RESUMO
A etiopatogenia da doença periodontal é complexa e exige estudos constantes em alternativas terapêuticas que possibilitem seu controle. Aggregatibacter actinomycetemcomitans está associado fortemente à periodontite crônica e à periodontite agressiva. A tecnologia do plasma frio sob pressão atmosférica tem potencial para uso na odontologia, mas sua aplicação na periodontia ainda é pouco explorada. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do plasma de baixa temperatura sob pressão atmosférica (PBTPA) como adjuvante no controle da doença periodontal experimental induzida por ligadura, inoculada com A. actinomycetemcomitans, na região cervical do primeiro molar inferior em modelo murino. Inicialmente, foram determinados os parâmetros físicos efetivos para inibição de biofilmes de A. actinomycetemcomitans utilizando cepa padrão American Type Culture Collection ATCC 29523. Foram realizados testes de screening inicial com a verificação da inibição do crescimento por exposição ao PBTPA de A. actinomycetemcomitans semeados em placas de Petri. Posteriormente, foram formados biofilmes em placas de microtitulação e foram determinados os parâmetros físicos efetivos do PBTPA. Foram realizados experimentos in vivo de indução de doença periodontal por A. actinomycetemcomitans em modelo utilizando ligaduras em ratos. A tomografia computadorizada de feixe cônico foi utilizada para avaliar o nível de perda óssea após período experimental. Os resultados mostraram que o PBTPA foi efetivo na eliminação do micro-organismo observado através da formação de halos de inibição nos tempos de 5 e 7, 5 minutos e sobre biofilmes de A. actinomycetemcomitans expostos ao PBTPA no tempo de 5 minutos. Os resultados exibiram diferença estatística significativa (p <0,001) na distância entre a junção esmalte-cemento e a crista óssea alveolar, do grupo tratado com PBTPA em relação ao grupo raspagem e ao grupo controle. Os resultados do presente estudo sugerem o potencial do PBTPA no controle da periodontite induzida, contudo análises adicionais são necessárias(AU)
The etiopathogenesis of periodontal disease is complex requiring constant studies of therapeutic alternatives that enable its control. Aggregatibacter actinomycetemcomitans is strongly associated with chronic periodontitis and aggressive periodontitis. Cold plasma technology under atmospheric pressure has potential for use in dentistry, but its application in periodontics is still not well explored. This study aimed to evaluate the effects of low temperature atmospheric pressure plasma (PBTPA) as an adjuvant in the control of experimental periodontal disease induced by ligature inoculated with A. actinomycetemcomitans in the cervical region of the lower 1st molar in a murine model. Initially, effective physical parameters for inhibition of A. actinomycetemcomitans biofilms were determined using the standard strain American Type Culture Collection ATCC 29523. Initial screening tests were performed to verify growth inhibition after exposure of A. actinomycetemcomitans seeded in Petri dishes to the PBTPA. Subsequently, biofilms were formed on microtiter plates and the effective physical parameters of the PBTPA were determined. In vivo experiments were carried out to induce A. actinomycetemcomitans periodontal disease induced by ligature in a rat model. Cone beam computed tomography was used to assess the level of bone loss after the experimental period. The results showed that PBTPA was effective in eliminating the microorganism observed through the formation of halos inhibition during 5 and 7.5 minutes and in A. actinomycetemcomitans biofilms exposed to PBTPA at 5 minutes. The previous study using PBTPA in 5 minutes did not show cytotoxicity in Vero cells. The results showed a statistically significant difference (p <0.0001) in the distance between the enamel-cement joint and the alveolar bone crest, of the group treated with PBTPA in relation to the scalling group and the control group, confirming the potential of the technique in dentistry(AU)
Assuntos
Periodontite/complicações , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Gases em Plasma/efeitos adversosRESUMO
OBJECTIVE: To evaluate the effect of the periodontal treatment on Aggregatibacter actinomycetemcomitans JP2 clone, and the IgG serum levels against its outer membrane protein (Omp29) and A. actinomycetemcomitans serotypes in aggressive periodontitis (AgP). SUBJECTS AND METHODS: Seventeen patients with generalized (GAgP), 10 with localized (LAgP), and 10 healthy controls were included. AgP participants were submitted to periodontal treatment-scaling and root planing plus antibiotics (SRP+A). Periodontal parameters, for example, probing depth (PD) and clinical attachment loss (CAL), were evaluated at baseline and at 1-year. Serum IgG against Omp29 and serotypes a, b, and c were determined by ELISA. The levels of A. actinomycetemcomitans JP2 clone were determined in subgingival biofilm samples by qPCR. RESULTS: Periodontal treatment resulted in significant reductions of PD, CAL, and IgG levels against Omp29, serotypes b, and c. After therapy, IgG levels against A. actinomycetemcomitans serotypes, as well as the levels of the JP2 clone in AgP, became similar to controls. The reduction in JP2 clone count was correlated with a reduction of PD and IgG response against Omp29. CONCLUSION: Scaling and root planing plus antibiotics decreased IgG levels response against Omp29 and A. actinomycetemcomitans serotypes involved in the disease (b and c), while the serum response increased against tne commensal serotype (a), similar to what occurs in periodontally healthy individuals.
