RESUMO
Memory consolidation requires activation of a gene expression program that allows de novo protein synthesis. But the molecular mechanisms that favour or restrict that program are poorly understood. The kinase c-Abl can modulate gene expression through transcription factors and chromatin modifiers. Here, we show that c-Abl ablation in the brain improves learning acquisition and memory consolidation in mice. Its absence also affects gene expression profiles in the mouse hippocampus. We found that genes involved in synaptic plasticity and actin cytoskeleton dynamics, such as Arp2 and Thorase, are up-regulated at the mRNA and protein levels in trained c-Abl KO mice and by a chemical-LTP stimulus. Trained c-Abl KO mice also show that dendritic spines are larger than in wild-type mice and present at a higher density. These results indicate that c-Abl kinase is an important part of the mechanism that limits or restricts signalling of relevant gene programs involved in morphological and functional spine changes upon neuronal stimulation.
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Aprendizagem , Plasticidade Neuronal , Animais , Espinhas Dendríticas , Genes abl , Hipocampo , Consolidação da Memória , Camundongos , Neurônios , SinapsesRESUMO
ABSTRACT Introduction: Chronic Myeloid Leukemia (CML) is a myeloproliferative disease that affects mainly adults between 50 and 55 years. In Brazil, information from the Sistema Único de Saúde (SUS) Outpatient Information System indicates that 12,531 patients had the Autorização de Procedimento Ambulatorial (APAC) approved for the CML treatment in 2017. Disease monitoring through molecular response evaluation is critical to the care of CML patients. The quantitative PCR test (real-time polymerase chain reaction) provides adequate evaluation parameters that allow the health professional to intervene at the right moments in order to reduce the chance of progression of the disease, providing the best outcome to the patient, including the possibility of treatment discontinuation for eligible patients. Although the test is included in the Clinical Protocol and Therapeutic Guidelines (PCDT) of CML, it is not possible to monitor the molecular response within SUS since there is no reimbursement for this test. Objective: Obtain expert recommendations on the importance, financing, and reimbursement of molecular monitoring in SUS. Methods: Six CML experts with different perspectives participated in the panel. The discussion was based in the main publications about the quantitative PCR test in CML monitoring. Results: Experts' recommendations: Molecular monitoring should be part of the integral treatment of patients with CML to reduce the chances of disease progression and costs to the health system; The government should put into practice what is provided in the PCDT of Chronic Myeloid Leukemia in Brazil: performing the monitoring of the molecular response via quantitative PCR; The government should create a code with adequate nomenclature and reimbursement value in SIGTAP, so that the test is carried out and covered by the public health network, as it is contained in the PCDT of the disease and the existing APAC does not cover the operational costs for its performance; Patients with chronic phase CML should perform a quantitative PCR every 3 months and, after reaching the MMR, should perform the examination every 6 months, as recommended by international guidelines; Patients should be monitored in reference laboratories that are standardized according to the international scale; The laboratories that are within the reference public centers could absorb all the test demand in Brazil, and other centers could be qualified through an ABHH accreditation; Adequate molecular monitoring may allow some patients to stop taking drugs and selffinancing the molecular test for all SUS patients Conclusion: A solution for the molecular test (BCR-ABL1) funding is urgent to ensure the monitoring of CML patients in SUS. The savings that might be generated with patients that stop taking the medication when adequately monitored may finance the test.
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Humanos , Pessoa de Meia-Idade , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/terapia , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real , Mecanismo de Reembolso , Sistema Único de Saúde , Brasil , Genes ablRESUMO
Current clinical guidelines for managing chronic myeloid leukemia include molecular monitoring of BCR-ABL1 transcript quantitative reverse-transcription PCR. Despite the proven prognostic significance of molecular response, it is not widely appreciated that quantitative reverse-transcription PCR potentially produces highly variable data, which may affect the validity of results, making comparability between different laboratories difficult. Therefore, standardized reporting of BCR-ABL1 measurements is needed for optimal clinical management. An approach to achieve comparable BCR-ABL1 values is the use of an international reporting scale. Conversion to the international scale is achieved by the application of laboratory specific conversion factor that is obtained by using validated secondary reference calibrators. Moreover, with the aim to mitigate the interlaboratory imprecision of quantitative BCR-ABL1 measurements and to facilitate local laboratory results interpretation and reporting, we decide to prepare laboratory guidelines that will further facilitate interlaboratory comparative studies and independent quality-assessment programs, which are of paramount importance for worldwide standardization of BCR-ABL1 monitoring results, in particular for those most isolated laboratories, with not easy access to commercial kits or sample interchange programs.
