RESUMO
Pooled samples are used in veterinary and human medicine as a cost-effective approach to monitor disease prevalence. Nonetheless, there is limited information on the effect of pooling on test performance, and research is required to determine the appropriate number of samples which can be pooled. Therefore, this study aimed to evaluate the use of pooled serum samples as a herd-level surveillance tool for infectious production-limiting diseases: bovine viral diarrhoea (BVD), infectious bovine rhinotracheitis (IBR), enzootic bovine leukosis (EBL) and Neospora caninum (NC), by investigating the maximum number of samples one can pool to identify one positive animal, using commercial antibody-detection ELISAs. Four positive field standards (PFS), one for each disease, were prepared by pooling highly positive herd-level samples diagnosed using commercially available ELISA tests. These PFS were used to simulate 18 pooled samples ranging from undiluted PFS to a dilution representing 1 positive in 1,000 animals using phosphate-buffered saline as diluent. A 1:10 dilution of the PFS resulted in positive results for IBR, BVD and EBL. Moreover, for IBR and BVD, results were still positive at 1:100 and 1:30 dilutions, respectively. However, for NC, a lower dilution (8:10) was required for a seropositive result. This study indicates that, at herd-level, the use of pooled serum is a useful strategy for monitoring infectious diseases (BVD, IBR and EBL) but not NC, using readily available diagnostic assays.
Assuntos
Doença das Mucosas por Vírus da Diarreia Viral Bovina , Doenças dos Bovinos , Vírus da Diarreia Viral Bovina , Leucose Enzoótica Bovina , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina , Animais , Doença das Mucosas por Vírus da Diarreia Viral Bovina/diagnóstico , Doença das Mucosas por Vírus da Diarreia Viral Bovina/epidemiologia , Bovinos , Doenças dos Bovinos/diagnóstico , Doenças dos Bovinos/epidemiologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterinária , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/diagnóstico , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/epidemiologiaRESUMO
This study evaluated the seroprevalence and associated factors of Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR) and Bovine Viral Diarrhea (BVD), and to analyze the possible relationship between IBR, BVD, and the occurrence of mastitis. For this purpose, 854 crossbred dairy cows were evaluated from 69 properties allocated in the 12 municipalities that make up the Caparaó region, Espírito Santo (ES), Brazil. The seroprevalence of IBR and BVD was determined using the indirect ELISA test. Associations between variables were estimated using the prevalence ratio (PR) with a 95% confidence interval. The chi-square test was used to verify the significance of the associations (P < 0.05). The average prevalence of IBR and BVD was 48.59% and 26.46%, respectively. Animals seroreactive for IBR were more likely to develop subclinical mastitis (P < 0.01; PR: 1.27), and cows that were seroreactive for BVD were more likely to develop clinical mastitis (P < 0.01; PR: 2.24). Mechanical milking was considered a factor associated with IBR (P < 0.01; PR: 1.36) and BVD (P < 0.01; PR: 1.25). Reproductive management by natural breeding was considered a factor associated with IBR (P < 0.01; PR: 1.22). Animals seroreactive for BVD were more likely to develop reproductive problems (P < 0.01; PR: 1.34). It was concluded that the agents that cause IBR and BVD are widely disseminated in dairy cattle herds in the municipalities of the Caparaó region, ES, Brazil. The presence of IBR and BVD increased the chances of cows developing subclinical mastitis and clinical mastitis, respectively, and the cows that were mechanically milked were more likely to be seroreactive for IBR and BVD.(AU)
O objetivo do presente estudo foi avaliar a soroprevalência e os fatores de risco associados à Rinotraqueíte Infecciosa Bovina (IBR) e Diarreia Viral Bovina (BVD), e analisar a possível relação entre IBR, BVD e à ocorrência de mastite. Para tanto, foram avaliadas 854 vacas leiteiras mestiças de 69 propriedades localizadas nos 12 municípios que compõem a região do Caparaó, Espírito Santo (ES), Brasil. A soroprevalência de IBR e BVD foram determinadas pelo teste ELISA indireto. As associações entre variáveis foram estimadas pela razão de prevalência (PR) com intervalo de confiança de 95%. O teste do qui-quadrado foi utilizado para verificar a significância das associações (P < 0,05). A prevalência média de IBR e BVD foi de 48% e 26%, respectivamente. Os animais sororreagentes para IBR foram mais propensos