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Human cysticercosis is a public health problem caused by Taenia solium metacestodes; thus, eradication of T. solium transmission by vaccination is an urgent requirement. The Cc48 mimotope from T. solium cysticerci was tested expressed in phage particles (mCc48) and chemically synthesized (sCc48) as a vaccine candidate in experimental murine cysticercosis. For this, BALB/c mice were immunized with mCc48 (G1; n = 40), sCc48 (G2; n = 40) and phosphate-buffered saline (PBS) (G3; n = 40, positive control) and challenged with Taenia crassiceps metacestodes. Another PBS group without parasite challenge was used as a negative control (G4; n = 40). Mice were sacrificed 15, 30, 45 and 60 days post-infection for cysticerci and serum collection. Immunization efficacy was determined by cysticerci counting. Serum samples were tested by ELISA to verify antibody (IgM, IgG, IgA and IgE) and cytokine (IFNγ and IL-4) levels. The sCc48 achieved the highest rates of protection and efficacy (90 and 98%, respectively). The group immunized with mCc48 presented the highest reactivity for IgM, IgG and IgE. All groups presented IL-4, but IFNγ was quite variable among groups. The protection induced by sCc48 synthetic peptide supports further studies of this mimotope as a potential vaccine candidate against cysticercosis.

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Utilizando um anticorpo monoclonal contra a aflatoxina B1 (AFB1) como ligante, foi identificado um mimotopo específico de aflatoxina B1 após se realizarem quatro ciclos de seleção biológica de 7-peptídeos aleatórios em biblioteca de fago exibida. O mimotopo é denominado P10, e sua sequência de aminoácidos é YRRHEKD. O soro imunológico de ratos Balb/c imunizados com P10 foi especificamente ligado à aflatoxina B1-albumina, indicando que o anticorpo era específico ao AFB1. Esses resultados sugerem que é possível desenvolver a vacina baseada em mimotopo associado à toxina.(AU)

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Utilizando um anticorpo monoclonal contra a aflatoxina B1 (AFB1) como ligante, foi identificado um mimotopo específico de aflatoxina B1 após se realizarem quatro ciclos de seleção biológica de 7-peptídeos aleatórios em biblioteca de fago exibida. O mimotopo é denominado P10, e sua sequência de aminoácidos é YRRHEKD. O soro imunológico de ratos Balb/c imunizados com P10 foi especificamente ligado à aflatoxina B1-albumina, indicando que o anticorpo era específico ao AFB1. Esses resultados sugerem que é possível desenvolver a vacina baseada em mimotopo associado à toxina.(AU)

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O objetivo do presente estudo foiavaliar os efeitos do probiótico Saccharomyces boulardii na modulação da resposta imune humoral de animais expostos a antígenos de Leishmania infantum. Para isso, 16 camundongos BALB/c foram imunizados com antígeno particulado de Leishmania infantum e divididos em dois grupos experimentais, um composto por animais suplementados e outro por animais não suplementados com o probiótico. Amostras de sangue dos animais foram colhidas semanalmente durante o período experimental e submetidas ao Ensaio da Imunoabsorbância Ligado à Enzima indireto para avaliação dos títulos de IgG totais e o perfil dos isotipos de IgG produzidos (IgG1 e IgG2a). A suplementação com o probiótico não exacerbou a produção de IgG total em comparação ao grupo controle, não havendo diferenças significativas entre os dois grupos. Porém, as soroconversões de IgG2a foram mais elevadas no grupo suplementado, no qual registrou-se um aumento de 1,46 vezes no final do experimento. Assim,a suplementação com S. boulardii foi capaz de modular a resposta de IgG2a/IgG1 nos animais expostos aos antígenos de Leishmania infantum.

