RESUMO
Tissue engineering for spinal cord injury (SCI) remains a complex and challenging task. Biomaterial scaffolds have been suggested as a potential solution for supporting cell survival and differentiation at the injury site. However, different biomaterials display multiple properties that significantly impact neural tissue at a cellular level. Here, we evaluated the behavior of different cell lines seeded on chitosan (CHI), poly (ε-caprolactone) (PCL), and poly (L-lactic acid) (PLLA) scaffolds. We demonstrated that the surface properties of a material play a crucial role in cell morphology and differentiation. While the direct contact of a polymer with the cells did not cause cytotoxicity or inhibit the spread of neural progenitor cells derived from neurospheres (NPCdn), neonatal rat spinal cord cells (SCC) and NPCdn only attached and matured on PCL and PLLA surfaces. Scanning electron microscopy and computational analysis suggested that cells attached to the material's surface emerged into distinct morphological populations. Flow cytometry revealed a higher differentiation of neural progenitor cells derived from human induced pluripotent stem cells (hiPSC-NPC) into glial cells on all biomaterials. Immunofluorescence assays demonstrated that PCL and PLLA guided neuronal differentiation and network development in SCC. Our data emphasize the importance of selecting appropriate biomaterials for tissue engineering in SCI treatment.
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Células-Tronco Pluripotentes Induzidas , Tecido Nervoso , Traumatismos da Medula Espinal , Regeneração da Medula Espinal , Animais , Ratos , Humanos , Materiais Biocompatíveis/farmacologia , Engenharia Tecidual , Traumatismos da Medula Espinal/terapiaRESUMO
Tissue engineering (TE) is a therapeutic option within regenerative medicine that allows to mimic the original cell environment and functional organization of the cell types necessary for the recovery or regeneration of damaged tissue using cell sources, scaffolds, and bioreactors. Among the cell sources, the utilization of mesenchymal cells (MSCs) has gained great interest because these multipotent cells are capable of differentiating into diverse tissues, in addition to their self-renewal capacity to maintain their cell population, thus representing a therapeutic alternative for those diseases that can only be controlled with palliative treatments. This review aimed to summarize the state of the art of the main sources of MSCs as well as particular characteristics of each subtype and applications of MSCs in TE in seven different areas (neural, osseous, epithelial, cartilage, osteochondral, muscle, and cardiac) with a systemic revision of advances made in the last 10 years. It was observed that bone marrow-derived MSCs are the principal type of MSCs used in TE, and the most commonly employed techniques for MSCs characterization are immunodetection techniques. Moreover, the utilization of natural biomaterials is higher (41.96%) than that of synthetic biomaterials (18.75%) for the construction of the scaffolds in which cells are seeded. Further, this review shows alternatives of MSCs derived from other tissues and diverse strategies that can improve this area of regenerative medicine.
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Transplante de Células-Tronco Mesenquimais , Células-Tronco Mesenquimais , Materiais Biocompatíveis , Transplante de Células-Tronco Mesenquimais/métodos , Células-Tronco Mesenquimais/metabolismo , Medicina Regenerativa/métodos , Engenharia Tecidual/métodosRESUMO
As cicatrizes atróficas de acne, sequelas persistentes, são indesejáveis e causam impacto negativo cosmético e psicossocial nos pacientes. A questão torna-se mais delicada quando tais cicatrizes localizam-se na região pré-esternal, pelo risco do surgimento de cicatrizes hipertróficas com a realização de procedimentos na região. O papel da insulina na promoção da síntese de proteínas e gorduras é, há muito tempo, reconhecido. A utilização de suas propriedades como fator de crescimento para tratar estas sequelas parece lógica e provou ser gratificante cosmeticamente, com melhora na qualidade de vida
Atrophic acne scars are persistent and undesirable sequelae that have a negative cosmetic and psychosocial impact on patients. This issue becomes more delicate when such scars are located in the presternal region due to the risk of hypertrophic scars appearing when performing these procedures in the area. The literature has long recognized the role of insulin in promoting protein and fat synthesis. Insulin properties as a growth factor to treat these sequelae seems logical and has proved cosmetically satisfying, with quality of life improvement
RESUMO
AIMS: Pre-clinical and few clinical studies suggest that transplantation of autologous bone marrow mononuclear cells (BMNC) improves heart function in dilated cardiomyopathies. Our objective was to determine if intracoronary injection of autologous BMNC improves the left ventricular ejection fraction (LVEF) of patients with non-ischaemic dilated cardiomyopathy (NIDCM). METHODS AND RESULTS: This study was a multicentre, randomized, double-blind, placebo controlled trial with a follow-up of 12 months. Patients with NIDCM and LVEF <35% were recruited at heart failure ambulatories in specialized hospitals around Brazil. One hundred and sixty subjects were randomized to intracoronary injection of BMNC or placebo (1:1). The primary endpoint was the difference in change of LVEF between BMNC and placebo groups as determined by echocardiography. One hundred and fifteen patients completed the study. Left ventricular ejection fraction decreased from 24.0% (21.6-26.3) to 19.9% (15.4-24.4) in the BMNC group and from 24.3% (22.1-26.5) to 22.1% (17.4-26.8) in the placebo group. There were no significant differences in changes between cell and placebo groups for left ventricular systolic and diastolic volumes and ejection fraction. Mortality rate was 20.37% in placebo and 21.31% in BMNC. CONCLUSION: Intracoronary injection of autologous BMNC does not improve left ventricular function in patients with NIDCM. CLINICAL TRIAL REGISTRATION: URL: http://www.clinicaltrials.gov. Unique identifier: NCT00333827.
