RESUMO

Fungi are capable of sensing light from ultraviolet to far-red and they use light as a source of information about the environment anticipating stress and adverse conditions. Lentinus crinitus is a lignin-degrading fungus which produces laccase and other enzymes of biotechnological interest. The effect of blue light on fungal enzymatic activity has been studied; however, it has not been found studies on the effect of the blue light on carbohydrate-active enzymes and on mycelial biomass production of L. crinitus. We aimed to investigate carbohydrate-active enzymes activity and mycelial biomass production of L. crinitus cultivated under continuous illumination with blue light. L. crinitus was cultivated in malt extract medium in the dark, without agitation, and under continuous illumination with blue light-emitting diodes. The blue light reduced the total cellulase, pectinase and xylanase activities but increased the endoglucanase activity. Blue light reduced the mycelial growth of L. crinitus in 26% and the enzymatic activity-to-mycelial biomass ratio (U mg-1 dry basis) increased in 10% total cellulase, 33% endoglucanase, and 16% pectinase activities. Also, it is suggested that L. crinitus has a photosensory system and it could lead to new process of obtaining enzymes of biotechnological interest.

Fungos são capazes de sentir a luz com comprimentos de onda que variam do ultravioleta ao infravermelho e usam a luz como fonte de informação sobre o ambiente, antecipando condições adversas e de estresse. Lentinus crinitus é um fungo ligninolítico que produz lacase e outras enzimas de interesse biotecnológico. O efeito da luz azul na atividade enzimática de fungos já foi estudado, contudo, ainda não há estudos sobre o efeito da luz azul na produção de enzimas ativas sobre carboidratos (CAZymes, carbohydrate-active enzymes) e de biomassa micelial de L. crinitus. O objetivo deste estudo foi investigar a avitivade de CAZymes e a produção de biomassa micelial de L. crinitus cultivado sob iluminação continua com luz azul. L. crinitus foi cultivado em meio extrato de malte, sem agitação, na ausência de luz e sob luz continua fornecida por diodos emissores de luz azul. A luz azul reduziu a atividade de cellulase total, pectinase e xilanase, mas aumentou a atividade de endoglucanase. A luz azul reduziu o crescimento micelial de L. crinitus em 26% e aumentou a razão atividade enzimática/biomassa micelial (U mg-1 em base seca) de cellulase total em 10%, endoglucanase em 33% e pectinase em 16%. Além disso, sugere-se que L. crinitus possua um sistema fotossensorial que poderia ser explorado para a otimização de bioprocessos que visam a obtenção de enzimas de interesse biotecnológico.

Assuntos

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The purpose of this investigation was to study the effect of Bacillus subtilis CM5 in solid state fermentation using cassava bagasse for production of Exo-polygalacturonase (exo-PG). Response surface methodology was used to evaluate the effect of four main variables, i.e. incubation period, initial medium pH, moisture holding capacity (MHC) and incubation temperature on enzyme production. A full factorial Central Composite Design was applied to study these main factors that affected exo-PG production. The experimental results showed that the optimum incubation period, pH, MHC and temperature were 6 days, 7.0, 70 percent and 50ºC, respectively for optimum exo-PG production.

O objetivo desta investigação foi estudar a produção de exo-poligalacturonase (exo-PG) por Bacillus subtilis CM5 por fermentação em estado sólido empregando bagaço de mandioca. Empregou-se a metodologia de superfície de resposta para avaliar o efeito de quatro variáveis na produção da enzima: período de incubação, pH inicial do meio, MHC e temperatura de incubação. Os resultados experimentais mostraram que os ótimos de temperatura, período de incubação, MHC e temperatura para produção de exo-PG foram seis dias, 7,0, 70 por cento e 50ºC, respectivamente.

