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PCR em tempo real para detecção do vírus da doença de Aujeszky / Real time PCR for detection of Aujeszky's disease virus
Fonseca Júnior, A. A; Cotorello, A. C; Dias, N. L; D'Ambros, R; Leite, R. C; Heneimann, M. B; Reis, J. K. P.
Afiliación
  • Fonseca Júnior, A. A; Laboratório Nacional Agropecuário. Pedro Leopoldo. BR
  • Cotorello, A. C; Laboratório Nacional Agropecuário. Pedro Leopoldo. BR
  • Dias, N. L; Laboratório Nacional Agropecuário. Pedro Leopoldo. BR
  • D'Ambros, R; Centro de Diagnóstico em Sanidade Animal. Concórdia. BR
  • Leite, R. C; Universidade Federal de Minas Gerais. Escola de Veterinária. Belo Horizonte. BR
  • Heneimann, M. B; Universidade Federal de Minas Gerais. Escola de Veterinária. Belo Horizonte. BR
  • Reis, J. K. P; Universidade Federal de Minas Gerais. Escola de Veterinária. Belo Horizonte. BR
Arq. bras. med. vet. zootec ; 65(3): 801-808, June 2013. tab
Article en Pt | LILACS | ID: lil-679116
Biblioteca responsable: BR68.1
RESUMO
O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma PCR em tempo real (qPCR) para o diagnóstico rápido e sensível da doença de Aujeszky. Os iniciadores amplificaram um fragmento de 123 pares de base do gene codificante da glicoproteína D. A qPCR foi testada em 25 amostras de cérebro de suíno positivas e 85 amostras negativas para DA no isolamento viral e na soroneutralização. A sensibilidade analítica foi calculada com acréscimo de um isolado brasileiro do SuHV-1 titulado em amostras de cérebro de suíno negativas na soroneutralização e na PCR. A técnica apresentou sensibilidade analítica de 10-0,5 TCID50/50µL. A qPCR foi capaz de distinguir reações inespecíficas devido a dímero de oligonucleotídeos iniciadores ou amplificações, além do alvo designado (evitando, assim, os falso-positivos), e de obter resultados rápidos.
ABSTRACT
The aim of this study was to validate a low-cost real-time PCR for a quick and sensitive diagnosis of the disease. The fluorofore used was a DNA intercalating agent, one of the cheaper detection systems. Primers amplified a 123 base pairs fragment of the gene coding for glycoprotein D. PCR was tested on 25 samples of pig brain positive for AD and 85 samples negative in viral isolation and serum neutralization. The detection limit was calculated on samples of pig brain contaminated with a Brazilian isolate of SuHV-1. The technique had a detection limit of 10-0,5 TCID50/50µL. PCR was able to distinguish nonspecific reactions due to primer dimers (thus avoiding false positives) and get faster results.
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Texto completo: 1 Colección: 01-internacional Base de datos: LILACS Asunto principal: Virus / Reacción en Cadena de la Polimerasa / Diagnóstico Tipo de estudio: Diagnostic_studies Límite: Animals Idioma: Pt Revista: Arq. bras. med. vet. zootec Asunto de la revista: MEDICINA VETERINARIA Año: 2013 Tipo del documento: Article País de afiliación: Brasil Pais de publicación: Brasil
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Texto completo: 1 Colección: 01-internacional Base de datos: LILACS Asunto principal: Virus / Reacción en Cadena de la Polimerasa / Diagnóstico Tipo de estudio: Diagnostic_studies Límite: Animals Idioma: Pt Revista: Arq. bras. med. vet. zootec Asunto de la revista: MEDICINA VETERINARIA Año: 2013 Tipo del documento: Article País de afiliación: Brasil Pais de publicación: Brasil