Assuntos
Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/imunologia , Periodontite Agressiva/microbiologia , Periodontite Agressiva/terapia , Proteínas da Membrana Bacteriana Externa/imunologia , Imunoglobulina G/sangue , Adolescente , Adulto , Periodontite Agressiva/sangue , Periodontite Agressiva/complicações , Amoxicilina/uso terapêutico , Antibacterianos/uso terapêutico , Contagem de Colônia Microbiana , Feminino , Humanos , Masculino , Metronidazol/uso terapêutico , Perda da Inserção Periodontal/microbiologia , Índice Periodontal , Estudos Prospectivos , Aplainamento Radicular , Sorogrupo , Adulto JovemRESUMO
This study aimed to evaluate the association between haplotypes in the interleukin 8 (IL8) and IL4 genes previously associated to chronic periodontitis (CP) and the levels of Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a.) in subgingival sites of patients with and without CP. Moreover, multifaceted evaluations were made to search associations among patients' genetic background with the A.a. levels and previous clinical/immunological/microbiological findings. Subgingival sites (n = 596) of 104 patients were divided into susceptible to CP by the IL8 haplotype ATC/TTC (IL8+); non-susceptible to CP by the IL8 AGT/TTC (IL8-); susceptible to CP by the IL4 TCI/CCI (IL4+); protection against CP by the IL4 TTD/CTI (IL4-). Subgingival biofilm samples from diseased and healthy sites of CP patients and from control sites of health patients were obtained for absolute quantification of A.a. by quantitative real-time polymerase chain reaction. For diseased sites, samples were collected before and 45 days after periodontal treatment. The IL4 but not the IL8 haplotypes were associated with levels of A.a. (in both periods). After periodontal treatment, higher levels of A.a. were found in subgingival sites of (IL4-) patients, and higher levels of IL-4 were associated with deeper probing pockets in these same patients. Significant correlations were found among genetic (patients carrying IL8 or IL4 haplotypes), microbiological and immunological data showing the interrelationship of different factors in the CP.
Assuntos
Aggregatibacter actinomycetemcomitans/genética , Biofilmes/crescimento & desenvolvimento , Periodontite Crônica/genética , Predisposição Genética para Doença , Interleucina-4/genética , Interleucina-8/genética , Polimorfismo Genético , Adulto , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/isolamento & purificação , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/patogenicidade , Carga Bacteriana , Periodontite Crônica/imunologia , Periodontite Crônica/microbiologia , Periodontite Crônica/terapia , Feminino , Expressão Gênica , Haplótipos , Humanos , Interleucina-4/imunologia , Interleucina-8/imunologia , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Análise Multivariada , RNA Ribossômico 16S/genética , Curetagem SubgengivalRESUMO
Black-pigmented bacteria (BPB) are Gram-negative anaerobic, non-motile, proteolytic rods strongly implicated in the pathogenesis of periodontal disease. Although pigments are produced in vitro, black pigmentation is rarely found clinically. However, it may compromise aesthetics and contribute to gingival inflammation. The aim of this report is to describe a clinical case of a 10-year-old boy showing black pigmentation covering all teeth and to propose an alternative therapy for removal of black pigmentation, based on photodynamic therapy (PDT). In order to perform microbiological analysis, plaque samples were collected before and after PDT, and analysed by real-time-PCR (RT-PCR). The results showed a significant reduction in BPB levels after therapy, along with clinical evidence of absence of black pigmentation and reduction in gingival bleeding, although the plaque index remained unaltered. This case showed that PDT is effective for eliminating black pigmentation caused by BPB, without recurrence during a follow-up period of 7 months.
