RESUMO
Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) is a known food pathogen, which main reservoir is the intestine of ruminants. The abundance of different STEC lineages in nature reflect a heterogeneity that is characterised by the differential expression of certain genotypic characteristics, which in turn are influenced by the environmental conditions to which the microorganism is exposed. Bacterial homeostasis and stress response are under the control of the alarmone guanosine tetraphosphate (ppGpp), which intrinsic levels varies across the E. coli species. In the present study, 50 STEC isolates from healthy sheep were evaluated regarding their ppGpp content, cytotoxicity and other relevant genetic and phenotypic characteristics. We found that the level of ppGpp and cytotoxicity varied considerably among the examined strains. Isolates that harboured the stx2 gene were the least cytotoxic and presented the highest levels of ppGpp. All stx2 isolates belonged to phylogroup A, while strains that carried stx1 or both stx1 and stx2 genes pertained to phylogroup B1. All but two stx2 isolates belonged to the stx2b subtype. Strains that belonged to phylogroup B1 displayed on average low levels of ppGpp and high cytotoxicity. Overall, there was a negative correlation between cytotoxicity and ppGpp.
Assuntos
Guanosina Pentafosfato/metabolismo , Guanosina Tetrafosfato/metabolismo , Doenças dos Ovinos/microbiologia , Ovinos/microbiologia , Escherichia coli Shiga Toxigênica/genética , Fatores de Virulência/genética , Animais , Reservatórios de Doenças , Infecções por Escherichia coli/microbiologia , Variação Genética , Doenças dos Ovinos/epidemiologia , Toxina Shiga II/metabolismo , Escherichia coli Shiga Toxigênica/imunologia , Escherichia coli Shiga Toxigênica/isolamento & purificaçãoRESUMO
Objetivos: Os genes stx1 e stx2 estão localizados em prófagos do tipo lambda, e nessa condição sua expressão é reprimida. Uma efetiva produção de toxina shiga ocorre somente no momento da indução do prófago e seu posterior desenvolvimento lítico, incluindo a replicação do genoma do fago como um elemento extracromossomal. Material e Método: O potencial de produção da toxina shiga foi observada indiretamente através da indução e quantificação dos fagos stx em 70 isolados (filogrupos B1 e A), com relação ao perfil stx (stx1, stx2, stx1+stx2) foram analisadas 72 cepas. Os isolados foram cultivados com ciprofloxacina durante 18hs. Após este período uma alíquota da cultura foi coletada e centrifugada (10.000rpm/2min), em seguida foi adicionado 50µl de clorofórmio. Depois foram feitas diluições seriadas do sobrenadante e plaqueadas juntamente com Top agar e a bactéria receptora E. coli C600. A contagem das unidades formadoras de placas de lise (PFU) foi realizada após a incubação há 37C por 24 horas. Resultados: Das 60 cepas pertencentes ao filogrupo B1 53% apresentaram placas de lise (32/60), enquanto que somente 20% (2/10) das cepas do filogrupo A expressaram seus prófagos. Já quando comparamos o perfil stx+ a expressão dos profágos, observamos que os isolados do perfil Stx1 foram os que mais expressaram, 72%; enquanto que no perfil stx2 somente dois isolados apresentaram placas d
RESUMO
Objetivos: A contagem de PFU/mL indica a eficiência de produção de fagos pela indução dos prófagos, e geralmente corresponde à eficiência de expressão de genes localizados no lócus stx, bem como a expressão dos promotores stx1 e stx2 nos fagos-stx é diferentemente regulada. Em geral fagos lisogênicos tem particular importância para a dinâmica populacional das células hospedeiras como as STEC. Eles podem aumentar a aptidão competitiva da bactéria hospedeira devido a sua capacidade de alternar para o ciclo lítico e destruir bactérias rivais. Material e Método: Os isolados STEC (n=67) foram cultivados e após uma alíquota foi coletada e centrifugada, em seguida foi adicionado 50µl de clorofórmio. Foram feitas diluições