RESUMO

A banana constitui interessante alternativa para compor saladas de frutas. No entanto, possui curta vida de prateleira após o processamento mínimo em razão da rápida perda da firmeza. Neste trabalho, objetivou-se avaliar o efeito da mistura química contendo cloreto de cálcio, ácido ascórbico e L-cisteína e/com o uso de atmosfera modificada ativa (10 kPa CO2 e 2 kPa O2), enfatizando a perda de firmeza sobre a qualidade e vida de prateleira de banana 'Prata' minimamente processada. O conteúdo de pectina solúvel e a por cento de solubilização aumentaram significativamente ao longo do período de conservação. A perda de firmeza e o aumento das atividades das enzimas poligalacturonase e pectinametilesterase apresentaram uma interação significativa entre os fatores estudados (Tratamento/Tempo). As fatias tratadas com misturas químicas permaneceram com boas características para o consumo por até 3 dias de conservação. Os tratamentos com injeção inicial de gases de forma isolada, ou junto ao tratamento com mistura química, não propiciaram maior retenção da firmeza de banana 'Prata' minimamente processada em relação ao tratamento contendo L-cisteína (1 por cento p/v) + ácido ascórbico (1 por cento p/v) + cloreto de cálcio (1 por cento p/v) na mistura química.

Banana constitutes an interesting alternative to make fruit salad. Nevertheless, they have short shelf life after cutting due to the fast loss of firmness. The objective of this work was to evaluate the effect of chemical mixtures containing calcium chloride, ascorbic acid and L-cysteine with the use of active modified atmosphere (10 kPa CO2 and 2 kPa O2), emphasizing the lost of firmness on the quality and shelf life of fresh-cut 'Silver' banana. Soluble pectin content and the percentage of solubilization increased significantly throughout the conservation period. The lost of firmness and the increase of pectinmethylesterase and polygalacturonase activities presented a significant interaction among the studied factors (treatment/time). The slices treated with chemical mixtures remained with good characteristics for consume until 3 days of conservation. The treatments with an isolated initial gas injection or together with the chemical mixture treatment didn't promote better firmness retention of fresh-cut 'Silver' banana in relation to the treatment containing 1 percent (w/v) L-cysteine + 1 percent (w/v) ascorbic acid + 1 percent (w/v) calcium chloride in the chemical mixture.

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Objetivou-se, neste trabalho, avaliar as modificações da poligalacturonase (PG) e da pectinametilesterase (PME) em morangos cultivados na região de Lavras, MG, e armazenados em temperatura ambiente. Foram utilizados morangos das cultivares 'Oso-grande', 'Toyorrinho' e 'Tudla'. Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado com 4 repetições, sendo os tratamentos arranjados em esquema fatorial (3X2), sendo 3 cultivares e 2 dias de análises (0 e 5 dias). A parcela experimental foi constituída por 10 frutos. Durante o armazenamento houve uma diminuição nos teores de pectina total e um aumento nos de pectina solúvel em todas as variedades analisadas. A atividade da PG e PME aumentaram com o período de armazenamento, independente da cultivar.

The objective of this research was to evaluate the modifications of the polygalacturonase (PG) and the pectinmethilesterase (PME) in strawberries cultivated in the region of Lavras, MG, and stored at room temperature. Strawberries of the research were used for plantation of 'Oso-grande', 'Toyorrinho' and 'Tudla'. The entirely randomized design with 4 replicates was used, being the treatments arranged in factorial (3x2), being 3 plantations and 2 days of analyses (0 and 5 days). The experimental parcel was consisted by 10 fruits. During the storage there was a reduction in the levels of total pectin and an increase in the ones of soluble pectin in all the analyzed varieties. With the period of storage the PG and PME activity grew, independent of the cultivar.

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The purpose of this investigation was to study the effect of Bacillus subtilis CM5 in solid state fermentation using cassava bagasse for production of Exo-polygalacturonase (exo-PG). Response surface methodology was used to evaluate the effect of four main variables, i.e. incubation period, initial medium pH, moisture holding capacity (MHC) and incubation temperature on enzyme production. A full factorial Central Composite Design was applied to study these main factors that affected exo-PG production. The experimental results showed that the optimum incubation period, pH, MHC and temperature were 6 days, 7.0, 70% and 50ºC, respectively for optimum exo-PG production.

