Colonização e infecção experimental de Lutzomyia longipalpis, para padronização da técnica de PCR e identificação de Leishmania no vetor / Experimental colonization and infection of Lutzomyia longipalpis for standartization of PCR technique and identification of Leishamania sp in the vector
São Paulo; s.n; 2006-set. 110 p. ilus, tab. (BR).
Thesis
en Pt
| SES-SP, SESSP-SUCENPROD, SES-SP, SESSP-TESESESSP, SES-SP
| ID: biblio-1069616
Biblioteca responsable:
BR93.2
Ubicación: BR93.2; . 732c14533
RESUMO
No período de 1999 a agosto de 2005, 54 óbitos e 462 casos humanos de leishmaniose visceral americana foram confirmados na região de Araçatuba, noroeste do Estado de São Paulo, onde a enzootia canina está presente em 31 municípios. Frente ao agravamento desta situação, a identificação da taxa de infecção dos flebotomíneos é um parâmetro importante para a priorização das áreas a serem trabalhadas. O presente estudo teve como objetivos:
padronizar e avaliar a técnica da reação em cadeia pela polimerase (PCR) para identificar flebotomíneos experimentalmente infectados por Leishmania chagasi, bem como estabelecer e manter a colônia de Lutzomyia longipalpis; infectar experimentalmente exemplares de Lutzomyia longipalpis; definir a sensibilidade da PCR para detecção de L. chagasi e comparar a microscopia direta do trato digestivo e a PCR para detecção e identificação de flebotomíneos experimentalmente infectados por L. chagasi. Para a extração de DNA foi utilizado o método fenol/clorofórmio, após digestão prévia com proteinase K. A partir de uma seqüência que codifica para a região 28S ribossomal de Lutzomyia longipalpis, oligonucleotídeos foram desenhados utilizando-se o programa Primer 3â. Exemplares de F1 de Lu. Longipalpis, obtidos de colônia, foram contaminados artificialmente com diluições seriadas, na base 10, de formas promastigotas de L. chagasi mantidas em cultura e exemplares de flebotomíneos, capturados em campo, foram infectados experimentalmente por formas amastigotas e promastigotas de L. chagasi. Para a amplificação de fragmento de DNA de cinetoplasto de Leishmania sp foram utilizados oligonucleotídeos iniciadores descritos por Rodgers et al. (1990). A PCR padronizada para identificação de Lu. Longipalpis resultou em amplificação de um fragmento de DNA de 370 pares de base (pb). Quanto aos exemplares de LU. Longipalpis contaminados com as formas flageladas de L. chagasi, quando submetidos à técnica de PCR, observou-se a presença de fragmento de 120 pb em todas diluições testadas, bem como nos exemplares infectados experimentalmente, demonstrando-se a potencialidade desta ferramenta na detecção de flebotomíneos infectados.
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Colección:
06-national
/
BR
Base de datos:
SES-SP
/
SESSP-SUCENPROD
/
SESSP-TESESESSP
Asunto principal:
Leishmaniasis Visceral
Tipo de estudio:
Diagnostic_studies
Límite:
Aged80
/
Animals
/
Female
/
Humans
/
Male
País/Región como asunto:
America do sul
/
Brasil
Idioma:
Pt
Año:
2006
Tipo del documento:
Thesis
Pais de publicación:
Brasil