The aim of the present study was to evaluate the effects of the Saccharomyces boulardii probiotic on the modulation of humoral immune response in animals exposed to Leishmania infantum antigens. For this, 16 BALB/c mice were immunized with Leishmania infantum particulate antigen and divided into two experimental groups, one consisting of supplemented animals and the other not probiotic supplemented animals. Blood samples from the animals were taken weekly during the experimental period and subjected to the Indirect Enzyme-Linked Immunosorbance Assay for evaluation of total IgG titers and the profile of the produced IgG isotypes (IgG1 and IgG2a). Probiotic supplementation did not exacerbate total IgG production compared to the control group, with no significant differences between the two groups. However, IgG2a seroconversions were higher in the supplemented group, which showed a 1.46-fold increase at the end of the experiment. Thus, supplementation with S. boulardii was able to modulate the IgG2a/IgG1 response in animals exposed to Leishmania infantum antigens.

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This study evaluated the immune response of nude and BALB/c mice inoculated in the footpads (FP) with Mycobacterium leprae after 3, 5 and 8 months. At each timepoint peritoneal cells, peripheral blood, FP and popliteal lymph nodes (PLN) were collected. Peritoneal cell cultures were performed to measure the H2O2, O2−, NO, IL­2, IL­4, IL­10, IL­12, IFN­Î³ and TNF levels. Serum levels of anti­PGL­I antibodies were also quantified. The results showed that the infection was progressive in nude mice with bacterial multiplication, development of macroscopic lesions in the FP and presence of bacilli in the PLN at 8 months. In BALB/c mice, the infection reached a plateau of bacillary multiplication at 5 months and regressed at 8 months. Histopathological analysis of FP revealed a mononuclear inflammatory infiltrate with a large number of neutrophils at 5 months, with a higher number in nude mice. At 8 months, the number of neutrophils decreased and the infiltrate was predominantly mononuclear in both mouse strains. There was no H2O2, O2−, IL­2, IL­4, IL­10 and IFN­Î³ production in the course of infection in nude mice; however, in BALB/c, O2− and IL­12 production was higher at 5 months and NO, IFN­Î³ and TNF production was higher at 8 months when there was a decrease in the number of bacilli. The level of anti­PGL­I antibodies was higher in BALB/c mice. Thus, nude and BALB/c mice can be used as experimental models for the study of various aspects of leprosy(AU).

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Background: Lipid metabolites play an important role in parasite differentiation and virulence. Studies have revealed that Leishmania sp. uses prostaglandins to evade innate barriers, thus enabling the parasites to survive inside immune cells. Despite the role of the enzyme Phospholipase A2 (PLA2) in prostaglandins production, few studies have investigated the role of parasite PLA2 during the interaction between L. (L.) amazonensis and the host (in vitro and in vivo) immune cells. Methods: In the present work, the leishmanicidal effect of PLA2 inhibitors, methyl arachidonyl fluorophosphonate (MAFP), bromoenol lactone (BEL) and aristolochic acid (AA) were investigated in vitro (promastigote and intracellular amastigote forms of L. (L.) amazonensis) and during in vivo infection using BALB/c mice. Results: The aforementioned inhibitors were deleterious to promastigote and amastigote forms of the L. (L.) amazonensis and were non-toxic to peritoneal macrophages from BALB/c mice. L. (L.) amazonensis-infected BALB/c mice treated with the inhibitor BEL presented decreased lesion size and skin parasitism; however, BEL treatment induced hepatotoxicity in BALB/c mice. Conclusions: Results presented herein suggested that PLA2 inhibitors altered L. (L.) amazonensis viability. In spite of liver toxicity, treatment with BEL was the most selective compound in vitro, as well in vivo, resulting in lower skin parasitism in the infected mice. These findings corroborate the role of PLA2 in parasite virulence and maintenance in vertebrate hosts, and suggest that molecules structurally related to BEL should be considered when planning compounds against Leishmania sp.(AU)