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Biomarcadores Tumorais/sangue , Proteínas de Fusão bcr-abl/sangue , Genes abl/genética , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/sangue , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa , Biomarcadores Tumorais/genética , Guias como Assunto , Humanos , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/tratamento farmacológico , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/genética , Inibidores de Proteínas Quinases/uso terapêutico , Padrões de ReferênciaRESUMO
Actualmente las guías clínicas para el manejo de pacientes con leucemia mieloide crónica incluyen el monitoreo molecular de BCR-ABL1 por PCR cuantitativa en tiempo real; esta metodología permite definir la respuesta molecular. A pesar de la probada importancia pronóstica de la respuesta molecular, en muchos casos no se tiene en cuenta que la PCR cuantitativa puede producir datos muy variables, que pueden afectar la validez de los resultados, y hacer difícil la comparación entre diferentes laboratorios. Por lo tanto, para un manejo clínico óptimo, es absolutamente necesaria la estandarización de las metodologías de medición de BCR-ABL1. La estrategia para obtener valores de BCR-ABL1 comparables consiste en la adopción de la escala internacional. La conversión a la escala internacional se logra mediante la aplicación de un factor de conversión específico para cada laboratorio; este factor de conversión se puede obtener mediante el uso de calibradores secundarios validados, que hoy se producen en Argentina, en el marco del programa nacional de armonización. Por otra parte, con el objetivo de mitigar las diferencias entre laboratorios y facilitar criterios uniformes en la interpretación de los resultados y presentación de los informes, decidimos preparar estas guías de laboratorio. Esto permitirá además a los laboratorios poder evaluar su calidad de trabajo, tarea muy importante, en particular para aquellos centros más aislados, que no tienen fácil acceso a costosos kits comerciales o programas internacionales de intercambio de muestras.
Current clinical guidelines for managing chronic myeloid leukemia include molecular monitoring of BCR-ABL1 transcript quantitative reverse-transcription PCR. Despite the proven prognostic significance of molecular response, it is not widely appreciated that quantitative reverse-transcription PCR potentially produces highly variable data, which may affect the validity of results, making comparability between different laboratories difficult. Therefore, standardized reporting of BCR-ABL1 measurements is needed for optimal clinical management. An approach to achieve comparable BCR-ABL1 values is the use of an international reporting scale. Conversion to the international scale is achieved by the application of laboratory specific conversion factor that is obtained by using validated secondary reference calibrators. Moreover, with the aim to mitigate the interlaboratory imprecision of quantitative BCR-ABL1 measurements and to facilitate local laboratory results interpretation and reporting, we decide to prepare laboratory guidelines that will further facilitate interlaboratory comparative studies and independent quality-assessment programs, which are of paramount importance for worldwide standardization of BCR-ABL1 monitoring results, in particular for those most isolated laboratories, with not easy access to commercial kits or sample interchange programs.
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Humanos , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/sangue , Biomarcadores Tumorais/sangue , Genes abl/genética , Proteínas de Fusão bcr-abl/sangue , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa , Padrões de Referência , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/genética , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/tratamento farmacológico , Biomarcadores Tumorais/genética , Guias como Assunto , Inibidores de Proteínas Quinases/uso terapêuticoRESUMO
This is the largest Latin American study of BCR-ABL mutations in chronic myeloid leukemia (CML) patients, resistant to imatinib (IM). In 195/467 (41%) patients, mutations were detected. The most frequent mutation was T315I (n = 31, 16%). Progression-free (PFS) and overall survival (OS) at 5 years were lower in patients with BCR-ABL mutations (43% vs. 65%, p = 0.07 and 47% vs. 72%, p = 0.03, respectively) and in those with the T315I mutation (p = 0.003 and p = 0.03). OS and PFS were superior in subgroup who switched to second generation inhibitors (SGIs) after IM failure (OS: 50% vs. 39% p = 0.01; PFS: 48% vs. 30% p = 0.02). BCR-ABL mutations conferred a significant poor prognosis in CML patients.
