RESUMO
Giardia lamblia is a protozoan parasite with many characteristics common among eukaryotic cells, but lacking other features found in most eukaryotes. Cardiolipin is a phospholipid located exclusively in energy transducing membranes and it was identified in mitochondria, bacteria, hydrogenosomes and chloroplasts. In eukaryotes, cardiolipin is the only lipid that is synthesized in the mitochondria. Biochemical procedures (TLC, HPLC) and fluorescent tools (NAO) were applied in order to search for cardiolipin in G. lamblia. In addition, BLAST searches were used to find homologs of enzymes that participate in the cardiolipin synthesis. Cardiolipin synthase was searched in the Giardia genome, using Saccharomyces cerevisiae and Mycoplasma penetrans sequences as bait. However, a good match to G. lamblia related proteins was not found. Here we show that mitosomes of G. lamblia apparently do not contain cardiolipin, which raises the discussion for its endosymbiotic origin and for the previous proposal that Giardia mitosomes are modified mitochondria.
Assuntos
Cardiolipinas/análise , Giardia lamblia/química , Mitocôndrias/química , Sequência de Aminoácidos , Animais , Cardiolipinas/isolamento & purificação , Cromatografia Líquida de Alta Pressão , Cromatografia em Camada Fina , Sequência Conservada , Giardia lamblia/enzimologia , Iodo , Lipídeos/isolamento & purificação , Proteínas de Membrana/análise , Proteínas de Membrana/química , Mycoplasma penetrans/enzimologia , Organelas/química , Organelas/enzimologia , Saccharomyces cerevisiae/enzimologia , Alinhamento de Sequência , Transferases (Outros Grupos de Fosfato Substituídos)/análise , Transferases (Outros Grupos de Fosfato Substituídos)/químicaRESUMO
To develop a rapid and efficient method for preparing monoclonal antibodies (MAb) against 35 kDa lipoprotein of Mycoplasma penetrans, BALB/c mice were injected into the footpads for immunization, and the popliteal lymph nodes were isolated 19 days later for MAb-producing hybridomas, from which the mAbs against the 35 kDa lipoprotein were screened. The identification of the mAb against the 35 kDa lipoprotein was performed using indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunoblotting. Using popliteal lymph node procedures, we generated several positive clones, one of which we characterized by ELISA and immunoblot. The clone 1D41B8 was identified as the immunoglobulin G1 (IgG1) isotype, kappa chain with affinity constants (Ka) of 2.95 x 10(9) M(-1). The MAbs did not cross-react with a number of control bacteria, which included Mycoplasma fermentans, Mycoplasma hominis, and Mycoplasma genitalium. This is the first report on the preparation of mAbs against M. penetrans that is specific to 35 kDa lipoprotein using popliteal lymph nodes. The high-specificity and high-affinity MAbs produced by two methodologies used of hybridomas provide a basis for further research on the pathogenesis and early diagnosis of M. penetrans. This simple approach may become a method of choice for the generation and production of MAbs in a short period of time.
