RESUMO
Autophagy is defined as an intracellular system of lysosomal degradation in eukaryotic cells, and the genes involved in this process are conserved from yeast to humans. Among these genes, ATG8 encodes a ubiquitin-like protein that is conjugated to a phosphatidylethanolamine (PE) membrane by the ubiquitination system. The Atg8p-PE complex is important in initiating the formation of the autophagosome and thus plays a critical role in autophagy. In silico modeling of Atg8p of Moniliophthora perniciosa revealed its three-dimensional structure and enabled comparison with its Saccharomyces cerevisiae homologue ScAtg8p. Some common and distinct features were observed between these two proteins, including the conservation of residues required to allow the interaction of α-helix1 with the ubiquitin core. However, the electrostatic potential surfaces of these helices differ, implying particular roles in selecting specific binding partners. The proposed structure was validated by the programs PROCHECK 3.4, ANOLEA, and QMEAN, which demonstrated 100% of amino acids located in favorable regions with low total energy. Our results showed that MpAtg8p contains the same functional domains (3 α-helices and 4 ß-sheets) and is similar in structure as the ScAtg8p yeast. Both proteins have many conserved sequences in common, and therefore, their proposed three-dimensional models show similar configuration.
Assuntos
Agaricales/genética , Proteínas Associadas aos Microtúbulos/genética , Proteínas Associadas aos Microtúbulos/ultraestrutura , Proteínas de Saccharomyces cerevisiae/genética , Proteínas de Saccharomyces cerevisiae/ultraestrutura , Saccharomyces cerevisiae/genética , Sequência de Aminoácidos , Autofagia , Família da Proteína 8 Relacionada à Autofagia , Modelos Moleculares , Dados de Sequência Molecular , Fosfatidiletanolaminas/metabolismo , Estrutura Terciária de Proteína , Alinhamento de Sequência , Ubiquitinação/genéticaRESUMO
The microtubule-associated protein (MAP) tau is abnormally hyperphosphorylated in Alzheimer disease and accumulates in neurons undergoing neurofibrillary degeneration. In the present study, the associations of the Alzheimer-hyperphosphorylated tau (AD P-tau) with the high molecular weight MAPs (HMW-MAPs) MAP1 and MAP2 were investigated. The AD P-tau was found to aggregate with MAP1 and MAP2 in solution. The association of AD P-tau to the MAPs resulted in inhibition of MAP-promoted microtubule assembly. However, unlike the coaggregation of AD P-tau and normal tau, the association between AD P-tau and the HMW-MAPs did not result in the formation of filaments/tangles. The affinity of the tau-AD P-tau association was higher than that of HMW-MAPs-AD P-tau because normal tau inhibited the latter binding. The association between AD P-tau and the HMW-MAPs also appeared to occur in situ because these proteins cosedimented from the Alzheimer brain extracts, and, in the sediment, the levels of the HMW-MAPs correlated with the levels of AD P-tau. These studies suggested that the abnormally phosphorylated tau can sequester both normal tau and HMW-MAPs and disassemble microtubules but, under physiological conditions, can form tangles of filaments only from tau.
Assuntos
Doença de Alzheimer/metabolismo , Proteínas Associadas aos Microtúbulos/metabolismo , Microtúbulos/metabolismo , Proteínas tau/metabolismo , Doença de Alzheimer/etiologia , Doença de Alzheimer/patologia , Ligação Competitiva , Humanos , Proteínas Associadas aos Microtúbulos/ultraestrutura , Microtúbulos/ultraestrutura , Fosforilação , Ligação Proteica , Proteínas tau/ultraestruturaRESUMO
Cultura primária de células derivadas do adenoma pleomórfico humano (AP2) foi estabelecida e utilizada em estudos de resposta à açäo de proteínas da matriz extra-celular (MEC). As células cultivadas foram caracterizadas como mio-epitelial símile por imunocitoquímica e microscopia eletrônica de transmissäo (MET). Células AP2 cresceram em contato com as seguintes proteínas da MEC: lamina, colágeno I, colágeno IV e membrana basal reconstituída (Matrigel). Laminina e colágenos tipos I e IV, quando aplicados individualmente, näo causaram efeito no fenótipo das células AP2. No entanto, células crescidas em Matrigel mostraram importantes alteraçöes fenotípicas, dependendo do modo de aplicaçäo do substrato. Células crescidas sobre finas camadas de Matrigel desenvolveram fenótipo estrelado, com prolongamentos delicados, longos e intercomunicantes, lembrando as células mio-epiteliais normais. Células crescidas dentro de massas de Matrigel formaram agrupamentos tri-dimensionais. Ao microscópio confocal e MET esses agrupamentos apresentaram dupla camada de células epitelióides delimitando espaços luminais. As células próximas aos lúmens eram cubóides, com vilosidades apicais e complexo juncional. Nosso trabalho forneceu uma evidência direta demonstrando que a formaçäo de estruturas luminais do adenoma pleomórfico somente ocorre quando suas células säo tri-dimensionalmente envoltas por membrana basal. Paralelamente a esse estudo, foi analisada a distribuiçäo do filamento intermediário vimentina no citoplasma de células AP2. Nessa célula, a vimentina distribui-se como filamentos pequenos, completamente segregados da rede principal. A maioria desses filamentos näo co-localiza com microtúbulos. Análise da relaçäo vimentina-microtúbulos nas células AP2 mostrou que essas estruturas somente interagem quando os filamentos de vimentina se estendem em direçäo à periferia da célula
Assuntos
Adenoma/microbiologia , Adenoma/fisiopatologia , Adenoma/ultraestrutura , Neoplasias das Glândulas Salivares/fisiopatologia , Neoplasias das Glândulas Salivares/microbiologia , Neoplasias das Glândulas Salivares/ultraestrutura , Citoesqueleto/microbiologia , Citoesqueleto/ultraestrutura , Matriz Extracelular/microbiologia , Matriz Extracelular/ultraestrutura , Microscopia Eletrônica/métodos , Proteínas Associadas aos Microtúbulos/farmacocinética , Proteínas Associadas aos Microtúbulos/ultraestrutura , Vimentina/farmacocinética , Vimentina/ultraestruturaRESUMO
En el presente trabajo se describen algunos aspectos morfológicos de la evolución de la corteza cerebral, determinada por la expresión de la proteína asociada a microtúbulos 2 (MAP-2) en diferentes etapas del desarrollo postnatal (3,5,7 y 10 días). Se describe la organización de los procesos dendríticos y se discuten los resultados a la luz de las implicaciones anatomofuncionales