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Gram-negative bacteria are major pathogens that develop antibiotic resistance and cause distinct types of infections. According to the WHO (World Health Organization), bacterial resistance is considered a public health problem. Multiresistance Klebsiella pneumoniae and E. coli are prevalent in many hospitals. These bacteria produce outer membrane vesicles (OMVs) these vesicles can contribute to bacterial survival by eliminating toxic compounds, removing misfolded periplasmic proteins, establishing a colonization niche, biofilm formation, drug delivery, and modulation of host defense and response. This work aimed to evaluate the production and extraction of OMVs produced by E. coli and K. pneumoniae, comparing two different gel filtration and ultracentrifugation methods. Furthermore, we evaluated the interference of OMVs on the growth of enteropathogenic E. coli, uropathogenic E. coli, and hematophatogenic K. pneumoniae strains verifying the viability test. The gel filtration extraction system obtained an elevated concentration when compared to ultracentrifugation method. We observed the presence of OmpA by eletrophoresis and Dot blotting, responsible for the structure of OMVs. The results showed interferences of OMV EC086-UC, EC086-GF and OMV-KP70 on E2348/69 growth were directly proportional to the concentration of OMVs but inversely proportional to the concentration of OMVs with OMV-KP70 on EC086 and KP70 growth. We concluded that vesicle interference on EC086, E2348/69, and KP70 growth should not be based only on optical density parameters but complemented with the viability test of each bacterium strain. The use of biotechnology tools like genetic modifications, OMVs can perform multiple functions carrying molecules with many capabilities to be applied in many fields such as immunology, diagnostics, clinical medicine.

As bactérias Gram-negativas são patógenos que apresentam resistência a diversos antibióticos. De acordo com a Organização Mundial da Saúde (OMS), a resistência antimicrobiana é um problema de saúde pública. A Escherichia coli e a Klebsiella pneumoniae são multirresistentes e prevalentes nos ambientes hospitalares. Estas bactérias produzem vesículas de membrana externa (OMVs) e possuem diversas funções como: contribuição para a sobrevivência das bactérias através da neutralização de componentes tóxicos, eliminação de proteínas desnaturadas, estabelecimento do nicho de colonização, formação de biofilme, entrega de drogas, modulação do sistema de defesa e resposta imune. Este trabalho avaliou a produção e extração de OMVs produzidas por cepas de E. coli e K. pneumoniae comparando os métodos de extração das mesmas por da gel filtração e ultracentrifugação. Além disso, através do teste de viabilidade bacteriana avaliamos a interferência das OMVs no crescimento de E. coli enteropatogência, E. coli uropatogênica e K. pneumoniae hematopatogênica. A purificação das OMVs por gel filtração apresentou uma concentração elevada quando comparada com o método de ultracentrifugação. Identificamos, para ambos os métodos, através da eletroforese e imunoensaio a presença da proteína de membrana externa a OmpA, responsável pela estrutura das OMVs. Demonstramos pelos resultados que as EC086-UC, EC086-GF e OMV-KP70 interferiram no crescimento da cepa E2348/69 com padrão diretamente proporcional quando comparado com a concentração das vesículas. O contrário ocorreu na interferência da OMV KP70-UC, atuando sobre o crescimento de EC086 e KP70 de forma inversamente proporcional quando comparado com a concentração das vesículas. Concluímos que a interferência das vesículas sobre o crescimento deve levar em conta os parâmetros de densidade óptica e a viabilidade bacteriana. Assim, com as diversas ferramentas da biotecnologia como a engenharia genética podemos desenvolver OMVs capazes de carrear diversas moléculas e ser aplicada em vários campos da imunologia, diagnósticos e na medicina clínica.

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Objective: evaluation of antibiotic resistance in Gram-negative microbiota from ready-to-eat cheese samples. Methodology: this research applied an adapted methodology to select from a food sample viable Gram-negative microbiota displaying antibiotic resistance. The selected food was a cheese that is commonly consumed without thermal processing, the Minas Frescal cheese. The evaluation was followed by a PCR screening in this resistant microbiota, for genes that provide resistance to antibiotics and also to the quaternary ammonium. Results: all cheese samples harbored a resistant microbiota. In 13.3% of the cheese samples analyzed, the resistance reached all ten different antibiotics tested and, in 80%, 8 to 10 different antibiotics. In antibiotics considered critics as the carbapenems: ertapenem presented resistant microbiota in 86.7% of the samples. In cephalosporins, the resistance reached 100% in the third generation (ceftazidime) and almost half of the samples (46.7%) in the fourth generation (cefepime). In genotypic research, seven different resistance genes were found in 69.2% of the bacterial pools, including the beta-lactamase-producing genes ctx, tem, shv, tetracycline-resistant genes, and a high rate of integrons class 1 and 2. Conclusion: the results indicate phenotypically and genotypically that the Minas Frescal cheese can harbor potential resistant microbiota. Therefore, the methodology used is a viable possibility and with a broader answer about the food microbiota role in resistance. This research corroborates the food area as an important sector to be managed to reduce the process of antibiotic resistance.