O objetivo desta investigação foi estudar a produção de exo-poligalacturonase (exo-PG) por Bacillus subtilis CM5 por fermentação em estado sólido empregando bagaço de mandioca. Empregou-se a metodologia de superfície de resposta para avaliar o efeito de quatro variáveis na produção da enzima: período de incubação, pH inicial do meio, MHC e temperatura de incubação. Os resultados experimentais mostraram que os ótimos de temperatura, período de incubação, MHC e temperatura para produção de exo-PG foram seis dias, 7,0, 70% e 50ºC, respectivamente.

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Various process parameters for the production of polygalacturonase by Streptomyces lydicus under solid-state fermentation were optimized. The optimum particle size of wheat bran for polygalacturonase production was in the range of 500-1000 µm. Initial moisture content of 70 percent was found to be the optimum for enzyme production. The most suitable inoculum size was 1.25 x 10(5) CFU/mL and the optimum incubation temperature was 30ºC. Addition of carbon sources resulted in 37 percent increase in enzyme yield (425 U/g), whereas no significant enhancement was obtained on nitrogen supplementation. Maximum enzyme yield was recorded at 72 h. When compared to the initial production medium (108.5 U/g), the enzyme yield was 3.9 fold after optimization. Solid-state fermentation was effectively employed to develop a novel process for the simultaneous extraction and degumming of banana fibers. Streptomyces lydicus was allowed to grow on wheat bran medium in which banana leaf sheath pieces were incorporated and the fiber bundles were separated after a two-step fermentative process.

Vários parâmetros de processo de produção de poligalacturonase por Streptomyces lydicus por fermentação em estado sólido foram otimizados. O tamanho ótimo de partícula de farelo de trigo para a produção de poligalacturonase esteve na faixa de 500 a 1000 mm. O teor inicial de umidade de 70 por cento foi o melhor para a produção da enzima. O inóculo inicial mais adequado foi de 1,25 x 10(5) UFC/mL e a temperatura ótima de incubação foi 30ºC. A adição de fontes de carbono resultou em aumento de 37 por cento no rendimento da enzima (425U/g), enquanto que a suplementação com nitrogênio não melhorou o rendimento. O rendimento máximo da enzima foi obtido em 72h. A otimização resultou em um aumento de 3,9 vezes na quantidade de enzima produzida inicialmente (108,5U/g). A fermentação em estado-sólido foi eficiente para o desenvolvimento de um novo processo de extração e simultânea degomagem. Streptomyces lydicus foi cultivado em meio de farelo de trigo acrescentado de fragmentos de folhas de banana, sendo os feixes de fibras separados após um processo de fermentação em dois passos.

Assuntos

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Various process parameters for the production of polygalacturonase by Streptomyces lydicus under solid-state fermentation were optimized. The optimum particle size of wheat bran for polygalacturonase production was in the range of 500-1000 µm. Initial moisture content of 70% was found to be the optimum for enzyme production. The most suitable inoculum size was 1.25 x 10(5) CFU/mL and the optimum incubation temperature was 30ºC. Addition of carbon sources resulted in 37% increase in enzyme yield (425 U/g), whereas no significant enhancement was obtained on nitrogen supplementation. Maximum enzyme yield was recorded at 72 h. When compared to the initial production medium (108.5 U/g), the enzyme yield was 3.9 fold after optimization. Solid-state fermentation was effectively employed to develop a novel process for the simultaneous extraction and degumming of banana fibers. Streptomyces lydicus was allowed to grow on wheat bran medium in which banana leaf sheath pieces were incorporated and the fiber bundles were separated after a two-step fermentative process.

