Amplificación del adn de la subunidad-1 del receptor n-metil-d-aspartato (nmdar-1) en el hipotálamo ovino mediante la técnica de rt-pcr / Dna amplification of the n-methyl-d-aspartate receptor subunit-1 (nmdar-1) in sheep hypothalamus by rt-pcr
Rev. cient. (Maracaibo)
; Rev. cient. (Maracaibo);16(5): 496-505, oct. 2006. ilus, tab
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em Es
| LILACS
| ID: lil-630972
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VE1.1
RESUMEN
El receptor N-metil-D-aspartato (NMDAR), uno de los principales receptores de los aminoácidos excitatorios, ha sido involucrado en el control de la secreción de la hormona luteinizante (LH) al facilitar la liberación de la hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH). La capacidad del NMDAR para estimular la liberación de la LHRH está significativamente comprometida en animales castrados. En este estudio se plantearon tres objetivos:
Primero, estandarizar las condiciones óptimas para re-amplificar el ADN de la subunidad-1 del NMDAR (NMDAR-1) en ovino. Segundo, determinar si existe diferencia en la distribución del ADN de la NMDAR-1 en los diferentes cuadrantes hipotalámicos del ovino no castrado y finalmente, determinar si las hormonas sexuales testiculares están involucradas en la expresión del NMDAR en el hipotálamo. El ADN de la NMDAR-1 procedente de cuatro cuadrantes del hipotálamo (cuadrantes dorsal-rostral, ventral-rostral, dorsal-caudal, y ventral-caudal) fue amplificado mediante la técnica de RT-PCR. Las condiciones óptimas encontradas para amplificar el ADN de la NMDAR-1 fueron 1,5 mM CIMg2, 100 nM de los oligonucleótidos iniciadores y 59°C como temperatura de hibridación. No se observó efecto del cuadrante del hipotálamo sobre la expresión del ADN de la NMDAR-1 en el hipotálamo del ovino no castrado. La castración redujo (P < 0,05) la expresión del ADN para el NMDAR-1, comparado con la de animales no castrados. Estos resultados sugieren que el NMDAR-1 se encuentra distribuido ampliamente en el hipotálamo del ovino. Además, a través de estos resultados se puede presumir que la expresión del receptor NMDA en el hipotálamo del ovino está afectada por las hormonas sexuales esteroideas.ABSTRACT
The N-methyl-D-aspartate receptor (NMDAR), one of the excitatory amino acid receptors, has been implicated in the control of luteinizing hormone (LH) secretion through facilitation of luteinizing hormone releasing-hormone (LHRH). Interestingly, the ability of NMDAR to stimulate LHRH release is significantly compromised in castrated animals. The present study had three aims. Firstly, to standardize the optimal conditions used to amplify the DNA for NMDAR subtype-1 (NMDAR-1) in the sheep. Second, to determine whether a difference exists in the distribution of DNA for NMDAR-1 in different hypothalamic regions in intact male sheep. Finally, to determine if testicular steroid hormones are involved in NMDA receptor expression in the hypothalamus. The DNA of NMDAR-1 was amplified by RT-PCR in four quadrants of the hypothalamus (dorsal-rostral, ventral-rostral, dorsal-caudal, and ventral-caudal quadrant) of intact and castrated male sheep. The optimal conditions to amplify the DNA of NMDAR-1 were 1.5 mM MgCl2, 100 nM of primers and 59°C annealing temperature. In experiment 1, there was no effect of quadrant on the DNA expression of NMDAR-1 in the hypothalamus of the intact male sheep. Experiment 2 revealed that castration reduced (P < 0.05) the expression of DNA for NMDAR compared to that in intact males. Taken together, these data suggest that NMDAR-1 is widely expressed in the hypothalamus of male sheep. Furthermore these experiments suggest that testicular steroid hormones are involved in the regulation of NMDAR-1 expression at the DNA level, which allows understanding of its involvement in the modulation of different activities including reproduction.
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LILACS
Idioma:
Es
Revista:
Rev. cient. (Maracaibo)
Assunto da revista:
VETERINARIA
Ano de publicação:
2006
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Article
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Venezuela