Objetivo: avaliação da resistência a antibióticos em microbiota Gram-negativa de amostras de queijo prontas para consumo. Metodologia: esta pesquisa aplicou uma metodologia adaptada para selecionar a microbiota Gram-negativa viável apresentando resistência a antibióticos em uma amostra de alimento. O alimento selecionado foi um queijo frequentemente consumido sem processamento térmico, o queijo Minas Frescal. A avaliação foi seguida de uma triagem por PCR, nesta microbiota resistente, para genes que fornecem resistência aos antibióticos e também ao quaternário de amônio. Resultados: todas as amostras de queijo apresentaram microbiota resistente. Em 13,3% dos queijos analisados essa resistência alcançou todos os 10 diferentes antibióticos testados e em 80% entre 8 e 10 antibióticos diferentes. Em antibióticos considerados críticos como os carbapenêmicos: ertapenem apresentou microbiota resistente em 86,7% das amostras. Nas cefalosporinas, a resistência atingiu 100% na terceira geração (ceftazidima) e quase a metade das amostras (46,7%) na quarta geração (cefepime). Na pesquisa genotípica, sete diferentes genes de resistência foram encontrados em 69,2% dos pools bacterianos, incluindo o genes produtores de beta-lactamase, genes de resistência à tetraciclina, ctx, tem, shv e uma alta taxa de integron classe 1 e 2. Conclusão: os resultados indicam fenotipicamente e genotipicamente que o queijo Minas Frescal pode apresentar uma potencial microbiota resistente. Portanto, a metodologia utilizada é uma possibilidade viável e com uma resposta mais ampla sobre o papel da microbiota na resistência. Esta pesquisa corrobora a área de alimentos como um setor importante a ser gerenciado para redução no processo de resistência a antibióticos.

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Resumen La bacteriemia asociada a catéter representa una parte importante de la morbilidad en pacientes con terapia de reemplazo renal, el Chryseobacterium indologenes (CI) es una bacteria gram negativa que afecta principalmente a pacientes con estancias hospitalarias prolongadas; la mayoría de casos reportados hasta el momento han ocurrido en Asia. El presente artículo reporta un caso identificado en la ciudad de Cali, Colombia, de un paciente que recibe hemodiálisis con el propósito de establecer los factores de riesgo que tienen los pacientes afectados por C. indologenes y conocer más acerca de las características microbiológicas y el espectro de sensibilidad y resistencia de esta bacteria, con el fin de establecer los protocolos de tratamiento para la bacteriemia asociada a catéter.

Abstract Catheter-associated bacteremia represent an important part of the morbidity in patients with renal replacement therapy, Chryseobacterium indologenes is a gram-negative bacterium that mainly affects patients with prolonged hospitalization; the majority of cases reported until now occurred in Asia. This article presents a case identified in Cali, Colombia, in a patient receiving hemodialysis, with the purpose of establishing the risk factors for the patients affected by C. indologenes, and know more about the microbiological characteristics, the spectrum of sensitivity and resistance of this bacterium, in order to establish treatment protocols for catheter-associated bacteremia.

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Resumen Objetivo. Recuperar y analizar la presencia de bacterias formadoras de biopelículas en las mangueras de la jeringa triple y de la pieza de mano que distribuyen el agua a las unidades dentales de la Fundación Universitaria San Martin. Método. Se realizó un estudio descriptivo de corte transversal con muestreo probabilístico. Se estudiaron las bacterias presentes en el agua recolectada en la jeringa triple y la pieza de mano, las cuales fueron seleccionadas al ser los instrumentos por los cuales transita el agua que entrará en contacto con el paciente. Se tomaron muestras antes y después de la consulta, de la jeringa triple con solo agua, con agua-aire y la pieza de mano. Se realizaron cultivos por filtración por membrana en medios Endo, Cetrimide y Sangre Azida. Resultados. Se encontraron 84 % de muestras positivas para cocos Gram positivos, mientras que el 8 % de las muestras presentaban aislamientos de bacilos Gram negativos, representado en E coli y P aeruginosa. La flora Gram positiva estuvo representada por Staphylococcus hominis y Staphylococcus epidermidis.

Abstract Objective. To recover and to analyze the presence of biofilm forming bacteria in the triple syringe and handpiece hoses, which distribute the water to the dental units from La Fundación Universitaria San Martin. Methods. A cross-sectional descriptive study was carried out with probabilistic sampling. We studied the bacteria present in the water collected in the triple syringe and the handpiece were selected because they are the instruments through which the water that will come into contact with the patient. Samples were taken before and after the consultation, of the triple syringe with only water, with air water and the handpiece. Cultures were performed by membrane filtration in Endo, Cetrimide and Blood Azida media. Results. We found 84 % positive samples for Gram positive cocci, while there were 8 % of samples, with isolates of Gram negative bacilli, represented in E coli and P aeruginosa. The Gram positive flora was represented by Staphylococcus hominis and Staphylococcus epidermidis.