Assuntos
Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Esmalte Dentário , Placa Dentária/microbiologia , Gengivite/microbiologia , Fotoquimioterapia , Pigmentação , Dente , Criança , Corantes , Placa Dentária/complicações , Placa Dentária/terapia , Índice de Placa Dentária , Raspagem Dentária , Gengiva/microbiologia , Gengiva/patologia , Hemorragia Gengival/terapia , Gengivite/complicações , Gengivite/terapia , Humanos , Masculino , Doenças PeriodontaisRESUMO
Os mastócitos (MCs) estão presentes tanto no periodonto normal quanto inflamado, em diferentes quantidades e em vários locais. Nos últimos anos, a eficácia e a contribuição dos MCs em eliminar bactérias, através de sua atividade microbicida intracelular, estão se tornando cada vez mais reconhecidas. Assim, a partir de MCs murinos desafiados in vitro com o periodontopatógeno Aggregatibacter actinomycetemcomitans (ATCC 29523) por 3, 5, 10 e 24 horas, o presente estudo teve como objetivo investigar a capacidade microbicida intracelular de MCs, e comparar com a capacidade microbicida de macrófagos peritoneais murinos (MPs), considerados fagócitos profissionais, por meio da contagem das unidades formadoras de colônias. Além disso, avaliou-se a produção e liberação de mediadores microbicidas, óxido nítrico (NO) e peróxido de hidrogênio (H2O2), por meio do método colorimétrico de Griess e pela degradação de substratos fluorescentes, respectivamente. Para a análise estatística, foram utilizados os testes estatísticos ANOVA Fatorial seguido do teste de Tukey e teste de correlação de Pearson (p<0.05). Nossos resultados revelaram que os MCs foram capazes de eliminar eficientemente o periodontopatógeno, principalmente após 10h de desafio intracelular. Comparando-se a atividade microbicida dos dois tipos celulares, verificou-se, nos períodos de 3h e 5h de desafio, um menor percentual de colônias viáveis no interior de MPs, em comparação aos MCs. Inversamente, nos períodos de 10h e 24h, observaram-se menores valores percentuais de colônias intracelulares nos MCs em relação aos MPs. Além disso, a produção/liberação de NO bem como, em menor proporção, de H2O2 pelos MCs foram concordantes com a sua capacidade microbicida. Este é o primeiro estudo que demonstra a eficiente ação microbicida intracelular de MCs murinos contra Aggregatibacter actinomycetemcomitans, com produção e liberação de substâncias potencialmente bactericidas, e de forma mais eficaz que os macrófagos...
Mast cells (MCs) are present in both normal and inflamed periodontal tissues, in varying amounts and locations. Recently, MCs contribution in eliminating bacteria and its effectiveness, through its intracellular microbicidal activity, have been increasingly recognized. Thus, this study aimed to investigate the intracellular microbicide capacity of MCs, and compare it with the microbicide capacity of murine peritoneal macrophages (MPs), considered professional phagocytes, by counting the colony forming units. Both cell types were challenged in vitro with periodontopathogen Aggregatibacter actinomycetemcomitans (ATCC 29523) by 3, 5, 10 and 24 hours. Additionally, the production and release of microbicidal agents, nitric oxide (NO) and hydrogen peroxide (H2O2) were evaluated by means of colorimetric Griess method and by the degradation of fluorescent substrates, respectively. Statistical analysis was performed by ANOVA Factorial test followed by Tukey and Pearson's correlation test (p <0.05). Our results revealed that MCs are able to efficiently eliminate periodontopathogen, mainly after 10 hours of intracellular challenge. The microbicidal activity of both cell types, in 3 and 5 hours of challenge showed a lower percentage of viable colonies inside MPs, compared to MCs. Contradictorily, in 10 and 24 hours a lower percentage of intracellular colonies in MCs was observed in relation to MPs. Moreover, the production/release of NO and, in minor proportion, of H2O2 by MCs was in agreement with its microbicidal capacity. Therefore, this is the first report to describe the intracellular microicidal activity of murine MCs against Aggregatibacter actinomycetemcomitans, concerning production and release of potentially bactericidal substances, which is more effective than macrophages. These results suggest the importance of these cells in pathogenesis and defense mechanisms of biofilm-associated periodontal disease...
