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The aromatic nucleophilic substitution reactions of the nitro group of 4-Nitro-N-alkyl-1,8-naphthalimides by thiolate anions produce fluorescent derivatives and their rates are strongly accelerated by micelles of hexadecyltrimethylammonium chloride even at low pH. Acceleration factors of this reactions can reach million-fold. As the products are oxidant-insensible, this reaction allows the determination of SH- containing compounds such as cysteine, glutathione or proteins even in oxidative conditions. Limits of detection are as low as 5 × 10-7 M, ten times lower than the limit for the classic 5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoic) acid method. Moreover, this reaction can be developed at pHs between 6.5 and 7.5 thereby diminishing the rate of spontaneous oxidation of the thiols. In addition, we demonstrated that 4-Nitro-N-alkyl-1,8-naphthalimides can be used to evidence SH groups in peptides, proteins and living cells.

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UNLABELLED: Paranaguá Bay is one of the largest estuarine systems on the Southern Brazilian coast. The only recorded cholera outbreak in this region since the early 20th century occurred in 1999 and resulted in 467 cases and at least three reported deaths in a population of approx. 150 000 people. This short communication reports historical, unpublished data related to that outbreak. Water, zooplankton and bivalve samples were collected and evaluated using direct fluorescence assay to determine whether Vibrio cholerae serogroups O1 and O139 were present in the estuarine system at that time. Most of the water (83%) and zooplankton samples (75%) were positive for V. cholerae O1, while V. cholerae O139 was not detected. Shellfish (Mytella sp.) were also positive for V. cholerae O1. These results indicate that the estuary, including biological vectors such as copepods and bivalves, comprise an important reservoir of V. cholerae O1 and a probable waterborne pathway for the disease, in addition to contamination with untreated sewage. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: Despite most of the cholera cases that occurred in Brazil during the 7th pandemic were located in the northern areas of the country, a significant outbreak in Paranaguá, an estuary in the south coast, resulted in at least three deaths in 1999. We report here the detection of Vibrio cholerae O1 in water, zooplankton and bivalve samples during the outbreak, using direct fluorescence assay as an alternative method for the traditional plate culture employed at the time by the Brazilian Sanitary Agency. Results demonstrate that aquatic natural reservoirs comprise a potential route of transmission of cholera, in addition to untreated sewage and routine monitoring is recommended.

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Toxoplasmosis is a zoonotic disease caused by the protozoan Toxoplasma gondii. Among domestic species, the horse is one of those most resistant to T. gondii infection; however, upon acute infection, horses may present hyperirritability, poor motor coordination, ocular disorders, and abortion. Herein, we investigated the presence of antibodies against T. gondii, in order to identify possible risk factors for infection in horses and to establish the correlation of T. gondii infection with reproductive and/ or neurological disorders. We collected 615 blood samples from animals in the mountain mesoregion (n=311) and the coastal mesoregion (n=304) of Santa Catarina state. An epidemiological questionnaire was used to identify possible risk factors. Antibodies to T. gondii were detected by immuno-fluorescence assay (IFA≥1:64) using RH strain tachyzoites of the protozoan as antigen. Correlation (P<0.05) between seropositivity and race, sex, age, diet, contact with other animals, reproductive and/or neurological disorders, and origin were assessed. The overall incidence of seropositivity was 10.4% (64/615), and in the mountain and coastal regions, 10.3% and 10.5%, respectively. The reciprocal of the titles observed was: 1:64 (36), 1:256 (26) and 1:1024 (two). There was no significant difference (P>0.05) between regions, and there was no correlation between seropositivity and the variables analyzed.(AU)