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Abstract Objective: To evaluate the epidemiologic aspects of cornea ulcers in a referred ophthalmology private practice center. Methods: Retrospective study over electronic files of patients treated for corneal ulcers during a period of 7 years by the same physician (RJMF) at Centro de Olhos São Francisco, between june 2007 and june 2014. These patients were evaluated for risk factors such as: trauma causes, co-morbidities and contact lenses use. They were also evaluated by the microorganism found at the smears, treatment and patient's outcome. Patients that didn't return with the smears results or that didn´t have a complete follow-up were excluded from the study. Results: A total of 242 patients were fully treated during this period. 55 patients were excluded and 187 patients were included. 28.88% (54/187) were positive for gram negative bacteria, 27.81% (52/187) for filamentous fungi, 16.04% (29/187) for gram positive bacteria and only 1.07% for acanthamoeba. Twenty-four patients had negative cultures and 21 patients had combined infections (bacteria + fungi or other combination). Corneal collagen Cross-linking was effective on melting arrest in 16 of the 16 patients that we have submitted to this procedure during 2008 and 2009. Among all the patients that had corneal infection and were previously using contact lenses, 81% were infected by pseudomonas or pseudomonas associated with other gram negative bacteria. Filamentous fungi had a strong association with physical trauma. While use of saline solution for contact lenses cleaning had a strong association with gram negative bacteria and biological trauma, a strong association with combined infection. Conclusion: Gram negative bacteria (Pseudomonas) followed by filamentous fungi (Fusarium sp) were the most frequent etiologic agent found in our study. Cross-link was effective on corneal melting arrest. Pseudomonas aeruginosa was the most frequent isolated agent on hydrophilic contact lenses wearers.

Resumo Objetivo: Avaliar os aspectos epidemiológicos de úlceras de córnea em um centro privado de referência oftalmológica. Métodos: Estudo retrospectivo a partir de arquivos eletrônicos de pacientes tratados por úlceras de córnea durante um período de 7 anos pelo mesmo médico (RJMF) no Centro de Olhos São Francisco, entre Junho de 2007 e Junho de 2014. Estes pacientes foram avaliados quanto a fatores de risco, trauma, co-morbidades, uso de lentes de contato, tipo de microrganismo encontrado, tratamento e evolução do doente. Os pacientes que não retornaram com os resultados das culturas ou que não possuíam um seguimento completo foram excluídos do estudo. Resultados: Um total de 242 pacientes foram tratados durante este período. 55 pacientes foram excluídos e 187 foram incluídos no estudo. 28,88% (54/187) foram positivos para as bactérias gram-negativas, 27,81% (52/187) para fungos filamentosos, 16,04% (29/187) para as bactérias gram-positivas e apenas 1,07% para acanthamoeba. Vinte e quatro pacientes tiveram culturas negativas e 21 pacientes tinham infecções combinadas (bactérias fungos + ou outra combinação). O Cross-link foi eficaz em interromper o melting em 16 dos 16 pacientes que se submeteram a este procedimento durante 2008 e 2009. Entre todos os pacientes que tiveram infecção de córnea e usavam previamente lentes de contato, 81% foram infectados por pseudomonas isolada ou pseudomonas associada ou não a outras bactérias gram-negativas. Os fungos filamentosos tiveram uma forte associação com trauma físico, uso de solução salina para a limpeza de lentes de contato teve uma forte associação com bactérias gram- negativas e trauma biológico, uma forte associação com a infecção combinada. Conclusão: Bactérias Gram negativas (em especial, Pseudomonas) seguido por fungos filamentosos (Fusarium sp) foram os agentes etiológicos mais freqüentemente encontrados em nosso estudo. O Cross-linking foi eficaz em interromper o melting de córnea. Pseudomonas aeruginosa foi o agente isolado mais frequente em usuários de lente de contato hidrofílica.

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La Pasteurella multocida es una gammaproteobacteria oportunista que produce una zoonosis caracterizada clínicamente por desarrollar cuadros mayoritariamente respiratorios como neumonía y rinitis atrófica, aunque las manifestaciones clínicas pueden derivar de la colonización de tejidos vascularizados y partes blandas de casi cualquier órgano, produciendo hemorragias, dermonecrosis, celulitis, meningitis, abscesos, septicemia, osteomielitis o endocarditis, entre otras. Este microorganismo se transmite a los humanos a través de mordeduras, arañazos o lesiones producidas por animales domésticos (especialmente gatos y perros), pero también salvajes. El diagnóstico es eminentemente clínico, apoyándose también en una anamnesis pormenorizada, y confirmándose mediante el crecimiento bacteriano en medios de cultivo como el agar sangre o el agar chocolate, de las muestras obtenidas de los pacientes afectados por esta rara infección. La antibioterapia con B-lactámicos durante 2 o 3 semanas, es la base terapéutica de este cuadro, aunque existe un alto porcentaje de pacientes con resistencia a los mismos, pudiendo necesitar terapias basadas en otros antibióticos como carbapenem, fluoroquinolonas o tetraciclinas. Las líneas de investigación más actuales están dando una gran importancia a los procedimientos de inmunización en animales domésticos, ya que por una parte son los principales vectores de transmisión y, por otro lado, la vacunación en humanos ha demostrado no ser efectiva, debido a la baja prevalencia de esta enfermedad en las personas expuestas. A continuación, presentamos el caso de una paciente con antecedentes de miomas uterinos y convivencia con gatos domésticos, que sufre un shock séptico por Pasteurella multocida, que tiene como principal foco infeccioso su útero miomatoso.

