RESUMO
Abstract The msp4 gene of A. marginale is unicodon, stable and mostly homogeneous, being considered as a useful marker for phylogeographic characterization of this bacterium. The objective of this work was to analyze the phylogeography of A. marginale based on the msp4 gene in beef cattle from the Brazilian Pantanal, compared to those found in other regions worldwide. The blood samples investigated were collected from 400 animals (200 cows and 200 calves) reared in five extensive breeding farms in this region. The results indicated that of the evaluated samples, 56.75% (227/400) were positive for A. marginale based on the msp1β gene by quantitatitve PCR (qPCR), while 8.37% (19/227) were positive for the msp4 gene in the conventional PCR. In the Network distance analysis, 14 sequences from the Brazilian Pantanal were grouped into a single group with those from Thailand, India, Spain, Colombia, Parana (Brazil), Mexico, Portugal, Argentina, China, Venezuela, Australia, Italy and Minas Gerais (Brazil). Among 68 sequences from Brazil and the world, 15 genotypes were present while genotype number one (#1) was the most distributed worldwide. Both Splitstree and network analyses showed that the A. marginale msp4 sequences detected in beef cattle from the Brazilian Pantanal showed low polymorphism, with the formation of one genogroup phylogenetically related to those found in ruminants from South and Central America, Europe, and Asia.
Resumo O gene msp4 de A. marginale é unicodon, estável e pouco heterogêneo, sendo considerado como um marcador útil para caracterização filogeográfica desta bactéria. Este trabalho teve como objetivo analisar a filogeografia de A. marginale com base no gene msp4 em bovinos de corte do Pantanal Brasileiro, comparativamente a outra regiões do mundo. Alíquotas de sangue foram colhidas de 400 bovinos (200 vacas e 200 bezerros) em cinco propriedades de cria e recria extensiva. Como resultado, 56,75% (227/400) mostraram-se positivas para A. marginale pela qPCR para o gene msp1β e destas, 8,37% (19/227) amostras foram positivas na PCR convencional para o gene msp4. Na análise de distância Network, 14 sequências do Pantanal brasileiro foram agrupadas em um único grupo com as da Thailândia, Índia, Espanha, Colômbia, Paraná (Brasil), México, Portugal, Argentina, China, Venezuela, Austrália, Italia e Minas Gerais (Brasil). Dentre 68 sequências do Brasil e do mundo, constatou-se a presença de 15 genótipos, sendo o genótipo número um (#1) o mais distribuído. As sequências msp4 de A. marginale detectadas em bovinos de corte no Pantanal brasileiro apresentaram baixo polimorfismo com formação de dois genogrupos filogeneticamente relacionados àqueles encontrados em ruminantes de países das América do Sul e Central, Europa e Ásia.
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Proteínas de Bactérias/genética , Bovinos/microbiologia , Anaplasma marginale/genética , Filogeografia/métodos , Proteínas de Membrana/genética , Ásia , América , Brasil , DNA Bacteriano/genética , Dados de Sequência Molecular , Reação em Cadeia da Polimerase , Sequência de Aminoácidos , Anaplasma marginale/isolamento & purificação , Europa (Continente) , GenótipoRESUMO
The msp4 gene of A. marginale is unicodon, stable and mostly homogeneous, being considered as a useful marker for phylogeographic characterization of this bacterium. The objective of this work was to analyze the phylogeography of A. marginale based on the msp4 gene in beef cattle from the Brazilian Pantanal, compared to those found in other regions worldwide. The blood samples investigated were collected from 400 animals (200 cows and 200 calves) reared in five extensive breeding farms in this region. The results indicated that of the evaluated samples, 56.75% (227/400) were positive for A. marginale based on the msp1 gene by quantitatitve PCR (qPCR), while 8.37% (19/227) were positive for the msp4 gene in the conventional PCR. In the Network distance analysis, 14 sequences from the Brazilian Pantanal were grouped into a single group with those from Thailand, India, Spain, Colombia, Parana (Brazil), Mexico, Portugal, Argentina, China, Venezuela, Australia, Italy and Minas Gerais (Brazil). Among 68 sequences from Brazil and the world, 15 genotypes were present while genotype number one (/1) was the most distributed worldwide. Both Splitstree and network analyses showed that the A. marginale msp4 sequences detected in beef cattle from the Brazilian Pantanal showed low polymorphism, with the formation of one genogroup phylogenetically related to those found in ruminants from South and Central America, Europe, and Asia.(AU)
O gene msp4 de A. marginale é unicodon, estável e pouco heterogêneo, sendo considerado como um marcador útil para caracterização filogeográfica desta bactéria. Este trabalho teve como objetivo analisar a filogeografia de A. marginale com base no gene msp4 em bovinos de corte do Pantanal Brasileiro, comparativamente a outra regiões do mundo. Alíquotas de sangue foram colhidas de 400 bovinos (200 vacas e 200 bezerros) em cinco propriedades de cria e recria extensiva. Como resultado, 56,75% (227/400) mostraram-se positivas para A. marginale pela qPCR para o gene msp1 e destas, 8,37% (19/227) amostras foram positivas na PCR convencional para o gene msp4. Na análise de distância Network, 14 sequências do Pantanal brasileiro foram agrupadas em um único grupo com as da Thailândia, Índia, Espanha, Colômbia, Paraná (Brasil), México, Portugal, Argentina, China, Venezuela, Austrália, Italia e Minas Gerais (Brasil). Dentre 68 sequências do Brasil e do mundo, constatou-se a presença de 15 genótipos, sendo o genótipo número um (/1) o mais distribuído. As sequências msp4 de A. marginale detectadas em bovinos de corte no Pantanal brasileiro apresentaram baixo polimorfismo com formação de dois genogrupos filogeneticamente relacionados àqueles encontrados em ruminantes de países das América do Sul e Central, Europa e Ásia.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Filogeografia/classificação , Filogeografia/tendências , Anaplasma marginale/genéticaRESUMO