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Camundongos , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Células da Medula Óssea/fisiologia , Mastócitos/fisiologia , Contagem de Colônia Microbiana , Doenças Periodontais/patologia , Óxido Nítrico/biossíntese , Peróxido de Hidrogênio/metabolismo , Fatores de TempoRESUMO
Os mastócitos (MCs) estão presentes tanto no periodonto normal quanto inflamado, em diferentes quantidades e em vários locais. Nos últimos anos, a eficácia e a contribuição dos MCs em eliminar bactérias, através de sua atividade microbicida intracelular, estão se tornando cada vez mais reconhecidas. Assim, a partir de MCs murinos desafiados in vitro com o periodontopatógeno Aggregatibacter actinomycetemcomitans (ATCC 29523) por 3, 5, 10 e 24 horas, o presente estudo teve como objetivo investigar a capacidade microbicida intracelular de MCs, e comparar com a capacidade microbicida de macrófagos peritoneais murinos (MPs), considerados fagócitos profissionais, por meio da contagem das unidades formadoras de colônias. Além disso, avaliou-se a produção e liberação de mediadores microbicidas, óxido nítrico (NO) e peróxido de hidrogênio (H2O2), por meio do método colorimétrico de Griess e pela degradação de substratos fluorescentes, respectivamente. Para a análise estatística, foram utilizados os testes estatísticos ANOVA Fatorial seguido do teste de Tukey e teste de correlação de Pearson (p<0.05). Nossos resultados revelaram que os MCs foram capazes de eliminar eficientemente o periodontopatógeno, principalmente após 10h de desafio intracelular. Comparando-se a atividade microbicida dos dois tipos celulares, verificou-se, nos períodos de 3h e 5h de desafio, um menor percentual de colônias viáveis no interior de MPs, em comparação aos MCs. Inversamente, nos períodos de 10h e 24h, observaram-se menores valores percentuais de colônias intracelulares nos MCs em relação aos MPs. Além disso, a produção/liberação de NO bem como, em menor proporção, de H2O2 pelos MCs foram concordantes com a sua capacidade microbicida. Este é o primeiro estudo que demonstra a eficiente ação microbicida intracelular de MCs murinos contra Aggregatibacter actinomycetemcomitans, com produção e liberação de substâncias potencialmente bactericidas, e de forma mais eficaz que os macrófagos...
Mast cells (MCs) are present in both normal and inflamed periodontal tissues, in varying amounts and locations. Recently, MCs contribution in eliminating bacteria and its effectiveness, through its intracellular microbicidal activity, have been increasingly recognized. Thus, this study aimed to investigate the intracellular microbicide capacity of MCs, and compare it with the microbicide capacity of murine peritoneal macrophages (MPs), considered professional phagocytes, by counting the colony forming units. Both cell types were challenged in vitro with periodontopathogen Aggregatibacter actinomycetemcomitans (ATCC 29523) by 3, 5, 10 and 24 hours. Additionally, the production and release of microbicidal agents, nitric oxide (NO) and hydrogen peroxide (H2O2) were evaluated by means of colorimetric Griess method and by the degradation of fluorescent substrates, respectively. Statistical analysis was performed by ANOVA Factorial test followed by Tukey and Pearson's correlation test (p <0.05). Our results revealed that MCs are able to efficiently eliminate periodontopathogen, mainly after 10 hours of intracellular challenge. The microbicidal activity of both cell types, in 3 and 5 hours of challenge showed a lower percentage of viable colonies inside MPs, compared to MCs. Contradictorily, in 10 and 24 hours a lower percentage of intracellular colonies in MCs was observed in relation to MPs. Moreover, the production/release of NO and, in minor proportion, of H2O2 by MCs was in agreement with its microbicidal capacity. Therefore, this is the first report to describe the intracellular microicidal activity of murine MCs against Aggregatibacter actinomycetemcomitans, concerning production and release of potentially bactericidal substances, which is more effective than macrophages. These results suggest the importance of these cells in pathogenesis and defense mechanisms of biofilm-associated periodontal disease.