Pasteurella multocida is an opportunistic gammaproteobacteria which produces a zoonosis characterized clinically by developing majority respiratory pneumonia and atrophic rhinitis, even the clinical manifestations can be derived from the colonization of vascularized tissue and soft tissue of almost any organ, causing bleeding, dermonecrosis, cellulitis, meningitis, abscesses, sepsis, osteomyelitis or endocarditis, among others. This organism is transmitted to humans through bites, scratches or injuries caused by pets (especially cats and dogs), but also animals wild. The diagnosis is clinical, also leaning on a detailed anamnesis, and confirming through the bacterial growth in culture medium such as blood agar or chocolate agar samples from patients affected by this rare infection. With B-lactam antibiotic therapy for 2 or 3 weeks, is therapeutic base, although there is a high percentage of patients with resistance to them, and may need therapies based on other antibiotics as carbapenem, fluoroquinolones or tetracyclines. The lines of research are giving great importance to immunization procedures in domestic animals, since on the one hand are the main vectors of transmission and, on the other hand, vaccination in humans has proven to be not effective, due to the low prevalence of this disease in exposed persons. Then, present the case of a patient with a history of uterine fibroids and coexistence with domestic cats, suffering septic shock by Pasteurella multocida, which has as its main infectious focus your fibroid uterus.

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SUMMARY This study aimed to evaluate the effect of residues extraction hydroalcoholic of propolis, green and brown, on the development of Gram-positive and Gram-negative bacteria. The crude propolis was obtained from Companhia da Abelha in Contagem, Minas Gerais. The green propolis derived from alecrim-do-campo (Baccharis dracunculifolia), and the brown propolis derived from alecrim-do-campo (B. dracunculifolia) and assa-peixe (Vernonia polyanthes). We used five levels of inclusion (0; 0.625; 0.125; 0.25; 0.5g) of the residue, and control for the inoculum (CI) and six bacterial strains, two of which are Gram-positive and four Gram-negative. The method used was to count colony-forming units in petri dishes (pour plate). Among the Gram-positive bacteria, the greatest inhibitory effect was detected for Staphylococcus aureus strains, and increased susceptibility was observed for Escherichia coli among Gram-negative bacteria. There was antimicrobial effect of the residue of the propolis extract on S. aureus and S. intermedius. The residue of brown propolis extract showed greater inhibition for S. intermedius only in 0.5 and 0.25g of residue inclusion levels. There was no effect of residues extraction hydroalcoholic of propolis, green and brown on the growth of Pseudomonas. The residues of the extraction of propolis green and brown acted as inhibitors of growth of Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius and Escherichia coli, and to a lesser extent Salmonella and Klebsiella. The residue has greater inhibitory effect on Gram-positive bacteria.

RESUMO Objetivou-se avaliar o efeito dos resíduos da extração hidroalcoólica de própolis dos tipos verde e marrom sobre o desenvolvimento de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. As própolis brutas foram adquiridas da apicultura Companhia da Abelha, instalada em Contagem, Minas Gerais. A própolis verde foi derivada de alecrim-do-campo (Baccharis dracunculifolia), e a própolis marrom foi derivada de alecrim-do-campo (B. dracunculifolia) e assa-peixe (Vernonia polyanthes). Foram usados cinco níveis de inclusão (0; 0,625; 0,125; 0,25; 0,5g) dos resíduos, além do controle para o inóculo (CI), e seis amostras bacterianas, sendo duas delas Gram-positivas e quatro Gram-negativas. O método utilizado foi o de contagem de unidades formadoras de colônias em placas de petri (pour plate). Entre as bactérias Gram-positivas, o maior efeito inibidor foi detectado para amostras de Staphylococcus aureus, e maior susceptibilidade foi para a Escherichia coli dentre as Gram-negativas. Houve efeito antimicrobiano do resíduo da extração da própolis verde sobre as bactérias S. aureus e S. intermedius. O resíduo da extração da própolis marrom apresentou maior inibição para S. intermedius somente nos tratamentos com 0,5 e 0,25g de resíduo. Não houve efeito do resíduo da extração de própolis verde ou marrom sobre o crescimento de bactérias gênero Pseudomonas. Os resíduos da extração hidroalcoólica de própolis verde e marrom atuaram como inibidores de crescimento das bactérias Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius e Escherichia coli, e em menor grau para Salmonella e Klebsiella. O resíduo tem maior efeito inibidor em bactérias Gram-positivas.

