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Producción de anticuerpos policlonales IgG contra una proteína con actividad de óxido nítrico sintetasa de Toxoplasma gondii recombinante (NOS-Tg-r) y marcación inmunológica en taquizoítoso / Production of Polyclonal Antibodies against Toxoplasma gondii Recombinant protein with Nitric Oxide Synthase activity and immunologic marking in Tachyzoites
Padilla-Londoño, Jonathan Mauricio; Trejos-Suárez, Juanita; Coronado, Sandra Milena; Cardona-Pérez, Néstor Iván.
Afiliação
  • Padilla-Londoño, Jonathan Mauricio; Universidad del Quindío. Facultad de Ciencias de la Salud. Centro de Investigaciones Biomédicas. Grupo de Inmunológica molecular (GYMOL). Armenia. CO
  • Trejos-Suárez, Juanita; Universidad del Quindío. Facultad de Ciencias de la Salud. Centro de Investigaciones Biomédicas. Grupo de Inmunológica molecular (GYMOL). Armenia. CO
  • Coronado, Sandra Milena; Universidad del Quindío. Facultad de Ciencias de la Salud. Centro de Investigaciones Biomédicas. Grupo de Inmunológica Patogenesis (PATOMOL). CO
  • Cardona-Pérez, Néstor Iván; Universidad del Quindío. Facultad de Ciencias de la Salud. Centro de Investigaciones Biomédicas. Grupo de Inmunológica molecular (GYMOL). Armenia. CO
Infectio ; 12(2): 340-348, jun. 2008. ilus, graf, tab
Article em Es | LILACS, COLNAL | ID: lil-635636
Biblioteca responsável: CO359.1
RESUMEN
La enzima óxido nítrico sintetasa ha sido estudiada en mamíferos; en los últimos años se ha descrito que existe también en protozoos, pero se desconocen aspectos importantes de su función. Se logró producir anticuerpos policlonales contra la proteína recombinante con actividad de óxido nítrico sintetasa (NOS-Tg-r) de Toxoplasma gondii y realizar marcación inmunológica en taquizoítos. Se usaron dos conejos Nueva Zelanda (Oryctolagus cuniculus)que se inmunizaron por vía intramuscular con NOS-Tg-r, y dos tipos de adyuvantes, hidróxido de aluminio y adyuvante de Freund. Se comprobó la presencia de anticuerpos policlonales con la técnica de ensayo inmunoenzimático indirecto. Los resultados obtenidos mostraron que a NOS-Tg-r con adyuvante de Freund indujo mayor respuesta inmune que la de la NOS-Tg-r con hidróxido aluminio p 0,005). Para verificar si había reacción cruzada, se realizó una prueba ELISA utilizando como antígenos metaloproteasa de T. gondii recombinante, cisteína proteasa 5 de Entamoeba histolytica recombinante, albúmina al 2%, hidróxido de aluminio y adyuvante de Freund. Los valores obtenidos con sueros preinmunes y contra proteínas alternas no superaron el punto de corte (0,069), lo cual indica que los anticuerpos policlonales obtenidos son específicos para NOS-Tg-r. Se realizó marcación inmunológica en taquizoítos de Toxoplasma gondii con inmunofluorescencia indirecta que mostró una marcación difusa a nivel de citoplasma y confirmó la presencia de esta proteína en los taquizoítos.
ABSTRACT
The nitric oxide synthase (NOS)is an enzyme well described on mammals but little is known about the role of these enzymes on pathogenic parasites. We produced polyclonal antibodies against a recombinant NOS enzyme from Toxoplasma gondii nd e lso er formed n mmunol locali zation of the enzyme on tachyzoites. We used two New Zealand rabbits (Oryctolagus cuniculus) to perform intramuscular immunization and we used two types of adjuvant aluminum hydroxide and Freund ’s adjuvant. We tested the generation of polyclonal antibodies by an indirect ELISA assay. The results showed that levels of antibodies were higher in rabbits immunized with Freund ’s adjuvant than with aluminum hydroxide (p =0.005). In order to test cross reactions, we used a recombinant Toxoplasma metallooprotease, a recombinant cysteine protease from Entamoeba histolytica, albumin 2%, hydroxide aluminium and Freund ’s adjuvant as antigens on indirect ELISA assays for the polyclonal serum antibodies. No serum showed absorbances higher than the cutoff level with these antigens, indicating that the polyclonal antibodies were specific for recombinant Toxoplasma NOS. Additionally, we performed immunodetection of the enzyme on Toxoplasma gondii tachyzoites and we obtained a diffuse labeling of the parasite.
Assuntos
Palavras-chave
Texto completo: 1 Coleções: 01-internacional Base de dados: COLNAL / LILACS Assunto principal: Toxoplasma Limite: Animals / Humans Idioma: Es Revista: Infectio Assunto da revista: DOENCAS TRANSMISSIVEIS Ano de publicação: 2008 Tipo de documento: Article País de afiliação: Colômbia País de publicação: Colômbia
Texto completo: 1 Coleções: 01-internacional Base de dados: COLNAL / LILACS Assunto principal: Toxoplasma Limite: Animals / Humans Idioma: Es Revista: Infectio Assunto da revista: DOENCAS TRANSMISSIVEIS Ano de publicação: 2008 Tipo de documento: Article País de afiliação: Colômbia País de publicação: Colômbia