Expression of recombinant proteins with uniform N-termini.

Király, Orsolya; Guan, Lan; Sahin-Tóth, Miklós

Király, Orsolya; Guan, Lan; Sahin-Tóth, Miklós.

Afiliación

Király O; Department of Molecular and Cell Biology, Henry M. Goldman School of Dental Medicine, Boston University, Boston, MA, USA. okiraly@mit.edu

Methods Mol Biol ; 705: 175-94, 2011.

Article en En | MEDLINE | ID: mdl-21125386

RESUMEN

Heterologously expressed proteins in Escherichia coli may undergo unwanted N-terminal processing by methionine and proline aminopeptidases. To overcome this problem, we present a system where the gene of interest is cloned as a fusion to a self-splicing mini-intein. This fusion construct is expressed in an engineered E. coli strain from which the pepP gene coding for aminopeptidase P has been deleted. We describe a protocol using human cationic trypsinogen as an example to demonstrate that recombinant proteins produced in this expression system contain homogeneous, unprocessed N-termini.

Asunto(s)

Escherichia coli/metabolismo; Inteínas; Proteínas Recombinantes de Fusión/biosíntesis; Tripsinógeno/biosíntesis; Aminopeptidasas/genética; Escherichia coli/genética; Proteínas de Escherichia coli/genética; Eliminación de Gen; Humanos; Estructura Terciaria de Proteína; Tripsinógeno/genética

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Texto completo: 1 Colección: 01-internacional Base de datos: MEDLINE Asunto principal: Tripsinógeno / Proteínas Recombinantes de Fusión / Inteínas / Escherichia coli Límite: Humans Idioma: En Revista: Methods Mol Biol Asunto de la revista: BIOLOGIA MOLECULAR Año: 2011 Tipo del documento: Article País de afiliación: Estados Unidos Pais de publicación: Estados Unidos

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