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Although Brazil has a great bird diversity, information on the health status of free living psittacine is scarce. The aim of this study was to determine the prevalence of endoparasites and the ratio of gram-negative versus gram-positive bacteria in the feces of free-living adult Hyacinth and Green-winged macaws. Fecal samples were collected placing camouflaged sheet covers on bird foraging areas. Fifty-five swabs were evaluated by gram staining technique and 101 fecal samples were analyzed using flotation and centrifugation methods. None of the samples presented parasites or ova. The presence of gram-negative bacteria was detected in 1.8% of the fecal samples. These results suggest that parasites and gram-negative bacteria may be transient in the gastrointestinal tract of healthy free-living psittacine birds. This situation is quite different from what is observed for birds in captivity, where stressful events and improper husbandry facilitate the dysbiosis and high parasite loads, with an imbalance in the host-parasite relationship.(AU)

Embora o Brasil tenha uma grande diversidade de aves, as informações sobre o estado sanitário de psitacídeos de vida livre são escassas. O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de endoparasitas e a relação entre bactérias gram-negativas e gram-positivas nas fezes de Arara-azuis e Araras-vermelhas-grandes adultas em vida-livre. Amostras de fezes foram coletadas empregando-se lonas camufladas onde as aves se reuniam para forragear. Cinquenta e cinco esfregaços foram avaliados pela técnica de gram e 101 amostras de fezes foram analisadas pelos métodos de flutuação e centrífugo-flutuação.  Nenhuma amostra foi positiva para a presença de ovos ou formas adultas de parasitas. A presença de bactérias gram-negativas foi detectada em 1.8% das amostras fecais. Esses resultados sugerem que parasitas e bactérias gram-negativas podem ser apenas transientes no trato gastrointestinal de psitacídeos saudáveis de vida livre. Essa situação é bastante diversa do que ocorre em cativeiro, onde situações de estresse e manejo inadequado facilitam a disbiose e o aumento das cargas parasitárias, com um desequilíbrio na relação hospedeiro-parasita.(AU)

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Although Brazil has a great bird diversity, information on the health status of free living psittacine is scarce. The aim of this study was to determine the prevalence of endoparasites and the ratio of gram-negative versus gram-positive bacteria in the feces of free-living adult Hyacinth and Green-winged macaws. Fecal samples were collected placing camouflaged sheet covers on bird foraging areas. Fifty-five swabs were evaluated by gram staining technique and 101 fecal samples were analyzed using flotation and centrifugation methods. None of the samples presented parasites or ova. The presence of gram-negative bacteria was detected in 1.8% of the fecal samples. These results suggest that parasites and gram-negative bacteria may be transient in the gastrointestinal tract of healthy free-living psittacine birds. This situation is quite different from what is observed for birds in captivity, where stressful events and improper husbandry facilitate the dysbiosis and high parasite loads, with an imbalance in the host-parasite relationship.

Embora o Brasil tenha uma grande diversidade de aves, as informações sobre o estado sanitário de psitacídeos de vida livre são escassas. O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de endoparasitas e a relação entre bactérias gram-negativas e gram-positivas nas fezes de Arara-azuis e Araras-vermelhas-grandes adultas em vida-livre. Amostras de fezes foram coletadas empregando-se lonas camufladas onde as aves se reuniam para forragear. Cinquenta e cinco esfregaços foram avaliados pela técnica de gram e 101 amostras de fezes foram analisadas pelos métodos de flutuação e centrífugo-flutuação.  Nenhuma amostra foi positiva para a presença de ovos ou formas adultas de parasitas. A presença de bactérias gram-negativas foi detectada em 1.8% das amostras fecais. Esses resultados sugerem que parasitas e bactérias gram-negativas podem ser apenas transientes no trato gastrointestinal de psitacídeos saudáveis de vida livre. Essa situação é bastante diversa do que ocorre em cativeiro, onde situações de estresse e manejo inadequado facilitam a disbiose e o aumento das cargas parasitárias, com um desequilíbrio na relação hospedeiro-parasita.

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Escherichia coli é um micro-organismo altamente adaptativo e sua habilidade em formar biofilmes pode ser fundamental na resistência a tratamentos com antimicrobianos. A avaliação da concentração mínima inibitória (CMI) vem sendo utilizada para verificar a sensibilidade dos micro-organismos aos antimicrobianos. Entretanto, quando se avaliam células sésseis, a concentração do antimicrobiano requerido para erradicação do biofilme é maior do que a determinada pela CMI. Objetivou-se comparar as CMI com as concentrações mínimas de erradicação de biofilmes (CMEB) de antimicrobianos usados no tratamento da mastite em 27 isolados de E. coli produtores de biofilmes provenientes de mastite. Os isolados foram submetidos a testes de sensibilidade a antimicrobianos usados no tratamento da mastite, tanto para células planctônicas, por meio da CMI, quanto para células sésseis, pela avaliação da CMEB. Os resultados revelaram uma alta sensibilidade: apenas quatro (14,8%) isolados obtiveram valores da CMI elevados, variando de 4 a 10µg/mL, sendo classificados como resistentes. Para os demais isolados (85,2%), os valores foram menores, variando de 0,125 a 2µg/mL, classificados como sensíveis. A avaliação de CMEB indicou que a concentração dos antimicrobianos necessária para eliminar as células sésseis variou de 100µg/mL a 500µg/mL. Os valores de CMEB foram significativamente maiores nos isolados grandes e moderados produtores de biofilmes em relação aos isolados fracos produtores de biofilmes (p<0,001). Não houve correlação entre os valores de CMEB e CMI (p>0,05). A escolha da terapêutica antimicrobiana correta para o tratamento de infecções intramamárias em bovinos relacionadas com a produção de biofilmes parece exigir a aplicação de testes mais específicos. Testes de susceptibilidade antimicrobiana baseados apenas em valores de CMI mostraram-se ineficazes em determinar com precisão a susceptibilidade das células bacterianas sésseis.(AU)

