RESUMO
En este trabajo se evaluó la aplicación de la solución CM-95 tratada magnéticamente como adyuvante inmunológico, en comparación con el adyuvante de Freund, para la obtención del suero de Coombs en conejos, de gran demanda en bancos de sangre y hospitales, para el diagnóstico clínico de conflictos Rh y la enfermedad hemolítica del recién nacido, entre otras. Conejos Nueva Zelanda Blancos se inocularon por la vía subcutànea con suero humano obtenido de 30 donantes O+, unido con la solución CM-95 tratada magnéticamente como adyuvante inmunológico. Se empleó un esquema de inmunización de 40 días, donde se evaluó la dinàmica en el título de anticuerpos anti IgG humano por la técnica de hemoaglutinación en tubos. Al antisuero se le determinó la calidad inmunológica por el título de heteroaglutininas de los grupos sanguíneos A, B y O, de anticuerpos anticomplemento C3b, C3d y C4b y anti IgG, antes y después de su purificación. El suero de Coombs con la solución adyuvante CM-95 tratada magnéticamente mostró valores similares a los obtenidos con el adyuvante de Freund. En el mismo se cumplió con los requisitos establecidos por el Centro Estatal para el Control de la Calidad de los Medicamentos, según las normativas de la FDA para este diagnosticador. Estos resultados abren nuevas perspectivas para el uso de la solución adyuvante en la obtención del suero de Coombs(AU)
This paper assessed the application of the magnetically treated CM-95 solution as immunological adjuvant compared to Freund adjuvant for the obtainment of Coombs serum in rabbits. Among others, Coombs serum is very demanded in blood banks and hospitals for the clinical diagnosis of Rh conflicts and haemolytic disease of the newborn. New Zealand white rabbits were subcutaneously inoculated with human serum, obtained from 30 donors of O+ blood, together with the magnetically treated CM-95 adjuvant. The immunization schedule was of 40 days and dynamics in the titers of human anti IgG antibodies was assessed by the hemagglutination technique in tubes. The immunological quality of the antiserum was determined by the titers of heteroagglutins from A,B,O blood groups, of anti C3b¸ C3d and C4d and anti IgG, before and after purification. The Coombs serum with the magnetically treated CM-95 adjuvant solution showed values similar to those of Freund adjuvant. In addition, it meets the requirements of CECMED and FDA established for this diagnostic. These results open new perspectives to the use of the adjuvant Solution in the Coombs serum obtainment(AU)
Assuntos
Animais , Coelhos , Adjuvante de Freund , Teste de CoombsRESUMO
La enzima óxido nítrico sintetasa ha sido estudiada en mamíferos; en los últimos años se ha descrito que existe también en protozoos, pero se desconocen aspectos importantes de su función. Se logró producir anticuerpos policlonales contra la proteína recombinante con actividad de óxido nítrico sintetasa (NOS-Tg-r) de Toxoplasma gondii y realizar marcación inmunológica en taquizoítos. Se usaron dos conejos Nueva Zelanda (Oryctolagus cuniculus)que se inmunizaron por vía intramuscular con NOS-Tg-r, y dos tipos de adyuvantes, hidróxido de aluminio y adyuvante de Freund. Se comprobó la presencia de anticuerpos policlonales con la técnica de ensayo inmunoenzimático indirecto. Los resultados obtenidos mostraron que a NOS-Tg-r con adyuvante de Freund indujo mayor respuesta inmune que la de la NOS-Tg-r con hidróxido aluminio p 0,005). Para verificar si había reacción cruzada, se realizó una prueba ELISA utilizando como antígenos: metaloproteasa de T. gondii recombinante, cisteína proteasa 5 de Entamoeba histolytica recombinante, albúmina al 2%, hidróxido de aluminio y adyuvante de Freund. Los valores obtenidos con sueros preinmunes y contra proteínas alternas no superaron el punto de corte (0,069), lo cual indica que los anticuerpos policlonales obtenidos son específicos para NOS-Tg-r. Se realizó marcación inmunológica en taquizoítos de Toxoplasma gondii con inmunofluorescencia indirecta que mostró una marcación difusa a nivel de citoplasma y confirmó la presencia de esta proteína en los taquizoítos.
The nitric oxide synthase (NOS)is an enzyme well described on mammals but little is known about the role of these enzymes on pathogenic parasites. We produced polyclonal antibodies against a recombinant NOS enzyme from Toxoplasma gondii nd e lso er formed n mmunol locali zation of the enzyme on tachyzoites. We used two New Zealand rabbits (Oryctolagus cuniculus) to perform intramuscular immunization and we used two types of adjuvant: aluminum hydroxide and Freund s adjuvant. We tested the generation of polyclonal antibodies by an indirect ELISA assay. The results showed that levels of antibodies were higher in rabbits immunized with Freund s adjuvant than with aluminum hydroxide (p =0.005). In order to test cross reactions, we used a recombinant Toxoplasma metallooprotease, a recombinant cysteine protease from Entamoeba histolytica, albumin 2%, hydroxide aluminium and Freund s adjuvant as antigens on indirect ELISA assays for the polyclonal serum antibodies. No serum showed absorbances higher than the cutoff level with these antigens, indicating that the polyclonal antibodies were specific for recombinant Toxoplasma NOS. Additionally, we performed immunodetection of the enzyme on Toxoplasma gondii tachyzoites and we obtained a diffuse labeling of the parasite.