Vários parâmetros de processo de produção de poligalacturonase por Streptomyces lydicus por fermentação em estado sólido foram otimizados. O tamanho ótimo de partícula de farelo de trigo para a produção de poligalacturonase esteve na faixa de 500 a 1000 mm. O teor inicial de umidade de 70% foi o melhor para a produção da enzima. O inóculo inicial mais adequado foi de 1,25 x 10(5) UFC/mL e a temperatura ótima de incubação foi 30ºC. A adição de fontes de carbono resultou em aumento de 37% no rendimento da enzima (425U/g), enquanto que a suplementação com nitrogênio não melhorou o rendimento. O rendimento máximo da enzima foi obtido em 72h. A otimização resultou em um aumento de 3,9 vezes na quantidade de enzima produzida inicialmente (108,5U/g). A fermentação em estado-sólido foi eficiente para o desenvolvimento de um novo processo de extração e simultânea degomagem. Streptomyces lydicus foi cultivado em meio de farelo de trigo acrescentado de fragmentos de folhas de banana, sendo os feixes de fibras separados após um processo de fermentação em dois passos.

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Polygalacturonases production by newly isolated Monascus sp N8 and Aspergillus sp N12 strains was carried out in solid-state fermentation using mixtures of wheat bran, sugar cane bagasse and orange bagasse as carbon sources. The maximal activity values of exo-polygalacturonases (exo-Pg) from Monascus sp and Aspergillus sp were obtained using wheat bran/sugar cane bagasse/orange bagasse mixture (6.6 U/mL) and wheat bran/orange bagasse mixture (10 U/mL), respectively. Enzyme production by both strains was higher at 45ºC after 72 h and 1.6 U/mL at 50ºC after 120 h. Endo-polygalacturonase (endo-Pg) production was higher in wheat bran/orange bagasse mixture and was not affected by temperature of incubation for both fungi. Endo-Pg production by Monascus was 1.8 U/mL at 45ºC and 50ºC, after 72. Similar values were obtained in Aspergillus sp culture, 1.9 U/mL at 45ºC and 1.8 U/mL at 50ºC. Exo-Pg from both strains showed optimum activity at pH 5.5. Maximal activity was determined at 60ºC for enzyme from Monascus sp and 50ºC for that produced by Aspergillus sp. Exo-Pg from Monascus sp was stable at pH range 4.5-6.0 whereas that from Aspergillus sp enzyme was stable at pH 4.0. Both enzymes showed stability when incubated at 50ºC for 1 h, in absence of substrate.

A produção de poligalacturonases pelas linhagens fúngicas recentemente isoladas, Monascus sp N8 e Aspergillus sp N12, foi estudada através de fermentação em estado sólido usando como substratos misturas de farelo de trigo, bagaço da cana-de-açúcar e bagaço de laranja. A atividade máxima de exo-Pg produzida por Monascus sp (6,6 U/mL) foi obtida quando o meio de cultivo utilizado continha mistura de farelo de trigo, bagaço da cana-de-açúcar e bagaço de laranja (1:1:1), enquanto que Aspergillus sp produziu maior quantidade da enzima (10 U/mL) em meio de farelo de trigo e bagaço de laranja. A maior produção de exo-Pg foi obtida através de incubação das culturas a 45ºC quando comparadas àquelas incubadas a 50ºC. A produção de endo-poligalacturonase (endo-Pg) pelas duas linhagens não foi afetada pela temperatura de incubação. A atividade de endo-Pg em meio de cultura Monascus sp foi 1.8 U/mL a 45ºC em 72 hs de fermentação e 1,6 U/mL a 50ºC em 120 hs de fermentação nas mesmas condições. Valores semelhantes foram obtidos pelo cultivo de Aspergillus sp com 1.9 U/mL a 45ºC a 1.8 U/mL at 50ºC. As exo-poligalacturonases produzidas por ambas as linhagens mostraram maiores atividades em pH 5,5. Enzimas de Monascus sp foi mais ativa a 60ºC e a de Aspergillus sp, a 50ºC. A exo-Pg produzida por Monascus sp foi estável em valores de pH entre 4,5-6,0, enquanto a de Aspergillus sp foi estável somente em pH 4,0. Ambas as enzimas mostraram-se estáveis por 1 hora a 50ºC, quando incubadas em ausência de substrato.