Escherichia coli is a highly adaptive microorganism. Its ability to form biofilms may be critical for resistance to antimicrobial treatments. Evaluation of minimum inhibitory concentration (MIC) has been used to check the sensitivity of microorganisms to antibiotics, however, when evaluating sessile cells, the required antibiotic concentration to eradicate biofilm is greater than determined by MIC. This study aimed to compare MIC with minimum biofilm eradication concentration (MBEC) of antimicrobials used in mastitis treatment in 27 E. coli biofilm producers isolates from mastitis. Isolates were tested for sensitivity to antimicrobials used in mastitis treatment, for both planktonic cells (by CMI) and sessile cells (by MBEC). The results revealed high sensitivity: only four (14.8%) isolates showed high MIC values, ranging from 4 to 10g/mL and they were classified as resistant. All other isolates (85.2%) showed lower values, ranging from 0.125 to 2mg/mL, and they were classified as sensitive. Evaluation of MBEC indicated that concentration of antimicrobial needed to remove sessile cells ranged from 100mg/mL to 500mg/mL. MBEC values were significantly higher in large and moderate biofilm producers isolates regarding weak biofilm producers isolates (p<0.001). There was no correlation between MBEC and CMI values (p>0.05). The correct choice of antimicrobial therapy for treatment of mammary infections in cattle related to biofilm production seems to require application of more specific tests. Antimicrobial susceptibility testing based only on MIC values proved ineffectiveness to accurately determination the susceptibility of sessile bacterial cells.(AU)

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Escherichia coli é um micro-organismo altamente adaptativo e sua habilidade em formar biofilmes pode ser fundamental na resistência a tratamentos com antimicrobianos. A avaliação da concentração mínima inibitória (CMI) vem sendo utilizada para verificar a sensibilidade dos micro-organismos aos antimicrobianos. Entretanto, quando se avaliam células sésseis, a concentração do antimicrobiano requerido para erradicação do biofilme é maior do que a determinada pela CMI. Objetivou-se comparar as CMI com as concentrações mínimas de erradicação de biofilmes (CMEB) de antimicrobianos usados no tratamento da mastite em 27 isolados de E. coli produtores de biofilmes provenientes de mastite. Os isolados foram submetidos a testes de sensibilidade a antimicrobianos usados no tratamento da mastite, tanto para células planctônicas, por meio da CMI, quanto para células sésseis, pela avaliação da CMEB. Os resultados revelaram uma alta sensibilidade: apenas quatro (14,8%) isolados obtiveram valores da CMI elevados, variando de 4 a 10µg/mL, sendo classificados como resistentes. Para os demais isolados (85,2%), os valores foram menores, variando de 0,125 a 2µg/mL, classificados como sensíveis. A avaliação de CMEB indicou que a concentração dos antimicrobianos necessária para eliminar as células sésseis variou de 100µg/mL a 500µg/mL. Os valores de CMEB foram significativamente maiores nos isolados grandes e moderados produtores de biofilmes em relação aos isolados fracos produtores de biofilmes (p<0,001). Não houve correlação entre os valores de CMEB e CMI (p>0,05). A escolha da terapêutica antimicrobiana correta para o tratamento de infecções intramamárias em bovinos relacionadas com a produção de biofilmes parece exigir a aplicação de testes mais específicos. Testes de susceptibilidade antimicrobiana baseados apenas em valores de CMI mostraram-se ineficazes em determinar com precisão a susceptibilidade das células bacterianas sésseis.

Escherichia coli is a highly adaptive microorganism. Its ability to form biofilms may be critical for resistance to antimicrobial treatments. Evaluation of minimum inhibitory concentration (MIC) has been used to check the sensitivity of microorganisms to antibiotics, however, when evaluating sessile cells, the required antibiotic concentration to eradicate biofilm is greater than determined by MIC. This study aimed to compare MIC with minimum biofilm eradication concentration (MBEC) of antimicrobials used in mastitis treatment in 27 E. coli biofilm producers isolates from mastitis. Isolates were tested for sensitivity to antimicrobials used in mastitis treatment, for both planktonic cells (by CMI) and sessile cells (by MBEC). The results revealed high sensitivity: only four (14.8%) isolates showed high MIC values, ranging from 4 to 10g/mL and they were classified as resistant. All other isolates (85.2%) showed lower values, ranging from 0.125 to 2mg/mL, and they were classified as sensitive. Evaluation of MBEC indicated that concentration of antimicrobial needed to remove sessile cells ranged from 100mg/mL to 500mg/mL. MBEC values were significantly higher in large and moderate biofilm producers isolates regarding weak biofilm producers isolates (p<0.001). There was no correlation between MBEC and CMI values (p>0.05). The correct choice of antimicrobial therapy for treatment of mammary infections in cattle related to biofilm production seems to require application of more specific tests. Antimicrobial susceptibility testing based only on MIC values proved ineffectiveness to accurately determination the susceptibility of sessile bacterial cells.