A toxoplasmose é uma zoonose parasitária, causada pelo protozoário Toxoplasma gondii. Os equinos estão entre as espécies domésticas mais resistentes à infecção, porém, em infecções agudas, podem apresentar sintomas como hiperirritabilidade, incoordenação motora, distúrbios oculares e aborto. Com os objetivos de determinar a ocorrência de anticorpos contra T. gondii, identificar possíveis fatores de risco para a infecção em cavalos e a correlação da infecção toxoplásmica com distúrbios reprodutivos e/ou neurológicos, em animais de duas mesorregiões do estado de Santa Catarina (Serrana e Litorânea), 615 amostras de sangue (311 provenientes da região serrana e 304 do litoral) foram colhidas. Um questionário epidemiológico foi aplicado para a identificação de possíveis fatores de risco. A pesquisa de anticorpos foi realizada por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI≥1:64) utilizando como antígeno taquizoítos da cepa RH do protozoário. Os dados foram analisados pelos testes exato de Fischer e do χ2 para verificar correlação (P<0,05) entre soropositividade e as variáveis analisadas (Raça; Sexo; Idade; Dieta Principal; Contato com outros animais; Desordens reprodutivas e/ou neurológicas e procedência). A ocorrência geral de animais positivos foi de 10,4% (64/615), com as regiões Serrana e Litorânea apresentando 10,3% e 10,5% de animais positivos, respectivamente. A recíproca dos títulos observada foi: 1:64 (36), 1:256 (26) e 1:1024 (2). Não foi observada diferença (P>0,05) entre as regiões e nem correlação entre a soropositividade e as variáveis analisadas.(AU)

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Toxoplasmosis is a zoonotic disease caused by the protozoan Toxoplasma gondii. Among domestic species, the horse is one of those most resistant to T. gondii infection; however, upon acute infection, horses may present hyperirritability, poor motor coordination, ocular disorders, and abortion. Herein, we investigated the presence of antibodies against T. gondii, in order to identify possible risk factors for infection in horses and to establish the correlation of T. gondii infection with reproductive and/ or neurological disorders. We collected 615 blood samples from animals in the mountain mesoregion (n=311) and the coastal mesoregion (n=304) of Santa Catarina state. An epidemiological questionnaire was used to identify possible risk factors. Antibodies to T. gondii were detected by immuno-fluorescence assay (IFA≥1:64) using RH strain tachyzoites of the protozoan as antigen. Correlation (P0.05) between regions, and there was no correlation between seropositivity and the variables analyzed.

A toxoplasmose é uma zoonose parasitária, causada pelo protozoário Toxoplasma gondii. Os equinos estão entre as espécies domésticas mais resistentes à infecção, porém, em infecções agudas, podem apresentar sintomas como hiperirritabilidade, incoordenação motora, distúrbios oculares e aborto. Com os objetivos de determinar a ocorrência de anticorpos contra T. gondii, identificar possíveis fatores de risco para a infecção em cavalos e a correlação da infecção toxoplásmica com distúrbios reprodutivos e/ou neurológicos, em animais de duas mesorregiões do estado de Santa Catarina (Serrana e Litorânea), 615 amostras de sangue (311 provenientes da região serrana e 304 do litoral) foram colhidas. Um questionário epidemiológico foi aplicado para a identificação de possíveis fatores de risco. A pesquisa de anticorpos foi realizada por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI≥1:64) utilizando como antígeno taquizoítos da cepa RH do protozoário. Os dados foram analisados pelos testes exato de Fischer e do χ2 para verificar correlação (P0,05) entre as regiões e nem correlação entre a soropositividade e as variáveis analisadas.

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The literature contains several studies on feline ehrlichiosis. However, information about the characteristics of Ehrlichia infection in cats is still scanty. This study evaluated the association between Ehrlichia spp. infection and the hematologic data of 93 cats treated at the Federal University of Mato Grosso Veterinary Hospital in Cuiabá, state of Mato Grosso, Brazil. The presence of or exposure to Ehrlichia spp. infection was evaluated by Polymerase Chain Reaction (PCR) targeting the dsb and 16S rRNA gene of Ehrlichia, and by detection of anti-Ehrlichia canis IgG antibodies in Indirect Fluorescence Assay (IFA), respectively. Eight (8.6%) cats tested positive by PCR and the partial DNA sequence obtained from PCR products was a 100% match to E. canis. Forty-two (45.1%) cats showed antibody reactivity against Ehrlichia spp. Hematological alterations such as low erythrocyte count, thrombocytopenia, lymphopenia and monocytosis were observed in PCR positive cats. Among them, low erythrocyte counts were associated with IgG antibody titers of 40 to 640 and five cats also tested positive by PCR. Furthermore, PCR-positive cats showed a tendency to be lymphopenic. No correlation was found between age and sex, and no ticks were observed in any of the examined cats.