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A thermophilic fungal strain producing both pectinase and polygalacturonase was isolated after primary screening of 120 different isolates. The fungus was identified as Aspergillus fumigatus Fres. MTCC 4163. Using solid-state cultivation, the optimum levels of variables for pectinase and polygalacturonase (PG) production were determined. Maximal levels of enzyme activities were achieved upon growing the culture in a medium containing wheat bran, sucrose, yeast extract and (NH4)2SO4 after 2-3 days of incubation at a temperature of 50ºC. Highest enzyme activities of 1116 Ug-1 for pectinase and 1270 Ug-1 for polygalacturonase were obtained at pH 4.0 and 5.0, respectively.

Através da tiragem de 120 cepas de fungos, isolou-se uma cepa capaz de produzir tanto pectinase quanto poligalacturonase. A cepa foi identificada como Aspergillus fumigatus Fres. MTCC 4163. Empregando cultivo em estado sólido, determinou-se os níveis ótimos das variáveis para a produção de pectinase e de poligalacturonase. Os níveis máximos de atividade enzimática foram obtidos quando a cultura era realizada em meio contendo farelo de trigo, sacarose, extrato de levedura e (NH4)2SO4 por 2-3 dias a uma temperatura de 50ºC. A atividade máxima de pectinase (1116 Ug-1) e de poligalacturonase (1270 Ug-1) foi obtida em pH 4,0 e 5,0, respectivamente.

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The effects of cations addition on pellet morphology and polygalacturonase (PG) synthesis by Aspergillus niger 3T5B8 were studied and compared with a control system. Fe(II), Cu(II), Zn(II) and Mn(II) were added to the fermentation medium separately, and also as combined groups of cations. The addition of Fe2+ and/or Zn2+ ions was significantly positive to the enzyme production. A positive effect in the biomass content, however, was only obtained when the same metal ions were added separately. On the other hand, Cu2+ and Mn2+ ions had almost no effect on these parameters. The morphology of the pellets was studied by image processing techniques. Small pellets with small cores were usually obtained when Fe2+ and Zn2+ ions were individually or collectively added to the medium. The pellets produced in media containing Fe2+ or Zn2+ ions were compact, while the ones produced in a medium containing both cations were considered diffuse. Autolysis of the core was observed for large control pellets, due to the deficient nutrient transfer to the interior of the pellet. The pellets obtained in a medium containing both Fe2+ and Zn2+ ions were high enzyme producers, probably due to a loose morphology, induced by the presence of combined groups of metal ions in the medium, favoring the nutrient transfer.

O efeito da adição de cátions na morfologia do agregado e na síntese de poligalacturonase (PG) por Aspergillus niger 3T5B8 foi estudado e comparado com um sistema controle. Fe(II), Cu(II), Zn(II) and Mn(II) foram adicionados ao meio de fermentação, tanto separadamente, como em grupos de cátions. A adição dos íons Fe2+ e/ou Zn2+ foi positivamente significante para a produção da enzima. Um efeito similar no teor de biomassa, contudo, só pode ser observado quando os mesmos íons foram adicionados isoladamente. Por outro lado, os íons Cu2+ e Mn2+ não afetaram significativamente estes parâmetros. Utilizando-se técnicas de processamento de imagens para o estudo da morfologia dos pellets, observou-se que pequenos aglomerados, com pequenos núcleos, foram geralmente obtidos quando os cátions Fe2+ e Zn2+ foram adicionados ao meio, seja isolada ou simultaneamente. Os aglomerados produzidos em meios contendo íons Fe2+ ou Zn2+ eram compactos, enquanto que aqueles produzidos em meios contendo ambos os cátions foram considerados difusos. A autólise do núcleo foi observada para os grandes agregados produzidos no meio controle, devido ao transporte deficiente de nutrientes para o seu interior. Os agregados produzidos em meio contendo os íons Fe2+ e Zn2+ foram grandes produtores de enzima, provavelmente devido a uma morfologia mais "frouxa", induzida pela presença combinada destes metais no meio, favorecendo o transporte de nutrientes.