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Camundongos , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Células da Medula Óssea/fisiologia , Mastócitos/fisiologia , Contagem de Colônia Microbiana , Doenças Periodontais/patologia , Óxido Nítrico/biossíntese , Peróxido de Hidrogênio/metabolismo , Fatores de TempoRESUMO
Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) é uma bactéria associada à Periodontite Agressiva (PA). Ela invade tecidos moles, com ocorrência de lisogenia e bacteriófagos presentes em até 69% das subespécies. Estudos in vitro sugerem que a indução do bacteriófago (Aa17) ocorre numa co-cultura de Aa lisogênico com fibroblastos humanos. Se esta interação ocorre in vivo, com liberação do vírus, uma reação imunológica contra o Aa17 aconteceria. O objetivo deste estudo é constatar se anticorpos (AC) contra proteínas do Aa17 existem e estão associados à doença periodontal. Um objetivo adicional foi testar a resposta de AC contra os sorotipos do Aa. 52 indivíduos participaram: 31 com PA, 5 com Periodontite Crônica (PC) e 16 com Periodonto Saudável (PS). Soro foi coletado após a classificação clínica. As proteínas do Aa17 foram obtidas de preparações purificadas. As subespécies do Aa utilizadas para amostras de proteínas através de sonicação foram: 43717(American Tissue Culture Collection - ATCC) sorotipo A, 43718 (ATCC) sorotipo B, 33384 (ATCC) sorotipo C, IDH781 sorotipo D, NJ9500 sorotipo E and CU1000 sorotipo F. As proteínas foram separadas em géis de poliacrilamida e transferidas para membranas de nitrocelulose. As reações de Western-blotting ocorreram com o AC primário sendo o soro de cada indivíduo. Todas as membranas foram lidas pelo sistema Odyssey que captura sinais no AC secundário (antihumano). A resposta de AC contra ao menos uma proteína do Aa17, assim como pelo menos um sorotipo do Aa foi observado em todos, com exceção de dois indivíduos (com PS), participantes. Um indivíduo do grupo PC e três do PA tiveram resposta de AC contra alguns, mas não todos os sorotipos do Aa. A resposta de AC contra todos os sorotipos foi o achado mais comum nos grupos PA (28/31), PS (14/16) e PC (4/5). A resposta de AC contra o complexo de proteínas do Aa17 foi observado em 7 indivíduos...
Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) is a bacteria associated with Aggressive Periodontitis (AP). It invades soft tissues, with occurrence of lysogeny and bacteriophage presence up to 69% of Aa subspecies. In vitro studies suggested that bacteriophage (Aa17) induction occurs upon co-culture of Aa lysogens subspecies with human fibroblasts. If such an in vivo interaction resulted in Aa17 induction and release of virions, an immunologic reaction to Aa17 proteins could ensue. The purpose of this investigation was to learn whether serum antibodies (AB) to Aa17 proteins are found in human sera, and whether they are associated with periodontal disease. An additional purpose was to test the AB response against known Aa serotypes.52 individuals took part: 31 with AP, 5 with Chronic Periodontitis (CP) and 16 with a Healthy Periodontium (HP). Serum was collected after clinical classification. Aa17 proteins were obtained from purified Aa17 preparations. The Aa strains used for protein sampling through sonication were: 43717(American Tissue Culture Collection - ATCC) serotype A, 43718 (ATCC) serotype B, 33384 (ATCC) serotype C, IDH781 serotype D, NJ9500 serotype E and CU1000 serotype F. Proteins were separated by SDS-PAGE gels and then transferred to nitrocellulose membranes. Western-blotting reactions were carried out with the primary AB being each subjects serum. All membranes were read through the Odyssey system which captures signals from a dye in a secondary (antihuman) AB. AB response against at least one Aa17 protein, as well as a response to at least one Aa serotype, was observed in all but two individuals (with HP) who participated in the study. Serum from one individual from the CP group and three from the AP group had AB response to some, but not all Aa serotypes. AB response against all Aa serotypes was the most common finding in AP (28/31), HP (14/16) and CP (4/5) groups. AB response to the full complex...
