RESUMO
Threonyl-tRNA synthetase (E.C. 6.1.1.3) from bovine liver has been purified to near homogeneity approximately 500 fold with a recovery of 48%. Two bands of molecular weight 90,000 and 82,000 respectively, were obtained by sodium dodecyl sulfate gel electrophoresis. The enzyme has an isoelectric point of 5.2 by polyacrylamide containing ampholine gel electrophoresis. Optimum assay conditions and apparent Km values have been determined in the ATP-PPi exchange reaction. Effects of divalent cations and diamine in substitution to Mg2+ and effects of sulfhydryl reagents on ATP-PPi exchange activity have also been observed.
Assuntos
Aminoacil-tRNA Sintetases/isolamento & purificação , Fígado/enzimologia , Treonina-tRNA Ligase/isolamento & purificação , Difosfato de Adenosina/metabolismo , Animais , Bovinos , Cromatografia DEAE-Celulose , Eletroforese em Gel de Poliacrilamida , Ponto Isoelétrico , Cinética , Métodos , Peso Molecular , Treonina-tRNA Ligase/metabolismoRESUMO
Treonil-RNA sintetase (E.C. 6.1.1.3) foi purificada quase à homogeneidade de fígado bovino cerca de 500 vezes com um rendimento de 48%. Duas bandas de pesos moleculares 90.000 e 82.000, respectivamente, foram obtidas por eletroforese em gel em presença de dodecil sulfato de sódio. A enzima tem um ponto isoelétrico de 5,2 por eletroforese em gel de poliacrilamida contendo anfoline. Utilizando-se a reaçäo de intercâmbio ATP-PPi foram determinadas as condiçöes ótimas de ensaio e os valores aparentes de Km. através da mesma reaçäo foram também observados efeitos de cátions divalentes e diaminas em substituiçäo ao Mg2+ e efeitos de reagentes sulfidrílicos