RESUMO
BACKGROUND: Non-invasive foetal RHD genotyping can predict haemolytic disease of the foetus and the newborn in pregnancies with anti-D alloantibodies and also avoid antenatal anti-D prophylaxis in pregnant women carrying an RHD negative foetus. Considering that the Argentine genetic background is the result of generations of intermixing between several ethnic groups, we evaluated the diagnostic performance of a non-invasive foetal RHD determination strategy to guide targeted antenatal RhD immunoprophylaxis. This algorithm is based on the analysis of four regions of the RHD gene in cell-free foetal DNA in maternal plasma and maternal and paternal RHD genotyping. MATERIALS AND METHODS: DNA from 298 serologically D negative pregnant women between 19-28 weeks gestation were RHD genotyped. Foetal RHD status was determined by real-time PCR in 296 maternal plasma samples. In particular cases, RHDΨ and RHD-CE-Ds alleles were investigated in paternal DNA. Umbilical cord blood was collected at birth, and serological and molecular studies were performed. RESULTS: Of the 298 maternal samples, 288 were D-/RHD- and 10 D-/RHD+ (2 RHD*DAR; 5 RHD-CE-Ds; 3 RHDΨ). Plasma from RHD*DAR carriers was not analysed. Real-time PCR showed 210 RHD+ and 78 RHD- foetuses and 8 inconclusive results. In this latter group, paternal molecular studies were useful to report a RHD negative status in 5 foetuses while only 3 remained inconclusive. All the results, except one false positive due to a silent allele (RHD[581insG]), agreed with the neonatal typing performed in cord blood. DISCUSSION: The protocol used for non-invasive prenatal RHD genotyping proved to be suitable to determine foetal RHD status in our admixed population. The knowledge of the genetic background of the population under study and maternal and paternal molecular analysis can reduce the number of inconclusive results when investigating foetal RHD status.
Assuntos
Técnicas de Genotipagem/métodos , Sistema do Grupo Sanguíneo Rh-Hr/genética , DNA/sangue , DNA/genética , Feminino , Sangue Fetal/imunologia , Feto/imunologia , Feto/metabolismo , Variação Genética , Genótipo , Idade Gestacional , Humanos , Imunoterapia , Masculino , Gravidez , Diagnóstico Pré-Natal , Sistema do Grupo Sanguíneo Rh-Hr/sangue , Sistema do Grupo Sanguíneo Rh-Hr/imunologiaRESUMO
We report the case of a pregnant woman sensitized with a panreactive anti-Rh17 alloantibody. Patient's red blood cells showed a partial deletion of Rh antigens, which was responsible for the alloimmunization. An autotransfusion program was instrumented so as to cover possible demands. Molecular analysis of the RH locus showed the presence of a hybrid RHCE-D(5-7)-CE allele that gave origin to the deleted phenotype.
Assuntos
Isoanticorpos/imunologia , Complicações Hematológicas na Gravidez/imunologia , Isoimunização Rh/imunologia , Sistema do Grupo Sanguíneo Rh-Hr/imunologia , Adulto , Feminino , Frequência do Gene/imunologia , Genótipo , Humanos , Isoanticorpos/sangue , Fenótipo , Gravidez , Complicações Hematológicas na Gravidez/sangue , Isoimunização Rh/sangue , Sistema do Grupo Sanguíneo Rh-Hr/genéticaRESUMO
Describimos el caso de una embarazada sensibilizada con un aloanticuerpo anti-Rh17 de muy amplia reactividad. Los glóbulos rojos de la paciente presentaban una deleción parcial de los antígenos del sistema Rh, responsable de la aloinmunización encontrada. Debido a la dificultad de obtener sangre compatible se elaboró un plan de transfusión autóloga para cubrir las posibles demandas. El análisis molecular del locus RH demostró la presencia de un alelo híbrido RHCE-D(5-7)-CE que generaba el fenotipo delecionado.