Assuntos
Anticorpos Monoclonais/biossíntese , Lipoproteínas/imunologia , Mycoplasma penetrans/imunologia , Animais , Anticorpos Monoclonais/isolamento & purificação , Células Produtoras de Anticorpos/metabolismo , Reações Cruzadas , Hibridomas/metabolismo , Linfonodos/citologia , Linfonodos/metabolismo , Camundongos , Camundongos Endogâmicos BALB CRESUMO
Micoplasmas são procariotos diminutos, desprovidos de parede celular e envoltos por uma membrana lipoproteica cujo pequeno genoma sintetiza a maioria das moléculas necessárias para crescimento e replicacão. Dentre as dezesseis espécies isoladas do homem, Mycoplasma pneumoniae, agente causador da pneumonia atípica primária, e as espécies do trato urogenital como Mycoplasma hominis,Ureaplasma urealyticum e Ureaplasma parvum têm definido seu papel patogênico. M. penetrans e M. fermentans, espécies associadas ao HIV, têm sido investigadas principalmente em laboratórios de pesquisa. Considerando a importância dos micoplasmas nas doencas humanas e a peculiar variacão antigênica observada em tais espécies, foram caracterizadas, neste estudo, as lipoproteínas associadas a membranas (LAMP) de Mycoplasma penetrans e Mycoplasma fermentans. Para definir peptídeos com possível valor diagnóstico, empregamos as técnicas de ELISA e de Western blot usando soros de gestantes cujas amostras cervicais foram positivas por PCR. Por meio do ELISA foram observados anticorpos IgG anti-LAMP-M. fermentans em 57,5 per center e IgM em 74,5 per center das amostras. As três amostras PCR positivas para M. penetrans apresentaram anticorpos IgG anti-LAMP-M. penetrans e uma amostra positiva para IgM. IgA não foi detectada em nenhuma das espécies. A análise da LAMP, por Western blot, revelou como principais proteinas imunoreativas: 35, 38, 42, 61 and 103 kDa para M. penetrans e 29, 38, 41, 61, 78 and 95 kDa de M. fermentans. Dentre estas podemos considerar p35 específica para M. penetrans e p29, M. fermentans.Tais proteinas são promissoras como marcadores em diagnóstico.
Assuntos
Masculino , Feminino , Técnicas In Vitro , Mycoplasma fermentans , Infecções por Mycoplasma , Mycoplasma penetrans , Peptídeos , Meios de Cultura , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , MétodosRESUMO
Neste trabalho investigamos a prevalência de três espécies de micoplasma recémðidentificadas como patógenos humanos, M. genitalium, implicado em casos de uretrite näoðgonocócica, e M. fermentans e M. penetrans, isolados de pacientes imunodeprimidos, e das duas espécies mais freqüentes no trato geniturinário, M. hominis e U. urealyticum. Foram estudados 110 pacientes com sintomas de uretrite (grupo A) e 106 indivíduos infectados pelo HIVð1 (grupo B). M. genitalium foi detectado em 10,9 por cento das amostras de raspado uretral do grupo A, e em 1,9 por cento das amostras de raspado uretral e 0,9 por cento e 5,7 por cento das amostras de raspado uretral dos grupos A e B, respectivamente. M. penetrans foi detectado em 6,6 por cento das amostras de urina somente do grupo B. M. hominis e U. urealyticum tiveram taxas de infecçäo de 0,9 por cento e 14,5 por cento no grupo A, e de 7,5 por cento e 18,9 por cento no grupo B, respectivamente. A relevante prevalência da infecçäo por estas novas espécies, em comparaçäo aos micoplasmas mais conhecidos do trato urogenital, sugere que a magnitude do papel destes microrganismos no âmbito das doenças sexualmente transmissíveis (DST) e da infecçäo pelo HIV pode estar sendo subestimada em nossa populaçäo
Assuntos
Humanos , Masculino , Adulto , Brasil , Infecções Sexualmente Transmissíveis/microbiologia , Soronegatividade para HIV , Soropositividade para HIV , Infecções por HIV/microbiologia , Mycoplasma , Mycoplasma fermentans , Mycoplasma penetrans , Reação em Cadeia da Polimerase , Prevalência , Uretra , UretriteRESUMO
The aim of the present study was to determine the frequency of IgG, IgA, and IgM antibodies to Mycoplasma penetrans in HIV-1-infected patients and in patients with sexually transmitted diseases. We tested serum samples from 106 HIV-1-positive patients and 110 individuals with clinical symptoms of urethritis. ELISA and the immunoblot test were performed using M. penetrans lipid associated membrane proteins as antigen. By ELISA, we found a higher frequency (P < 0.05) of IgG against M. penetrans in HIV-1-infected and STD patients (25.5 and 17.3%) than in controls (1.2%), as well as a higher frequency of IgA (P < 0.05) (15.1 and 17.3% compared to 1.2%). For IgM, no differences were observed (P >/= 0.05) (3.8, 9.1, and 5. 8%, respectively). When the frequencies of IgG, IgM, and IgA antibodies of the HIV-1-infected patients were compared taking into account the CD4/CD8 cell ratios < 0.3 and >/= 0.3, no significant differences were observed between the two groups (13.3, 10, and 20%, compared to 20, 0, and 5%, respectively) (P > 0.05), possibly due to the low number of samples on which we could perform T-cell counts (53/106). The M. penetrans peptide of 38 kDa, considered immunodominant, was recognized in immunoblot by 51.8% of positive sera by ELISA for IgG, 50.0% for IgM, and 75% for IgA in the AIDS patients group, and by 47.4, 60.0, and 75.0%, respectively, in the sexually transmitted disease group. Cross-reactions in immunoblot for IgG were observed in sera from individuals infected with Mycoplasma pneumoniae and Mycoplasma hominis, and cross-reactions in immunoblot for IgA were observed in sera from individuals infected with M. hominis; all of them were ELISA negative to M. penetrans.
