RESUMO
A method based on Melting Temperature analysis of Hypervariable regions (HVR) of S1 gene within a RT-qPCR was developed to detect different genotypes of avian infectious bronchitis virus (IBV) and identify the Mass genotype. The method was able to rapidly identify the Mass genotype among IBV field isolates, vaccine attenuated strains and reference M41 strain in allantoic liquid and also directly in tissues. The RT-qPCR developed detected the virus in both tracheal and pulmonary samples from M41-infected or H120-infected birds, in a larger post-infection period compared to detection by standard method of virus isolation. RT-qPCR method tested provided a sensitivity and rapid approach for screening on IBV detection and Mass genotyping from IBV isolates.
Assuntos
Infecções por Coronavirus/veterinária , Vírus da Bronquite Infecciosa/genética , Doenças das Aves Domésticas/diagnóstico , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real/veterinária , Animais , Benzotiazóis , Galinhas/virologia , Infecções por Coronavirus/diagnóstico , Infecções por Coronavirus/virologia , Diaminas , Genótipo , Pulmão/virologia , Desnaturação de Ácido Nucleico , Compostos Orgânicos/uso terapêutico , Doenças das Aves Domésticas/virologia , Quinolinas , Traqueia/virologiaRESUMO
Twelve Brazilian isolates and one reference vaccine strain of avian infectious bronchitis virus (IBV) were propagated in embryonating chicken eggs. The entire S1 glycoprotein gene of these viruses was analysed by reverse-transcriptase-polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism (RT-PCR-RFLP), using the restriction enzymes HaeIII, XcmI and BstyI. The RFLP patterns led to the classification of these isolates into five distinct genotypes: A, B, C, D and Massachusetts. Five of twelve isolates were grouped in Massachusetts genotype and the remaining seven viruses were classified into four distinct genotypes: A (2), B (2), C (2) or D (1). Such genotyping classification agreed with previous immunological analysis for most of these viruses, highlighting the occurrence of a relevant variability among the IBV strains that are circulating in Brazilian commercial poultry flocks.
Doze isolados de campo do Brasil e uma estirpe de referência vacinal do vírus da bronquite infecciosa das aves (VBI) foram propagadas em ovos embrionados SPF. O gene S1 dessas amostras foi analisado por RT-PCR seguido de RFLP, empregando-se as enzimas de restrição HaeIII, XcmI e BstyI. Observou-se a existência de cinco genotipos diferentes: M (Massachusetts), A , B, C e D. Cinco dos doze isolados de campo do VBI foram classificados no genótipo Massachusetts e os sete vírus restantes foram classificados em quatro genotipos diferentes; A (2), B (2), C (2) ou D (1). Os resultados desta genotipagem concordam com os dados obtidos na análise imunológica previamente realizada para a maior parte destes vírus, destacando a ocorrência de uma variabilidade marcante entre os isolados do VBI que estão circulando nas granjas avícolas comerciais do Brasil.
Assuntos
Genótipo , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa/métodos , Vacinas/administração & dosagem , Vacinas/efeitos adversos , Vírus da Bronquite Infecciosa/isolamento & purificaçãoRESUMO
RESUMO A bronquite infecciosa das galinhas (BIG) é uma doença respiratória altamente contagiosa causada por um Coronavírus, o vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBIG). Embora o VBIG seja um patógeno primário do trato respiratório, ele é também uma causa comum de redução da produção e qualidade dos ovos em galinhas. Certos tipos de VBIG causam lesões renais, com significativa mortalidade. Há também mortalidade por conseqüências respiratórias. A doença possui grande importância econômica devida às perdas na produção, sendo estas maiores que as perdas por mortalidade. A ocorrência de múltiplos sorotipos e as características mutantes de seu agente etiológico tem complicado e aumentado os custos de produção e dificultado sua prevenção através da imunização. Recentemente, uma variante do VBIG tem sido descrita associado com a miopatia dos músculos peitorais em muitas partes do mundo, inclusive no Brasil.
ABSTRACT Avian infectious bronchitis (IB) is a highly contagious respiratory disease of chickens caused by a Coronavirus, infectious bronchitis virus (IBV). Although IBV is primarily a respiratory tract pathogen, it is also a common cause of reduced egg production and egg quality in laying hens, and certain strains of IBV cause kidney lesions with significant mortality. Mortality by tracheal blockage also occurs. The disease has high economic importance due the loss of production, which is more important than the loss by mortality. The occurrence of multiple serotypes and mutants of the IBV have complicated and increased the production costs and have impaired its prevention through immunization. Recently, a variant IBV has been reported associated with pectoral muscle myopathy in many parts of world including Brazil.