RESUMO
INTRODUCTION: Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases (NOX 1-5) are enzymes that generate cellular reactive oxygen species (ROS) besides mitochondria and might be important ROS sources associated with pregnancy complications, particularly preterm premature rupture of membranes (pPROM), that has been related to ROS. OBJECTIVE: To characterize NOX enzymes expression in human fetal membranes. METHODS: Differential expression and localization of NOX isoforms in human fetal membranes collected from women with uncomplicated pregnancies at term, preterm birth (PTB) or pPROM and in vitro in normal term membranes maintained in an organ explant system stimulated with water-soluble cigarette smoke extract (wsCSE) were documented by real time PCR and immunohistochemistry. RESULTS: Fetal membranes from term deliveries, PTB and pPROM expressed NOX 2, 3 and 4 mRNAs whereas NOX 1 and 5 were not detected. NOX 2 expression was 2.3-fold higher in PTB than pPROM (p = 0.005) whereas NOX 3 was 2.2-fold higher in pPROM compared to PTB (p = 0.04). NOX 2 and 3 expressions at term mimicked pPROM and PTB, respectively. No difference in NOX 4 expression was observed among the studied groups. NOX 2, 3 and 4 were localized to both amniotic and chorionic cells. Expression of NOX 2, 3 and 4 were not significant in wsCSE-stimulated membranes compared to untreated controls. DISCUSSION/CONCLUSIONS: NOX enzymes are present in the fetal membranes and are differentially expressed in PTB and pPROM. Absence of any changes in NOXs expression after wsCSE stimulation suggests ROS generation in the membranes does not always correlate with NOX expression.
Assuntos
Membranas Extraembrionárias/enzimologia , Ruptura Prematura de Membranas Fetais/enzimologia , Glicoproteínas de Membrana/biossíntese , Proteínas de Membrana/biossíntese , NADPH Oxidases/biossíntese , Nascimento Prematuro/enzimologia , Adulto , Feminino , Humanos , Recém-Nascido , NADPH Oxidase 2 , Gravidez , Espécies Reativas de Oxigênio/metabolismo , Fumar/fisiopatologiaRESUMO
En este trabajo se ha caracterizado al factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a) como una señal contenida en la membrana corioamniótica de casos con ruptura prematura de membranas complicada con infección y que induce la expresión y que induce la expresión de enzimas que degradan a los componentes de matriz extracelular en las membranas fetales. Esta citocina es producida normalmente por células del sistema inmune en respuesta al contacto con agentes infecciosos y su identificación constituye el establecimiento de un nexo molecular directo entre la respuesta inflamatoria y el desarrollo de ruptura prematura de membranas
Assuntos
Northern Blotting , Western Blotting , Células Cultivadas , Corioamnionite , Epitélio/ultraestrutura , Ruptura Prematura de Membranas Fetais/complicações , Ruptura Prematura de Membranas Fetais/enzimologia , Ruptura Prematura de Membranas Fetais/microbiologia , Infecções/enzimologiaRESUMO
Las metaloprotesas de matriz extracelular (MMP) son las mediadoras fisiológicas de la degradación de la colágena y su participación en la fisiopatogenia de la ruptura prematura de membranas ha sido sugerida por nuestro grupo. Con objeto de definir si algunas MMP se activan de manera coordinada con el trabajo de parto en las membranas fetales, analizamos la actividad enzimática y proteína inmunorreactiva presente en extractos de membranas obtenidas durante cesáreas, sin trabajo de parto, aunque su actividad/cantidad fue apenas detectable. En cambio los extractos de membranas fetales obtenidas durante el trabajo de parto activo, mostraron gran actividad/cantidad de ésta MMP. Con ayuda de un anticuerpo monoclonal, fue posible demostrar que la forma activa de la MMP-9 se podía encontrar sólo en las muestras con trabajo de parto. La MMP-9 y su ARN mensajero correspondiente fueron localizados por inmunohistoquímica e hibridación in situ en el epitelio amniótico, en algunos fibroblastos de la capa compacta y en células con características de trofoblasto en el corion. Se concluye que: 1. La actividad y la cantidad de la MMP-9 se incrementa de manera selectiva asociada al trabajo de parto y 2. que esta enzima es expresada por diferentes poblaciones celulares de la membrana fetal
Assuntos
Colágeno/fisiologia , Colágeno/química , Matriz Extracelular/enzimologia , Matriz Extracelular/fisiologia , Membranas Extraembrionárias/química , Membranas Extraembrionárias/enzimologia , Membranas Extraembrionárias/ultraestrutura , Ruptura Prematura de Membranas Fetais/enzimologia , Imuno-Histoquímica/instrumentação , Trabalho de Parto/fisiologia , Metaloproteases/biossíntese , Metaloproteases/isolamento & purificação , Metaloproteases/fisiologiaRESUMO
The phospholipase A2 activity in young amniotic fluids: 1.782, was determined. In the term amniotic fluids, the activity was 10.693. The detected activity in fluids from premature rupture of membranes was 29.077 in the group with infection, add 12.357 for the samples without infection. It was seen that young amniotic fluid has less activity. The group with infection showed the greatest activity. The significant increase of phospholipase A2 activity in term amniotic fluids and with PRM, in comparison with what is seen in young fluids suggests the active participation of the soluble form of this enzyme as mediator in the increase of Prostaglandin E2 seen in the amniotic fluid of the two first groups. Accordingly, one may think that PPLA2 could be a central mediator in membranes rupture mechanism in normal labor, as in PRM.
Assuntos
Ruptura Prematura de Membranas Fetais/enzimologia , Fosfolipases A/análise , Complicações Infecciosas na Gravidez/enzimologia , Líquido Amniótico/enzimologia , Feminino , Humanos , Fosfolipases A2 , Gravidez , Primeiro Trimestre da Gravidez , Prostaglandinas E/análiseRESUMO
Se determinó la actividad de fosfolipasa A2 en líquidos amnióticos jóvenes: 1.782. En los líquidos amnióticos de término, la actividad fue de 10.693. La actividad detectada en los LA de ruptura prematura de membranas fue de 29.077 en el grupo con infección y 12.357 para las muestras sin infección. Se observó que el líquido amniótico joven posee la menor actividad. El grupo con infección mostró la mayor actividad. El aumento significativo en la actividad de la fosfolipasa A2 en los líquidos amnióticos de término y con RPM en comparación con la observada en los líquidos jóvenes permite suponer la participación activa de la forma soluble de estaenzima como mediador en el aumento de Prostaglandina E2 observado en el LA de los dos primeros grupos. Por ello, se puede inferir que la FLA2 podría ser un mediador central en el macanismo de ruptura de membranas tanto en el trabajo de parto normal, como en la RPM