RESUMO
O desafio na produção de materiais de referência (MR) destinados a ensaios microbiológicos é ainstabilidade natural dos micro-organismos. A liofilização é indicada para criopreservação de culturasbacterianas quando o número de células deve ser resguardado. Agentes protetores podem ser adicionadosantes do congelamento para aumentar a estabilidade do material. Neste trabalho foram avaliados oscrioprotetores na produção de MR liofilizados a serem utilizados em ensaio de proficiência para contagemde coliformes. Foram produzidos quatro lotes utilizando-se diferentes crioprotetores: solução de leitedesnatado a 10 % (EC1), a mesma solução contendo glicerol (EC2), sacarose (EC3) e trealose (EC4). Umacepa de Escherichia coli foi empregada no preparo dos materiais. A homogeneidade foi avaliada conforme oProtocolo Internacional Harmonizado. A estabilidade foi estudada durante quatro meses à ≤ -70 ºC (longaduração) e às temperaturas de -20 ºC, 4 ºC, 25 ºC e 35 ºC durante cinco dias (curta duração), segundo aISO/GUIDE 35. Apenas EC1 foi considerado não homogêneo. Os lotes permaneceram estáveis à ≤ -70 ºCdurante quatro meses. EC2 apresentou resultados insatisfatórios na estabilidade de curta duração. EC3 eEC4 foram homogêneos e estáveis nas temperaturas estudadas. A sacarose e a trealose foram consideradascrioprotetores adequados para o preparo do MR em questão.
Assuntos
Coliformes , Crioprotetores/análise , Ensaio de Proficiência Laboratorial , Substitutos do Leite HumanoRESUMO
O desafio na produção de materiais de referência (MR) destinados a ensaios microbiológicos é a instabilidade natural dos micro-organismos. A liofilização é indicada para criopreservação de culturas bacterianas quando o número de células deve ser resguardado. Agentes protetores podem ser adicionados antes do congelamento para aumentar a estabilidade do material. Neste trabalho foram avaliados os crioprotetores na produção de MR liofilizados a serem utilizados em ensaio de proficiência para contagem de coliformes. Foram produzidos quatro lotes utilizando-se diferentes crioprotetores: solução de leite desnatado a 10 % (EC1), a mesma solução contendo glicerol (EC2), sacarose (EC3) e trealose (EC4). Umacepa de Escherichia coli foi empregada no preparo dos materiais. A homogeneidade foi avaliada conforme o Protocolo Internacional Harmonizado. A estabilidade foi estudada durante quatro meses à ≤ -70 ºC (longa duração) e às temperaturas de -20 ºC, 4 ºC, 25 ºC e 35 ºC durante cinco dias (curta duração), segundo aISO/GUIDE 35. Apenas EC1 foi considerado não homogêneo. Os lotes permaneceram estáveis à ≤ -70 ºC durante quatro meses. EC2 apresentou resultados insatisfatórios na estabilidade de curta duração. EC3 eEC4 foram homogêneos e estáveis nas temperaturas estudadas. A sacarose e a trealose foram consideradas crioprotetores adequados para o preparo do MR em questão.(AU)
The challenge in producing reference materials (RM) for microbiological assays is the natural instability of microorganisms. Freeze-drying is suitable for bacterial cultures cryopreservation when the number of cells has to be retained. Protective agents can be added before freezing to increase the material stability. This study aimed at evaluating the use of different cryoprotectants during the production of RM, by freeze-drying, to be used in proficiency testing for coliforms enumeration. Four batches were produced adding different cryoprotectants: 10 % skim milk solution (EC1), the same solution containing glycerol (EC2), sucrose (EC3), and trehalose (EC4). A strain of Escherichia coli was used for preparing the materials. Homogeneity was assessed according to the International Harmonized Protocol. Stability was analyzed during four months at ≤ -70 ºC (long-term stability) and during five days at -20 ºC, 4 ºC, 25 ºC and 35 ºC (short-term stability), in accordance with the ISO guide 35. EC1 only was regarded as non-homogeneous. All of the lots remained stable at ≤ -70 ºC during the four-month study. EC2 showed unsatisfactory results in the short-term study. EC3 and EC4 were homogeneous and stable at the studied temperatures. Sucrose and trehalose were regarded as suitable cryoprotectants to prepare these specific MR.(AU)
Assuntos
Crioprotetores/análise , Coliformes , Ensaio de Proficiência LaboratorialRESUMO
This work aimed at isolating Staphylococcus spp. from minas frescal type cheese, and for this purpose a Multiplex PCR (M-PCR) was standardized for detecting the classical Staphylococcus aureus enterotoxingenes (sea, seb, sec, sed and see), using the femA gene as a positive control for S. aureus strains. Bacterial detection directly from the minas frescal type cheese and from artificially contaminated food was tested.One hundred eleven colonies (104 coagulase-positive and seven coagulase-negative) were selected for performing M-PCR assay. Thirty-four colonies (30.62%) were positive for at least one of the fiveente rotoxin genes analyzed; enterotoxins sea and seb were the most frequently detected. The study on Staphylococci coagulase-positive samples revealed that 40% of the samples showed bacterial counts above the limit established by Brazilian legislation. (AU)
Assuntos
Staphylococcus/isolamento & purificação , Queijo , Enterotoxinas , Reação em Cadeia da PolimeraseRESUMO
This work aimed at isolating Staphylococcus spp. from minas frescal type cheese, and for this purpose a Multiplex PCR (M-PCR) was standardized for detecting the classical Staphylococcus aureus enterotoxingenes (sea, seb, sec, sed and see), using the femA gene as a positive control for S. aureus strains. Bacterial detection directly from the minas frescal type cheese and from artificially contaminated food was tested.One hundred eleven colonies (104 coagulase-positive and seven coagulase-negative) were selected for performing M-PCR assay. Thirty-four colonies (30.62%) were positive for at least one of the fiveente rotoxin genes analyzed; enterotoxins sea and seb were the most frequently detected. The study on Staphylococci coagulase-positive samples revealed that 40% of the samples showed bacterial counts above the limit established by Brazilian legislation.