seriadas do sobrenadante e plaqueadas com Top agar e a bactéria receptora E. coli C600. A contagem das unidades formadoras de placas de lise (PFU) foi realizada após a incubação há 37C por 24 horas. Os testes de resistência aos antimicrobianos foram realizados usando-se a técnica de disco-difusão. Resultados: Foram observadas as seguintes frequências de resistência (sulfametoxazol + trimetoprim 1.49%; ciprofloxacina 0%; cefalotina 40.29%; cefoxitina 0%; tetraciclina 0%; ertapenem 1.49%; amicacina 2.98%; gentamicina 1.49%; amoxicilina+clavulanato 0%; norfloxacin 0% e ampicilina 0%). Nota-se também que a disseminação da resistência a cefalotina independe da produçã
RESUMO
Objetivos: O alarmônio ppGpp acumula-se em bactérias submetidas a estresses nutricionais, tais como a limitação de aminoácidos, carbono ou fosfato e também em bactérias submetidas a estresses ambientais. O acúmulo de ppGpp provoca a resposta severa, caracterizada por uma radical diminuição na síntese de ribossomos e proteínas, impedindo o crescimento bacteriano. A capacidade dos agentes patogénicos causadores de doenças alimentares sobreviver em certos alimentos depende de seus mecanismos de resposta ao estresse, neste sentido foi objetivo deste estudo avaliar a variabilidade da produção de ppGpp em isolados STEC de diferentes perfis stx+. Material e Método: Foi avaliada a produção de ppGpp em 33 cepas STEC. As bactérias foram cultivadas em meio mínimo, após este prazo, alíquotas foram retiradas e misturadas a volumes iguais de 2 M de ácido fórmico. O extrato celular foi aplicado a placas de cromatografia. O extrato foi resolvido colocando as placas em uma câmara de cromatografia contendo 1.5 M KH2PO4 (pH 3.4) como solvente e analisada em um Phosphor-Imager. A quantidade de ppGpp foi estimada através da medição de radioatividade dos spots. Resultados: Em média, as cepas stx1 apresentaram um nível de ppGpp de 0,25 unidades, as stx1+stx2 0,28 unidades e as stx2 0,36 unidades. Ou seja, as STEC que carregam apenas stx2 apresentaram em média pelo menos 30% a mais de ppGpp que as c
RESUMO
Objetivos: A habilidade de colonizar as células da mucosa intestinal é uma característica importante quando avaliamos o perfil de virulência das STECs. A adesão pela intimina foi considerada por muitos anos o único fator importante de colonização pelas STEC. Entretanto o rápido progresso das análises genômicas tem acelerado a descoberta de outras formas importantes de adesão, que tem emergido como importantes fatores de colaboração para a colonização intestinal. Material e Método: O nível de adesão de 15 cepas stx+, isoladas de ovinos, foi avaliado por teste de adesão em células Hep-2. As células foram incubadas por 24-48 horas em placas contendo meio DMEM e 10% de soro fetal bovino e em seguida foi adicionado meio DMEM e 2% de soro fetal bovino contendo 1% de D-manose. Uma população de 5x107 células foi inoculada em cada poço. As placas foram incubadas a 37 C por 3 horas. As células foram então lisadas e incubadas por 5 minutos. A contagem do número de colônia viáveis foi utilizado como parâmetro para medição do nível de adesão. Resultados: O nível de adesão entre os grupos stx1, stx2 e stx1+stx2 foi de maneira geral homogêneo e menor do que o da cepa controle O157:H7 stx+. Cabe lembrar que os isolados eram eae negativos, e esta é, provavelmente, a característica genotípica responsável pela menor adesão. Entretanto, já foram relatadas STEC LEE-negativas associadas à doença
RESUMO
