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Specific calpain activity evaluation in Plasmodium parasites.
Gomes, Mayrim M; Budu, Alexandre; Ventura, Priscilla D S; Bagnaresi, Piero; Cotrin, Simone S; Cunha, Rodrigo L O R; Carmona, Adriana K; Juliano, Luiz; Gazarini, Marcos L.
Afiliação
  • Gomes MM; Departamento de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia, Escola Paulista de Medicina, UNIFESP, São Paulo, SP, Brazil; Departamento de Biociências, Universidade Federal de São Paulo, Santos, SP, Brazil.
  • Budu A; Departamento de Biofísica, Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, SP, Brazil.
  • Ventura PD; Departamento de Biociências, Universidade Federal de São Paulo, Santos, SP, Brazil.
  • Bagnaresi P; Departamento de Biofísica, Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, SP, Brazil.
  • Cotrin SS; Departamento de Biofísica, Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, SP, Brazil.
  • Cunha RL; Centro de Ciências Naturais e Humanas, Universidade Federal do ABC, Santo André, SP, Brazil.
  • Carmona AK; Departamento de Biofísica, Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, SP, Brazil.
  • Juliano L; Departamento de Biofísica, Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, SP, Brazil.
  • Gazarini ML; Departamento de Biociências, Universidade Federal de São Paulo, Santos, SP, Brazil. Electronic address: marcos.gazarini@unifesp.br.
Anal Biochem ; 468: 22-7, 2015 01 01.
Article em En | MEDLINE | ID: mdl-25281458
In the intraerythrocytic trophozoite stages of Plasmodium falciparum, the calcium-dependent cysteine protease calpain (Pf-calpain) has an important role in the parasite calcium modulation and cell development. We established specific conditions to follow by confocal microscopy and spectrofluorimetry measurements the intracellular activity of Pf-calpain in live cells. The catalytic activity was measured using the fluorogenic Z-Phe-Arg-MCA (where Z is carbobenzoxy and MCA is 4-methylcoumaryl-7-amide). The calmodulin inhibitor calmidazolium and the sarcoplasmic reticulum calcium ATPase inhibitor thapsigargin were used for modifications in the cytosolic calcium concentrations that persisted in the absence of extracellular calcium. The observed calcium-dependent peptidase activity was greatly inhibited by specific cysteine protease inhibitor E-64 and by the selective calpain inhibitor ALLN (N-acetyl-l-leucyl-l-leucyl-l-norleucinal). Taken together, we observed that intracellular Pf-calpain can be selectively detected and is the main calcium-dependent protease in the intraerythrocytic stages of the parasite. The method described here can be helpful in cell metabolism studies and antimalarial drug screening.
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Texto completo: 1 Coleções: 01-internacional Base de dados: MEDLINE Assunto principal: Plasmodium falciparum / Calpaína / Proteínas de Protozoários / Plasmodium chabaudi Limite: Animals Idioma: En Revista: Anal Biochem Ano de publicação: 2015 Tipo de documento: Article País de afiliação: Brasil País de publicação: Estados Unidos
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