a desenvolver mastite subclínica (P < 0,01; PR: 1,27), e as vacas sororreagentes para BVD foram mais propensas a desenvolver mastite clínica (P < 0,01; PR: 2,24). À ordenha mecânica foi considerada um fator associado a IBR (P < 0,01; PR: 1,36) e BVD (P < 0,01; PR: 1,25). O manejo reprodutivo por monta natural foi considerado um fator associado IBR (P < 0,01; PR: 1,22). Os animais sororreagentes para BVD foram mais propensos a desenvolverem problemas reprodutivos (P < 0,01; PR: 1,34). Concluiu-se que os agentes causadores de IBR e BVD estão amplamente disseminados em rebanhos leiteiros nos municípios da região de Caparaó, ES, Brasil. A presença de IBR e BVD aumentaram as chances das vacas desenvolverem mastite subclínica e mastite clínica, respectivamente, e as vacas que foram ordenhadas mecanicamente apresentaram maior probabilidade de serem sororreagente para IBR e BVD.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Doenças dos Bovinos/patologia , Mastite Bovina/sangue , Mastite Bovina/diagnóstico , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/sangue , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/diagnóstico , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/microbiologia , Vírus da Diarreia Viral Bovina/patogenicidadeRESUMO
This study evaluated the seroprevalence and associated factors of Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR) and Bovine Viral Diarrhea (BVD), and to analyze the possible relationship between IBR, BVD, and the occurrence of mastitis. For this purpose, 854 crossbred dairy cows were evaluated from 69 properties allocated in the 12 municipalities that make up the Caparaó region, Espírito Santo (ES), Brazil. The seroprevalence of IBR and BVD was determined using the indirect ELISA test. Associations between variables were estimated using the prevalence ratio (PR) with a 95% confidence interval. The chi-square test was used to verify the significance of the associations (P < 0.05). The average prevalence of IBR and BVD was 48.59% and 26.46%, respectively. Animals seroreactive for IBR were more likely to develop subclinical mastitis (P < 0.01; PR: 1.27), and cows that were seroreactive for BVD were more likely to develop clinical mastitis (P < 0.01; PR: 2.24). Mechanical milking was considered a factor associated with IBR (P < 0.01; PR: 1.36) and BVD (P < 0.01; PR: 1.25). Reproductive management by natural breeding was considered a factor associated with IBR (P < 0.01; PR: 1.22). Animals seroreactive for BVD were more likely to develop reproductive problems (P < 0.01; PR: 1.34). It was concluded that the agents that cause IBR and BVD are widely disseminated in dairy cattle herds in the municipalities of the Caparaó region, ES, Brazil. The presence of IBR and BVD increased the chances of cows developing subclinical mastitis and clinical mastitis, respectively, and the cows that were mechanically milked were more likely to be seroreactive for IBR and BVD.
O objetivo do presente estudo foi avaliar a soroprevalência e os fatores de risco associados à Rinotraqueíte Infecciosa Bovina (IBR) e Diarreia Viral Bovina (BVD), e analisar a possível relação entre IBR, BVD e à ocorrência de mastite. Para tanto, foram avaliadas 854 vacas leiteiras mestiças de 69 propriedades localizadas nos 12 municípios que compõem a região do Caparaó, Espírito Santo (ES), Brasil. A soroprevalência de IBR e BVD foram determinadas pelo teste ELISA indireto. As associações entre variáveis foram estimadas pela razão de prevalência (PR) com intervalo de confiança de 95%. O teste do qui-quadrado foi utilizado para verificar a significância das associações (P < 0,05). A prevalência média de IBR e BVD foi de 48% e 26%, respectivamente. Os animais sororreagentes para IBR foram mais propensos a desenvolver mastite subclínica (P < 0,01; PR: 1,27), e as vacas sororreagentes para BVD foram mais propensas a desenvolver mastite clínica (P < 0,01; PR: 2,24). À ordenha mecânica foi considerada um fator associado a IBR (P < 0,01; PR: 1,36) e BVD (P < 0,01; PR: 1,25). O manejo reprodutivo por monta natural foi considerado um fator associado IBR (P < 0,01; PR: 1,22). Os animais sororreagentes para BVD foram mais propensos a desenvolverem problemas reprodutivos (P < 0,01; PR: 1,34). Concluiu-se que os agentes causadores de IBR e BVD estão amplamente disseminados em rebanhos leiteiros nos municípios da região de Caparaó, ES, Brasil. A presença de IBR e BVD aumentaram as chances das vacas desenvolverem mastite subclínica e mastite clínica, respectivamente, e as vacas que foram ordenhadas mecanicamente apresentaram maior probabilidade de serem sororreagente para IBR e BVD.