Objetivos: A habilidade de colonizar as células da mucosa intestinal é uma característica importante quando avaliamos o perfil de virulência das STECs. A adesão pela intimina foi considerada por muitos anos o único fator importante de colonização pelas STEC. Entretanto o rápido progresso das análises genômicas tem acelerado a descoberta de outras formas importantes de adesão, que tem emergido como importantes fatores de colaboração para a colonização intestinal. Material e Método: O nível de adesão de 15 cepas stx+, isoladas de ovinos, foi avaliado por teste de adesão em células Hep-2. As células foram incubadas por 24-48 horas em placas contendo meio DMEM e 10% de soro fetal bovino e em seguida foi adicionado meio DMEM e 2% de soro fetal bovino contendo 1% de D-manose. Uma população de 5x107 células foi inoculada em cada poço. As placas foram incubadas a 37 C por 3 horas. As células foram então lisadas e incubadas por 5 minutos. A contagem do número de colônia viáveis foi utilizado como parâmetro para medição do nível de adesão. Resultados: O nível de adesão entre os grupos stx1, stx2 e stx1+stx2 foi de maneira geral homogêneo e menor do que o da cepa controle O157:H7 stx+. Cabe lembrar que os isolados eram eae negativos, e esta é, provavelmente, a característica genotípica responsável pela menor adesão. Entretanto, já foram relatadas STEC LEE-negativas associadas à doença
RESUMO
Objetivos: O alarmônio ppGpp acumula-se em bactérias submetidas a estresses nutricionais, tais como a limitação de aminoácidos, carbono ou fosfato e também em bactérias submetidas a estresses ambientais. O acúmulo de ppGpp provoca a resposta severa, caracterizada por uma radical diminuição na síntese de ribossomos e proteínas, impedindo o crescimento bacteriano. A capacidade dos agentes patogénicos causadores de doenças alimentares sobreviver em certos alimentos depende de seus mecanismos de resposta ao estresse, neste sentido foi objetivo deste estudo avaliar a variabilidade da produção de ppGpp em isolados STEC de diferentes perfis stx+. Material e Método: Foi avaliada a produção de ppGpp em 33 cepas STEC. As bactérias foram cultivadas em meio mínimo, após este prazo, alíquotas foram retiradas e misturadas a volumes iguais de 2 M de ácido fórmico. O extrato celular foi aplicado a placas de cromatografia. O extrato foi resolvido colocando as placas em uma câmara de cromatografia contendo 1.5 M KH2PO4 (pH 3.4) como solvente e analisada em um Phosphor-Imager. A quantidade de ppGpp foi estimada através da medição de radioatividade dos spots. Resultados: Em média, as cepas stx1 apresentaram um nível de ppGpp de 0,25 unidades, as stx1+stx2 0,28 unidades e as stx2 0,36 unidades. Ou seja, as STEC que carregam apenas stx2 apresentaram em média pelo menos 30% a mais de ppGpp que as c
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Objetivos: A contagem de PFU/mL indica a eficiência de produção de fagos pela indução dos prófagos, e geralmente corresponde à eficiência de expressão de genes localizados no lócus stx, bem como a expressão dos promotores stx1 e stx2 nos fagos-stx é diferentemente regulada. Em geral fagos lisogênicos tem particular importância para a dinâmica populacional das células hospedeiras como as STEC. Eles podem aumentar a aptidão competitiva da bactéria hospedeira devido a sua capacidade de alternar para o ciclo lítico e destruir bactérias rivais. Material e Método: Os isolados STEC (n=67) foram cultivados e após uma alíquota foi coletada e centrifugada, em seguida foi adicionado 50µl de clorofórmio. Foram feitas diluições seriadas do sobrenadante e plaqueadas com Top agar e a bactéria receptora E. coli C600. A contagem das unidades formadoras de placas de lise (PFU) foi realizada após a incubação há 37C por 24 horas. Os testes de resistência aos antimicrobianos foram realizados usando-se a técnica de disco-difusão. Resultados: Foram observadas as seguintes frequências de resistência (sulfametoxazol + trimetoprim 1.49%; ciprofloxacina 0%; cefalotina 40.29%; cefoxitina 0%; tetraciclina 0%; ertapenem 1.49%; amicacina 2.98%; gentamicina 1.49%; amoxicilina+clavulanato 0%; norfloxacin 0% e ampicilina 0%). Nota-se também que a disseminação da resistência a cefalotina independe da produçã
RESUMO