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Background: Lipid metabolites play an important role in parasite differentiation and virulence. Studies have revealed that Leishmania sp. uses prostaglandins to evade innate barriers, thus enabling the parasites to survive inside immune cells. Despite the role of the enzyme Phospholipase A2 (PLA2) in prostaglandins production, few studies have investigated the role of parasite PLA2 during the interaction between L. (L.) amazonensis and the host (in vitro and in vivo) immune cells. Methods: In the present work, the leishmanicidal effect of PLA2 inhibitors, methyl arachidonyl fluorophosphonate (MAFP), bromoenol lactone (BEL) and aristolochic acid (AA) were investigated in vitro (promastigote and intracellular amastigote forms of L. (L.) amazonensis) and during in vivo infection using BALB/c mice. Results: The aforementioned inhibitors were deleterious to promastigote and amastigote forms of the L. (L.) amazonensis and were non-toxic to peritoneal macrophages from BALB/c mice. L. (L.) amazonensis-infected BALB/c mice treated with the inhibitor BEL presented decreased lesion size and skin parasitism; however, BEL treatment induced hepatotoxicity in BALB/c mice. Conclusions: Results presented herein suggested that PLA2 inhibitors altered L. (L.) amazonensis viability. In spite of liver toxicity, treatment with BEL was the most selective compound in vitro, as well in vivo, resulting in lower skin parasitism in the infected mice. These findings corroborate the role of PLA2 in parasite virulence and maintenance in vertebrate hosts, and suggest that molecules structurally related to BEL should be considered when planning compounds against Leishmania sp.

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It has been reported that fetal lymphoid progenitor cells are acquired during gestation and are able to develop in the maternal mouse thymus into functional T cells. Moreover, previous pregnancies increase the number of fetal cells in the mother. In the present study, we investigated whether mouse pregnancy induces changes in T lymphocyte subsets in the maternal thymus. We determined the T lymphocyte subsets in two allogeneic cross-breedings, namely CBA/J×BALB/c (normal) and CBA/J×DBA/2 (abortion prone), and investigated the effects of the age and parity of the female, as well as pregnancy outcome, on thymocyte populations. In addition, hormonal effects were evaluated in a syngeneic combination (CBA/J×CBA/J). We found that during pregnancy both hormonal and allogeneic stimuli induced a reduction in the CD4(+)CD8(+) subset with an increase in the CD4(+)CD8(-) population. Only young females of the normal combination exhibited an increase in the CD4(-)CD8(+) population. All young mice showed an increase in CD4(+)CD25(+)FoxP3(+) T cells. Interestingly, the γδT thymus pool was increased in all females of the normal allogeneic pregnancy only, suggesting the participation of this pool in the observed beneficial effect of multiparity in this cross-breeding. Our results demonstrate that allogeneic pregnancies induce important variations in maternal thymocyte subpopulations depending on the age of the female and the male component of the cross-breeding.

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Com o objetivo de gerar novos conhecimentos acerca da interação parasito-hospedeiro, o presente trabalho avaliou parâmetros parasitológicos e imunológicos associados ao desenvolvimento do parasito no hospedeiro definitivo após a infecção e reinfecção pelo S. mansoni, nas linhagens murinas BALB/c e C57BL/6. Para tanto, a avaliação dos parâmetros parasitológicos foi realizada utilizando animais das linhagens BALB/c e C57BL/6 infectados e reinfectados. Os animais infectados e reinfectados, 50 dias pós-infecção/reinfecção foram perfundidos para avaliação da carga parasitária. Dois dias antes da perfusão foi realizado o exame de fezes utilizando as metodologias HPJ e Eclosão de Miracídios. O número de ovos presentes no intestino e no fígado dos animais foram determinados através da digestão dos órgãos utilizando KOH 10%. Além disso, o peso dos animais foi avaliado durante todo o período de infecção, tratamento e reinfecção. Para realizar a avaliação da resposta celular, o baço de camundongos, de ambas as linhagens, infectados, infectados/tratados e reinfectados, bem como de camundongos não infectados, foram retirados nos dias 3, 7, 15, 30, 60, 110 e 155 pós-infecção/reinfecção para a obtenção e cultura de esplenócitos que foram estimulados, ou não, com SEA, extrato de verme adulto (AWA) e Ag. de Esquistossômulo. Os sobrenadantes das culturas dos esplenócitos foram coletados após 24 (para a quantificação das citocinas IL-4 e TNF-α) e 72 horas (para as citocinas IL-10, IL-17, IL-13, IFN-γ) de incubação. Os soros dos animais infectados e reinfectados, e de seus controles, foram obtidos nos dias 3, 7, 15, 30, 60 e 110 pós-infecção/reinfecção para a avaliação da resposta humoral.