Assuntos
Humanos , Feminino , Adolescente , Adulto Jovem , Pessoa de Meia-Idade , Periodontite Agressiva , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Bacteriófagos , Periodontia , Anticorpos , Brasil , Distribuição de Qui-Quadrado , LisogeniaRESUMO
Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) é uma bactéria associada à Periodontite Agressiva (PA). Ela invade tecidos moles, com ocorrência de lisogenia e bacteriófagos presentes em até 69% das subespécies. Estudos in vitro sugerem que a indução do bacteriófago (Aa17) ocorre numa co-cultura de Aa lisogênico com fibroblastos humanos. Se esta interação ocorre in vivo, com liberação do vírus, uma reação imunológica contra o Aa17 aconteceria. O objetivo deste estudo é constatar se anticorpos (AC) contra proteínas do Aa17 existem e estão associados à doença periodontal. Um objetivo adicional foi testar a resposta de AC contra os sorotipos do Aa. 52 indivíduos participaram: 31 com PA, 5 com Periodontite Crônica (PC) e 16 com Periodonto Saudável (PS). Soro foi coletado após a classificação clínica. As proteínas do Aa17 foram obtidas de preparações purificadas. As subespécies do Aa utilizadas para amostras de proteínas através de sonicação foram: 43717(American Tissue Culture Collection - ATCC) sorotipo A, 43718 (ATCC) sorotipo B, 33384 (ATCC) sorotipo C, IDH781 sorotipo D, NJ9500 sorotipo E and CU1000 sorotipo F. As proteínas foram separadas em géis de poliacrilamida e transferidas para membranas de nitrocelulose. As reações de Western-blotting ocorreram com o AC primário sendo o soro de cada indivíduo. Todas as membranas foram lidas pelo sistema Odyssey que captura sinais no AC secundário (antihumano). A resposta de AC contra ao menos uma proteína do Aa17, assim como pelo menos um sorotipo do Aa foi observado em todos, com exceção de dois indivíduos (com PS), participantes. Um indivíduo do grupo PC e três do PA tiveram resposta de AC contra alguns, mas não todos os sorotipos do Aa. A resposta de AC contra todos os sorotipos foi o achado mais comum nos grupos PA (28/31), PS (14/16) e PC (4/5). A resposta de AC contra o complexo de proteínas do Aa17 foi observado em 7 indivíduos ...
Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) is a bacteria associated with Aggressive Periodontitis (AP). It invades soft tissues, with occurrence of lysogeny and bacteriophage presence up to 69% of Aa subspecies. In vitro studies suggested that bacteriophage (Aa17) induction occurs upon co-culture of Aa lysogens subspecies with human fibroblasts. If such an in vivo interaction resulted in Aa17 induction and release of virions, an immunologic reaction to Aa17 proteins could ensue. The purpose of this investigation was to learn whether serum antibodies (AB) to Aa17 proteins are found in human sera, and whether they are associated with periodontal disease. An additional purpose was to test the AB response against known Aa serotypes.52 individuals took part: 31 with AP, 5 with Chronic Periodontitis (CP) and 16 with a Healthy Periodontium (HP). Serum was collected after clinical classification. Aa17 proteins were obtained from purified Aa17 preparations. The Aa strains used for protein sampling through sonication were: 43717(American Tissue Culture Collection - ATCC) serotype A, 43718 (ATCC) serotype B, 33384 (ATCC) serotype C, IDH781 serotype D, NJ9500 serotype E and CU1000 serotype F. Proteins were separated by SDS-PAGE gels and then transferred to nitrocellulose membranes. Western-blotting reactions were carried out with the primary AB being each subjects serum. All membranes were read through the Odyssey system which captures signals from a dye in a secondary (antihuman) AB. AB response against at least one Aa17 protein, as well as a response to at least one Aa serotype, was observed in all but two individuals (with HP) who participated in the study. Serum from one individual from the CP group and three from the AP group had AB response to some, but not all Aa serotypes. AB response against all Aa serotypes was the most common finding in AP (28/31), HP (14/16) and CP (4/5) groups. AB response to the full complex ...