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Uno de los grupos de antibióticos más importantes, es el grupo de los beta-lactámicos. Para ejercer su acción antimicrobiana los beta-lactámicos requieren penetrar la pared celular y atacar las Proteínas Ligadoras de Penicilinas (Penicilin Binding Proteins: PBP). El mecanismo más utilizado por los bacilos Gram negativos para adquirir resistencia a beta-lactámicos, es la inactivación de las drogas por las enzimas beta-lactamasas. La producción de beta-lactamasas tipo carbapenemasas es un mecanismo de resistencia de gran importancia. Estas enzimas, codificadas por genes que en su mayoría están localizados en elementos genéticos tales como los integrones o insertados en elementos móviles como transposones y plásmidos, se han extendido rápidamente entre los agentes patógenos de importancia clínica, como Enterobacterias, P. aeruginosa y A. baumanii. Las metalo-beta-lactamasas (MbetaL) pertenecientes al grupo B de Ambler y el grupo 3 de Bush, poseen cuatro características principales: (i) Poseen actividad contra los carbapenemes, (ii) No hidrolizan los monobáctamicos como el aztreonam, (iii) Son inhibidas por quelantes como el EDTA o el Mercapto acetato de Sodio; y (iv) Requieren cationes +2 divalentes, generalmente Zn como cofactor para su actividad catalítica. La aproximación de un disco conteniendo un agente quelante a uno que contiene un carbapeneme podría resultar una herramienta útil para la detección de MbetaLs. El efecto sinérgico entre los carbapenemes [imipenem (IPM) y/o meropenem (MEN)] y el agente quelante sería indicativo de la presencia de MbetaL. La aparición de metalo-beta-lactamasas como una amenaza sustancial a la salud debe impulsar a las autoridades de salud para formular un plan de contención, para su implementación a nivel nacional. Este plan debe asegurar la detección temprana de casos, la vigilancia permanente de brotes y una estrategia en entornos con presencia espor dica o ausencia completa de productores metalo-beta-lactamasa.

One of the most important groups of antibiotics, is the group of beta-lactams. To exert its antimicrobial action the beta-lactam require penetrate and attack the cell wall Penicillin Binding Proteins (PBP). The mechanism used by Gram negative bacilli to acquire resistance tobeta-lactams, is drug inactivation by beta-lactamase enzymes. The production of beta-lactamase carbapenemases is a resistance mechanism of great importance. These enzymes encoded by genes that are located mostly in genetic elements such as integrons or inserted in mobile elements such as transposons and plasmids, have spread rapidly among clinically important pathogens such as Enterobacteriaceae, P. aeruginosa and A. baumannii. The metallo-beta-lactamases (MbetaL) in group B and group 3 Ambler Bush, have four main characteristics: (i) possess activity against carbapenems, (ii) not hydrolyze monobactams like aztreonam, (iii) are inhibited by chelating agents such as EDTA or sodium acetate Mercapto and (iv) require divalent cations, usually Zn+2 cofactor for its catalytic activity. The approximation of a disc containing a chelating agent containing one carbapeneme could be a useful tool for detecting MbetaLs. The synergistic effect between carbapenems [imipenem (IPM) and/or meropenem (MEN)] and the chelating agent would be indicative of the presence of MbetaL. The emergence of metallo-beta-lactamase as a substantial threat to health should prompt health officials to develop a plan of containment, for implementation at the national level. This plan should ensure early case detection, continuous surveillance of outbreaks and strategy in environments with sporadic presence or complete absence of metallo-beta-lactamase.

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RESUMO

The Citrus Variegated Chlorosis and the Coffee Leaf Scorch are some of the many destructive diseases caused by Xylella fastidiosa, a gram-negative bacterium limited to the xylem of affected plants. As its genetic characterization is still not well established, different isolates of X. fastidiosa from citrus and coffee were evaluated through RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) technique to characterize and classify these isolates based on similarity coefficients. Sixteen isolates of X. fastidiosa were used on this trial, obtained from citrus, coffee and almond. The genetic polymorphism evaluation was performed using six arbitrary 10-base primer pairs. It was possible to establish a dendogram in which the isolates were classified into five groups (A, B, C, D and E). A prevalence of citrus isolates in groups A and D was observed. In groups B and C, there was a prevalence of coffee isolates meanwhile the group D consisted of the almond isolate, solely.