Foram dosados os anticorpos IgG total, e seus subtipos IgG1 e IgG2c, específicos para SEA, AWA e Ag. de esquistossômulo, através da técnica de ELISA. Quanto à avaliação parasitológica, não foi possível observar diferença significativa em relação à carga parasitária pós-infecção/reinfecção em camundongos de mesma linhagem, bem como, entre os animais de linhagens diferentes. Também não foi observada diferença estatisticamente significativa no número de ovos/miracídios nas fezes de camundongos pós-infecção ou pós-reinfecção em ambas as linhagens. Em relação ao número de ovos retidos nos órgãos, observou-se diferença estatisticamente significativa apenas no fígado. Nesse órgão, os animais BALB/c reinfectados apresentaram um reduzido número de ovos em relação aos animais BALB/c infectados e aos C57BL/6 reinfectados. Quanto à produção das imunoglobulinas, os camundongos C57BL/6 reinfectados apresentaram maior produção de IgG2c e os animais BALB/c reinfectados maior produção de IgG1. Camundongos C57BL/6 apresentaram um perfil misto de produção de citocinas do tipo 1/tipo 2, com produção das citocinas IL-10 e IL-13 ao longo de toda a infecção/reinfecção, sendo também considerável a produção das citocinas IFN-γ e TNF-α.. Os animais BALB/c produziram as citocinas IL-13 e IL-10 ao longo de toda a infecção/reinfecção, porém foram os únicos a produzirem a citocina IL-4 durante todo o tempo de infecção e reinfecção. Os resultados do nosso trabalho puderam apontar as principais diferenças imunológicas e parasitológicas entre as linhagens murinas BALB/c e C57BL/6 durante a infecção e/ou reinfecção pelo Schistosoma mansoni contribuindo para a geração de novos conhecimentos acerca dos mecanismos imunológicos desencadeados em resposta ao desenvolvimento do parasito no hospedeiro definitivo tanto durante infecção quanto reinfecção.

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Com o objetivo de gerar novos conhecimentos acerca da interação parasito-hospedeiro, o presente trabalho avaliou parâmetros parasitológicos e imunológicos associados ao desenvolvimento do parasito no hospedeiro definitivo após a infecção e reinfecção pelo S. mansoni, nas linhagens murinas BALB/c e C57BL/6. Para tanto, a avaliação dos parâmetros parasitológicos foi realizada utilizando animais das linhagens BALB/c e C57BL/6 infectados e reinfectados. Os animais infectados e reinfectados, 50 dias pós-infecção/reinfecção foram perfundidos para avaliação da carga parasitária. Dois dias antes da perfusão foi realizado o exame de fezes utilizando as metodologias HPJ e Eclosão de Miracídios. O número de ovos presentes no intestino e no fígado dos animais foram determinados através da digestão dos órgãos utilizando KOH 10%. Além disso, o peso dos animais foi avaliado durante todo o período de infecção, tratamento e reinfecção. Para realizar a avaliação da resposta celular, o baço de camundongos, de ambas as linhagens, infectados, infectados/tratados e reinfectados, bem como de camundongos não infectados, foram retirados nos dias 3, 7, 15, 30, 60, 110 e 155 pós-infecção/reinfecção para a obtenção e cultura de esplenócitos que foram estimulados, ou não, com SEA, extrato de verme adulto (AWA) e Ag. de Esquistossômulo. Os sobrenadantes das culturas dos esplenócitos foram coletados após 24 (para a quantificação das citocinas IL-4 e TNF-α) e 72 horas (para as citocinas IL-10, IL-17, IL-13, IFN-γ) de incubação. Os soros dos animais infectados e reinfectados, e de seus controles, foram obtidos nos dias 3, 7, 15, 30, 60 e 110 pós-infecção/reinfecção para a avaliação da resposta humoral.