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Pectin lyase and polygalacturonase production by newly isolated Penicillium viridicatum strain Rfc3 was carried out by means of solid state fermentation using orange bagasse, corn tegument, wheat bran and mango and banana peels as carbon sources. The maximal activity value of polygalacturonase (Pg) (30U.g-1) was obtained using wheat bran as carbon source while maximal pectin lyase (Pl) (2000 U.g-1) activity value was obtained in medium composed of orange bagasse. Mixtures of banana or mango peels with sugar cane bagasse resulted in increased Pg and Pl production compared to fermentations in which this residue was not used. The mixture of orange bagasse and wheat bran (50%) increased the production of Pg and Pl to 55 U.g-1 and 3540 U.g -1 respectively. Fractions of Pg and Pl, isolated by gel filtration in Sephadex G50, presented optimum activity at pH 5.0 and 10.5 respectively. Maximal activity of Pg and Pl fractions was determined at 55ºC and 50ºC respectively. Pg was stable in neutral pH range and at 40ºC whereas Pl was stable in acidic pH and at 35ºC, for 1 h.

A produção de pectina liase (Pl) e poligalacturonase (Pg) por cepa de Penicillium viridicatum Rfc3, recentemente isolada, foi estudada por meio de fermentação em estado sólido usando bagaço de laranja, tegumento de milho, farelo de trigo e cascas de manga e banana como fontes de carbono. Quando os resíduos foram utilizados isoladamente, o valor máximo de atividade de Pg (30 U g-1) foi observado em meio de farelo de trigo, enquanto que o valor máximo para atividade de Pl (2000 U g-1) foi obtido em meio de bagaço de laranja. Misturas de cascas de banana ou de manga com bagaço de cana-de-açúcar (50% p/p), resultaram em aumento na produção tanto de Pl quanto de Pg, quando comparado com os experimentos nos quais esses materiais foram usados isoladamente. A mistura de bagaço de laranja e farelo de trigo (50%) elevou a produção de Pg e Pl para 55 U.g-1 e 3540 U.g-1, respectivamente. O fracionamento das enzimas presentes na solução enzimática bruta, através de filtração em gel Sephadex G50, resultou na obtenção de diferentes frações de Pl e de Pg. As frações de Pg e Pl, as quais foram caracterizadas, apresentaram atividade ótima em pH 5,0 e 10,5, respectivamente. A atividade máxima da fração de Pg foi obtida a 55ºC e, para Pl, a 50ºC. A Pg foi estável em valores de pH próximos à neutralidade e a 40ºC, enquanto que a Pl foi estável em pH ácido e a 35ºC, por uma hora.

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Fungi are well known by their ability to excrete enzymes into the environment. Among them, representatives of Mucor Fresen. have important biotechnological potential and some of them produce industrial enzymes. This work studied amylase, lipase, polygalacturonase and protease production by fifty-six isolates of Mucor belonging to 11 different taxa, selected from herbivores dung using solid media. The results showed that the majority of the isolates presented several enzymatic activities with predominance of polygalacturonase (96%), followed by amylase (84%), protease (82%) and lipase (66%).

Os fungos apresentam a capacidade de produzir e secretar enzimas para o meio ambiente. Entre esses, representantes de Mucor Fresen constituem um grupo de microrganismos com importante potencial biotecnológico, sendo responsáveis pela produção de várias enzimas usadas em processos industriais. Foi observado que 56 isolados do gênero Mucor, totalizando 11 táxons, obtidos de fezes de herbívoros são capazes de produzir amilase, lipase, polygalacturonase e protease em meios sólidos. Os resultados demonstraram que 96% dos isolados produziram poligalacturonase, (84%) amilase, (82%) protease e (66%) lipase.