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Genes abl/genética , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/genética , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/mortalidade , Mutação/genética , Inibidores de Proteínas Quinases/uso terapêutico , Proteínas Tirosina Quinases/antagonistas & inibidores , Adolescente , Adulto , Idoso , Idoso de 80 Anos ou mais , Antineoplásicos/uso terapêutico , Criança , Pré-Escolar , Intervalo Livre de Doença , Feminino , Humanos , Mesilato de Imatinib/uso terapêutico , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/patologia , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Prognóstico , Estudos Retrospectivos , Adulto JovemRESUMO
The development of Bcr-Abl tyrosine kinase inhibitors has dramatically changed the prognosis of patients with newly diagnosed chronic myeloid leukemia (CML). Standard-dose imatinib (400 mg/day in chronic phase, 600 mg/day in advanced CML) now dominates the management of this disease, producing considerably higher hematologic, cytogenetic, and molecular response rates than seen with previous drug therapies. However, although many patients respond well to standard-dose imatinib initially, some patients do not achieve adequate levels of response or discontinue therapy because of resistance. One approach to improving treatment response with first-line imatinib may be to increase the imatinib dose (800 mg/day), although recent trial data indicate that overall increases in response rates may be modest. Newer Bcr-Abl tyrosine kinase inhibitors can induce responses in patients with all phases of imatinib-resistant CML, even those with imatinib-resistant mutations in the BCR-ABL gene. Furthermore, in initial studies, first-line dasatinib or nilotinib treatment has produced response rates that compare favorably with historical controls treated with imatinib, although confirmation is required from head-to-head clinical trials. Future clinical approaches may include drug combinations, which may allow quiescent leukemia stem cells to be eradicated. Further improvements in drug treatment for first-line CML are expected during the next few years.
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Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/tratamento farmacológico , Piperazinas/uso terapêutico , Pirimidinas/uso terapêutico , Tiazóis/uso terapêutico , Protocolos de Quimioterapia Combinada Antineoplásica/normas , Benzamidas , Ensaios Clínicos como Assunto/tendências , Dasatinibe , Proteínas de Fusão bcr-abl , Genes abl , Humanos , Mesilato de Imatinib , Interferon-alfa/uso terapêutico , Piperazinas/administração & dosagem , Piperazinas/efeitos adversos , Inibidores de Proteínas Quinases/farmacologia , Inibidores de Proteínas Quinases/uso terapêutico , Proteínas Tirosina Quinases/antagonistas & inibidores , Pirimidinas/administração & dosagem , Pirimidinas/efeitos adversos , Pirimidinas/farmacologia , Tiazóis/administração & dosagem , Tiazóis/efeitos adversos , Resultado do TratamentoRESUMO
Molecular detection of the BCR-ABL gen by RT-PCR In Costa Rican children with leukemia. Many leukemias could have chromosomic translocations and according to the transcripts formed by the genes involved, the patients present an specific phenotype of the leukemia. We show the first results of the investigation of the gen BCR-ABL using RT-PCR, in order to look for the t(9;22)(q34;q11) in pediatric leukemic children. We studied in total 55 patients, 6 (10.9%) of them were positive for that translocation. Two (3.63%) of the positive children had ALL and the other 4 (7.27%) presented CML, the genotyping analysis of the transcript was studied in these children. With the introduction of this methodology as part of the routine studies, the leukemic children could get in the future an specific diagnosis, that will be important to classify them in prognostic categories and to improve the detection of minimal residual disease. Rev. Biol. Trop. 56 (4): 1613-1618. Epub 2008 December 12.