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Transplante de Medula Óssea/métodos , Cardiomiopatia Dilatada/terapia , Cardiomiopatia Dilatada/fisiopatologia , Método Duplo-Cego , Tolerância ao Exercício/fisiologia , Feminino , Humanos , Injeções Intralesionais , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Consumo de Oxigênio , Volume Sistólico/fisiologia , Transplante Autólogo/métodos , Resultado do Tratamento , Disfunção Ventricular Esquerda/fisiopatologia , Disfunção Ventricular Esquerda/terapiaRESUMO
Objectives At present there are several drugs for the treatment of advanced renal cell carcinoma (ARCC). The main objective of this work was to perform a systematic review (SR) and meta-analysis (MA) of clinical randomized studies that compared target cell therapies (TCT). Materials and Methods SR identified clinical randomized trials that compared TCT versus interferon-alpha in the treatment of patients with ARCC. In order to analyze efficiency, it was evaluated free-survival progression (FSP), total survival (TS) and response rate (RR). Results In relation to first line treatment, seven studies of TCT were identified using sunitinib, sorafenib, bevacizumab and temsirolimus; and two studies with sorafenib and everolimus for second line treatment. Relative risk (RRi) of MA for FSP of first line therapies was: 0.83, CI = 0.78-0.87, I2 = 94% and p < 0.00001. Best results of RR of specific FSP among studies were: 0.38, sunitinib, CI = 0.25-0.58, bevacizumab, 0.62, CI = 0.47-0.83; and temsirolimus, 0.78, CI = 0.70-0.87. MA didn't show any benefit regarding TS of first line treatment of all analyzed drugs. As for RR significant results were: sunitinib, 3.83 CI = 2.86-5.12; bevacizumab, 2.52 CI = 1.78-3.57 and bevacizumab, 1.97 CI = 1.43-2.71. Conclusions: For first line treatment, sunitinib was the most effective TCT in relation to FPS; there was no alteration of TS and RR was small but significant for sunitinib and bevacizumab. Available studies could not conclude any results for second line treatments. .
Assuntos
Feminino , Humanos , Masculino , Antineoplásicos/uso terapêutico , Carcinoma de Células Renais/tratamento farmacológico , Neoplasias Renais/tratamento farmacológico , Terapia de Alvo Molecular/métodos , Carcinoma de Células Renais/mortalidade , Carcinoma de Células Renais/secundário , Progressão da Doença , Neoplasias Renais/mortalidade , Metástase Neoplásica , Ensaios Clínicos Controlados Aleatórios como Assunto , Análise de Sobrevida , Resultado do TratamentoRESUMO
FUNDAMENTO: A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é uma das mais importantes causas de insuficiência cardíaca na América Latina. A terapia celular vem sendo investigada como uma possível opção terapêutica para pacientes com doenças cardiovasculares. OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da terapia com células-tronco mesenquimais em um modelo experimental de cardiomiopatia chagásica crônica. MÉTODOS: Camundongos C57BL/6 foram infectados com 1000 tripomastigotas da cepa Colombiana de T. cruzi e, após seis meses de infecção, foram tratados com células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo humano (CTTAs) ou com meio DMEM (controle). O grupo tratado recebeu duas injeções intraperitoneais de CTTAs (1x106 células / dose), com um mês de intervalo entre as duas doses. Antes e após 1 e 2 meses de tratamento, os animais chagásicos e controles normais foram submetidos à eletrocardiograma e teste ergoespirométrico. Todos os animais foram sacrificados sob anestesia após 2 meses de tratamento, para análise histopatológica do coração. RESULTADOS: Não foi observada melhora de arritmias e da função cardiovascular no grupo tratado com CTTAs, porém secções de corações de camundongos deste grupo apresentaram uma redução significativa do número de células inflamatórias (p < 0,0001) e da área de fibrose (p < 0,01) em comparação com animais chagásicos tratados com DMEM. CONCLUSÃO: Deste modo, conclui-se que a administração de CTTAs por via intraperitoneal é capaz de reduzir inflamação e fibrose no coração de camundongos cronicamente infectados por T. cruzi, porém não teve efeitos na função cardíaca dois meses após o transplante.
BACKGROUND: Chagas disease, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, is a major cause of heart failure in Latin America. Tissue therapy has been investigated as a possible therapeutic option for patients with cardiovascular disease. OBJECTIVE: This study evaluated the effects of therapy with mesenchymal stem cells in an experimental model of chronic Chagasic cardiomyopathy. METHODS: C57BL/6 mice were infected with 1000 trypomastigotes from the Colombian strain of T. cruzi and, after six months of infection, were treated with mesenchymal human stem cells from adipose tissue (STAT) or with Dulbecco/Vogt modified Eagle's minimal essential medium - DMEM (control). The treated group received two intraperitoneal injections of STAT (1x10(6) cells/dose), with a month interval between the two doses. Before and after the first and second months of treatment, the chagasic and normal control animals underwent cardiopulmonary exercise testing and electrocardiography. All animals were sacrificed under anesthesia after two months of treatment for histopathological analysis of the heart. RESULTS: No improvement was observed in arrhythmias and cardiovascular function in the group of animals treated with STAT; however, sections of mice hearts in this group revealed a significant reduction in the number of inflammatory cells (p<0.0001) and areas of fibrosis (p<0.01) in comparison with chagasic animals treated with DMEM. CONCLUSION: Thus, it is concluded that administration of intraperitoneal STAT can reduce inflammation and fibrosis in the heart of mice chronically infected with T. cruzi; however, there were no effects on the cardiac function two months after transplantation.