Diversos estudos sobre erliquiose felina vêm sendo relatados na literatura. No entanto, a caracterização da infecção por Ehrlichia em gatos ainda é escassa. O presente estudo objetivou avaliar a associação entre infecção por Ehrlichia e dados hematológicos em 93 gatos atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Mato Grosso, em Cuiabá, Brasil. A presença de infecção por Ehrlichia spp. foi avaliada pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) visando à amplificação dos genes dsb e 16S rRNA de Ehrlichia e por Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Oito (8,6%) gatos demonstraram ser positivos pela PCR, sendo suas sequências parciais de DNA 100% idênticas à E. canis. Quarenta e dois gatos (45,1%) apresentaram anticorpos reativos contra Ehrlichia spp. Alterações hematológicas como baixas contagens de eritrócitos, trombocitopenia, linfopenia e monocitose foram observadas em gatos positivos pela PCR. Dentre essas, eritropenia foi associada em gatos com títulos de anticorpos IgG entre 40 e 640, sendo cinco destes positivos pela PCR. Adicionalmente, gatos positivos na PCR apresentaram uma tendência a serem linfopênicos. Não foram observadas associações entre a presença de infecção nos gatos e suas respectivas idades e sexo. Nenhum carrapato foi observado nos gatos examinados.

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The literature contains several studies on feline ehrlichiosis. However, information about the characteristics of Ehrlichia infection in cats is still scanty. This study evaluated the association between Ehrlichia spp. infection and the hematologic data of 93 cats treated at the Federal University of Mato Grosso Veterinary Hospital in Cuiabá, state of Mato Grosso, Brazil. The presence of or exposure to Ehrlichia spp. infection was evaluated by Polymerase Chain Reaction (PCR) targeting the dsb and 16S rRNA gene of Ehrlichia, and by detection of anti-Ehrlichia canis IgG antibodies in Indirect Fluorescence Assay (IFA), respectively. Eight (8.6%) cats tested positive by PCR and the partial DNA sequence obtained from PCR products was a 100% match to E. canis. Forty-two (45.1%) cats showed antibody reactivity against Ehrlichia spp. Hematological alterations such as low erythrocyte count, thrombocytopenia, lymphopenia and monocytosis were observed in PCR positive cats. Among them, low erythrocyte counts were associated with IgG antibody titers of 40 to 640 and five cats also tested positive by PCR. Furthermore, PCR-positive cats showed a tendency to be lymphopenic. No correlation was found between age and sex, and no ticks were observed in any of the examined cats.

Diversos estudos sobre erliquiose felina vêm sendo relatados na literatura. No entanto, a caracterização da infecção por Ehrlichia em gatos ainda é escassa. O presente estudo objetivou avaliar a associação entre infecção por Ehrlichia e dados hematológicos em 93 gatos atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Mato Grosso, em Cuiabá, Brasil. A presença de infecção por Ehrlichia spp. foi avaliada pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) visando à amplificação dos genes dsb e 16S rRNA de Ehrlichia e por Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Oito (8,6%) gatos demonstraram ser positivos pela PCR, sendo suas sequências parciais de DNA 100% idênticas à E. canis. Quarenta e dois gatos (45,1%) apresentaram anticorpos reativos contra Ehrlichia spp. Alterações hematológicas como baixas contagens de eritrócitos, trombocitopenia, linfopenia e monocitose foram observadas em gatos positivos pela PCR. Dentre essas, eritropenia foi associada em gatos com títulos de anticorpos IgG entre 40 e 640, sendo cinco destes positivos pela PCR. Adicionalmente, gatos positivos na PCR apresentaram uma tendência a serem linfopênicos. Não foram observadas associações entre a presença de infecção nos gatos e suas respectivas idades e sexo. Nenhum carrapato foi observado nos gatos examinados.