Assuntos
Humanos , Feminino , Adolescente , Adulto Jovem , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Periodontite Agressiva , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Bacteriófagos , Periodontia , Anticorpos , Brasil , Distribuição de Qui-Quadrado , LisogeniaRESUMO
New periodontal disease treatments are needed to prevent infection progression. Photodynamic therapy (PDT) is one of the greatest pledges for this purpose. It involves the use of light of specific wavelength to activate a nontoxic photosensitizing agent in the presence of oxygen for eradication of target cells, and can be used for photokilling of microorganisms. This study evaluated in vitro the photodynamic effect of 0.01% toluidine blue-O (TBO) in combination with an AlGaInP diode laser light source on Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a.) and Streptococcus sanguinis (S.s.). Suspensions (2 mL) containing A.a. and S.s. at 1.5 x 108 CFU/mL concentration were prepared and divided into 3 groups: Control group (no treatment), Dye group (inoculum and TBO for 5 min) and Dye/Laser group (inoculum, TBO for 5 min and laser for 3 min). Next, a dilution for subsequent subculture in 20 mL of Trypic Soy Agar (A.a) and Brucella Agar (S.s.) in Petri dishes (Pourplate Method) was done. Incubation of A.a. in microaerophilia and S.s. in aerobiosis at 35oC for 48 h was performed for subsequent visual counting of CFU/mL. Data were analyzed by one-way ANOVA and Tukey's HSD test at 5% significance level. For both strains, the control group showed a significantly higher (p<0.05) bacterial growth (1.5 x 108 CFU/mL), while the Dye group presented no significant reduction (p>0.05) in the CFU counts. The Dye/Laser group presented a significant decrease in the CFU counts (p<0.05) compared with the Control group (61.53% for A.a. and 84.32% for S.s.). It may be concluded that PDT was effective in reducing the numbers of A.a. and S.s. in vitro.
Assuntos
Aggregatibacter actinomycetemcomitans/efeitos dos fármacos , Fotoquimioterapia/métodos , Streptococcus sanguis/efeitos dos fármacos , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Carga Bacteriana/efeitos dos fármacos , Técnicas Bacteriológicas , Humanos , Lasers Semicondutores/uso terapêutico , Viabilidade Microbiana/efeitos dos fármacos , Doenças Periodontais/tratamento farmacológico , Doenças Periodontais/microbiologia , Fármacos Fotossensibilizantes/uso terapêutico , Streptococcus sanguis/crescimento & desenvolvimento , Fatores de Tempo , Cloreto de Tolônio/uso terapêuticoRESUMO
New periodontal disease treatments are needed to prevent infection progression. Photodynamic therapy (PDT) is one of the greatest pledges for this purpose. It involves the use of light of specific wavelength to activate a nontoxic photosensitizing agent in the presence of oxygen for eradication of target cells, and can be used for photokilling of microorganisms. This study evaluated in vitro the photodynamic effect of 0.01 percent toluidine blue-O (TBO) in combination with an AlGaInP diode laser light source on Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a.) and Streptococcus sanguinis (S.s.). Suspensions (2 mL) containing A.a. and S.s. at 1.5 x 108 CFU/mL concentration were prepared and divided into 3 groups: Control group (no treatment), Dye group (inoculum and TBO for 5 min) and Dye/Laser group (inoculum, TBO for 5 min and laser for 3 min). Next, a dilution for subsequent subculture in 20 mL of Trypic Soy Agar (A.a) and Brucella Agar (S.s.) in Petri dishes (Pourplate Method) was done. Incubation of A.a. in microaerophilia and S.s. in aerobiosis at 35oC for 48 h was performed for subsequent visual counting of CFU/mL. Data were analyzed by one-way ANOVA and Tukey’s HSD test at 5 percent significance level. For both strains, the control group showed a significantly higher (p<0.05) bacterial growth (1.5 x 108 CFU/mL), while the Dye group presented no significant reduction (p>0.05) in the CFU counts. The Dye/Laser group presented a significant decrease in the CFU counts (p<0.05) compared with the Control group (61.53 percent for A.a. and 84.32 percent for S.s.). It may be concluded that PDT was effective in reducing the numbers of A.a. and S.s. in vitro.
Novos tratamentos são propostos para evitar a progressão da periodontite, sendo a terapia fotodinâmica (PDT) uma notória promessa. Sua aplicação associa o Azul de orto-toluidina a 0,01 por cento (TBO) e uma fonte luminosa a laser de diodo (TwinFlex, Mmoptics), liberando assim, toxinas às bactérias. O objetivo do estudo é avaliar in vitro a eficiência da PDT sobre Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a.) e Streptococcus sanguinis (S.s.). Preparou-se suspensões distintas de 2 mL contendo A.a. e S.s. na concentração de 1,5x108 UFC/mL, e divisão de cada suspensão em 3 grupos: Controle (sem tratamento); Corante (suspensão e TBO por 5min) e Corante/Laser (suspensão, TBO por 5 min e laser por 3 min). Promoveu-se a diluição, a semeadura em 20 mL de TSA (A.a.) e de Ágar Brucella (S.s.), em placas de Petri (Método Pourplate), e a incubação da A.a. em microaerofilia e da S.s. em aerobiose, por 48 h a 35oC, para posterior contagem visual das UFC. Os grupos Controle mostraram ótimo crescimento bacteriano (1,5 x 108 UFC/mL). Os grupos Corante não apresentaram redução significativa para ambas bactérias. Os grupos Laser apresentaram redução em relação ao controle, 61,53 por cento para A.a. e 84,32 por cento para S.s. A análise estatística (ANOVA, p<0,05) corrobou que a PDT é eficaz na redução destas bactérias in vitro.