Assuntos
Animais , Camundongos , Tecido Adiposo/citologia , Cardiomiopatia Chagásica/cirurgia , Transplante de Células-Tronco Mesenquimais , Trypanosoma cruzi , Análise de Variância , Arritmias Cardíacas/metabolismo , Cardiomiopatia Chagásica/patologia , Cardiomiopatia Chagásica/fisiopatologia , Modelos Animais de Doenças , Fibrose , Injeções Intraperitoneais , Inflamação/metabolismo , Condicionamento Físico Animal/métodos , Distribuição AleatóriaRESUMO
Introducción: las células mononucleares de la médula ósea son efectivas para el tratamiento de pacientes con enfermedad arterial periférica (EAP). Los factores de crecimiento que ellas sintetizan se usan para inducir angiogénesis. Objetivo: establecer en Colombia la seguridad, factibilidad y resultado del tratamiento de la EAP utilizando células autólogas, para evitar su progreso a estadios más avanzados. Métodos: previo consentimiento, se hizo aspirado de médula ósea bajo anestesia local. Las células obtenidas se concentraron y se inyectaron intramuscularmente en los gastrocnemios de las extremidades isquémicas. El grupo control retrospectivo no recibió células. La evaluación clínica incluyó varios parámetros. Las células se analizaron por citometría de flujo. Resultados: edad media de los pacientes: 69 ± 11 años; viabilidad celular: 99,15% ± 0,76%; número de células inyectadas: 9,2 x 108 ± 6,2 x 108. Los análisis angiográficos postratamiento mostraron formación de vasos colaterales nuevos en las extremidades afectadas, con mínimo engrosamiento. Se observaron aumento en la distancia caminada libre de dolor y mejoría del dolor en reposo. La obtención y aplicación de las células no se asoció con ninguna complicación. Conclusiones: este estudio preliminar demostró que la terapia celular autóloga es segura, factible y cambia positivamente la historia natural de la EAP. Se sugiere el estudio de un número mayor de pacientes antes de establecer este tratamiento en Colombia.
Introduction: Autologous bone marrow mononuclear cells have been shown to be safe and effective for treatment of patients with peripheral arterial disease (PAD). Angiogenesis can also be induced by growth factors synthesized by them. Objective: To determine in Colombia the feasibility, safety and outcome of the afore-mentioned treatment. Methods: After informed consent, bone marrow was obtained by aspiration under local anesthesia; mononuclear cells were concentrated and their number and viability were established. They were suspended in saline solution and implanted by intramuscular injection into the gastrocnemius muscles of ischemic legs. Control patients were left untreated. Clinical evaluation included several parameters. Flow cytometry was used for cell analysis. Results: Mean age of patients: 69 ± 11 years; cell viability: 99.15 ± 0.76%; total number of injected cells: 9.2 x 108 ± 6.2 x 108. After treatment, angiographic studies showed the formation of new collateral vessels in all patients, with minimal thickness increase. There were no complications from bone marrow aspiration and intramuscular administration of cells. All treated patients experienced increase in the walking distance and improvement of rest pain. Conclusions: These preliminary results demonstrate that autologous cell therapy is safe, feasible and positively changes the natural history of patients with advanced peripheral arterial disease. In order to establish this treatment as a current practice in Colombia, we suggest the study of a larger number of patients.
Assuntos
Humanos , Medula Óssea , Leucócitos Mononucleares , Extremidade Inferior , Doença Arterial Periférica , ArtériasRESUMO
Adult stem/progenitor cells are found in different human tissues. An in vitro cell culture is needed for their isolation or for their expansion when they are not available in a sufficient quantity to regenerate damaged organs and tissues. The level of complexity of these new technologies requires adequate facilities, qualified personnel with experience in cell culture techniques, assessment of quality and clear protocols for cell production. The rules for the implementation of cell therapy centers involve national and international standards of good manufacturing practices. However, such standards are not uniform, reflecting the diversity of technical and scientific development. Here standards from the United States, the European Union and Brazil are analyzed. Moreover, practical solutions encountered for the implementation of a cell therapy center appropriate for the preparation and supply of cultured cells for clinical studies are described. Development stages involved the planning and preparation of the project, the construction of the facility, standardization of laboratory procedures and development of systems to prevent cross contamination. Combining the theoretical knowledge of research centers involved in the study of cells with the practical experience of blood therapy services that manage structures for cell transplantation is presented as the best potential for synergy to meet the demands to implement cell therapy centers.
RESUMO
PURPOSE: To evaluate the effects of mesenchymal stem cells (MSC) from eight mice C57BL/6 gfp+ bone marrows expanded in cultures associated with platelets rich plasma (PRP) deriving from another eight mice, in the repair of critical defects in calvarial bone produced in twenty-four adult isogenic mice C57BL/6. METHODS: The animals were submitted to a cranial defect of 6.0mm in diameter and divided into two equal experimental groups. Control group did not receive treatment and the treated group received a MSC pellet containing 1.0 x 10(7) cells/mL associated with 50.0µL of plasma gel containing 1.0 x 10(9) autologous platelets within the defect. RESULTS: In the treated group was observed process of angiogenesis and bone repair better than control group. CONCLUSION: Mesenchymal stem cells derived from bone marrow of C57BL/6 gfp+ mice associated with PRP gel applied in bone critical defects produced in calvarial contributes positively to the process of bone repair.
OBJETIVO: Avaliar os efeitos da associação das células-tronco mesenquimais (MSC) oriundas da medula óssea de oito camundongos jovens C57BL/6 gfp+ e expandidas em culturas, com Plasma Rico em Plaquetas (PRP) provenientes de outros oito camundongos, na reparação de defeitos críticos confeccionados em calvária de 24 camundongos adultos C57BL/6. MÉTODOS: Os animais foram submetidos a um defeito craniano de 6,0mm de diâmetro e separados em dois grupos experimentais iguais. O grupo controle não recebeu tratamento e no grupo tratado foi administrado, no interior do defeito, pellet de MSC contendo 1,0 x 10(7) células/mL associado com 50,0µL de plasma em gel autólogo contendo 1,0 x 10(9) plaquetas. RESULTADOS: No grupo tratado verificou-se processo de angiogênese e reparação óssea superior ao grupo controle. CONCLUSÃO: A associação das células-tronco mesenquimais (MSC) derivadas da medula óssea de camundongos C57BL/6 gfp+ com gel de PRP aplicadas em defeitos ósseos críticos confeccionadas em calvária de camundongos C57BL/6 jovens, contribuiu positivamente para o processo de reparação óssea.