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The Indirect Fluorescence Assay (IFA) and the indirect ELISA were comparatively used to detect IgG and IgM antibodies for Toxoplasma gondii in experimentally and naturally infected primates. In the experimentally infected group, antibodies of diagnostic value were detected at day 9 post-infection (PI) with the IFA (IgG and IgM) and with IgG-ELISA. IgM-ELISA detected antibodies for T. gondii starting at day 3 PI until the end of the experiment (102 days PI). Of the 209 naturally infected sera tested, from many zoos of State of Sao Paulo, 64.59 and 67.94 percent were positive in the IgG-IFA test and IgG-ELISA respectively. IgM-ELISA test detected seropositivity in 52.63 percent of the sera although IgM-IFA test detected it in only in 0.96 percent of the samples. The differential toxoplasmosis diagnosis was accomplished with Neospora caninum by IFA, observing 61 (29.2 percent) seropositive animals for this parasite and 149 (70.8 percent) negative. Sixty animals were positive for both T. gondii and N. caninum. Pneumonia, splenomegaly, and intestinal ulcers were macroscopically observed. Unremarkable interstitial pneumonia, enteritis, colitis, splenitis, and glomerulitis were microscopically observed. The immunohistochemical stain could not detect the presence of T. gondii in the tissues of the animals infected experimentally.

Detectou-se anticorpos das classes IgG e IgM anti-Toxoplasma gondii em primatas experimentalmente e naturalmente infectados, utilizando-se como técnicas comparativas a RIFI e o ELISA-teste. No grupo dos primatas experimentalmente infectados, anticorpos de valor diagnóstico foram detectados a partir do 9º dia de infecção tanto na RIFI (IgG e IgM) como no ELISA-IgG. O ELISA IgM detectou anticorpos a partir do 3º dia de infecção até o final do experimento (102 dias pós-infecção). Dos 209 soros dos primatas naturalmente infectados, de diversos zoológicos do Estado de São Paulo, 64,59 e 67,94 por cento mostraram-se positivos na RIFI-IgG e no ELISA-IgG, respectivamente. O ELISA-IgM detectou soropositividade em 52,63 por cento dos soros ao passo que a RIFI-IgM detectou apenas 0,96 por cento. Foi realizado também diagnóstico diferencial para Neospora caninum, através da RIFI, observando-se 61 (29,2 por cento) animais soropositivos para este parasita e 149 (70,8 por cento) animais negativos. Sessenta animais foram positivos para T. gondii e N. caninum. Pneumonia, esplenomegalia e úlceras intestinais foram observadas macroscopicamente. Pneumonia intersticial, enterite, colite, esplenite e glomerulite foram os achados microscópicos. A imunoistoquímica não revelou a presença do T. gondii nos tecidos dos animais experimentalmente infectados.

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The Indirect Fluorescence Assay (IFA) and the indirect ELISA were comparatively used to detect IgG and IgM antibodies for Toxoplasma gondii in experimentally and naturally infected primates. In the experimentally infected group, antibodies of diagnostic value were detected at day 9 post-infection (PI) with the IFA (IgG and IgM) and with IgG-ELISA. IgM-ELISA detected antibodies for T. gondii starting at day 3 PI until the end of the experiment (102 days PI). Of the 209 naturally infected sera tested, from many zoos of State of Sao Paulo, 64.59 and 67.94% were positive in the IgG-IFA test and IgG-ELISA respectively. IgM-ELISA test detected seropositivity in 52.63% of the sera although IgM-IFA test detected it in only in 0.96% of the samples. The differential toxoplasmosis diagnosis was accomplished with Neospora caninum by IFA, observing 61 (29.2%) seropositive animals for this parasite and 149 (70.8%) negative. Sixty animals were positive for both T. gondii and N. caninum. Pneumonia, splenomegaly, and intestinal ulcers were macroscopically observed. Unremarkable interstitial pneumonia, enteritis, colitis, splenitis, and glomerulitis were microscopically observed. The immunohistochemical stain could not detect the presence of T. gondii in the tissues of the animals infected experimentally.