Assuntos
Enterotoxinas , Queijo , Reação em Cadeia da Polimerase , Staphylococcus/isolamento & purificaçãoRESUMO
O consumo de água mineral tem sido associado a um estilo de vida saudável e à crença, por parte dos consumidores, de que esse produto é relativamente seguro. A RDC n. 275/05 determina os padrões microbiológicos para água mineral natural e água natural no Brasil. Este trabalho teve como objetivo comparar as técnicas de filtração em membrana e de número mais provável (NMP) pela avaliação da qualidade microbiológica de amostras de água mineral natural envasilhadas em garrafões de 20 litros, comercializadas no Município do Rio de Janeiro, Brasil. Das 31 amostras representativas (no total de 155 unidades amostrais) analisadas, 22 (70,97%) apresentaram-se insatisfatórias em virtude de ocorrência de coliformes termotolerantes em duas (6,45%) amostras, independentemente da técnica utilizada. A contagem de coliformes totais acima do limite especificado foi evidenciada em três amostras (9,68%), de enterococos em uma amostra (3,23%), de P. aeruginosa em 21 (67,74%) e de clostrídios sulfito redutores em duas amostras (6,46%). A técnica do NMP apresentou maior sensibilidade na detecção dos grupos de micro-organismos relacionados na resolução supracitada. Portanto, esta técnica demonstrou ser mais eficiente para executar o controle da qualidade microbiológica de água potável.
Assuntos
Técnicas Microbiológicas , Aqua Petra , Filtração , Microbiologia da Água , Método de Tubulação MúltiploRESUMO
Cronobacter, formerly known as Enterobacter sakazakii, is a novel genus of the Enterobacteriaceae family recognized as a cause of high number of fatal cases in neonates, after consuming infant formula. The conventional methods for detecting these organisms are time-consuming and lack sensitivity. The ISO/TS 22964:2006 is the most recently standardized methodology for detecting Cronobacter in powderedinfant formula. This study aimed at confirming the Brazilian isolates previously identified as E. sakazakiias Cronobacter spp. by biochemical assays, and also to compare characteristics of 37 Cronobacter andnon-Cronobacter isolates; and the miniaturized kits and the ISO/TS methodology were evaluated. A conventional PCR protocol targeting dna G was also developed and a previously described gluA targeting protocol was used. The majority of the Brazilian isolates were not confirmed as Cronobacter spp., and the selective enrichment step of ISO/TS methodology was inhibitory to some Cronobacter strains. The ID 32 Ewas the most reliable kit. The PCR protocol targeting gluA showed consistent results with ID 32E and the developed dnaG PCR protocol was 100% sensitive and specific. Thus, the PCR protocols targeting gluA and dnaG might be used to complement the Cronobacter spp. detection or identification after performing the conventional isolation and identification methods.