Assuntos
Animais , Masculino , Camundongos , Células-Tronco Adultas/transplante , Células da Medula Óssea/fisiologia , Regeneração Óssea/fisiologia , Células-Tronco Mesenquimais , Transplante de Células-Tronco Mesenquimais/métodos , Plasma Rico em Plaquetas/fisiologia , Crânio/cirurgia , Células-Tronco Adultas/ultraestrutura , Células da Medula Óssea/ultraestrutura , Células Cultivadas , Modelos Animais de Doenças , Proteínas de Fluorescência Verde/genética , Células-Tronco Mesenquimais , Camundongos Transgênicos , Osteogênese/fisiologia , Distribuição Aleatória , Crânio/lesões , Crânio/ultraestrutura , Transplante Homólogo , Engenharia Tecidual/métodosRESUMO
PURPOSE: To evaluate the effects of mesenchymal stem cells (MSC) from eight mice C57BL/6 gfp+ bone marrows expanded in cultures associated with platelets rich plasma (PRP) deriving from another eight mice, in the repair of critical defects in calvarial bone produced in twenty-four adult isogenic mice C57BL/6. METHODS: The animals were submitted to a cranial defect of 6.0mm in diameter and divided into two equal experimental groups. Control group did not receive treatment and the treated group received a MSC pellet containing 1.0 x 10(7) cells/mL associated with 50.0µL of plasma gel containing 1.0 x 10(9) autologous platelets within the defect. RESULTS: In the treated group was observed process of angiogenesis and bone repair better than control group. CONCLUSION: Mesenchymal stem cells derived from bone marrow of C57BL/6 gfp+ mice associated with PRP gel applied in bone critical defects produced in calvarial contributes positively to the process of bone repair.(AU)
OBJETIVO: Avaliar os efeitos da associação das células-tronco mesenquimais (MSC) oriundas da medula óssea de oito camundongos jovens C57BL/6 gfp+ e expandidas em culturas, com Plasma Rico em Plaquetas (PRP) provenientes de outros oito camundongos, na reparação de defeitos críticos confeccionados em calvária de 24 camundongos adultos C57BL/6. MÉTODOS: Os animais foram submetidos a um defeito craniano de 6,0mm de diâmetro e separados em dois grupos experimentais iguais. O grupo controle não recebeu tratamento e no grupo tratado foi administrado, no interior do defeito, pellet de MSC contendo 1,0 x 10(7) células/mL associado com 50,0µL de plasma em gel autólogo contendo 1,0 x 10(9) plaquetas. RESULTADOS: No grupo tratado verificou-se processo de angiogênese e reparação óssea superior ao grupo controle. CONCLUSÃO: A associação das células-tronco mesenquimais (MSC) derivadas da medula óssea de camundongos C57BL/6 gfp+ com gel de PRP aplicadas em defeitos ósseos críticos confeccionadas em calvária de camundongos C57BL/6 jovens, contribuiu positivamente para o processo de reparação óssea.(AU)
Assuntos
Animais , Camundongos/classificação , Células-Tronco/citologia , Crânio/anatomia & histologia , Plaquetas/citologiaRESUMO
Adult stem/progenitor cells are found in different human tissues. An in vitro cell culture is needed for their isolation or for their expansion when they are not available in a sufficient quantity to regenerate damaged organs and tissues. The level of complexity of these new technologies requires adequate facilities, qualified personnel with experience in cell culture techniques, assessment of quality and clear protocols for cell production. The rules for the implementation of cell therapy centers involve national and international standards of good manufacturing practices. However, such standards are not uniform, reflecting the diversity of technical and scientific development. Here standards from the United States, the European Union and Brazil are analyzed. Moreover, practical solutions encountered for the implementation of a cell therapy center appropriate for the preparation and supply of cultured cells for clinical studies are described. Development stages involved the planning and preparation of the project, the construction of the facility, standardization of laboratory procedures and development of systems to prevent cross contamination. Combining the theoretical knowledge of research centers involved in the study of cells with the practical experience of blood therapy services that manage structures for cell transplantation is presented as the best potential for synergy to meet the demands to implement cell therapy centers.
Assuntos
Humanos , Células-Tronco , Técnicas de Cultura de Células , Boas Práticas de Fabricação , Células-Tronco Adultas , Terapia Baseada em Transplante de Células e TecidosRESUMO
Objective: The aim of this study was to evaluate the osteogenic potential of human umbilical cord blood-derived osteoprogenitor cells and to prove its applicability as a promising candidate for cell-based therapeutics for bone repair. Methods: Primary cultures of human umbilical blood cord adherent cells were expanded in vitro until passage 2 and seeded for osteodifferentiation study. Morphological (light microscopy), cytochemical (Von Kossa's method), and functional analyses (calcium level, alkaline phosphatase activity, and total protein content in cell culture) were carried out 7, 14, 21, and 28 days after the osteoinduction protocol. Results: The proliferative step showed colony-forming units in 7 days. After osteoinduction, cuboidal cellular morphology similar to osteoblasts at 14 days and mineralization nodules and biochemical changes (increased alkaline phosphatase level and calcium deposits) at 21 days confirmed the osteodifferentiation process. Conclusion: Cell culture of human umbilical blood cord is a reliable technique, constituting itself as an alternative source of osteoprogenitor cells for experimental needs. More animal tests and clinical trials must be carried out to validate its use and to establish quality control of future autologous or allogeneic cell-based therapy aimed at bone repair.
Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial osteogênico de células osteoprogenitoras de sangue de cordão umbilical humano e provar sua aplicabilidade como candidato promissor para terapias celulares de reparo ósseo. Métodos: Culturas primárias de células aderentes de sangue de cordão umbilical humano foram expandidas in vitro até a passagem 2 e semeadas para estudo de osteodiferenciação. Análises morfológicas (microscopia de luz), citoquímicas (método de Von Kossa), e funcionais (dosagem de cálcio, atividade de fosfatase alcalina e conteúdo total de proteína na cultura celular) foram conduzidas em 7, 14, 21, e 28 dias após o protocolo de osteoindução. Resultados: A fase proliferativa demonstrou unidades formadoras de colônia em 7 dias. Após osteoindução, a morfologia celular cuboidal similar a osteoblastos em 14 dias e nódulos de mineralização e mudanças bioquímicas (aumento do nível de fosfatase alcalina e depósitos de cálcio) em 21 dias confirmaram o processo de osteodiferenciação. Conclusões: A cultura celular de sangue de cordão umbilical humano é uma técnica segura, constituindo-se uma fonte alternativa de células osteoprogenitoras para usos experimentais. Mais testes em animais e ensaios clínicos devem ser conduzidos para validar seu uso e estabelecer controle de qualidade de futuras terapias celulares autólogas ou alogênicas objetivando o reparo ósseo.
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Regeneração Óssea , Sangue Fetal , Osteogênese , Cordão UmbilicalRESUMO
INTRODUÇÃO: as células-tronco (CT) possuem capacidade de induzir a regeneração tecidual e, portanto, apresentam um potencial terapêutico. Assim como a medula óssea e o cordão umbilical, a polpa dentária é uma das fontes disponíveis de CT. O seu fácil acesso e o fato de os dentes decíduos não serem órgãos vitais, que normalmente são descartados após a esfoliação, provêm um atrativo para testes de segurança e viabilidade terapêutica dessas células. OBJETIVOS: descrever a coleta, o isolamento e o cultivo de CT obtidas da polpa de dentes decíduos, assim como a sua caracterização por meio de citometria de fluxo e da indução da diferenciação em linhagens osteogênica e adipogênica. MÉTODOS: as CT foram obtidas de forma relativamente simples e apresentaram boa capacidade proliferativa, mesmo a partir de pouca quantidade de tecido pulpar. RESULTADOS: a análise por citometria de fluxo confirmou as características de CT mesenquimais, com baixos níveis de expressão dos antígenos CD34 e CD45, que são marcadores de células hematopoiéticas, e altos níveis de expressão dos antígenos CD105, CD166, CD90 e CD73, que são marcadores de CT mesenquimais. A plasticidade das células foi confirmada pela identificação de depósitos de cálcio nas culturas que receberam meio osteogênico, e de acúmulo lipídico intracelular nas culturas que receberam meio adipogênico. CONCLUSÕES: as CT de dentes decíduos têm um potencial promissor de aplicação em regeneração tecidual. Sendo assim, é importante difundir entre os cirurgiões-dentistas o conhecimento sobre a existência e as características dessa fonte de CT, discutindo a técnica utilizada, suas limitações e possíveis indicações.
INTRODUCTION: Stem cells (SCs) are capable of inducing tissue regeneration and are, therefore, potentially therapeutic. Similarly to bone marrow and umbilical cords, dental pulp is one of the available sources of SCs. The fact that these cells are easily accessible and that deciduous teeth are not vital organs, and are normally discarded after exfoliation, make them particularly attractive for use in safety and viability tests. OBJECTIVE: To describe the collection, isolation and culture of SCs obtained from the pulp of deciduous teeth as well as their characterization by flow cytometry, and the induction of differentiation into osteogenic and adipogenic lineages. METHODS: SCs were obtained in a relatively straightforward manner and showed good proliferative capacity, even from a small amount of pulp tissue. RESULTS: Analysis by flow cytometry confirmed the characteristics of mesenchymal SCs with low expression of CD34 and CD45 antigens, which are markers for hematopoietic cells, and high levels of expression of CD105, CD166, CD90 and CD73 antigens, which are markers for mesenchymal SCs. Cell plasticity was confirmed by identifying calcium deposits in cultures that received osteogenic medium, and intracellular lipid accumulation in adipogenic cultures that received adipogenic medium. CONCLUSIONS: SCs collected from deciduous teeth show promising potential for application in tissue regeneration. Therefore, it is important that knowledge about the existence and characteristics of this source of stem cells be disseminated among dentists and that the technique, its limitations and possible indications are highlighted and discussed.
Assuntos
Dentes Natais , Células-Tronco , Dente Decíduo , OrtodontiaRESUMO
FUNDAMENTO: Insuficiência cardíaca (IC) causada por Doença de Chagas (DC) é uma cardiomiopatia inflamatória progressiva que afeta milhões de pessoas na América Latina. Estudos com modelos de camundongo de IC devido à DC indicam que o transplante de células mononucleares derivadas da medula óssea (TCDMO) pode reduzir a inflamação, fibrose e melhorar a função miocárdica. OBJETIVO: O propósito desse estudo foi avaliar, pela primeira vez em seres humanos, a segurança e a eficácia de TCDMO no miocárdio de pacientes com IC devido à DC. MÉTODOS: Um total de 28 pacientes com IC devido à DC (média de idade de 52,2 ± 9,9 anos) com classe funcional NYHA III e IV foram submetidos à TCDMO através de injeção coronariana. Os efeitos na fração de ejeção do ventrículo esquerdo (FEVE), capacidade funcional, qualidade de vida, arritmias e parâmetros bioquímicos, imunológicos e neuro-humorais foram avaliados. RESULTADOS: Não houve complicações diretamente relacionadas ao procedimento. A FEVE foi 20,1 ± 6,8 por cento e 28,3 ± 7,9 por cento, p < 0,03 a nível basal e 180 dias após o procedimento, respectivamente. No mesmo período, melhoras significantes foram observadas na classe funcional NYHA (3,1 ± 0,3 para 1,8 ± 0,5; p < 0,001), qualidade de vida (50,9 ± 11,7 para 25,1 ± 15,9; p < 0,001), e no teste de caminhada de seis minutos (355 ± 136 m para 437 ± 94 m; p < 0,01). Não houve alterações nos marcadores de ativação imune ou neurohormonais. Nenhuma complicação foi registrada. CONCLUSÃO: Nossos dados sugerem que a injeção intracoronariana de células derivadas da medula óssea é segura e potencialmente efetiva em pacientes com IC devido à DC. A extensão do benefício, entretanto, parece ser discreta e precisa ser confirmada em estudos clínicos maiores, randomizados, duplo-cegos, controlados com placebo.