A Clorose Variegada dos Citros e a Requeima das Folhas do Cafeeiro são algumas das várias doenças destrutivas causadas pela Xylella fastidiosa, que é uma bactéria gram-negativa e limitada ao xilema de plantas afetadas. Como a sua caracterização genética ainda não está determinada, diferentes isolados da X. fastidiosa de citros e café foram avaliados pela técnica RAPD (Polimorfismo do DNA Amplificado ao Acaso) para caracterizar e classificar estes isolados com base em coeficientes de similaridade. Foram utilizados 16 isolados de X. fastidiosa provenientes de citros, café e amêndoa. A avaliação do polimorfismo genético foi realizada utilizando seis iniciadores randômicos de 10 pares de base. Foi possível estabelecer um dendograma no qual os isolados foram classificados em cinco grupos (A, B, C, D e E). Nos grupos A e D existe uma forte predominância de isolados de citros. Nos grupos B e C há predominância de isolados de café enquanto no grupo E ficou apenas o isolado de amêndoa.

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The Citrus Variegated Chlorosis and the Coffee Leaf Scorch are some of the many destructive diseases caused by Xylella fastidiosa, a gram-negative bacterium limited to the xylem of affected plants. As its genetic characterization is still not well established, different isolates of X. fastidiosa from citrus and coffee were evaluated through RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) technique to characterize and classify these isolates based on similarity coefficients. Sixteen isolates of X. fastidiosa were used on this trial, obtained from citrus, coffee and almond. The genetic polymorphism evaluation was performed using six arbitrary 10-base primer pairs. It was possible to establish a dendogram in which the isolates were classified into five groups (A, B, C, D and E). A prevalence of citrus isolates in groups A and D was observed. In groups B and C, there was a prevalence of coffee isolates meanwhile the group D consisted of the almond isolate, solely.

A Clorose Variegada dos Citros e a Requeima das Folhas do Cafeeiro são algumas das várias doenças destrutivas causadas pela Xylella fastidiosa, que é uma bactéria gram-negativa e limitada ao xilema de plantas afetadas. Como a sua caracterização genética ainda não está determinada, diferentes isolados da X. fastidiosa de citros e café foram avaliados pela técnica RAPD (Polimorfismo do DNA Amplificado ao Acaso) para caracterizar e classificar estes isolados com base em coeficientes de similaridade. Foram utilizados 16 isolados de X. fastidiosa provenientes de citros, café e amêndoa. A avaliação do polimorfismo genético foi realizada utilizando seis iniciadores randômicos de 10 pares de base. Foi possível estabelecer um dendograma no qual os isolados foram classificados em cinco grupos (A, B, C, D e E). Nos grupos A e D existe uma forte predominância de isolados de citros. Nos grupos B e C há predominância de isolados de café enquanto no grupo E ficou apenas o isolado de amêndoa.

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One hundred and ninety-seven isolates of Gram-negative bacteria, comprising 10 genera, were isolated from poultry carcasses at a processing plant in order to investigate resistance to low levels of antibiotics. The samples were taken just after evisceration and before inspection. Most of the isolates were of Samonella and Escherichia. Other genera present were Enterobacter, Serratia, Klebsiella, Kluyvera, Erwinia, Citrobacter, Pseudomonas and Aeromonas. Distinct profiles of antibiotic resistance were detected. Resistance to more than two antibiotics predominated and spanned several classes of antibiotics. Salmonellae and escherichiae were mainly resistant to the aminoglycosides, followed by tetracycline, nitrofuran, sulpha, macrolide, chloramphenicol, quinolones and b-lactams. Most isolates were sensitive to 30mg/ml olaquindox, the growth promoter in use at the time of sampling. However, many were resistant to a level of 10mg/ml and 13mg/ml olaquindox, levels present in the gut due to the dilution in the feed. The results suggest a possible role of low level administration of antibiotics to broilers in selecting multi-resistant bacteria in vivo.(AU)

Para verificar a resistência a baixos níveis de antibióticos foram obtidos e identificados 197 isolados de bactérias Gram negativas pertencentes a 10 gêneros. Os isolados foram coletados em abatedouro industrial, imediatamente após a evisceração e antes do serviço de inspeção. Salmonella e Escherichia foram os gêneros identificados com maior freqüência. Os demais gêneros foram Aeromonas, Enterobacter, Serratia, Klebsiella, Citrobacter, Erwinia, Kluyvera, Pseudomonas e Aeromonas. Diferentes perfis de resistência a antibióticos foram detectados. A resistência a mais de dois antibióticos foi freqüente na maioria dos isolados e incluiu diversas classes de antibióticos. As bactérias dos gêneros Salmonella e Escherichia apresentaram maior percentagem de isolados resistentes à classe dos aminoglicosídeos, seguida das classes de tetraciclina, nitrofurano, sulfa, macrolídeo, cloranfenicol, quinolona e â-lactâmico. A maioria dos isolados foi sensível a 30mg/ml de olaquindox, promotor de crescimento usado no período da coleta das amostras. Foram observados isolados com resistência ao olaquindox nas concentrações de 10mg/ml e 13mg/ml, níveis presentes no intestinos das aves devido à diluição da ração. Os resultados sugerem que os baixos níveis de antibióticos administrados aos frangos podem estar selecionando “in vivo” bactérias multirresistentes.(AU)

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