Objetivos: Os genes stx1 e stx2 estão localizados em prófagos do tipo lambda, e nessa condição sua expressão é reprimida. Uma efetiva produção de toxina shiga ocorre somente no momento da indução do prófago e seu posterior desenvolvimento lítico, incluindo a replicação do genoma do fago como um elemento extracromossomal. Material e Método: O potencial de produção da toxina shiga foi observada indiretamente através da indução e quantificação dos fagos stx em 70 isolados (filogrupos B1 e A), com relação ao perfil stx (stx1, stx2, stx1+stx2) foram analisadas 72 cepas. Os isolados foram cultivados com ciprofloxacina durante 18hs. Após este período uma alíquota da cultura foi coletada e centrifugada (10.000rpm/2min), em seguida foi adicionado 50µl de clorofórmio. Depois foram feitas diluições seriadas do sobrenadante e plaqueadas juntamente com Top agar e a bactéria receptora E. coli C600. A contagem das unidades formadoras de placas de lise (PFU) foi realizada após a incubação há 37C por 24 horas. Resultados: Das 60 cepas pertencentes ao filogrupo B1 53% apresentaram placas de lise (32/60), enquanto que somente 20% (2/10) das cepas do filogrupo A expressaram seus prófagos. Já quando comparamos o perfil stx+ a expressão dos profágos, observamos que os isolados do perfil Stx1 foram os que mais expressaram, 72%; enquanto que no perfil stx2 somente dois isolados apresentaram placas d
RESUMO
Objetivos: RpoS contribui para a virulência através do esforço de sobrevivência contra os sistemas de defesa do hospedeiro, ou diretamente através da regulação de fatores de virulência em certos patógenos. A capacidade dos agentes patogênicos causadores de doenças alimentares sobreviver em certos alimentos depende, principalmente, de seus mecanismos de resposta ao estresse. Neste sentido foi objetivo deste estudo avaliar a variabilidade da produção de RpoS em isolados STEC de diferentes perfis stx+. Material e Métodos: Foi avaliada a produção de RpoS em 31 cepas, 8 cepas stx2, 16 cepas stx1+stx2 e 7 cepas stx1. O lisado de células foi resolvido em gel de acrilamida, e após a eletroforese, as proteínas foram transferidas a uma membrana de nitrocelulose submetida a ensaio de imuno-detecção com o soro anti-RpoS e soro anti-IgG conjugado. Para detecção do complexo, foi utilizado kit de detecção e a membrana exposta a filmes de raios-X. Resultados: Não observamos diferenças significativas no nível de produção de RpoS entre os perfis stx1 e stx2. O perfil stx1+ stx2 produziu, em geral, níveis menores de RpoS do que os dois perfis anteriores, mas nenhuma era rpoS-negativa. Avaliar o nível de produção de RpoS nos isolados STEC é fundamental pois já foi demonstrada sua importância para a E. coli O157:H7 sobreviver sob alta pressão hidrostática, em solo adubado com esterco, em á
RESUMO
Objetivos: A habilidade de colonizar as células da mucosa intestinal é uma característica importante quando avaliamos o perfil de virulência das STECs. A adesão pela intimina foi considerada por muitos anos o único fator importante de colonização pelas STEC. Entretanto o rápido progresso das análises genômicas tem acelerado a descoberta de outras formas importantes de adesão, que tem emergido como importantes fatores de colaboração para a colonização intestinal. Material e Método: O nível de adesão de 15 cepas stx+, isoladas de ovinos, foi avaliado por teste de adesão em células Hep-2. As células foram incubadas por 24-48 horas em placas contendo meio DMEM e 10% de soro fetal bovino e em seguida foi adicionado meio DMEM e 2% de soro fetal bovino contendo 1% de D-manose. Uma população de 5x107 células foi inoculada em cada poço. As placas foram incubadas a 37° C por 3 horas. As células foram então lisadas e incubadas por 5 minutos. A contagem do número de colônia viáveis foi utilizado como parâmetro para medição do nível de adesão. Resultados: O nível de adesão entre os grupos stx1, stx2 e stx1+stx2 foi de maneira geral homogêneo e menor do que o da cepa controle O157:H7 stx+. Cabe lembrar que os isolados eram eae negativos, e esta é, provavelmente, a característica genotípica responsável pela menor adesão. Entretanto, já foram relatadas STEC LEE-negativas associadas à doença