Assuntos
Feminino , Animais , Bovinos , Doenças dos Bovinos/patologia , Mastite Bovina/diagnóstico , Mastite Bovina/sangue , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/diagnóstico , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/microbiologia , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/sangue , Vírus da Diarreia Viral Bovina/patogenicidadeRESUMO
Bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) is recognized as an important pathogen causing respiratory, reproductive, and neurological disorders in cattle and is associated with economic losses to animal industry. Accurate diagnostic methods are needed for prevention of disease transmission. While the virus neutralization test is considered the gold standard method, it requires maintenance of the virus and cell cultures, which is time consuming and expensive. Serological techniques such as enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) are widely applied, as these are easy to perform and provide quick results. In the present study, a nanogold slot blot inhibition assay was developed for the serological diagnosis of BoHV-1 and compared with standard ELISA and horseradish peroxidase (HRP) slot blot assays. Of 42 serum samples tested by ELISA, 32 (76.2%) were positive and 10 (23.8%), were negative. The sensitivity and specificity of the nanogold slot blot inhibition assay was similar to that observed for ELISA and HRP slot blot assays, and a strong correlation was observed between the tests. Thus, the nanogold slot blot inhibition assay may serve as an efficient and rapid alternative to ELISA in settings, where plate-reading equipment is lacking.
Assuntos
Anticorpos Antivirais/química , Bioensaio , Western Blotting/métodos , Coloide de Ouro/química , Herpesvirus Bovino 1/imunologia , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/diagnóstico , Animais , Anticorpos Antivirais/isolamento & purificação , Benchmarking , Western Blotting/instrumentação , Bovinos , Cães , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Herpesvirus Bovino 1/isolamento & purificação , Soros Imunes/química , Imunoconjugados/química , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/sangue , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/virologia , Células Madin Darby de Rim Canino , Nanopartículas Metálicas/química , Sensibilidade e EspecificidadeRESUMO
A Rinotraqueíte Infecciosa Bovina é uma relevante doença, tendo em vista os transtornos reprodutivoscausados, a facilidade de disseminação, o difícil controle e a ampla disseminação nos rebanhos bovinos de cortee de leite. O herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) pode estar presente em fluidos onde os embriões são recolhidos,manipulados, criopreservados ou transferidos, assim como no sêmen, nos órgãos genitais e também no líquidofolicular e ovócitos. A interação do BoHV-1 com estruturas e órgãos genitais da fêmea bovina vem sendoestudada pelo Grupo de trabalho. Até o presente foram encontrados resultados relevantes nesta interação. ODNA viral foi detectado em ovários, ovócitos e em complexos cumulus oophorus de animais soropositivos.Verificou-se ainda que vacas infectadas naturalmente apresentam comprometimento na taxa de maturaçãonuclear ovocitária. Trabalhos em andamento estão demonstrando, em animais soropositivos, a presença departículas virais em tecido ovariano, uterino e tubárico, sendo em substancial quantidade no tecido ovariano.Teria o vírus alguma afinidade por estes órgãos? Os resultados ainda são parciais, sugerindo a necessidade deaprofundar os estudos a respeito.
Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR) is an important disease because it can cause reproductiveproblems. It is also highly contagious with a high prevalence in beef and dairy herds, making it very difficult tocontrol viral spread. BoHV-1 might be present in embryo fluids when collected, manipulated, cryopreserved, ortransferred, as well as in the semen, genital organs, follicular fluids, and oocytes. Here, we investigated therelationship between BoHV-1 and cows genital organs. Our results showed relevant findings regarding thisrelationship. For instance, viral DNA was detected in the ovary, oocytes, and cumulus-oocyte complex fromBoHV-1 positive cows. Our results also showed that the oocyte nuclear maturation rate was compromised innaturally infected cows. Furthermore, BoHV-1 particles were detected in the ovary, uterus, and the uterine tubetissues, in which the highest number of viral particles was found in the ovary tissue. Despite the promisingresults, they are still preliminary to make conclusions about the tropism of the virus for these organs, andtherefore, further investigation is still required for that.