Foram dosados os anticorpos IgG total, e seus subtipos IgG1 e IgG2c, específicos para SEA, AWA e Ag. de esquistossômulo, através da técnica de ELISA. Quanto à avaliação parasitológica, não foi possível observar diferença significativa em relação à carga parasitária pós-infecção/reinfecção em camundongos de mesma linhagem, bem como, entre os animais de linhagens diferentes. Também não foi observada diferença estatisticamente significativa no número de ovos/miracídios nas fezes de camundongos pós-infecção ou pós-reinfecção em ambas as linhagens. Em relação ao número de ovos retidos nos órgãos, observou-se diferença estatisticamente significativa apenas no fígado. Nesse órgão, os animais BALB/c reinfectados apresentaram um reduzido número de ovos em relação aos animais BALB/c infectados e aos C57BL/6 reinfectados. Quanto à produção das imunoglobulinas, os camundongos C57BL/6 reinfectados apresentaram maior produção de IgG2c e os animais BALB/c reinfectados maior produção de IgG1. Camundongos C57BL/6 apresentaram um perfil misto de produção de citocinas do tipo 1/tipo 2, com produção das citocinas IL-10 e IL-13 ao longo de toda a infecção/reinfecção, sendo também considerável a produção das citocinas IFN-γ e TNF-α.. Os animais BALB/c produziram as citocinas IL-13 e IL-10 ao longo de toda a infecção/reinfecção, porém foram os únicos a produzirem a citocina IL-4 durante todo o tempo de infecção e reinfecção. Os resultados do nosso trabalho puderam apontar as principais diferenças imunológicas e parasitológicas entre as linhagens murinas BALB/c e C57BL/6 durante a infecção e/ou reinfecção pelo Schistosoma mansoni contribuindo para a geração de novos conhecimentos acerca dos mecanismos imunológicos desencadeados em resposta ao desenvolvimento do parasito no hospedeiro definitivo tanto durante infecção quanto reinfecção.

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TgROP2 is an intracellular protein associated with rhoptries of Toxoplama gondii and an antigen component of a candidate vaccine for toxoplasmosis. The purpose of the present study was to evaluate the efficacy of rTgROP2 to stimulate humoral and cellular immune responses in BALB/c mice via intranasal injection. TgROP2 partial coding sequence was (196-561) amplified by PCR from genomic T. gondii RH strain DNA and cloned into the pTrcHis expression vector. Escherichia coli Rosetta 2 cells transformed with pTrcHis-TgROP2 showed high levels (~1 mg.mL(-1)) of recombinant protein after 4 hours of IPTG induction. Recombinant TgROP2 exhibited an apparent Mr equal to 54 kDa. In order to test immunogenicity of the recombinant protein, 10 BALB/c mice received 10 µg of rROP2 protein + 10 µg of Quil-A via intranasal injection. Doses were administered at days 0, 21, and 42. Three animals were euthanized and used to evaluate cellular immune response on day 62. Five (50%) and two (20%) out of ten animals produced IgG (DO mean = 0.307; cut-off = 0.240) and IgA (DO mean = 0.133, cut-off = 0.101), respectively, by ELISA on day 62. The proliferation of splenocytes revealed high stimulation index (SI) when co-cultured with 5, 10 and 15 µg.mL(-1) of rTgROP2. These results indicate that intranasal immunization with recombinant protein ROP2 plus Quil-A can elicit both cellular and humoral immune responses in BALB/c mice.

