RESUMO
This work explores the possibility of using the electrically charged "spherical soft particle" (SSP) to model the electrophoretic mobility of proteins in the low charge regime. The general framework concerning the electrophoretic mobility of the SSP already presented in the literature is analyzed and discussed here in particular for polyampholyte-polypeptide chains. In this regard, this theory is applied to BSA for different protocol pH values. The physicochemical conditions required to model proteins as SSP from their experimentally determined electrophoretic mobilities are established. In particular, the protein charge regulation phenomenon and the SSP particle core are included to study BSA having isoelectric point pI ≈ 5.71, within a wide range of bulk pH values. The results of this case study are compared with previous ones concerning the spherical porous particle and the spherical hard particle with occluded water. A discussion of chain conformations in the SSP polyampholyte layer is presented through estimations of the packing and friction fractal dimensions.
Assuntos
Eletroforese/métodos , Nuclease do Micrococo/química , Modelos Teóricos , Soroalbumina Bovina/química , Misturas Anfolíticas/química , Animais , Bovinos , Fricção , Hidrodinâmica , Ponto Isoelétrico , Permeabilidade , Conformação ProteicaAssuntos
Inibidores Enzimáticos/isolamento & purificação , Focalização Isoelétrica/métodos , alfa-Amilases/antagonistas & inibidores , Misturas Anfolíticas , Animais , Bovinos , Humanos , Técnicas In Vitro , Phaseolus , Lectinas de Plantas/isolamento & purificação , Isoformas de Proteínas/isolamento & purificaçãoRESUMO
A method for the characterization of proteins separated by isoelectric focusing in carrier ampholytes (CA-IEF) or immobilized pH gradient (IPG) gels by in-gel digestion and mass spectrometry is described. Proteins are detected by an improved imidazole-Sodium dodecyl sulfate (SDS)-zinc staining adapted for IEF and IPG gels. Sensitivity is close to that of mass spectrometry-compatible silver staining, but simpler and faster. Proteins were digested in imidazole-SDS-zinc stained CA-IEF and IPG gels in the presence of a zinc-chelating agent. Mass spectra were clearly interpretable as carrier ampholytes which were efficiently removed before digestion; high-sequence coverage that allowed isoform characterization was obtained by analyzing both the aqueous and the organic phase extracts.
Assuntos
Proteínas/análise , Misturas Anfolíticas , Animais , Humanos , Concentração de Íons de Hidrogênio , Imidazóis , Focalização Isoelétrica/métodos , Isoformas de Proteínas/análise , ZincoRESUMO
Se sintetizaron anfolitos carrier (AC) mediante la reacción entre tetraetilenpoentamina (TEPA) y ácido acrílico (AA). El producto obtenido se utilizó en la separación de proteínas séricas mediante isoelectroenfoque (IEF) en geles de agarosa y de poliacrilamida (PAA). Se determinó el gradiente de pH obtenido y se analizó el comportamiento isotacoforético de las distintas fracciones del anfolito carrier, obtenidas luego de su IEF sobre gel de agarosa
Assuntos
Ratos , Animais , Humanos , Técnicas In Vitro , Ponto Isoelétrico , Proteínas/sangue , Trietilenofosforamida/síntese química , Misturas AnfolíticasRESUMO
Se describe un procedimiento para la síntesis de anfolitos aplicables a la formación de gradientes de pH para isoelectroenfoque. Se utiliza tetraetilenpentamina a la cual se le agrega N, N'-metilenbisacrilamida como reactivo de condensación, con las finalidades de incrementar la diversidad de componentes anfotéricos, y/o de aumentar el número de grupos amino en la molécula resultante del acoplamiento de tetraetilenpentamina de a pares. En una operación posterior se hacen reaccionar estos productos con un ácido alfa, ß-insaturado. El procedimiento utilizando ácido acrílico se describe en detalle. Se estudia la uniformidad del gradiente de pH cortando el gel de poliacrilamida en fracciones de 1 x 1 cm y efectuando la medición del pH en cada una de ellas por el método de elución. La capacidad de formar gradientes estables de pH del producto sintetizado se demuestra realizando isoelectroenfoques de lisados eritrocitarios en geles de poliacrilamida de 1 mm de espesor
Assuntos
Humanos , Técnicas In Vitro , Ponto Isoelétrico , Misturas Anfolíticas/síntese química , Proteínas/sangue , TrietilenofosforamidaRESUMO
Se sintetizaron anfolitos carrier (AC) mediante la reacción entre tetraetilenpoentamina (TEPA) y ácido acrílico (AA). El producto obtenido se utilizó en la separación de proteínas séricas mediante isoelectroenfoque (IEF) en geles de agarosa y de poliacrilamida (PAA). Se determinó el gradiente de pH obtenido y se analizó el comportamiento isotacoforético de las distintas fracciones del anfolito carrier, obtenidas luego de su IEF sobre gel de agarosa (AU)
Assuntos
Ratos , Animais , Humanos , Técnicas In Vitro , Trietilenofosforamida/síntese química , Proteínas/sangue , Ponto Isoelétrico , Misturas AnfolíticasRESUMO
Se describe un procedimiento para la síntesis de anfolitos aplicables a la formación de gradientes de pH para isoelectroenfoque. Se utiliza tetraetilenpentamina a la cual se le agrega N, N-metilenbisacrilamida como reactivo de condensación, con las finalidades de incrementar la diversidad de componentes anfotéricos, y/o de aumentar el número de grupos amino en la molécula resultante del acoplamiento de tetraetilenpentamina de a pares. En una operación posterior se hacen reaccionar estos productos con un ácido alfa, ß-insaturado. El procedimiento utilizando ácido acrílico se describe en detalle. Se estudia la uniformidad del gradiente de pH cortando el gel de poliacrilamida en fracciones de 1 x 1 cm y efectuando la medición del pH en cada una de ellas por el método de elución. La capacidad de formar gradientes estables de pH del producto sintetizado se demuestra realizando isoelectroenfoques de lisados eritrocitarios en geles de poliacrilamida de 1 mm de espesor (AU)
Assuntos
Humanos , Técnicas In Vitro , Ponto Isoelétrico , Proteínas/sangue , Misturas Anfolíticas/síntese química , TrietilenofosforamidaRESUMO
Se detallan todos los pasos a llevar a cabo para realizar isoelectroenfoque en geles de poliacrilamida de 1 mm de espesor adheridos a un celofán como soporte. El gel se adhiere firmemente al celofán durante todos las operaciones (corrida, tinción y desteñido) y el soporte lo protege de las roturas, razón por la cual es fácilmente manejable. Se discute la optimización de las condiciones de trabajo para anfolito no comercial. Se muestra la buena resolución obtenida con dicho anfolito de sueros humanos normales y patológicos
Assuntos
Humanos , Proteínas/sangue , Ponto Isoelétrico/métodos , Celofane , Misturas AnfolíticasRESUMO
Se detallan todos los pasos a llevar a cabo para realizar isoelectroenfoque en geles de poliacrilamida de 1 mm de espesor adheridos a un celofán como soporte. El gel se adhiere firmemente al celofán durante todos las operaciones (corrida, tinción y desteñido) y el soporte lo protege de las roturas, razón por la cual es fácilmente manejable. Se discute la optimización de las condiciones de trabajo para anfolito no comercial. Se muestra la buena resolución obtenida con dicho anfolito de sueros humanos normales y patológicos (AU)