BACKGROUND: Heart failure due to Chagas' disease (HFCD) is a progressive inflammatory cardiomyopathy that affects millions of individuals in Latin America. Studies using mice models of HFCD indicate that bone marrow mononuclear cell transplantation (BMCT) may reduce inflammation, fibrosis, and improve myocardial function. OBJECTIVE: The purpose of this study was to evaluate, for the first time in humans, the safety and efficacy of BMCT to the myocardium of patients with HFCD. METHODS: A total of 28 HFCD patients (mean age 52.2 ± 9.9 years) with NYHA class III and IV were submitted to BMCT through intracoronary injection. Effects on the left ventricle ejection fraction (LVEF), functional capacity, quality-of-life, arrhythmias, biochemical, immunological, and neuro-humoral parameters, were evaluated. RESULTS: There were no complications directly related to the procedure. LVEF was 20.1 ± 6.8 percent and 28.3 ± 7.9 percent, p < 0.03 at baseline and 180 days after the procedure, respectively. In the same period, significant improvements were observed in the NYHA class (3.1 ± 0.3 to 1.8 ± 0.5; p < 0.001), quality-of-life (50.9 ± 11.7 to 25.1 ± 15.9; p < 0.001), and in the six-minute walking test (355 ± 136 m to 437 ± 94 m; p < 0,01). There were no changes in markers of immune or neurohormonal activation. No complications were registered. CONCLUSION: Our data suggest that the intracoronary injection of BMCT is safe and potentially effective in patients with HFCD. The extent of the benefit, however, appears to be small and needs to be confirmed in a larger randomized, double blind, placebo controlled clinical trial.
FUNDAMENTO: La insuficiencia cardíaca (IC), causada por la enfermedad de Chagas (EC), es una cardiomiopatía inflamatoria progresiva que afecta a millones de personas en Latinoamérica. Estudios con modelos experimentales de IC en razón de la EC, nos indican que el transplante de células mononucleares derivadas de la médula ósea (TCMO), puede reducir la inflamación y la fibrosis, mejorando así la función miocárdica. OBJETIVO:El objetivo de este estudio fue evaluar, por primera vez en seres humanos, la seguridad y la eficacia del TCMO en el miocardio de pacientes con IC debido a la EC. MÉTODOS:Fueron estudiados un total de 28 pacientes con IC debido a la EC (con edad promedio 52,2 ± 9,9 años), en clases funcionales III y IV (NYHA), al TCMO por medio de una inyección coronaria. Se evaluaron los efectos en la fracción de eyección del ventrículo izquierdo (FEVI), capacidad funcional, calidad de vida, arritmias y parámetros bioquímicos, inmunológicos y neurohumorales. RESULTADOS:No se registraron complicaciones relacionadas directamente con el procedimiento. La FEVI pasó de 20,1 ± 6,8 por ciento para 28,3 ± 7,9 por ciento, p < 0,03, cuando se comparó con el período basal y 180 días después del procedimiento, respectivamente. En el mismo período, también se observaron mejorías en la clase funcional NYHA promedio (3,1 ± 0,3 para 1,8 ± 0,5; p < 0,001), puntuación de calidad de vida de Minnesota (50,9 ± 11,7 para 25,1 ± 15,9; p < 0,001), y en el test de esfuerzo de seis minutos (355 ± 136 m para 437 ± 94 m; p < 0,01). No hubo alteraciones en los marcadores de activación inflamatoria o neurohormonales. Ninguna complicación fue registrada. CONCLUSIÓN:Nuestros datos sugieren que la inyección intracoronaria de las células derivadas de la médula ósea es segura y potencialmente efectiva en pacientes con IC debido a la EC. La extensión del beneficio, sin embargo, parece ser discreta, y necesita ser confirmada en los ensayos clínicos randomizados, doble ciegos, controlados con placebo.
Assuntos
Adulto , Idoso , Feminino , Humanos , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Adulto Jovem , Transplante de Medula Óssea , Cardiomiopatia Chagásica/cirurgia , Insuficiência Cardíaca/cirurgia , Transplante de Medula Óssea/efeitos adversos , Transplante de Medula Óssea/imunologia , Cardiomiopatia Chagásica/complicações , Fluorimunoensaio , Gelatinases/análise , Insuficiência Cardíaca/etiologia , Monocinas/análise , Qualidade de Vida , Volume Sistólico/fisiologia , Fatores de Tempo , Resultado do TratamentoRESUMO
É extensa a literatura existente sobre as características e potenciais terapêuticos das células-tronco mesenquimais adultas, e a possibilidade de seu isolamento a partir de tecido adiposo excedente de outros procedimentos é promissora e extremamente desejável. Os protocolos para tal utilização, porém, ainda são descritos de maneira sumarizada e não padronizada. O objetivo dessa comunicação é apresentar um protocolo simples, prático e eficaz tanto da coleta do tecido adiposo em ambiente hospitalar quanto do isolamento e cultivo, em laboratório, in vitro de células-tronco mesenquimais adultas derivadas de tecido adiposo, com a finalidade de discutir as perspectivas da utilização dessa técnica na dermatologia.
