Identificação molecular por reação em cadeia da polimerase multiplex para espécies do gênero Candida de importância médica / Molecular identification by polymerase chain reaction multiplex for Candida species of medical importance
São José dos Campos; s.n; 2014. 45 p. ilus, tab, graf.
Thesis
em Pt
| BBO
| ID: biblio-867609
Biblioteca responsável:
BR243.1
Localização: BR243.1; D17, S59i
RESUMO
Este estudo teve como objetivo padronizar a identificação das amostras de espécies de Candida albicans e não-albicans por meio da técnica molecular da reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex Os isolados foram obtidos de um estudo prévio, no qual foram realizados os procedimentos de coleta, isolamento e identificação das espécies de Candida de indivíduos HIV positivos e controle. Foram realizadas provas fenotípicas como a produção de clamidoconídeos e formação de tubo germinativo e pelo sistema de identificação API 20 C AUX. Para a identificação molecular de cada espécie foram utilizadas cepas ATCC e controle positivo. Os isolados foram semeados em caldo Sabouraud dextrose e incubados à 37 ºC por 24 h. Foi realizada a extração, quantificação e purificação do DNA. A amplificação do DNA foi realizada por iniciadores específicos para a identificação de C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei e C. guilliermondii. A presença e o comprimento dos fragmentos amplificados foram analisados em gel de agarose com brometo de etídio e visualizadas em luz ultra-violeta. Um total de 104 amostras previamente identificadas pelo API foram identificadas pela PCR multiplex e os resultados mostraram que apenas 14,4% estavam em discordância com o método fenotípico, dentre elas, dez amostras de C. albicans, duas de C. glabrata, uma de C. parapsilosis e duas de C. tropicalis. As amostras em discordância foram semeadas em meio cromogênico para Candida para confirmação da PCR multiplex. Os procedimentos de identificação fenotípicas geraram um custo aproximado de R$82,00 por amostra. PCR multiplex teve um gasto de aproximadamente R$8,00 por amostra e o tempo gasto na técnica molecular levou aproximadamente 8 h, já a identificação por métodos clássicos e bioquímicos podem exigir até 72 h. Concluimos que a PCR multiplex é um método preciso, fácil, econômico e rápido para a identificação destas espécies
ABSTRACT
This study aimed to standardize sample identification of Candida albicans and non-albicans species by polymerase chain reaction of molecular (PCR) multiplex The isolates were obtained from a previous study, in which the procedures were performed collection, isolation and identification of Candida species of HIV-infected individuals and control. Phenotypic tests such as chlamydospore production and germ tube formation and the identification system API 20 C AUX were performed. For the molecular identification of each species were used strains ATCC and positive control. The isolates were plated on Sabouraud dextrose broth and incubated at 37 °C for 24 h. Extraction, quantitation and purification of DNA was carried out. DNA amplification was performed with specific primers for the identification of C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei and C. guilliermondii. The presence and length of the amplified fragments were analyzed on agarose gel with ethidium bromide and visualized under ultra-violet light. A total of 104 samples previously identified by API were identified by multiplex PCR and the results showed that only 14.4% were in disagreement with the phenotypic method, among them, ten samples of C. albicans, two C. glabrata, one C. parapsilosis, and two C. tropicalis. Samples in dissent were sown in chromogenic medium for Candida to confirm the PCR multiplex. The phenotypic identification procedures generated a cost of R$82.00 per sample. Multiplex PCR had a cost of about R$8.00 per sample and the time spent in molecular technique took about 8 h, since the identification by classical biochemical methods and may require up to 72 h. We conclude that the multiplex PCR method is an accurate, easy, economical and quick to identify these species
Palavras-chave
Texto completo:
1
Coleções:
06-national
Base de dados:
BBO
Assunto principal:
Candida
/
Candida albicans
/
Diagnóstico
Tipo de estudo:
Diagnostic_studies
Aspecto:
Determinantes_sociais_saude
Idioma:
Pt
Ano de publicação:
2014
Tipo de documento:
Thesis
País de publicação:
Brasil