RESUMO
Objetivos: O alarmônio ppGpp acumula-se em bactérias submetidas a estresses nutricionais, tais como a limitação de aminoácidos, carbono ou fosfato e também em bactérias submetidas a estresses ambientais. O acúmulo de ppGpp provoca a resposta severa, caracterizada por uma radical diminuição na síntese de ribossomos e proteínas, impedindo o crescimento bacteriano. A capacidade dos agentes patogénicos causadores de doenças alimentares sobreviver em certos alimentos depende de seus mecanismos de resposta ao estresse, neste sentido foi objetivo deste estudo avaliar a variabilidade da produção de ppGpp em isolados STEC de diferentes perfis stx+. Material e Método: Foi avaliada a produção de ppGpp em 33 cepas STEC. As bactérias foram cultivadas em meio mínimo, após este prazo, alíquotas foram retiradas e misturadas a volumes iguais de 2 M de ácido fórmico. O extrato celular foi aplicado a placas de cromatografia. O extrato foi resolvido colocando as placas em uma câmara de cromatografia contendo 1.5 M KH2PO4 (pH 3.4) como solvente e analisada em um Phosphor-Imager. A quantidade de ppGpp foi estimada através da medição de radioatividade dos spots. Resultados: Em média, as cepas stx1 apresentaram um nível de ppGpp de 0,25 unidades, as stx1+stx2 0,28 unidades e as stx2 0,36 unidades. Ou seja, as STEC que carregam apenas stx2 apresentaram em média pelo menos 30% a mais de ppGpp que as c
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Objetivos: RpoS contribui para a virulência através do esforço de sobrevivência contra os sistemas de defesa do hospedeiro, ou diretamente através da regulação de fatores de virulência em certos patógenos. A capacidade dos agentes patogênicos causadores de doenças alimentares sobreviver em certos alimentos depende, principalmente, de seus mecanismos de resposta ao estresse. Neste sentido foi objetivo deste estudo avaliar a variabilidade da produção de RpoS em isolados STEC de diferentes perfis stx+. Material e Métodos: Foi avaliada a produção de RpoS em 31 cepas, 8 cepas stx2, 16 cepas stx1+stx2 e 7 cepas stx1. O lisado de células foi resolvido em gel de acrilamida, e após a eletroforese, as proteínas foram transferidas a uma membrana de nitrocelulose submetida a ensaio de imuno-detecção com o soro anti-RpoS e soro anti-IgG conjugado. Para detecção do complexo, foi utilizado kit de detecção e a membrana exposta a filmes de raios-X. Resultados: Não observamos diferenças significativas no nível de produção de RpoS entre os perfis stx1 e stx2. O perfil stx1+ stx2 produziu, em geral, níveis menores de RpoS do que os dois perfis anteriores, mas nenhuma era rpoS-negativa. Avaliar o nível de produção de RpoS nos isolados STEC é fundamental pois já foi demonstrada sua importância para a E. coli O157:H7 sobreviver sob alta pressão hidrostática, em solo adubado com esterco, em á
RESUMO
The Pst system is a high-affinity inorganic phosphate transporter found in many bacterial species. Streptococcus mutans, the etiological agent of tooth decay, carries a single copy of the pst operon composed of six cistrons (pstS, pstC1, pstC, pstB, smu.1134 and phoU). Here, we show that deletion of pstS, encoding the phosphate-binding protein, reduces phosphate uptake and impairs cell growth, which can be restored upon enrichment of the medium with high concentrations of inorganic phosphate. The relevance of Pst for growth was also demonstrated in the wild-type strain treated with an anti-PstS antibody. Nevertheless, a reduced ability to bind to saliva-coated surfaces was observed, along with the reduction of extracellular polysaccharide production, although no difference on pH acidification was observed between mutant and wild-type strains. Taken together, the present data indicate that the S. mutans Pst system participates in phosphate uptake, cell growth and expression of virulence-associated traits.