Muchas leucemias pueden presentar traslocaciones cromosómicas, las cuales, de acuerdo a los transcriptos formados por los genes involucrados, originará un fenotipo leucémica variable. En este trabajo se muestran los primeros resultados de pacientes pediátricos con leucemia, a los cuales se les hizo el estudio molecular por RT-PCR y el genotipaje para el gen BCR-ABL producto de la t(9;22)(q34;q11). De las 55 muestras estudiadas, 6 (10.9%) fueron positivas para el transcripto mencionado. De las 6 positivas, 2(3.63%) de esos pacientes tenían LLA y 4 (7.27%) eran LMC. La introducción de esta metodología en el manejo rutinario de los niños con leucemia, servirá para establecer un diagnóstico más preciso, un pronóstico más certero y un seguimiento adecuado de la enfermedad mínima residual.
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Criança , Humanos , Proteínas de Fusão bcr-abl/genética , Genes abl/genética , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/genética , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/genética , Biomarcadores Tumorais/genética , Genótipo , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/diagnóstico , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/diagnóstico , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase ReversaRESUMO
We evaluated the prevalence of BCR/ABL, MLL, and ETV6/RUNX1 rearrangements as well as CDKN2A (alias p16) deletion in a group of Mexican children with acute lymphoblastic leukemia (ALL) to determine whether the changes coexist, and to compare the incidences found with other reports in the literature. To increase the detection of these abnormalities, we combined conventional cytogenetics and fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis. Bone marrow samples were obtained from 59 consecutive children with ALL. FISH detected a total of 63 abnormalities with the selected probes, 34 of which were related to the conventional cytogenetic results. The most common abnormality was the p16 deletion (22.8%), followed by MLL and ETV6/RUNX1 rearrangements (8.7%), and the BCR/ABL fusion was the least frequent (2.7%). The coexistence of two recurrent abnormalities with specific prognostic significance in the same patient was not found. A lesser proportion of the p16 deletion in T-ALL patients was observed, probably related to the low prevalence of this subtype in our population. In addition, we confirmed the low frequency of the ETV6/RUNX1 fusion observed in Hispanics. Due to the different prevalence of these abnormalities in the Mexican population, similar studies should be conducted analyzing new rearrangements, to improve the adequate classification of the abnormalities and the stratification in prognostic groups.
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Aberrações Cromossômicas , Hibridização in Situ Fluorescente/métodos , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/genética , Criança , Pré-Escolar , Cromossomos Humanos Par 1 , Cromossomos Humanos Par 11 , Cromossomos Humanos Par 19 , Cromossomos Humanos Par 22 , Cromossomos Humanos Par 9 , Subunidade alfa 2 de Fator de Ligação ao Core/genética , Feminino , Frequência do Gene , Genes abl , Genes p16 , Histona-Lisina N-Metiltransferase , Humanos , Lactente , Recém-Nascido , Masculino , México , Proteína de Leucina Linfoide-Mieloide/genética , Proteínas de Fusão Oncogênica/genéticaRESUMO
Many leukemias could have chromosomic translocations and according to the transcripts formed by the genes involved, the patients present an specific phenotype of the leukemia. We show the first results of the investigation of the gen BCR-ABL using RT-PCR, in order to look for the t(9;22)(q34;q11) in pediatric leukemic children. We studied in total 55 patients, 6 (10.9%) of them were positive for that translocation. Two (3.63%) of the positive children had ALL and the other 4 (7.27%) presented CML, the genotyping analysis of the transcript was studied in these children. With the introduction of this methodology as part of the routine studies, the leukemic children could get in the future an specific diagnosis, that will be important to classify them in prognostic categories and to improve the detection of minimal residual disease.
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Biomarcadores Tumorais/genética , Proteínas de Fusão bcr-abl/genética , Genes abl/genética , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/genética , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/genética , Criança , Genótipo , Humanos , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/diagnóstico , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/diagnóstico , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase ReversaRESUMO
The effect of docosahexaenoic acid (DHA) on the killing efficacy of imatinib on HL-60 cells expressing the Bcr-Abl protein was investigated. Imatinib is an Abl tyrosine kinase inhibitor used in the treatment of patients with chronic myeloid leukemia. The pre-treatment with DHA for 24 h raised the effect of imatinib at 100 microM concentration only. On the other hand, after 72 h pre-treatment, all concentrations of DHA tested (25, 50 and 100 microM) enhanced the toxic effect of imatinib. These results indicate that long-term pre-treatment with DHA makes Bcr-Abl HL-60 cells more susceptible to the toxic effect of imatinib.
