RESUMO
A partial deficiency of Porphobilinogen deaminase (PBG-D) is responsible for acute intermittent porphyria (AIP). AIP is inherited in an autosomal dominant fashion, and the prevalence in the Argentinean population is about 1:125,000. Here, two new mutations and three previously reported were found in the PBG-D gene in 12 Argentinean AIP patients corresponding to 5 different families. To screen for AIP mutations in symptomatic patients, genomic DNA isolated was amplified in 2 Multiplex PCR reactions, then all coding exons and flanking intronic regions were sequenced. The new mutations are 453-455delAGC in exon 9 which results in the loss of an alanine residue at position 152, and one new point mutation in the splicing aceptor site in the last position of intron 8 (IVS8-1G>T) which leds to a 15 bp deletion because a cryptic site (first AG upstream) is used. Both mutations produce amino acid deletion without frameshift effect. To further characterize the 453-455delAGC mutation, the pKK-PBGD construct for the mutant allele was expressed in E. coli, the enzymatic activity of the recombinant protein was 1.3% of the mean level expressed by the normal allele. Finally, three missense mutations, previously reported, were identified in three unrelated families.
Assuntos
Hidroximetilbilano Sintase/genética , Porfirias/genética , Adolescente , Adulto , Escherichia coli/enzimologia , Feminino , Humanos , Hidroximetilbilano Sintase/biossíntese , Hidroximetilbilano Sintase/metabolismo , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Mutação , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase ReversaRESUMO
Se realizaron las curvas de crecimiento para las cepas D273-10B y B231 de Saccharomyces cerevisiae, obteniéndose los tiempos de generación (G = 1,26 y 3,20 horas respectivamente). Se han establecido las conclusiones óptimas para la ruptura celular y extracción de la Porfobilinogenasa (PBGasa). Se han determinado la composición del sistema, tiempo, pH y atmósfera de incubación óptima para la medición de la actividad de PBGasa en ambas cepas. Se midieron las constantes cinéticas, obteniéndose Km del mismo orden para ambas cepas de Saccharomyces cerevisiae, mientras que la velocidad máxima resultó ser para la cepa mutante el doble del valor correspondiente a la salvaje. Se estudió la variación de la actividad enzimática en función del tiempo de crecimiento, hallándose un comportamiento significativamente diferente entre ambas cepas. Para la mutante se apreció un máximo bien definido entre las 20 y 25 h. y además con una actividad de aproximadamente 2 veces del valor medido para la cepa salvaje en iguales condiciones
Assuntos
Hidroximetilbilano Sintase/biossíntese , Técnicas In Vitro , Saccharomyces cerevisiae/metabolismo , Hidroximetilbilano Sintase/análise , Porfirinas/metabolismoRESUMO
Se realizaron las curvas de crecimiento para las cepas D273-10B y B231 de Saccharomyces cerevisiae, obteniéndose los tiempos de generación (G = 1,26 y 3,20 horas respectivamente). Se han establecido las conclusiones óptimas para la ruptura celular y extracción de la Porfobilinogenasa (PBGasa). Se han determinado la composición del sistema, tiempo, pH y atmósfera de incubación óptima para la medición de la actividad de PBGasa en ambas cepas. Se midieron las constantes cinéticas, obteniéndose Km del mismo orden para ambas cepas de Saccharomyces cerevisiae, mientras que la velocidad máxima resultó ser para la cepa mutante el doble del valor correspondiente a la salvaje. Se estudió la variación de la actividad enzimática en función del tiempo de crecimiento, hallándose un comportamiento significativamente diferente entre ambas cepas. Para la mutante se apreció un máximo bien definido entre las 20 y 25 h. y además con una actividad de aproximadamente 2 veces del valor medido para la cepa salvaje en iguales condiciones (AU)