RESUMO
Cell therapy constitutes a possibility for improving nerve regeneration, increasing the success of nerve repair. We evaluate the use of mononuclear cells in the regeneration of the sciatic nerve after axotomy followed by end-to-end neurorrhaphy. Forty adult male Wistar rats (250-300 g) were divided into four groups: (1) sham, (2) neurorrhaphy: the sciatic nerve was sectioned and repaired using epineural sutures, (3) culture medium: after the suture, received an injection of 10 µL of culture medium into the nerve, and (4) mononuclear cell: after the suture, a concentration of 3 × 10(6) of mononuclear cell was injected in epineurium region. Mononuclear cells were obtained from the bone marrow aspirates and separated by Ficoll-Hypaque method. The histological analyses were performed at the 4th postoperative day. The sciatic functional index, histological, and morphometric analyzes were used to evaluate nerve regeneration at the 6th postoperative week. Six rats were used for immunohistochemical analysis on the 4th postoperative day. In the group 4, on the fourth day, the histological analysis demonstrated a more accelerated degenerative process and an increase of the neurotrophic factors was observed. In the 6th week, all the morphometric results of the group 4 were statistically better compared with groups 2 and 3. There was a statistically significant improvement in the sciatic functional index for group 4 compared with groups 2 and 3. Mononuclear cells stimulated nerve regeneration, most probably by speeding up the Wallerian degeneration process as well as stimulating the synthesis of neurotrophic factors.
Assuntos
Células da Medula Óssea/fisiologia , Terapia Baseada em Transplante de Células e Tecidos/métodos , Regeneração Nervosa , Ruptura/cirurgia , Nervo Isquiático/cirurgia , Animais , Biometria , Imuno-Histoquímica , Microscopia , Ratos , Ratos Wistar , Nervo Isquiático/anatomia & histologia , Nervo Isquiático/patologia , Resultado do TratamentoRESUMO
As células-tronco adultas ou somáticas detêm grande promessa para a reparação e regeneração de tecidos. Atualmente, o interesse dos cientistas é contínuo na investigação da biologia de células-tronco mesenquimais, tanto em aspectos básicos, quanto no potencial de aplicações terapêuticas. As células-tronco adultas derivadas do estroma do tecido adiposo, em comparação com as células-tronco derivadas do estroma da medula óssea, apresentam como vantagem o método fácil de obtenção da fonte tecidual. As células-tronco adultas derivadas do estroma do tecido adiposo apresentam potencial para se diferenciarem em células de tecidos mesodérmicos, como os adipócitos, as cartilagens, os ossos e o músculo esquelético e não mesodérmicos, como os hepatócitos, as células pancreáticas endócrinas, os neurônios, os hepatócitos e as células endoteliais vasculares. Entretanto, os dados disponíveis na literatura científica sobre as características das células-tronco adultas derivadas do estroma do tecido adiposo e os procedimentos para sua obtenção e manipulação no laboratório são inconsistentes. É necessário o desenvolvimento de metodologias e procedimentos eficazes de isolamento dessas células para obtenção de células em quantidade e qualidade suficientes para aplicação terapêutica. Nesta revisão, são discutidos os métodos correntes de coleta de tecido adiposo, isolamento e caracterização de células-tronco adultas derivadas do estroma do tecido adiposo, com ênfase na futura aplicação em medicina regenerativa e nos possíveis desafios nesse recente campo da ciência.
Adult or somatic stem cells hold great promise for tissue regeneration. Currently, one major scientific interest is focused on the basic biology and clinical application of mesenchymal stem cells. Adipose tissue-derived stem cells share similar characteristics with bone marrow mesenchymal stem cells, but have some advantages including harvesting through a less invasive surgical procedure. Moreover, adipose tissue-derived stem cells have the potential to differentiate into cells of mesodermal origin, such as adipocytes, cartilage, bone, and skeletal muscle, as well as cells of non-mesodermal lineage, such as hepatocytes, pancreatic endocrine cells, neurons, cardiomyocytes, and vascular endothelial cells. There are, however, inconsistencies in the scientific literature regarding methods for harvesting adipose tissue and for isolating, characterizing and handling adipose tissue-derived stem cells. Future clinical applications of adipose tissue-derived stem cells rely on more defined and widespread methods for obtaining cells of clinical grade quality. In this review, current methods in adipose tissue-derived stem cell research are discussed with emphasis on strategies designed for future applications in regenerative medicine and possible challenges along the way.