Assuntos
Aderência Bacteriana/fisiologia , Proteínas de Transporte de Fosfato/fisiologia , Streptococcus mutans/fisiologia , Transportadores de Cassetes de Ligação de ATP/análise , Adenosina Trifosfatases/análise , Proteínas de Bactérias/análise , Película Dentária/metabolismo , Técnicas de Inativação de Genes , Inativação Gênica , Genes Bacterianos/genética , Humanos , Concentração de Íons de Hidrogênio , Proteínas de Membrana Transportadoras/análise , Mutação/genética , Óperon/genética , Proteínas de Transporte de Fosfato/genética , Proteínas de Ligação a Fosfato/análise , Fosfatos/análise , Polissacarídeos Bacterianos/metabolismo , Análise de Sequência de DNA , Streptococcus mutans/genética , Streptococcus mutans/metabolismo , Fatores de Transcrição/análise , Virulência/genéticaRESUMO
This study assessed the effect of bacteriophages on the viability of Enterococcus faecalis. Human dental roots were inoculated with a suspension of E. faecalis at three different multiplicities of infection - 0.1, 1.0 and 10.0. The phage lysate was able to significantly inhibit bacteria growth when incubated at the multiplicities of infection of 1.0, 10.0 and 0.1. The dental roots were also inoculated with bacteria for 6 days to allow bacterial penetration into the teeth tubules. Addition of the phage lysate to the roots following the 6-day incubation period led to a substantial reduction in bacteria viability. Phage therapy may be an important alternative for the treatment of root canal infections refractory to conventional endodontic therapy.
Assuntos
Bacteriófagos , Cavidade Pulpar/microbiologia , Dentina/microbiologia , Enterococcus faecalis/virologia , Contagem de Colônia Microbiana , Infecções por Bactérias Gram-Positivas/terapia , HumanosRESUMO
Thioacetamide is a hepatotoxic and hepatocarcinogenic compound that affects liver metabolism, inhibits mRNA transport and induces enlargement of the nucleolus. To investigate the effect of thioacetamide at the molecular level, differential display RT-PCR was conducted. Analysis of nineteen differentially expressed genes demonstrated that ten cDNAs have their expression inhibited while the other nine were positively affected by thioacetamide. Two of the cDNAs were homologous to known genes-TAP and ankyrin-binding glycoprotein-1, two corresponded to repetitive sequences and seven were homologous to expressed sequence tags. The differential expression of some of the isolated cDNAs was confirmed by northern hybridization. It is proposed that since the product of TAP is involved in mRNA transport, thioacetamide inhibition of TAP expression might, at least partially, explain the thioacetamide-induced swelling of the nucleolus.