Assuntos
Anticorpos Antibacterianos/sangue , Infecções por HIV/complicações , HIV-1 , Infecções por Mycoplasma/complicações , Mycoplasma penetrans/imunologia , Infecções Sexualmente Transmissíveis/complicações , Adolescente , Adulto , Antígenos de Bactérias/imunologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/métodos , Infecções por HIV/imunologia , Infecções por HIV/microbiologia , Humanos , Immunoblotting/métodos , Imunoglobulina A/sangue , Imunoglobulina G/sangue , Imunoglobulina M/sangue , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Infecções por Mycoplasma/imunologia , Infecções por Mycoplasma/microbiologia , Infecções Sexualmente Transmissíveis/imunologia , Infecções Sexualmente Transmissíveis/microbiologiaRESUMO
Mycoplasma penetrans, a rare bacterium so far only found in HIV-infected persons, was isolated in the blood and throat of a non-HIV-infected patient with primary antiphospholipid syndrome (whose etiology and pathogenesis are unknown).
Assuntos
Síndrome Antifosfolipídica/complicações , Bacteriemia/complicações , Infecções por Mycoplasma/complicações , Mycoplasma penetrans/isolamento & purificação , Adolescente , Feminino , Humanos , Infecções por Mycoplasma/diagnósticoRESUMO
The objective of the present study was to determine the prevalence of certain mycoplasma species, i.e., Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma penetrans, in urethral swabs from HIV-1 infected patients compared to swabs from a control group. Mycoplasmas were detected by routine culture techniques and by the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique, using 16SrRNA generic primers of conserved region and Mycoplasma penetrans specific primers. The positivity rates obtained with the two methods were comparable. Nevertheless, PCR was more sensitive, while the culture techniques allowed the quantification of the isolates. The results showed no significant difference (p < 0.05) in positivity rates between the methods used for mycoplasma detection.
Assuntos
Síndrome da Imunodeficiência Adquirida/microbiologia , HIV-1 , Mycoplasma/isolamento & purificação , Reação em Cadeia da Polimerase , Uretra/microbiologia , Meios de Cultura , DNA Bacteriano/genética , Humanos , Masculino , Mycoplasma/genética , Mycoplasma hominis/genética , Mycoplasma hominis/isolamento & purificação , Mycoplasma penetrans/genética , Mycoplasma penetrans/isolamento & purificação , Prevalência , Sensibilidade e Especificidade , Ureaplasma urealyticum/genética , Ureaplasma urealyticum/isolamento & purificaçãoRESUMO
O objetivo do presente estudo foi determinar a prevalência de determinadas espécies de micoplasmas, tais como, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum e Mycoplasma penetrans, em swabs uretrais de pacientes infectados com HIV-1 comparando com um grupo controle. Micoplasmas foram detectados por técnicas padräo de cultivo e pela reacäo de polimerase em cadeia para a qual foram utilizados "primers" genericos obtidos da regiäo conservada 16sRNA e "primers" nos dois metodos foi comparavel. Contudo, o PCR mostrou ser mais sensivel nas condicöes empregadas enquanto que o cultivo permitiu a quantificacäo dos isolados. Os resultados demonstraram näo haver diferenças significantes (p<0,05) nas taxas de positividade entre os metodos empregados para a detecçäo dos micoplasmas