Detectou-se anticorpos das classes IgG e IgM anti-Toxoplasma gondii em primatas experimentalmente e naturalmente infectados, utilizando-se como técnicas comparativas a RIFI e o ELISA-teste. No grupo dos primatas experimentalmente infectados, anticorpos de valor diagnóstico foram detectados a partir do 9º dia de infecção tanto na RIFI (IgG e IgM) como no ELISA-IgG. O ELISA IgM detectou anticorpos a partir do 3º dia de infecção até o final do experimento (102 dias pós-infecção). Dos 209 soros dos primatas naturalmente infectados, de diversos zoológicos do Estado de São Paulo, 64,59 e 67,94% mostraram-se positivos na RIFI-IgG e no ELISA-IgG, respectivamente. O ELISA-IgM detectou soropositividade em 52,63% dos soros ao passo que a RIFI-IgM detectou apenas 0,96%. Foi realizado também diagnóstico diferencial para Neospora caninum, através da RIFI, observando-se 61 (29,2%) animais soropositivos para este parasita e 149 (70,8%) animais negativos. Sessenta animais foram positivos para T. gondii e N. caninum. Pneumonia, esplenomegalia e úlceras intestinais foram observadas macroscopicamente. Pneumonia intersticial, enterite, colite, esplenite e glomerulite foram os achados microscópicos. A imunoistoquímica não revelou a presença do T. gondii nos tecidos dos animais experimentalmente infectados.

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Considering the traditional use of Casearia sylvestris Sw., Salicaceae, to threat gastric injuries and the pre-clinical studies showing its efficacy we aimed to screen other species to explore the biological activity of some species of this family. For this, we used a protease inhibition assay as a model for searching gastric anti-ulcer plant extracts. The ethanolic and aqueous extracts from branches and leafs of C. gossypiosperma, C. decandra and C. rupestris showed high percentage inhibition of pepsin, approximately 50 percent, with 1 μg/mL concentration. Curiously, C. obliquoa and Flacourtia ramontchi did not inhibit pepsin, but its most apolar extract showed inhibitory activity in the subtilisin assay. The enriched fraction of clerodane diterpenes inhibited the activity (42.75 percent) of pepsin with 1 ug/mL, but it did not inhibit subtilisin (23.76 percent). The results obtained with apolar and polar extracts from branches and leaves of some species of Salicaceae showed a different pattern of inhibition of two proteases, the aspartic pepsin and the serinic subtilisin, related with different biological activities. The results with the enriched fraction of clerodane diterpenes suggests that the activity observed with the C. sylvestris may be related with the presence of these substances in the crude extract.

Considerando o uso popular de Casearia sylvestris Sw., Salicaceae, para o tratamento de problemas gástricos e resultados pré-clínicos que mostraram potencial atividade anti-ulcerogênica, foi realizado um screening farmacológico para avaliar a atividade biológica de outras espécies de Salicaceae. Para isso, foi utilizado um ensaio de inibição de proteases como um modelo farmacológico molecular para screening de extratos com atividade anti-ulcerogênica. Os extratos etanólico e aquoso dos galhos e folhas de C. gossypiosperma, C. decandra e C. rupestris mostraram inibição da atividade da pepsina em aproximadamente 50 por cento com a concentração de 1 μg/mL. Curiosamente, C. obliquoa e Flacourtia ramontchi não apresentaram atividade sobre a pepsina, mas seus extratos mais apolares mostraram atividade inibitória sobre a subtilisina. A fração enriquecida de diterpenos clerodânicos mostrou atividade inibitória (42,75 por cento) sobre a pepsina com a concentração de 1 μg/mL, mas não sobre a subtilisina (23,76 por cento). Os resultados obtidos com os extratos e folhas das espécies testadas mostraram um padrão de atividade diferente sobre os dois tipos de proteases, a pepsina e a subtilisina, as quais estão relacionadas com diferentes tipos de atividades biológicas. Ainda mais, os resultados com a fração enriquecida de diterpenos clerodânicos sugerem que estas substâncias podem estar relacionadas com a atividade do extrato bruto de C. sylvestris.