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Antineoplásicos/toxicidade , Ácidos Docosa-Hexaenoicos/farmacologia , Genes abl/genética , Piperazinas/agonistas , Piperazinas/toxicidade , Pirimidinas/agonistas , Pirimidinas/toxicidade , Benzamidas , Relação Dose-Resposta a Droga , Sinergismo Farmacológico , Regulação da Expressão Gênica , Células HL-60 , Humanos , Mesilato de ImatinibRESUMO
La resistencia al tratamiento con Imatinib resulta de mecanismos dependientes del BCR/ABL tales como la sobreexpresión y la adquisición de mutaciones de punto en sitios críticos del dominio kinasa de ABL o de diferentes mecanismos independientes, como la evolución clonal. El propósito de este estudio fue identificar las mutaciones del dominio kinasa del gen ABL y la amplificación del reordenamiento genómico BCR/ABL en pacientes con LMC con falta o pérdida de respuesta hematológica y/o citogenética al tratamiento con Imatinib. Se incluyeron 71 pacientes, de los cuales 56 fueron evaluables. En trece pacientes (24 por ciento) se identificó algún mecanismo de resistencia: 10 (18 por ciento) presentaron mutaciones de punto en el dominio kinasa, 3 (5 por ciento) duplicación del cromosoma Ph' y sólo 1 (1 por ciento) mostró amplificación del BCR/ABL. La mutación T315I se observó en 1 caso. La mediana de edad fue significativamente menor [39 años (20-53)] en los pacientes en los que se encontraron mutaciones que en los casos sin ellas [51 años (24-75)] p=0.047. Se detectaron mutaciones en 1 de 29 (3 por ciento) pacientes en fase crónica, 8 de 20 (40 por ciento) pacientes en fase acelerada y en 1 de 8 (12 por ciento) pacientes en crisis blástica (p=0.001). La mediana de aparición de las mismas fue de 45 meses desde el diagnóstico de LMC (12-158) y 28.5 meses (1-56) desde el inicio de la terapia con Imatinib (p=0.591 y p=0.762 respectivamente). Las mutaciones en la región p-loop fueron las más frecuentes. El análisis univariado demostró que edad y fase de la enfermedad se asociaron significativamente con presencia de mutaciones. Las mutaciones en el dominio kinasa se reconocen como el principal mecanismo de resistencia al tratamiento con Imatinib y su detección puede determinar un cambio en la estrategia terapéutica.
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Humanos , Masculino , Adulto , Feminino , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/genética , Piperazinas/farmacologia , Pirimidinas/farmacologia , Antineoplásicos , Genes abl , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/tratamento farmacológico , Mutação Puntual , Piperazinas/uso terapêutico , Pirimidinas/uso terapêutico , Resistencia a Medicamentos Antineoplásicos/genéticaRESUMO
O Cromossomo Philadelphia (Ph1) é conhecido como a primeira alteração cromossômica estrutural (translocação recíproca) envolvida em um tipo de câncer específico, sendo por este motivo, o mais bem caracterizado rearranjo cromossômico ligado à origem de leucemias. Sua origem está na translocação recíproca t(9;22), envolvendo o proto-oncogene ABL (9q34) e o gene BCR (22q11). A fusão destes genes forma o oncogene quimérico BCR-ABL, conhecido atualmente como marcador molecular da leucemia mielóide crônica (LMC), e apontado como fator significante na leucemogênese. A simples presença deste híbrido já é suficiente para conduzir a célula ao fenótipo neoplásico, contrariando estudos epidemiológicos referentes à gênese de cânceres. Diferentes pontos de quebra no gene BCR acabam produzindo transcritos de diferentes tamanhos, que codificam vários produtos quiméricos, como p190bcr-abl, p210bcr-abl e p230bcr-abl. A atuação destas proteínas parece estar ligada aos diferentes fenótipos leucêmicos, sendo responsáveis por modificações em vias intracelulares, como da proteína Ras, aquisição de fatores de crescimento, resistência ao processo de morte celular programada e desequilíbrio celular, promovendo a instabilidade genômica em células Ph1-positivas...