Assuntos
Cronobacter sakazakii , Reação em Cadeia da PolimeraseRESUMO
O consumo de água mineral tem sido associado a um estilo de vida saudável e à crença, por parte dos consumidores, de que esse produto é relativamente seguro. A RDC n. 275/05 determina os padrões microbiológicos para água mineral natural e água natural no Brasil. Este trabalho teve como objetivo comparar as técnicas de filtração em membrana e de número mais provável (NMP) pela avaliação da qualidade microbiológica de amostras de água mineral natural envasilhadas em garrafões de 20 litros, comercializadas no Município do Rio de Janeiro, Brasil. Das 31 amostras representativas (no total de 155 unidades amostrais) analisadas, 22 (70,97%) apresentaram-se insatisfatórias em virtude de ocorrência de coliformes termotolerantes em duas (6,45%) amostras, independentemente da técnica utilizada. A contagem de coliformes totais acima do limite especificado foi evidenciada em três amostras (9,68%), de enterococos em uma amostra (3,23%), de P. aeruginosa em 21 (67,74%) e de clostrídios sulfito redutores em duas amostras (6,46%). A técnica do NMP apresentou maior sensibilidade na detecção dos grupos de micro-organismos relacionados na resolução supracitada. Portanto, esta técnica demonstrou ser mais eficiente para executar o controle da qualidade microbiológica de água potável. (AU)
Assuntos
Aqua Petra , Microbiologia da Água , Filtração , Método de Tubulação Múltiplo , Técnicas MicrobiológicasRESUMO
Cronobacter, formerly known as Enterobacter sakazakii, is a novel genus of the Enterobacteriaceae family recognized as a cause of high number of fatal cases in neonates, after consuming infant formula. The conventional methods for detecting these organisms are time-consuming and lack sensitivity. The ISO/TS 22964:2006 is the most recently standardized methodology for detecting Cronobacter in powderedinfant formula. This study aimed at confirming the Brazilian isolates previously identified as E. sakazakiias Cronobacter spp. by biochemical assays, and also to compare characteristics of 37 Cronobacter andnon-Cronobacter isolates; and the miniaturized kits and the ISO/TS methodology were evaluated. A conventional PCR protocol targeting dna G was also developed and a previously described gluA targeting protocol was used. The majority of the Brazilian isolates were not confirmed as Cronobacter spp., and the selective enrichment step of ISO/TS methodology was inhibitory to some Cronobacter strains. The ID 32 Ewas the most reliable kit. The PCR protocol targeting gluA showed consistent results with ID 32E and the developed dnaG PCR protocol was 100% sensitive and specific. Thus, the PCR protocols targeting gluA and dnaG might be used to complement the Cronobacter spp. detection or identification after performing the conventional isolation and identification methods. (AU)
Assuntos
Cronobacter sakazakii , Reação em Cadeia da PolimeraseRESUMO
Twenty-five samples of several types of meat purchased at supermarkets in Rio de Janeiro were analyzed for presence of Yersinia . Species were isolated from 80% of beef and chicken giblets, 60% of ground beef and beef liver and 20% of pork, Fifteen strains were identified as Yersinia intermedia , 9 as Yersinia enterocolitica , 4 as Yersinia kristensenii and 1 as Yersinia frederiksenii . Two strains of Y. intermedia , serotype 0:13,7 were positive in both the autoagglutination and calcium-dependency tests. Two strains of atypical Y. intermedia (serotype 0:29 and one not typable) and one strain of atypical Y. enterocolitica , serotype 0:16; were positive only in the auto-agglutination test. Seventeen strains isolated from meat produced heat stable enterotoxin.
RESUMO
Thirty-seven (16.9%) of 219 raw milk samples and 38 (13.7%) of 280 pasteurized milk samples were positive for Yersinia sp. The isolates from raw milk samples include Yersinia enterocolitica (32.4%) comprising biotype 1 (0:5, 10.8%), and biotype 2 (0:10 K1, 1.6%); Yersinia intermedia (64.9%) comprising 0:18 (40.5%), 0:7,8 (8.1%), 0:16 (2,7%) and non-typable (13.5%) and Yersinia frederiksenii (0:22, 2.7%). The isolates from pasteurized milk samples include Y. enterocolitica (41.5%) comprising 0:5 (31.7%), 0:13 (2.4%), 0:7,8 (2.4%) and 0:16 (4.8%); Y. frederiksenii (56.1%) comprising 0:27 (7.3%), 0:25,35 (12.2%), non-typable (36.6%) and Y. intermedia (non-typable, 2.4%). Most Y. enterocolitica and about one third of non- Y. enterocolitica strains produce heat-stable toxin (ST). Antibiotic susceptibility, autoagglutination capacity and calcium-dependency of strains also were investigated.
RESUMO
Foi pesquisada a presença de Yersinia sp. em 80 amostras de leite tipo especial e 89 de leite tipo B, de diversas marcas comercializadas na cidade do Rio de Janeiro, sendo detectados estes microorganismos em 8,8% das amostras de leite tipo especial B. A partir do leite especial foram isoladas duas amostras de Y. enterocolitica e sete de y. frederiksenii. A partir do leite tipo B, foram isoladas 16 amostras de frederisksenii. As amostras isoladas foram testadas quanto ao potencial patogenico através dos testes de auto-aglutinação e dependência de cálcio a 37%C, sendo negativas para ambos os tetes. Seis estirpes produziram enterotoxina termoestável (ST) em meio de cultura, sendo que uma delas foi capaz de produzir ST em leite esterilizado. Duas amostras de leite tipo B estavam contaminadas com antibióticos, sendo detectado penicilina em uma delas. Foi realizada a pesquis de Yersinia sp. em 25 amostras de fifernetes tipos de carne, sendo isolado Yersina sp. em 80% das amostras de músculo bovino e de miúdos de galinha; 60% das amostras de carne bovina moída e fígado bovino e 20% das amostras de músculo de suíno. Quinze estirpes foram classificadas como Y. intermedia, nove eram Y. entercolitica...