Purification and properties of Aquifex aeolicus DNA polymerase expressed in Escherichia coli.

Chang, J R; Choi, J J; Kim, H K; Kwon, S T

Chang, J R; Choi, J J; Kim, H K; Kwon, S T.

Afiliación

Chang JR; Department of Genetic Engineering, Sungkyunkwan University, 300 Chunchon-dong, Jangan-Ku, Suwon 440-746, South Korea.

FEMS Microbiol Lett ; 201(1): 73-7, 2001 Jul 10.

Article en En | MEDLINE | ID: mdl-11445170

RESUMEN

The gene encoding Aquifex aeolicus (Aae) DNA polymerase was expressed under the control of the trp promoter on a high-copy plasmid, pTRPNS, in Escherichia coli. The expressed enzyme was purified 11-fold with a 13.8% yield and a specific activity of 2268.3 U mg(-1). The optimum pH of the enzyme was 6.8-7.2. The optimal concentrations of KCl and Mg(2+) were 20-30 mM and 4-5 mM, respectively. Aae DNA polymerase contained a double-strand-dependent 3'-->5' proofreading exonuclease activity but lacked any detectable 5'-->3' exonuclease activity.

Asunto(s)

ADN Polimerasa Dirigida por ADN/aislamiento & purificación; ADN Polimerasa Dirigida por ADN/metabolismo; Escherichia coli/genética; Bacilos y Cocos Aerobios Gramnegativos/enzimología; Cationes Bivalentes/farmacología; Clonación Molecular; ADN/metabolismo; ADN Polimerasa Dirigida por ADN/genética; Ácido Edético/farmacología; Exonucleasas/metabolismo; Bacilos y Cocos Aerobios Gramnegativos/genética; Concentración de Iones de Hidrógeno; Magnesio/farmacología; Cloruro de Potasio/farmacología; Proteínas Recombinantes/aislamiento & purificación; Proteínas Recombinantes/metabolismo; Temperatura; Transformación Bacteriana

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Colección: 01-internacional Base de datos: MEDLINE Asunto principal: Bacilos y Cocos Aerobios Gramnegativos / ADN Polimerasa Dirigida por ADN / Escherichia coli Idioma: En Revista: FEMS Microbiol Lett Año: 2001 Tipo del documento: Article País de afiliación: Corea del Sur Pais de publicación: Reino Unido

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