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Pectin lyase and polygalacturonase production by newly isolated Penicillium viridicatum strain Rfc3 was carried out by means of solid state fermentation using orange bagasse, corn tegument, wheat bran and mango and banana peels as carbon sources. The maximal activity value of polygalacturonase (Pg) (30U.g-1) was obtained using wheat bran as carbon source while maximal pectin lyase (Pl) (2000 U.g-1) activity value was obtained in medium composed of orange bagasse. Mixtures of banana or mango peels with sugar cane bagasse resulted in increased Pg and Pl production compared to fermentations in which this residue was not used. The mixture of orange bagasse and wheat bran (50%) increased the production of Pg and Pl to 55 U.g-1 and 3540 U.g -1 respectively. Fractions of Pg and Pl, isolated by gel filtration in Sephadex G50, presented optimum activity at pH 5.0 and 10.5 respectively. Maximal activity of Pg and Pl fractions was determined at 55ºC and 50ºC respectively. Pg was stable in neutral pH range and at 40ºC whereas Pl was stable in acidic pH and at 35ºC, for 1 h.

A produção de pectina liase (Pl) e poligalacturonase (Pg) por cepa de Penicillium viridicatum Rfc3, recentemente isolada, foi estudada por meio de fermentação em estado sólido usando bagaço de laranja, tegumento de milho, farelo de trigo e cascas de manga e banana como fontes de carbono. Quando os resíduos foram utilizados isoladamente, o valor máximo de atividade de Pg (30 U g-1) foi observado em meio de farelo de trigo, enquanto que o valor máximo para atividade de Pl (2000 U g-1) foi obtido em meio de bagaço de laranja. Misturas de cascas de banana ou de manga com bagaço de cana-de-açúcar (50% p/p), resultaram em aumento na produção tanto de Pl quanto de Pg, quando comparado com os experimentos nos quais esses materiais foram usados isoladamente. A mistura de bagaço de laranja e farelo de trigo (50%) elevou a produção de Pg e Pl para 55 U.g-1 e 3540 U.g-1, respectivamente. O fracionamento das enzimas presentes na solução enzimática bruta, através de filtração em gel Sephadex G50, resultou na obtenção de diferentes frações de Pl e de Pg. As frações de Pg e Pl, as quais foram caracterizadas, apresentaram atividade ótima em pH 5,0 e 10,5, respectivamente. A atividade máxima da fração de Pg foi obtida a 55ºC e, para Pl, a 50ºC. A Pg foi estável em valores de pH próximos à neutralidade e a 40ºC, enquanto que a Pl foi estável em pH ácido e a 35ºC, por uma hora.

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Previous studies from our laboratory have demonstrated that the fungus Penicillium frequentans produces high levels of polygalacturonase and pectinesterase. Endopolygalacturonase I (Endo-PG I) and Exopolygalacturonase I (Exo-PG I) were previously purified and characterized. In the present study two extracellular polygalacturonases were separated, partially purified and biochemically characterized. Both were characterized as exopolygalacturonases so they were named exopolygalacturonase II (Exo-PG II) and exopolygalacturonase III (Exo-PG III) which had a molecular mass of 63 kDa (Exo-PG II) and 79 kDa (Exo-PG III). The Km values were 1.6 and 0.059 g/L and the Vmax values were 2571 and 185 U/mg, respectively. The optimum temperature was 50ºC for both enzymes, while the optimum pH was 5.0 for Exo-PG II and 5.8 for Exo-PG III.

Estudos prévios realizados em nosso laboratório demonstraram que o fungo Penicillium frequentans produz altos níveis de poligalacturonase e pectinesterase. Endopoligalacturonase I (Endo-PG I) e Exopoligalacturonase I (Exo-PG I) já foram previamente purificadas e caracterizadas. No presente trabalho foram separadas, purificadas parcialmente e caracterizadas bioquimicamente duas poligalacturonases extracelulares. Ambas foram caracterizadas como exopoligalacturonases e então foram designadas exopoligalacturonase II (Exo-PG II) e exopoligalacturonase III (Exo-PG III) as quais apresentaram massa molecular de 63 kDa (Exo-PG II) e 79 kDa (Exo-PG III). Os valores de Km foram 1,6 e 0,059 g/L e os de Vmáx = 2571 e 185 U/mg, respectivamente. A temperatura ótima de ambas foi 50ºC e enquanto o pH ótimo da Exo-PG II foi 5,0 o da Exo-PG III foi 5,8.