Assuntos
Feminino , Animais , Bovinos , Genitália Feminina/anormalidades , Genitália Feminina/fisiopatologia , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/diagnóstico , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/fisiopatologiaRESUMO
A Rinotraqueíte Infecciosa Bovina é uma relevante doença, tendo em vista os transtornos reprodutivoscausados, a facilidade de disseminação, o difícil controle e a ampla disseminação nos rebanhos bovinos de cortee de leite. O herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) pode estar presente em fluidos onde os embriões são recolhidos,manipulados, criopreservados ou transferidos, assim como no sêmen, nos órgãos genitais e também no líquidofolicular e ovócitos. A interação do BoHV-1 com estruturas e órgãos genitais da fêmea bovina vem sendoestudada pelo Grupo de trabalho. Até o presente foram encontrados resultados relevantes nesta interação. ODNA viral foi detectado em ovários, ovócitos e em complexos cumulus oophorus de animais soropositivos.Verificou-se ainda que vacas infectadas naturalmente apresentam comprometimento na taxa de maturaçãonuclear ovocitária. Trabalhos em andamento estão demonstrando, em animais soropositivos, a presença departículas virais em tecido ovariano, uterino e tubárico, sendo em substancial quantidade no tecido ovariano.Teria o vírus alguma afinidade por estes órgãos? Os resultados ainda são parciais, sugerindo a necessidade deaprofundar os estudos a respeito.(AU)
Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR) is an important disease because it can cause reproductiveproblems. It is also highly contagious with a high prevalence in beef and dairy herds, making it very difficult tocontrol viral spread. BoHV-1 might be present in embryo fluids when collected, manipulated, cryopreserved, ortransferred, as well as in the semen, genital organs, follicular fluids, and oocytes. Here, we investigated therelationship between BoHV-1 and cows genital organs. Our results showed relevant findings regarding thisrelationship. For instance, viral DNA was detected in the ovary, oocytes, and cumulus-oocyte complex fromBoHV-1 positive cows. Our results also showed that the oocyte nuclear maturation rate was compromised innaturally infected cows. Furthermore, BoHV-1 particles were detected in the ovary, uterus, and the uterine tubetissues, in which the highest number of viral particles was found in the ovary tissue. Despite the promisingresults, they are still preliminary to make conclusions about the tropism of the virus for these organs, andtherefore, further investigation is still required for that.(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/diagnóstico , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/fisiopatologia , Genitália Feminina/anormalidades , Genitália Feminina/fisiopatologiaRESUMO
A multiplex polymerase chain reaction (multiplex-PCR) to detect and differentiate bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) and 5 (BoHV-5) was developed using primers for the gene sequence that encodes the glycoprotein C. The technique was assessed against the BoHV-1 and BoHV-5 cell culture adapted strains, and clinical samples collected from animals with clinical signs of BoHV-1 (n = 10) or BoHV-5 (n = 7) infection and with diagnosis confirmed by virus isolation in cell culture and semi-nested PCR. Fifteen clinical samples from asymptomatic animals were included as control group. For the evaluation of the amplifiability of the extracted nucleic acid from clinical specimens was included a bovine internal control that amplified a 626 bp fragment of the ND5 gene present in the bovine mitochondrial DNA. For DNA extraction, a combination of the phenol/chloroform/isoamyl alcohol and silica/guanidine isothiocyanate methods was used. The specificity of the BoHV-1 and BoHV-5 amplicons from standard strains were confirmed by sequence analysis. All the positive clinical samples for BoHV included in this study were characterized as BoHV-1 or BoHV-5 by the difference in length of the amplified product visualized in a agarose gel (354 bp size for BoHV-1, and 159 bp for BoHV-5). The internal control was amplified in all clinical specimens. Non-specific reactions were not observed when the multiplex-PCR was assessed with other viruses (bovine viral diarrhea virus and rabies virus) and BoHV-negative clinical samples from fetuses and adult cattle obtained from a slaughterhouse.