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Humanos , Proteínas de Fusão bcr-abl , Genes abl , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva , Cromossomo FiladélfiaRESUMO
BACKGROUND: The BCR-ABL fusion gene is the molecular expression of the Philadelphia chromosome. This cytogenetic aberration is the most frequent alteration found in leukemias, which is produced by the translocation t(9;22). Two different fusion proteins are produced depending on the break point (210 kD and 190 kD). The detection of this gene has both diagnostic and prognostic importance, associated with poor prognosis in acute lymphoblastic leukemia (ALL). AIM: To detect BCR-ABL gene sequences in patients with leukemia from the IX Region of Chile. MATERIAL AND METHODS: We studied 58 patients: 5 chronic myeloid leukemia (CML), 35 ALL, 15 acute myeloid leukemia (AML) and 3 biphenotypic leukemia. The gene sequences were detected using reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). RESULTS: BRC-ABL gene sequences were positive in all patients with CML, 2 of 35 ALL (one child and one adult). The remaining patients were negative. We found p210 and p190 co-expression in 2 CML and 1 ALL. CONCLUSIONS: Our results are in agreement with other reports. The detection of these and other genetic alterations will allow us to have invaluable diagnostic and prognostic information from our patients with leukemia.
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Proteínas de Fusão bcr-abl/genética , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/genética , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/genética , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa , Doença Aguda , Adolescente , Adulto , Idoso , Sequência de Bases , Criança , Pré-Escolar , Chile , Feminino , Genes abl , Humanos , Lactente , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/diagnóstico , Leucemia Mieloide/diagnóstico , Leucemia Mieloide/genética , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/diagnóstico , PrognósticoRESUMO
Estudos citogenéticos e moleculares em pacientes com leucemias são usados para a identificação de alterações gênicas com valor diagnóstico e prognóstico. Estes estudos, aqui apresentados, têm sido úteis para a caracterização e o monitoramento das leucemias associadas à presença de transcritos BCR-ABL, possibilitando a avaliação da doença residual mínima e a previsão da recaída.A análise molecular qualitativa e/ou quantitativa do gene quimérico BCR-ABL foi realizada em 80 pacientes através da Reação em Cadeia da Polimerase utilizando o ADN complementar ao ARN mensageiro após transcrição reversa (RT -PCR). A análise molecular por RT-PCR qualitativo foi usada para determinar diferentes pontos de quebras do gene quimérico (b3a2, b2a2, e1a2 e b2a3), permitindo a caracterização molecular de diferentes desordens hematológicas e monitoramento de diferentes procedimentos terapêuticos. Achados relacionados à expressão de BCR-ABL mostraram a utilidade de uma abordagem molecular rotineira para classificação de desordens mieloproliferativas e leucemias linfóides agudas Ph+ assim como no monitoramento dos tratamentos. A utilização do RT -PCR quantitativo, para estimar os níveis de BCR-ABLl/ABL em pacientes com LMC com diferentes tratamentos (Transplante de medula óssea (TMO), Infusão de linfócitos de doador (ILD) e Interferon (IFN) e em pacientes em remissão mostrou resultados consistentes. Este protocolo possibilitou um monitoramento preciso da doença residual mínima e de sua evolução, apresentando claras vantagens em relação às técnicas convencionais. O estudo preferencial por seqüenciamento de um paciente com LMC que apresentou um transcrito atípico ao diagnóstico possibilitou a caracterização do rearranjo b2a3 associado à um curso clínico agressivo. Finalmente, a análise citogenética e FISH realizados em 30 pacientes com suspeita de LMC ou após procedimentos terapêuticos para LMC permitiram o diagnóstico e a avaliação das terapias