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TgROP2 is an intracellular protein associated with rhoptries of Toxoplama gondii and an antigen component of a candidate vaccine for toxoplasmosis. The purpose of the present study was to evaluate the efficacy of rTgROP2 to stimulate humoral and cellular immune responses in BALB/c mice via intranasal injection. TgROP2 partial coding sequence was (196-561) amplified by PCR from genomic T. gondii RH strain DNA and cloned into the pTrcHis expression vector. Escherichia coli Rosetta 2 cells transformed with pTrcHis-TgROP2 showed high levels (~1 mg.mL-1) of recombinant protein after 4 hours of IPTG induction. Recombinant TgROP2 exhibited an apparent Mr equal to 54 kDa. In order to test immunogenicity of the recombinant protein, 10 BALB/c mice received 10 µg of rROP2 protein + 10 µg of Quil-A via intranasal injection. Doses were administered at days 0, 21, and 42. Three animals were euthanized and used to evaluate cell-ular immune response on day 62. Five (50 percent) and two (20 percent) out of ten animals produced IgG (DO mean = 0.307; cut-off = 0.240) and IgA (DO mean = 0.133, cut-off = 0.101), respectively, by ELISA on day 62. The proliferation of splenocytes revealed high stimulation index (SI) when co-cultured with 5, 10 and 15 µg.mL-1 of rTgROP2. These results indicate that intranasal immunization with recombinant protein ROP2 plus Quil-A can elicit both cellular and humoral immune responses in BALB/c mice.

TgROP2 é uma proteína localizada nas roptrias do Toxoplasma gondii, sendo um antígeno candidato a componente de uma vacina contra a toxoplasmose. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia da TgROP2 recombinante em estimular a resposta imune celular e humoral de camundongos BALB/c após estímulo intranasal. A sequência da TgROP2 foi amplificada pela PCR a partir da cepa RH e clonada em vetor de expressão pTrc-His. Após a transformação em Escherichia coli- Rosetta 2, a pTrcHis-TgROP2 exibiu alto nível de expressão após 4 horas de indução com IPTG. A proteína recombinante apresentou uma massa molecular aparente de aproximadamente 54 kDa. Para avaliar a imunogenicidade dessa proteína recombinante, 10 camundongos receberam, pela via intranasal, 10 µg da rROP2 associado a 10 µg de Quil-A. Três doses foram realizadas nos dias 0, 21 e 42. No dia 62 do experimento, três animais foram eutanasiados para avaliar as respostas imune celular e humoral. Cinco (50 por cento) e dois (20 por cento) dos 10 animais apresentaram níveis de IgG (DO média = 0,307; ponto de corte = 0,240) e IgA (DO média = 0,133; ponto de corte = 0,101) acima do ponto de corte no ELISA no dia 62. A proliferação de esplenócitos revelou altos Índices de Estimulação (SI), quando as células foram cultivadas com 5, 10 e 15 µg.mL-1 de rTgROP2. Os resultados obtidos indicam que a via nasal pode estimular tanto a resposta imune celular como a humoral.

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This work evaluated the effect of the Amblyomma cajennense tick on the immune response of BALB/c mice and on horse lymph node cell proliferation. We observed that mice do not develop resistance to nymphs of this tick species and that lymphocyte proliferation of this host is inhibited by tick saliva, nymphal extract, or infestations. Horse lymph node cell proliferation is inhibited by tick saliva as well. Mice lymphocytes under the effect of tick saliva, nymphal extract, or infestations display a predominantly Th-2 cytokine production pattern. Observed results partially explain this tick's disease vectoring capacity and broad host range.