Assuntos
Humanos , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/efeitos dos fármacos , Fotoquimioterapia/métodos , Streptococcus sanguis/efeitos dos fármacos , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Técnicas Bacteriológicas , Carga Bacteriana/efeitos dos fármacos , Lasers Semicondutores/uso terapêutico , Viabilidade Microbiana/efeitos dos fármacos , Doenças Periodontais/tratamento farmacológico , Doenças Periodontais/microbiologia , Fármacos Fotossensibilizantes/uso terapêutico , Streptococcus sanguis/crescimento & desenvolvimento , Fatores de Tempo , Cloreto de Tolônio/uso terapêuticoAssuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/imunologia , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/isolamento & purificação , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/patogenicidade , Infecções por Actinobacillus/microbiologiaAssuntos
Masculino , Feminino , Humanos , Infecções por Actinobacillus/microbiologia , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/imunologia , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/isolamento & purificação , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/patogenicidadeRESUMO
We evaluated the influence of abiotic factors on antagonistic activity of Actinobacillus actinomycetemcomitans strains isolated from periodontal pockets and two reference strains (ATCC 29523 and FDC Y4). Antagonistic assays were performed by the overlayer method on tryptic soy agar (TSA), brain heart infusion agar, thioglycollate agar and brucella agar, added with yeast extract and supplemented (S) or not with L-cystine and sodium bicarbonate. Iso-, auto-, and heteroantagonism against a wide range of indicator strains were assayed. The influence of incubation atmosphere (anaerobic chamber, anaerobic and candle jars) and pH (5.0 to 11.0) was also evaluated. Autoantagonism was not observed. TSA-S was shown to be the most adequate medium for antagonistic activity expression. The widest spectrum of heteroantagonistic activity was also observed on TSA-S. The incubation atmosphere affected only the isoantagonistic activity expression. Only at pH 8.0 did A. actinomycetemcomitans express bacteriocinogenic activity. The lack of standardized methodology to detect antagonistic activity can lead to discrepant results and can make data difficult to be compared. This study provides information on abiotic factors that influence bacteriocinogenic activity expression and suggests adequate culture conditions for testing A. actinomycetemcomitans bacteriocin production, contributing to the establishment of a reproducible and reliable methodology.
Assuntos
Infecções por Actinobacillus/microbiologia , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/efeitos dos fármacos , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/crescimento & desenvolvimento , Antibiose , Bacteriocinas/farmacologia , Bolsa Periodontal/microbiologia , Aggregatibacter actinomycetemcomitans/metabolismo , Anaerobiose , Bacteriocinas/biossíntese , Técnicas Bacteriológicas/normas , Meios de Cultura/química , Humanos , Concentração de Íons de Hidrogênio , Testes de Sensibilidade MicrobianaRESUMO
The ability of Actinobacillus actinomycetemcomitans to produce bacteriocin has rarely been reported. Antagonistic substance production may confer an important ecological advantage for the producer microorganisms, especially in a competitive ecosystem such as the oral cavity. In the present study, 75 A. actinomycetemcomitans strains isolated from the oral cavity of human patients with periodontal disease, periodontally healthy subjects and marmosets, as well as two reference strains (A. actinomycetemcomitans ATCC 29523 and FDC Y4) were evaluated for auto-, iso-, and heteroantagonistic activity. Fifty-one (68.00%) strains exhibited antagonistic activity; heteroantagonism was observed more often than isoantagonism. Isolated strains antagonized 17 different species of gram-positive and gram-negative bacteria from the oral and nonoral microbiota. Sensitivity to heat and to proteolytic enzymes constituted strong evidence that the antagonistic substance has a proteic nature. Taken together, our data enabled us to confirm that the antagonistic substance detected was a bacteriocin. The wide spectrum of activity indicates the possibility that more than one antagonistic substance is produced and that these substances play an important role in the ecological balance of the oral ecosystem.