Cytogenetic and molecular studies of leukaemic patients are useful for identifying gene rearrangements of diagnostic and prognostic significance associated to malignant transformation whose early detection has shown to be beneficial. The studies herein reported have been useful for characterising and monitoring leukaemias associated to presence of BCR-ABL transcripts as well as for assessing minimal residual disease and anticipating impending relapse. Qualitative and/or quantitative molecular analyses of the chimaeric BCRABL gene were carried out in 80 patients with Polymerase Chain Reaction assays amplifying complementary DNA following reverse transcription of messenger RNA (RT-PCR). Qualitative RT-PCR was used for identifying different breakpoints within the chimaeric BCR-ABL gene (b3a2, b2a2, e1a2, and b2a3), allowing for a molecular characterisation of different haematological disorders and monitoring different therapeutic procedures. Our findings indicated that detection of BCR-ABL transcripts should be routinely used for diagnosing myeloproliferative disorders and acute, Ph+ leukaemias as well as in serial studies following or during treatment. Quantitative RT-PCR assays, used for estimating BCR-ABL/ABL transcript levels in CML patients following or during treatment (Bone marrow transplantation, donor Iymphocyte infusion or interferon) and in remission, showed consistent results. These assays were useful for an accurate monitoring of minimal residual disease and its clinical progression, clearly preferable to conventional techniques. DNA sequence analysis of a CML patient who showed an atypical BCRABL transcript at diagnosis allowed for the characterisation of a b2a3 rearrangement associated to an aggressive clinical course. Finally, cytogenetic and FISH analyses of 30 patients with presumed CML or after CML therapy was useful for diagnosis and evaluation of therapeutic procedures
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Humanos , Genes abl , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva , Cromossomo Filadélfia , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase ReversaRESUMO
A leucemia mielóide crônica (LMC) é uma doença caracterizada pela proliferaçao e acumulaçao de células mielóides e seus precursores, induzida pela transformaçao neoplásica de uma célula hematopoética pluripotente, a stem-cell. Esse clone possui uma anormalidade citogenética que se caracteriza pela translocaçao recíproca entre os cromossomos 9 e 22 [t(9;22) (q34;q11)], resultando na formaçao do cromossomo Philadelphia (Ph1). O resultado dessa translocaçao é a justaposiçao do gene BCR com o protooncogene ABL, originando um gene híbrido que codifica uma proteína anormal com atividade tirosina quinase exacerbada. A reaçao de polimerizaçao em cadeia (PCR) baseada na amplificaçao do cDNA híbrido BCR/ABL tem sido considerada um meio altamente sensível e específico para detecçao dessa patologia, em nível molecular. O RNA total foi extraído pelo método de isocianato de guanidina, de leucócitos de sangue periférico e (ou) medula óssea. A primeira fita (cDNA) foi sintetizada utilizando primer complementar à regiao 3' do mRNA quimérico BCR/ABL, transcriptase reversa (Super Script II - Gibco-BRL) segundo sugestao do fabricante. A reaçao de PCR foi realizada em duas etapas: a primeira utilizando primers complementares à regiao BCR e ABL, num total de 25 ciclos com temperatura de 94 graus Celsius, 49 graus Celsius e 72 graus Celsius para desnaturaçao, anelamento e extensao, respectivamente; na segunda etapa foram utilizados primers internos aos primeiros (Nested-PCR) num total de 35 ciclos com temperatura de anelamento de 60 graus Celsius (primers sintetizados pela Genomic - Engenharia Molecular, SP). O controle de todo o procedimento técnico foi realizado pela amplificaçao de uma regiao do gene ABL. A presença de bandas características da LMC foram visualizadas após eletroforese em gel de poliacrilamida 6 por cento e coloraçao por brometo de etídio. O método foi considerado extremamente sensível e rápido para a detecçao da t(9;22) quando comparada com a citogenética convencional.