Assuntos
Infecções por Herpesviridae/veterinária , Herpesvirus Bovino 1/classificação , Herpesvirus Bovino 1/isolamento & purificação , Herpesvirus Bovino 5/classificação , Herpesvirus Bovino 5/isolamento & purificação , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Proteínas do Envelope Viral/genética , Animais , Bovinos , Doenças dos Bovinos/diagnóstico , Doenças dos Bovinos/virologia , Linhagem Celular , DNA Viral/análise , DNA Viral/isolamento & purificação , Encefalite Viral/diagnóstico , Encefalite Viral/veterinária , Encefalite Viral/virologia , Infecções por Herpesviridae/diagnóstico , Infecções por Herpesviridae/virologia , Herpesvirus Bovino 1/genética , Herpesvirus Bovino 5/genética , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/diagnóstico , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/virologia , Meningoencefalite/diagnóstico , Meningoencefalite/veterinária , Meningoencefalite/virologia , Especificidade da Espécie , Fatores de TempoRESUMO
La seroneutralización (SN) en cultivos celulares, hemoaglutinación pasiva (HA), la inmunofluorescencia indirecta (IFI) y las pruebas inmunoenzimáticas (ELISA) son de utilizadas para la detección de anticuerpos específicos contra Herpesvirus-bovino 1 (BHV-1). La prueba de SN es la determinación de referencia, sin embargo las dificuldades de implementación por la necessidad de contar con cultivos celulares, así como la celeridad en la obtención de resultados, determinan la optimización de otra prueba de alternativa y equivalente especificidad y sensibilidad. Trabajos previous describen una alta correlación entre las técnicas de SN vs IFI y de SN vs ELISA, destacando una mayor sensibilidad para el ELISA. El presente trabajo compara la sensibilidad y especificidad de IFI, ELISA y SN en la detección de anticuerpos a BHV-1 utilizando 105 sueros bovinos. La especificidad de las técnicas comparadas se demostró por la seroconversión obtenida en sueros de animales experimentalmente infectados (Cuadro 1). Se observó una alta asociación entre sueros reactivos y no reactivos entre SN e IFI, SN y ELISA y entre Ifi y ELISA destacándose una mayor sensibilidad para el ELISA (Figuras 2 y 3). El estudio estadístico de los resultados obtenidos con las tres técnicas diagnósticas determinó un alto coeficiente de correlación entre las mismas (Cuadro 2). Debido a la simplicidad y facilidad de ejecución se recomienda la técnica de ELISA para estudios epizootiológicos de larga escala
Assuntos
Animais , Bovinos , Herpesvirus Bovino 1/isolamento & purificação , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/diagnóstico , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Especificidade da Espécie , Imunofluorescência , Herpesvirus Bovino 1/imunologia , Testes de NeutralizaçãoRESUMO
La seroneutralización (SN) en cultivos celulares, hemoaglutinación pasiva (HA), la inmunofluorescencia indirecta (IFI) y las pruebas inmunoenzimáticas (ELISA) son de utilizadas para la detección de anticuerpos específicos contra Herpesvirus-bovino 1 (BHV-1). La prueba de SN es la determinación de referencia, sin embargo las dificuldades de implementación por la necessidad de contar con cultivos celulares, así como la celeridad en la obtención de resultados, determinan la optimización de otra prueba de alternativa y equivalente especificidad y sensibilidad. Trabajos previous describen una alta correlación entre las técnicas de SN vs IFI y de SN vs ELISA, destacando una mayor sensibilidad para el ELISA. El presente trabajo compara la sensibilidad y especificidad de IFI, ELISA y SN en la detección de anticuerpos a BHV-1 utilizando 105 sueros bovinos. La especificidad de las técnicas comparadas se demostró por la seroconversión obtenida en sueros de animales experimentalmente infectados (Cuadro 1). Se observó una alta asociación entre sueros reactivos y no reactivos entre SN e IFI, SN y ELISA y entre Ifi y ELISA destacándose una mayor sensibilidad para el ELISA (Figuras 2 y 3). El estudio estadístico de los resultados obtenidos con las tres técnicas diagnósticas determinó un alto coeficiente de correlación entre las mismas (Cuadro 2). Debido a la simplicidad y facilidad de ejecución se recomienda la técnica de ELISA para estudios epizootiológicos de larga escala (AU)
Assuntos
Estudo Comparativo , Animais , Bovinos , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/diagnóstico , Herpesvirus Bovino 1/isolamento & purificação , Herpesvirus Bovino 1/imunologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Imunofluorescência , Especificidade da Espécie , Testes de NeutralizaçãoRESUMO
Serum neutralization (SN), indirect immunofluorescence (IFI) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were compared for their sensitivity and specificity to detect bovine serum antibodies to Bovine Herpesvirus type 1 on 105 bovine serum samples. High correlation coefficients among all three techniques were observed, showing a higher sensitivity for the ELISA test. Due to its simplicity and its feasibility to be adopted in less equipped laboratories, the ELISA test is recommended for large scale epizotiological studies, serological diagnosis and detection of reactive animals.
Assuntos
Herpesvirus Bovino 1/isolamento & purificação , Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/diagnóstico , Animais , Bovinos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Imunofluorescência , Herpesvirus Bovino 1/imunologia , Testes de Neutralização , Sensibilidade e EspecificidadeRESUMO
A micromethod for passive Hemagglutination is described for the detection of IBR antibodies in serum samples of nine herds. The samples correspond to different zones of the province Buenos Aires. In animals without clinical signs the proportion of positives was 43.60%; in herds with signs consistent with the disease, this value attained 66.4% positivity (Tables 1 and 2). The feasibility of this method is discussed. Some variants introduced into the original technique are described.