Realizaram-se estudos para aferir as prováveis causas da baixa taxa de recuperação de estruturas embrionárias em búfalas superovuladas. No primeiro estudo (Experimento 1), foram utilizados sistemas genitais de búfalas e de bovinas tratadas para a indução de ovulações únicas ou múltiplas, os quais foram submetidos à morfometria, seguidos de lavagem dos ovidutos para a recuperação dos oócitos. Posteriormente, os ovidutos foram encaminhados à histologia. No Experimento 2, foram utilizados ovidutos de búfalas e de bovinas, tratadas para a indução de ovulação única. O lúmen do oviduto foi exposto e, após isso, os ovidutos foram incubados em meio de cultura com ou sem E2, com posterior colocação de microesferas na sua superfície para a aferição do movimento ciliar. No Experimento 3, foram utilizados ovidutos de búfalas e de bovinas tratadas para a indução de ovulação única. Os ovidutos foram incubados em meio de cultura com ou sem E2, com a inserção de oócitos bubalinos ou bovinos em seu lúmen, sendo posteriormente lavados para a recuperação e contagem dos oócitos. No Experimento 4, búfalas e bovinas foram tratadas para a indução de ovulações únicas ou múltiplas. Após a ovulação, os animais foram submetidos à laparotomia para a inserção de oócitos bubalinos ou bovinos no oviduto.
Studies were performed to assess the probable causes of the low embryonic structures recovery rate in superovulated buffaloes. In the first study (Experiment 1) were used buffaloes and bovines genital systems treated to induce single or multiple ovulations, which were submitted to morphometry followed by oviducts flushing for the oocytes recovery. Subsequently, the oviducts were sent to histology. In Experiment 2, were used buffaloes and bovines oviducts treated for single ovulation. The oviduct lumen was exposed and, thereafter, incubated in culture medium with or without E2, with subsequent placement of microspheres on its surface for the ciliary movement measure. In Experiment 3, were used buffaloes and bovines oviducts treated for a single ovulation. The oviducts were incubated in culture medium with or without E2, with the inclusion of bovine or buffalo oocytes in the lumen, and subsequently flushed for the oocytes recovery and counting. In Experiment 4, buffaloes and bovines were treated to induce single or multiple ovulations. After ovulation, the animals underwent laparotomy for the insertion of bovine or buffalo oocytes in the oviduct. Later (five and six days after buffalo and bovine oocytes insertion, respectively), the genital systems were flushed in vivo for the embryonic structures recovery.
Assuntos
Feminino , Animais , Bovinos , Búfalos/anatomia & histologia , Búfalos/embriologia , Genitália Feminina/anatomia & histologia , Genitália Feminina/embriologia , Transferência Embrionária/métodos , Transferência Embrionária/veterinária , Ovulação , OócitosRESUMO
Realizaram-se estudos para aferir as prováveis causas da baixa taxa de recuperação de estruturas embrionárias em búfalas superovuladas. No primeiro estudo (Experimento 1), foram utilizados sistemas genitais de búfalas e de bovinas tratadas para a indução de ovulações únicas ou múltiplas, os quais foram submetidos à morfometria, seguidos de lavagem dos ovidutos para a recuperação dos oócitos. Posteriormente, os ovidutos foram encaminhados à histologia. No Experimento 2, foram utilizados ovidutos de búfalas e de bovinas, tratadas para a indução de ovulação única. O lúmen do oviduto foi exposto e, após isso, os ovidutos foram incubados em meio de cultura com ou sem E2, com posterior colocação de microesferas na sua superfície para a aferição do movimento ciliar. No Experimento 3, foram utilizados ovidutos de búfalas e de bovinas tratadas para a indução de ovulação única. Os ovidutos foram incubados em meio de cultura com ou sem E2, com a inserção de oócitos bubalinos ou bovinos em seu lúmen, sendo posteriormente lavados para a recuperação e contagem dos oócitos. No Experimento 4, búfalas e bovinas foram tratadas para a indução de ovulações únicas ou múltiplas. Após a ovulação, os animais foram submetidos à laparotomia para a inserção de oócitos bubalinos ou bovinos no oviduto.(AU)
Studies were performed to assess the probable causes of the low embryonic structures recovery rate in superovulated buffaloes. In the first study (Experiment 1) were used buffaloes and bovines genital systems treated to induce single or multiple ovulations, which were submitted to morphometry followed by oviducts flushing for the oocytes recovery. Subsequently, the oviducts were sent to histology. In Experiment 2, were used buffaloes and bovines oviducts treated for single ovulation. The oviduct lumen was exposed and, thereafter, incubated in culture medium with or without E2, with subsequent placement of microspheres on its surface for the ciliary movement measure. In Experiment 3, were used buffaloes and bovines oviducts treated for a single ovulation. The oviducts were incubated in culture medium with or without E2, with the inclusion of bovine or buffalo oocytes in the lumen, and subsequently flushed for the oocytes recovery and counting. In Experiment 4, buffaloes and bovines were treated to induce single or multiple ovulations. After ovulation, the animals underwent laparotomy for the insertion of bovine or buffalo oocytes in the oviduct. Later (five and six days after buffalo and bovine oocytes insertion, respectively), the genital systems were flushed in vivo for the embryonic structures recovery.(AU)