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Leptospirosis is a public health problem worldwide and its etiology remains unclear. Its pathogenesis involves a complex interaction between host and infecting microorganism. The inflammatory reaction that controls the infection process also underscores many pathophysiological events occurring in leptospirosis. We investigated the presence of tumor necrosis factor-alfa (TNF-alfa) and interleukin-6 (IL-6) in renal tissues by immunohistochemical and histopathological examination in animals experimentally inoculated with Leptospira serovar Canicola. All the tests were carried out 2, 7, 14, 21 or 28 days after inoculation. Although TNF-alfa and IL-6 had been detected in tissues throughout the observation period, these cytokines appeared more intensely during the initial phase of infection. Therefore, both TNF-alfa and IL-6 were associated with the immunopathogenesis of leptospirosis. This profile suggests a high immunocellular response throughout the early infection stages followed by subsequent humoral response.

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A Leishmaniose Tegumentar (LT) constitui um grave problema de saúde pública no Brasil. As células T reguladoras (CD4+CD25+) (Tregs) executam um papel geral na regulação imune, prevenindo uma resposta imune patológica induzida. As Tregs naturais são definidas a partir da expressão constitutiva de CD25, CTLA-4, GITR, CD103 e FoxP3, entre outros marcadores. As células Tregs, ao se acumularem no sítio de infecção por Leishmania, suprimem a proliferação de células T CD4+CD25-, levando à persistência do parasita por mecanismos dependentes de IL-10. Nosso objetivo foi caracterizar a população de células Treg em camundongos BALB/c infectados e re-infectados com L. Braziliensis e avaliar se estas células estão relacionadas com a persistência do parasota. Células T CD4+CD25+, obtidas de camundongos infectados, expressam diferentes marcadores de superfície de Tregs (CD103, GITR, FoxP3) e foram capazes de suprimir a proliferação das células T CD4+CD25-. Observamos também a produção IFN-y e IL-10 por parte de células T CD4+CD25+. Observamos que os parasitas persistem no lifondo e no baço cuja infecção, contudo na orelha, o número de parasitas diminui com a cicatrização da lesão. Observamos também que não há reativação da lesão após o desafio. Nossos resultados mostram que as células Tregs estão presentes na infecção experimental por L. Braziliensis e sugerem que estas células estão associadas com a ausência de reativação da doença após um desafio.

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Neutrófilos são componentes importantes do sistema imune e fazem parte da primeira linha de defesa contra infecções. Na infecção intradérmica com L. braziliensis demonstramos que os neutrófilos são constantemente recrutados ao sítio de infecção. Além disso, já foi demonstrado que a interação de neutrófilos com macrófagos regula a resposta contra L. major. Neste estudo, investigamos o papel dos neutrófilos na infecção causada por Leishmania braziliensis usando o modelo de infecção intradérmica. Neutrófilos foram purificados de camundongos BALB/c, após a injeção intraperitonial de tioglicolato, sua pureza foi avaliada pela marcação com Gr-1, utilizando a citometria de fluxo. A posterior co-cultura de neutrófilos vivos ou mortos pelo calor com macrófagos peritoniais infectados com L. braziliensis levou a uma redução significativa na taxa de infecção e no número de amastigotas por célula quando comparado com as culturas controle. A presença de neutrófilos vivo ou mortos na cultura de macrófagos infectados com L. braziliensis foi associada a produção de altos níveis de TNF-a. Para avaliar o papel dos neutrófilos in vivo, camundongos foram co-inoculados com neutrófilos vivos e L. braziliensis. Observou-se que estes animais desenvolveram lesões significativamente menores e apresentaram um número menor de parasitas quando comparados com os camundongos controle. Por último, camundongos BALB/c foram depletados de neutrófilos após injeção intraperitonial do anticorpo RB6-8C5 e foram, em seguida, infectados com L. braziliensis. Camundongos depletados apresentaram lesões e carga parasitária maiores quando comparados com camundongos controle, os quais receberam injeção de IgG de rato. Estes dados indicam que os neutrófilos são células fundamentais para a eliminação inicial de L. braziliensis em camundongos BALB/c.

