Atualmente, os produtos naturais são considerados uma importante fonte de moléculas com potencial terapêutico. A Literatura demonstra que os componentes da secreção de sapos pertencentes à família Bufonidae induzem efeito antinociceptivo. Assim, os objetivos deste estudo são identificar e caracterizar moléculas antinociceptivas na secreção das glândulas parotoides de sapos Rhinella icterica e Rhinella marina e determinar seus mecanismos de ação. Após um screening inicial detectamos a presença de quatro compostos com atividade analgésica. Estes compostos foram purificados por RP-HPLC e identificados por espectrometria de massa como Dehidrobufotenina, Bufalina, Morinobufagina e Telecinobufagina. O efeito antinociceptivo destes compostos foram avaliados pelo teste de von Frey eletrônico, utilizando o modelo de hiperalgesia induzida por carragenina. Os resultados demonstraram que a Bufotenina, Telecinobufagina, Marinobufagina e Bufalina nas doses de 50 μg, 100 μg e 200 μg após administração por via oral, conseguiram reverter a hiperalgesia induzida pela carragenina 30 minutos após o tratamento, com um pico de atividade observado em 1 hora (p<0,001). Adicionalmente, não foram observadas alterações motoras para nenhum dos quatro compostos, que foram avaliados através do teste de campo aberto, labirinto em cruz elevado ou atividade citotóxica em cardiomiócitos. Avaliamos ainda os mecanismos de ação envolvidos no efeito analgésico destes compostos. Nossos resultados demonstraram que o tratamento com o antagonista seletivo para receptores 5- HT1a (300 nmol/pata), 5-HT2a (300 nmol/pata), delta opióide (90 μg/pata) e kappa opióide (75 μg/pata) estão envolvidos no efeito antinociceptivo induzido pelo alcaloide bufotenina (200 μg/100 μL). Já os animais tratados com os compostos esteroides telecinobufagina (200μg/100μL) e marinobufagina (200μg/100μL) tiveram a hiperalgesia revertida quando foram injetados com os antagonistas seletivos AM251 (40 μg/pata) e AM630 (25 μg/pata) revelando o envolvimento de receptores CB1 e CB2 respectivamente no efeito antinociceptivo (p<0,001). A bufalina (200μg/100μL) foi o único composto esteroide que não apresentou envolvimento de nenhum dos mecanismos testados, sendo eles opióides, canabinóides e serotoninérgicos. Portanto, realizamos análise em bancos de dados de moléculas considerando a estrutura da bufalina na busca por alvos de ação. Os resultados obtidos a partir dessa análise mostraram que a bufalina é ativadora de canais de cloreto in vitro. Com base nisso, avaliamos o envolvimento dos canais de cloreto ativados por cálcio e dos canais tipo 2 no efeito antinociceptivo, devido sua presença em fibras nociceptivas periféricas. Os resultados revelaram o envolvimento de canais de cloreto ativados por cálcio (300 μM/pata) no efeito da bufalina. Com esses dados, podemos confirmar a atividade antinocieptiva dos quatro compostos isolados da secreção das parotóides dos sapos R. icterica e R. marina - Bufotenina, Bufalina, Marinobufagina e Telecinobufagina.