Assuntos
Feminino , Animais , Ratos , Fígado , Fígado/metabolismo , RNA Mensageiro/genética , RNA Mensageiro/metabolismo , Tioacetamida/administração & dosagem , Tioacetamida/farmacologia , RadioisótoposRESUMO
The pst operon of Escherichia coli, which encodes the phosphate-specific transport system, is composed of five genes, pstS, pstC, pstA, pstB and phoU, whose transcription is induced by phosphate starvation. A phosphate-regulated promoter located upstream of the most proximal gene ( pstS) controls the transcription of the entire operon. Though the full-length pst mRNA could be detected by an improved RT-PCR protocol, Northern analysis using several pst-specific probes failed to reveal this transcript. Instead, smaller but distinct pst mRNA species were evident. Primer-extension experiments localized the 5' ends of pst mRNAs within the operon. The data suggest that the full-length mRNA is rapidly processed post-transcriptionally.
Assuntos
Transportadores de Cassetes de Ligação de ATP/genética , Proteínas de Bactérias/genética , Escherichia coli/genética , Óperon/genética , Transcrição Gênica , Fosfatase Alcalina/metabolismo , Northern Blotting , Primers do DNA/química , Família Multigênica/genética , Fosfatos/metabolismo , Regiões Promotoras Genéticas , RNA Mensageiro/análise , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase ReversaRESUMO
The effect of thioacetamide (TA), an hepatotoxic and hepatocarcinogenic compound, on the expression and activity of the cytosolic enzyme glutathione-S-transferase (GST) was studied in rat liver. Four h following the administration of 14C-labeled thioacetamide (50 mg/Kg), several subunits of GST were found to be radioactively labeled. A single sublethal dose of TA (250 mg/Kg) decreased by three-fold the expression of class alpha GST at 24-48 h of treatment, but did not significantly affect the transcription of class mu GST. The activity of the enzyme toward 1-chloro-2,4-dinitrobenzene was mildly inhibited (66% of the control) by a 24 h TA treatment and gradually increased thereafter. It is proposed that the covalent binding of TA or its derivative to the GST subunits does not affect the activity of the enzyme. Nevertheless, GST activity inhibition is due to the deleterious effect of TA on GST transcription.
Assuntos
Glutationa Transferase/metabolismo , Fígado/efeitos dos fármacos , Fígado/enzimologia , Tioacetamida/farmacologia , África do Norte , Sequência de Aminoácidos , Animais , Radioisótopos de Carbono , Cromatografia em Gel , Citosol/enzimologia , Eletroforese em Gel de Poliacrilamida , Feminino , Glutationa Transferase/antagonistas & inibidores , Glutationa Transferase/genética , Dados de Sequência Molecular , RNA Mensageiro/genética , RNA Mensageiro/metabolismo , Ratos , Ratos Wistar , Alinhamento de Sequência , Tioacetamida/metabolismo , Fatores de Tempo , Transcrição Gênica/efeitos dos fármacosRESUMO
The use of zidovudine (ZDV) and other forms of nucleoside therapy, including dideoxyinosine (ddI), to treat HIV-infected individuals has led to both longer survival and improved quality of life. However, ZDV-resistant variants of HIV-1 can be isolated from patients undergoing prolonged therapy with this drug. HIV drug resistance against ZDV, ddI and other nucleosides is attributable to a series of point mutations within the pol gene of HIV-1 that encodes the viral enzyme, reverse transcriptase (RT). This is not surprising, since the virus is known to replicate at high rates in infected individuals; moreover the RT which mediates transcription of proviral DNA from viral genomic RNA is known to be highly error-prone. Thus, mutants of HIV-1, which possess a drug resistance phenotype and genotype, may be expected to emerge under the selective pressure of long-term anti-viral chemotherapy. HIV drug resistance occurs most commonly in individuals with low CD4 counts, who have progressed to more serious forms of disease. Moreover, viruses obtained from patients with AIDS generally display higher levels of resistance, relative to pre-treatment isolates, than do viruses from patients with more limited illness. Although observations of drug resistance can be correlated with disease progression and a weakened immune system, it is still unclear whether a cause and effect relationship exists. Current clinical research is designed to answer this question while testing the notion that combinations of nucleosides and immuno-stimulatory drugs may provide important clinical benefits.