Assuntos
Humanos , Feminino , Gravidez , Adulto , Frequência do Gene/imunologia , Isoanticorpos/imunologia , Complicações Hematológicas na Gravidez/sangue , Isoimunização Rh/sangue , Sistema do Grupo Sanguíneo Rh-Hr/imunologia , Genótipo , FenótipoRESUMO
Describimos el caso de una embarazada sensibilizada con un aloanticuerpo anti-Rh17 de muy amplia reactividad. Los glóbulos rojos de la paciente presentaban una deleción parcial de los antígenos del sistema Rh, responsable de la aloinmunización encontrada. Debido a la dificultad de obtener sangre compatible se elaboró un plan de transfusión autóloga para cubrir las posibles demandas. El análisis molecular del locus RH demostró la presencia de un alelo híbrido RHCE-D(5-7)-CE que generaba el fenotipo delecionado. (AU)
Assuntos
Humanos , Feminino , Gravidez , Adulto , Sistema do Grupo Sanguíneo Rh-Hr/imunologia , Isoimunização Rh/sangue , Isoanticorpos/imunologia , Complicações Hematológicas na Gravidez/sangue , Frequência do Gene/imunologia , Fenótipo , GenótipoRESUMO
Describimos el caso de una embarazada sensibilizada con un aloanticuerpo anti-Rh17 de muy amplia reactividad. Los glóbulos rojos de la paciente presentaban una deleción parcial de los antígenos del sistema Rh, responsable de la aloinmunización encontrada. Debido a la dificultad de obtener sangre compatible se elaboró un plan de transfusión autóloga para cubrir las posibles demandas. El análisis molecular del locus RH demostró la presencia de un alelo híbrido RHCE-D(5-7)-CE que generaba el fenotipo delecionado. (AU)
Assuntos
Humanos , Feminino , Gravidez , Adulto , Sistema do Grupo Sanguíneo Rh-Hr/imunologia , Isoimunização Rh/sangue , Isoanticorpos/imunologia , Complicações Hematológicas na Gravidez/sangue , Frequência do Gene/imunologia , Fenótipo , GenótipoRESUMO
El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia del gen RHD en células fetales obtenidas de líquido amniótico por PCR. Se estudiaron 65 muestras de líquido amniótico, 11 de madres RhD negativas sensibilizadas con anti-D. Se confirmó el origen fetal del ADN analizando un locus VNTR y 3 loci STR en las muestras de ADN de líquido amniótico y sangre materna. En las muestras no contaminadas (n = 62) se realizó la genotipificación RHD utilizando una estrategia de PCR multiplex que permite la obtención de tres productos de amplificación en los fenotipos RhD positivos y sólo un fragmento de ADN en los fenotipos RhD negativos. Se genotipificaron 54 fetos RhD positivos (8 de madres RhD negativas sensibilizadas) y 8 fetos RhD negativos (3 de madres RhD negativas sensibilizadas). La genotipificación del ADN fetal permite diagnosticar con una única amniocentesis fetos en riesgo real de enfermedad hemolítica fetoneonatal y evitar la utilización de métodos invasivos en casos de fetos RhD negativos.
Assuntos
Humanos , Gravidez , Eritroblastose Fetal , Imunidade Materno-Adquirida , Diagnóstico Pré-Natal , Isoimunização Rh , Líquido Amniótico , Anticorpos , DNA , Sangue Fetal , Fatores de RiscoRESUMO
El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia del gen RHD en células fetales obtenidas de líquido amniótico por PCR. Se estudiaron 65 muestras de líquido amniótico, 11 de madres RhD negativas sensibilizadas con anti-D. Se confirmó el origen fetal del ADN analizando un locus VNTR y 3 loci STR en las muestras de ADN de líquido amniótico y sangre materna. En las muestras no contaminadas (n = 62) se realizó la genotipificación RHD utilizando una estrategia de PCR multiplex que permite la obtención de tres productos de amplificación en los fenotipos RhD positivos y sólo un fragmento de ADN en los fenotipos RhD negativos. Se genotipificaron 54 fetos RhD positivos (8 de madres RhD negativas sensibilizadas) y 8 fetos RhD negativos (3 de madres RhD negativas sensibilizadas). La genotipificación del ADN fetal permite diagnosticar con una única amniocentesis fetos en riesgo real de enfermedad hemolítica fetoneonatal y evitar la utilización de métodos invasivos en casos de fetos RhD negativos. (AU)
Assuntos
Humanos , Gravidez , Diagnóstico Pré-Natal , Imunidade Materno-Adquirida , Eritroblastose Fetal/fisiopatologia , Eritroblastose Fetal/complicações , Eritroblastose Fetal/classificação , Eritroblastose Fetal/imunologia , Eritroblastose Fetal/diagnóstico , Eritroblastose Fetal/genética , Isoimunização Rh , Anticorpos/diagnóstico , Líquido Amniótico , Fatores de Risco , DNA , Sangue FetalRESUMO
