Definição dos dinucleotídeos CpG metilados no promoter do gene PLCG2 e de sua influência na repressão transcricional em tumores de Wilms / Definition of methylated CpG sites in PLCG2 gene promoter and its influence on transcriptional silencing in Wilms tumors
São Paulo; s.n; 2011. 130 p. ilus, tab.
Thesis
em Pt
| Inca
| ID: biblio-1129458
Biblioteca responsável:
BR30.1
Localização: BR30.1
RESUMO
O tumor de Wilms (TW) é um tumor renal embrionário que apresenta diversidade histológica e características moleculares que recapitulam a nefrogênese normal, sendo considerado um modelo apropriado para o estudo da relação biológica entre diferenciação do rim e tumorigênese. Esse tumor se origina da incapacidade das células nefrogênicas mesenquimais de completar a transição mesênquima-epitélio, resultando em um tumor composto por três componentes histológicos - blastema, epitélio e estroma. Nosso grupo vem estudando TW no contexto de diferenciação do rim com o objetivo de identificar os eventos precoces que desencadeiam o surgimento do tumor. Nesse sentido, o grupo identificou uma assinatura denominada TW e desenvolvimento do rim, composta de 25 genes envolvidos nesses eventos. Anotação funcional revelou um enriquecimento de genes pertencentes à via Wnt, representada por APC, ROCK2 e PLCG2. A expressão do PLCG2 mostrou-se diminuída/ausente na grande maioria dos tumores recapitulando os primeiros estágios de diferenciação do rim e sugerindo que a expressão de PLCG2 é um evento importante na diferenciação do rim e sua inibição seja um fator importante para o surgimento do TW. Nesse contexto, o objetivo desse estudo foi avaliar o mecanismo de repressão transcricional do gene em amostras de TW. Uma análise da região promotora desse gene, revelou a existência de grande concentração de dinucleotídeos CpG, sugerindo a possibilidade desse gene sofrer regulação epigenética por metilação do DNA, sendo portanto necessária a definição dos dinucletídeos CpGs potencialmente envolvidos na regulação da expressão de PLCG2. Para isso a linhagem HEK293, de células renais embrionárias humanas normais, foi tratada com o agente desmetilante 5-aza-2'deoxicitidina apresentando a reativação da expressão de PLCG2, o que sugeriu fortemente que o gene é regulado por metilação. Em seguida o DNA das células foi tratado com bissulfito de sódio oara definição dos sítios CpG envolvidos nessa regulação. Essa análise revelou 8 sítios CpG potencialmente envolvidos na regulação da expressão do gene. Os 8 sítios CpGs foram investigados em 55 amostras de TW e 12 amostras de RM, dos quais sete apresentaram-se mais metiladas em TW (P < 0,05). Correlação inversa (P<0,001) foi observada entre o nível de metilação e de transcrição de PLCG2, confirmando ser a metilação desses 8 CpGs um dos principais mecanismos de repressão desse gene nos TW.
ABSTRACT
Wilms tumor (WT) is an embryonic renal tumor that presents histological diversity and molecular features that recapitulate the normal nephrogenesis, and it is considered an appropriate model for studying the biological relationship between differentiation and tumorigenesis of the kidney. This tumor arises from the failure of nephrogenic mesenchymal cells to complete the mesenchyme-epithelium transition, resulting in a tumor composed of three histological components - blastema, epithelium and stroma. Our group has been studying WT in the context of differentiation of the kidney in order to identify the early events that trigger the origin of the tumor. Therefore, our group identified a signature denominated WT and kidney development, consisting of 25 genes involved in these events. Functional annotation revealed an overrepresentation of genes belonging to the Wnt pathway, represented by APC, ROCK2 and PLCG2. The expression of PLCG2 was reduced or absent in most tumors, recapitulating the early stages of kidney differentiation and suggesting that the expression of PLCG2 is an important event in the differentiation of the kidney and that its inhibition is an important factor for the origin of TW. In this context, the aim of this study was to evaluate the mechanism of transcriptional repression of PLCG2 in WT samples. An analysis of the promoter region of this gene revealed the presence of high CpG sites density, suggesting that this gene can be under epigenetic regulation by DNA methylation. For this reason, it becomes important to define the CpG sites potentially involved with the regulation of the expression of PLCG2. Thus, HEK293 cells, a human embryonic kidney cell line, was treated with 5-aza-2'deoxicitidina, a emethylating agent, driving to reactivation, which strongly suggested that this gene is regulated by methylation. Then the DNA of cells was treated with sodium bisulfite to define the CpG sites involved with this regulation. This analysis revealed eight CpG sites potentially involved with the regulation of gene expression. These CpGs sites were investigated in 55 WT samples and in 12 mature kidney (MK) samples, and seven of which showed to be more methylated in TW than in RM (P<0.05). Significant inverse correlation (P<0.001) was observed between the methylation level and PLCG2 expression, confirming that the methylation of these eight CpGs is one of the principal mechanisms of PLCG2 transcriptional repression in TW.
Palavras-chave
Texto completo:
1
Base de dados:
Inca
Assunto principal:
Tumor de Wilms
/
Fosfolipase C gama
/
Neoplasias Renais
/
Metilação
Idioma:
Pt
Ano de publicação:
2011
Tipo de documento:
Thesis
País de publicação:
Brasil