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Genes abl , Leucemia Linfoide/genética , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/genética , Leucemia Mieloide/genética , Reação em Cadeia da Polimerase , RNA Mensageiro , Doença Aguda , Primers do DNA , DNA Complementar , Translocação GenéticaAssuntos
Leucemia/epidemiologia , Neoplasias do Colo do Útero/epidemiologia , Adolescente , Adulto , Idoso , Biomarcadores Tumorais/análise , Criança , Pré-Escolar , Sondas de DNA de HPV , DNA Viral/análise , Feminino , Proteínas de Fusão bcr-abl/análise , Proteínas de Fusão bcr-abl/genética , Genes abl , Proteínas de Homeodomínio/análise , Proteínas de Homeodomínio/genética , Humanos , Incidência , Leucemia/genética , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/epidemiologia , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/genética , Masculino , México/epidemiologia , Pessoa de Meia-Idade , Proteínas de Neoplasias/análise , Proteínas de Neoplasias/genética , Proteínas de Fusão Oncogênica/análise , Proteínas de Fusão Oncogênica/genética , Papillomaviridae/genética , Papillomaviridae/isolamento & purificação , Infecções por Papillomavirus/epidemiologia , Infecções por Papillomavirus/virologia , Reação em Cadeia da Polimerase , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras B/epidemiologia , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras B/genética , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/epidemiologia , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/genética , Translocação Genética , Infecções Tumorais por Vírus/epidemiologia , Infecções Tumorais por Vírus/virologia , Neoplasias do Colo do Útero/genética , Neoplasias do Colo do Útero/virologiaRESUMO
When injected into SCID mice, the Philadelphia chromosome-positive chronic myeloid leukemia-blast crisis cell line BV173 induces a disease process closely resembling that seen in leukemia patients. At 1 and 3 weeks after injection of 10(6) BV173 cells, CD10+ cells were detected in the bone marrow of the mice, leukemic colonies grew from bone marrow and spleen cell suspensions, and BCR-ABL transcripts were detectable in bone marrow, spleen, peripheral blood, liver, and lungs. Systemic treatment of the leukemic mice with a 26-mer BCR-ABL antisense oligodeoxynucleotide (1 mg/day for 9 days) induced disappearance of CD10+ and clonogenic leukemic cells and a marked decrease in BCR-ABL mRNA in mouse tissues. Untreated mice or mice treated with a BCR-ABL sense oligodeoxynucleotide or a 6-base-mismatched antisense oligodeoxynucleotide oligodeoxynucleotide were dead 8-13 weeks after leukemia cell injection; in marked contrast, mice treated with BCR-ABL antisense oligodeoxynucleotide died of leukemia 18-23 weeks after injection of leukemic cells. These findings provide evidence for the in vivo effectiveness of an anticancer therapy based on antisense oligodeoxynucleotides targeting a tumor-specific gene.
Assuntos
Divisão Celular/efeitos dos fármacos , Proteínas de Fusão bcr-abl/genética , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/tratamento farmacológico , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/patologia , Oligonucleotídeos Antissenso/toxicidade , Oligonucleotídeos Antissenso/uso terapêutico , Animais , Sequência de Bases , Linhagem Celular , Citometria de Fluxo , Proteínas de Fusão bcr-abl/biossíntese , Genes abl , Humanos , Rim/patologia , Leucemia Promielocítica Aguda/patologia , Fígado/patologia , Masculino , Camundongos , Camundongos SCID , Dados de Sequência Molecular , Oligodesoxirribonucleotídeos/toxicidade , Oligonucleotídeos Antissenso/análise , Baço/patologia , Fatores de Tempo , Transcrição Gênica , Translocação Genética , Transplante Heterólogo , Células Tumorais CultivadasRESUMO
The identification of early markers of myeloid differentiation can facilitate an understanding of how differentiation is arrested in leukemogenesis. Using murine bone marrow and the granulocyte-precusor cell line 32Dc13, we show that message for the granulocyte colony-stimulating factor receptor (G-CSFR) is upregulated by G-CSF in an immediate early fashion that is specific to the differentiation pathway and is antagonized by interleukin-3. We further show that G-CSFR message is superinduced by cycloheximide and that these patterns of regulation are altered in leukemic cell lines. In particular, the v-abl oncogene product supresses both ligand-mediated upregulation and superinduction of the G-CSFR gene.