The aim of this paper is to evaluate the erythrophagocytosis assay (EA) in patients with autoimmune hemolytic anemia (AIHA). Direct antiglobulin test (DAT), indirect antiglobulin test (ITA) and EA were performed in blood samples from 46 patients with presumed AIHA. The EA was carried out incubating patients'erythocytes and peripheral blood monocyte. A total of 200 monocytes were analysed to determine the percentage of active phagocytic cells (porcentage APC). In 9 of these patients the applied treatment was evaluated by DAT,IAT and EA. In 14 transfusion requirements, the compatibility tets and EA were performed. For EA, patients'monocyte were incubated with erytrocytes from previously selected units sensitized with patients'sera. The porcentage of APC was 32.1 +/- 1.7 in 35 patients with positive DAT and 17.8 +/- 1.3 in 11 patients with negative DAT. This last value was significantly higher than that with negative controls (3.7 +/- 0.3) (p
Assuntos
Humanos , Anemia Hemolítica Autoimune/imunologia , Eritrócitos/fisiologia , Fagocitose/fisiologia , Anemia Hemolítica Autoimune/diagnóstico , Anemia Hemolítica Autoimune/terapia , Transfusão de Sangue , Contagem de Células , Fagócitos/fisiologiaRESUMO
El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia del gen RHD en células fetales obtenidas de líquido amniótico (LA) por PCR. Se estudiaron 65 muestras de LA, 11 de madres RhD-sensibilizadas con anti-D. Se confirmó el origen fetal del AND analizando un locus VNTR y 3 loci STR en las muestras de AND de LA y sangre materna. En las muestras no contaminadas (n=62) se realizó la genotipicación RHD utilizando una estrategia de PCR multiplex que permite la obtención de 3 productos de amplificación en los fenotipos RhD+ y sólo un fragmento de AND en los fenotipos RhD-. Se genotipificaron 54 fetos RhD+ ( de 8 madres RhD- sensibilizadas) y 8 feto RhD- ( 3 de madres RhD- sensibilizadas). La genotipificación del AND fetal permite diagnosticar con una única amniocentesis fetos en riesgo real de enfermedad hemolítica fetoneonatal (EHFN) y evitar la utilización de métodos invasivos en casos de fetos RhD-.
Assuntos
Humanos , Feminino , Gravidez , Líquido Amniótico/imunologia , Eritroblastose Fetal/diagnóstico , Sistema do Grupo Sanguíneo Rh-Hr/genética , DNA/genética , Eletroforese em Gel de Ágar , Eritroblastose Fetal/genética , Marcadores Genéticos , Genótipo , Reação em Cadeia da PolimeraseRESUMO
The aim of this paper is to evaluate the erythrophagocytosis assay (EA) in patients with autoimmune hemolytic anemia (AIHA). Direct antiglobulin test (DAT), indirect antiglobulin test (ITA) and EA were performed in blood samples from 46 patients with presumed AIHA. The EA was carried out incubating patientserythocytes and peripheral blood monocyte. A total of 200 monocytes were analysed to determine the percentage of active phagocytic cells (porcentage APC). In 9 of these patients the applied treatment was evaluated by DAT,IAT and EA. In 14 transfusion requirements, the compatibility tets and EA were performed. For EA, patientsmonocyte were incubated with erytrocytes from previously selected units sensitized with patientssera. The porcentage of APC was 32.1 +/- 1.7 in 35 patients with positive DAT and 17.8 +/- 1.3 in 11 patients with negative DAT. This last value was significantly higher than that with negative controls (3.7 +/- 0.3) (p
Assuntos
Humanos , Eritrócitos/fisiologia , Fagocitose/fisiologia , Anemia Hemolítica Autoimune/imunologia , Anemia Hemolítica Autoimune/diagnóstico , Anemia Hemolítica Autoimune/terapia , Fagócitos/fisiologia , Contagem de Células , Transfusão de SangueRESUMO
El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia del gen RHD en células fetales obtenidas de líquido amniótico (LA) por PCR. Se estudiaron 65 muestras de LA, 11 de madres RhD-sensibilizadas con anti-D. Se confirmó el origen fetal del AND analizando un locus VNTR y 3 loci STR en las muestras de AND de LA y sangre materna. En las muestras no contaminadas (n=62) se realizó la genotipicación RHD utilizando una estrategia de PCR multiplex que permite la obtención de 3 productos de amplificación en los fenotipos RhD+ y sólo un fragmento de AND en los fenotipos RhD-. Se genotipificaron 54 fetos RhD+ ( de 8 madres RhD- sensibilizadas) y 8 feto RhD- ( 3 de madres RhD- sensibilizadas). La genotipificación del AND fetal permite diagnosticar con una única amniocentesis fetos en riesgo real de enfermedad hemolítica fetoneonatal (EHFN) y evitar la utilización de métodos invasivos en casos de fetos RhD-. (AU)