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During aging, there is an increased rise in susceptibility to infectious diseases. However, it is still unresolved whether standard vaccine adjuvants are efficient in the elderly. We report that immunization with OVA plus synthetic oligodeoxinucleotides containing immunostimulatory CpG motifs (CpG-ODN) stimulates specific Th1 response in aged mice. The immunization with OVA/CpG-ODN induced an increase in CD19+ cells. These cells from aged mice in vivo captured OVA-FITC as efficiently as those from young mice. Interestingly, naïve aged mice, which showed Th2 polarization and up-regulation of the expression of GATA-3, with immunization with OVA/CpG-ODN inducing Th1-specific response but maintaining a Th2 pattern in response to a non-specific stimulator of T cells. Our data suggest that the response elicited by CpG-ODN in aged mice have similar properties to the response developed in young mice, emphasizing the importance of the use of this adjuvant during aging.

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Se construyó una genoteca de Leishmania amazonensis en vector de expresión en células eucariotas (pEF1HisA, pEF1HisB, pEF1HisC). Se prepararon 2 subgenotecas con un número aproximado de 500 clones cada una y ratones BALB/c fueron inmunizados con 50 mg/0,1 mL de ADN de cada una; 2 inmunizaciones por vía IM, con 15 d de intervalo fueron realizadas. Grupos de ratones controles fueron inmunizados con ADN del plásmido vacío, con antígeno soluble del parásito (100 mg/0,1 mL) y solución salina fisiológica. Se midió el tamaño de las lesiones durante 12 semanas y al final del experimento, la carga parasitaria en los sitios de lesión fue determinada por el método de microtitulación en placas. Los ratones inmunizados con ADN 1, controlaron el tamaño de las lesiones, así como también los inmunizados con antígenos solubles, lo que alcanzó diferencia estadística (p< 0,05) en relación con el resto de los grupos, cuyas lesiones aumentaron de manera creciente. La carga de parásitos encontrada en los sitios de lesión corroboró los resultados anteriores, encontrando un número de promastigotes significativamente menor en aquellos que habían sido protegidos. Se concluyó que en la subgenoteca ADN1 deben existir genes, o fragmentos de genes, cuya expresión in vivo resulta protectora contra el reto, en el modelo murino empleado

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Se construyó una biblioteca genómica de Leishmania amazonensis mediante el vector pcDNA3, con promotor de expresión en células eucariotas, con el objetivo de contribuir a la aplicación de la tecnología de inmunización con ácidos nucleicos en la leishmaniosis. Para demostrar la expresión de la genoteca en el músculo de ratones inmunizados con esta, se realizó la técnica de inmunofluorescencia indirecta. Como anticuerpo primario se utilizó una mezcla de sueros con alto título antileishmania, de una zona donde predomina la infección con L. braziliensis. Se obtuvo una biblioteca con 80 porciento de clones recombinantes. Se demostró la expresión de determinantes antigénicos en el músculo de ratones BALB/c inmunizados, según resultados de la inmunofluorescencia

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Se construyó una biblioteca genómica de expresión de Trypanosoma cruzi con la utilización como vector el plásmido pcDNA3, con la cual se inmunizaron ratones de la línea isogénica BALB/c por vía intramuscular. Se empleó un grupo control positivo al que se le administraron antígenos solubles de T. cruzi y otro grupo que recibió el plásmido utilizado para la construcción de la biblioteca genómica; un grupo no recibió inmunización. A todos los animales se les extrajo sangre del plexo retrorbital 2 semanas posteriores a la tercera inmunización, para estudiar la respuesta de anticuerpos específicos contra los antígenos solubles del parásito mediante la técnica de western blot. Se obtuvo una respuesta de anticuerpos en los animales inmunizados con la biblioteca genómica de expresión y con antígenos solubles del parásito

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