Assuntos
Humanos , Tecido Adiposo/citologia , Células-Tronco Adultas/citologia , Células-Tronco Mesenquimais , Coleta de Tecidos e Órgãos/métodos , Adipogenia/fisiologia , Diferenciação Celular , Proliferação de Células , Medicina RegenerativaRESUMO
PURPOSE: To study were to reproduce an alveolar bone defect model in Wistar rats to be used for testing the efficacy of stem cell therapies. Additionally, we also aimed to determine the osteogenesis process of this osseous defect in the 1 month period post-surgery. METHODS: The animals were randomly divided into two groups of 7 animals each. A gingivobuccal incision was made, and a bone defect of 28 mm² of area was performed in the alveolar region. Animals were killed at 2 weeks after surgery (n=7) and 4 weeks after surgery (n=7). RESULTS: The average area of the alveolar defect at time point of 2 weeks was 22.27 ± 1.31 mm² and the average area of alveolar defect at time point of 4 weeks was 9.03 ± 1.17 mm². The average amount of bone formation at time point of 2 weeks was 5.73 ± 1.31 mm² and the average amount of bone formation at time point of 4 weeks was 19 ± 1.17 mm². Statistically significant differences between the amount of bone formation at 2 weeks and 4 weeks after surgery were seen (p=0.003). CONCLUSION: The highest rate of ossification occurred mostly from 2 to 4 weeks after surgery. This observation suggests that 4 weeks after the bone defect creation should be a satisfactory timing to assess the potential of bone inductive stem cells to accelerate bone regeneration in Wistar rats.(AU)
OBJETIVO: Reproduzir um novo modelo de defeito ósseo alveolar em ratos Wistar que será utilizado para terapia genética e estudos com células tronco. Adicionalmente, outro objetivo do presente estudo foi determinar o pico de regeneração óssea do defeito criado na região alveolar do modelo experimental. MÉTODOS: Os animais foram aleatoriamente divididos em dois grupos de sete animais. Através de uma incisão gengivobucal foi criado um defeito ósseo medindo 28 mm² de área na região alveolar dos ratos. Os ratos foram sacrificados após duas semanas (n=7) e quatro semanas (n=7) da cirurgia. RESULTADOS: A área média do defeito alveolar após duas semanas de cirurgia foi de 22.27 ± 1.31 mm² e a área média do defeito alveolar após quatro semanas de cirurgia foi de 9.03 ± 1.17 mm². A taxa de formação óssea foi de 5.73 ± 1.31 mm² após duas semanas de cirurgia e de 19 ± 1.17 mm² após quatro semanas de cirurgia. Foi observada diferença estatisticamente significante na taxa de formação óssea entre o grupo dos animais sacrificados com duas e quatro semanas (p=0.003). CONCLUSÃO: Este estudo demonstrou que a maior taxa de regeneração óssea ocorreu no período entre duas e quatro semanas após a cirurgia de criação do defeito ósseo alveolar, portanto esta observação sugere que o período de tempo de quatro semanas será suficiente para avaliar a capacidade de células tronco em regenerar osso em ratos Wistar com defeito ósseo alveolar.(AU)
Assuntos
Animais , Ratos , Terapia Baseada em Transplante de Células e Tecidos , Regeneração Óssea , Células-Tronco , Perda do Osso AlveolarRESUMO
PURPOSE: To study were to reproduce an alveolar bone defect model in Wistar rats to be used for testing the efficacy of stem cell therapies. Additionally, we also aimed to determine the osteogenesis process of this osseous defect in the 1 month period post-surgery. METHODS: The animals were randomly divided into two groups of 7 animals each. A gingivobuccal incision was made, and a bone defect of 28 mm² of area was performed in the alveolar region. Animals were killed at 2 weeks after surgery (n=7) and 4 weeks after surgery (n=7). RESULTS: The average area of the alveolar defect at time point of 2 weeks was 22.27 ± 1.31 mm² and the average area of alveolar defect at time point of 4 weeks was 9.03 ± 1.17 mm². The average amount of bone formation at time point of 2 weeks was 5.73 ± 1.31 mm² and the average amount of bone formation at time point of 4 weeks was 19 ± 1.17 mm². Statistically significant differences between the amount of bone formation at 2 weeks and 4 weeks after surgery were seen (p=0.003). CONCLUSION: The highest rate of ossification occurred mostly from 2 to 4 weeks after surgery. This observation suggests that 4 weeks after the bone defect creation should be a satisfactory timing to assess the potential of bone inductive stem cells to accelerate bone regeneration in Wistar rats.
OBJETIVO: Reproduzir um novo modelo de defeito ósseo alveolar em ratos Wistar que será utilizado para terapia genética e estudos com células tronco. Adicionalmente, outro objetivo do presente estudo foi determinar o pico de regeneração óssea do defeito criado na região alveolar do modelo experimental. MÉTODOS: Os animais foram aleatoriamente divididos em dois grupos de sete animais. Através de uma incisão gengivobucal foi criado um defeito ósseo medindo 28 mm² de área na região alveolar dos ratos. Os ratos foram sacrificados após duas semanas (n=7) e quatro semanas (n=7) da cirurgia. RESULTADOS: A área média do defeito alveolar após duas semanas de cirurgia foi de 22.27 ± 1.31 mm² e a área média do defeito alveolar após quatro semanas de cirurgia foi de 9.03 ± 1.17 mm². A taxa de formação óssea foi de 5.73 ± 1.31 mm² após duas semanas de cirurgia e de 19 ± 1.17 mm² após quatro semanas de cirurgia. Foi observada diferença estatisticamente significante na taxa de formação óssea entre o grupo dos animais sacrificados com duas e quatro semanas (p=0.003). CONCLUSÃO: Este estudo demonstrou que a maior taxa de regeneração óssea ocorreu no período entre duas e quatro semanas após a cirurgia de criação do defeito ósseo alveolar, portanto esta observação sugere que o período de tempo de quatro semanas será suficiente para avaliar a capacidade de células tronco em regenerar osso em ratos Wistar com defeito ósseo alveolar.
Assuntos
Animais , Masculino , Ratos , Perda do Osso Alveolar/cirurgia , Processo Alveolar/cirurgia , Regeneração Óssea/fisiologia , Fissura Palatina/cirurgia , Osteogênese/fisiologia , Transplante Ósseo/métodos , Modelos Animais de Doenças , Distribuição Aleatória , Ratos Wistar , Engenharia Tecidual/métodosRESUMO
A melhor compreensão das causas da instabilidade dos níveis da glicemia em pacientes com diabetes melito tipo 1 (DMT1) e a disponibilidade de novas alternativas para enfrentá-la com sucesso, como a bomba de infusão contínua de insulina e os análogos das insulinas, tornaram relevante o questionamento sobre a existência do diabetes hiperlábil como uma entidade bem como a necessidade de defini-lo. O presente artigo pretendeu descrever o conceito de diabetes hiperlábil à luz dos novos avanços na terapia do DMT1 e propor critérios objetivos para a quantificação da labilidade da glicemia.
The best comprehension about the instability of the glycemia levels in type 1 diabetes mellitus (T1DM) patients and the availability of new alternatives to successfully control it, like insulin pump therapy and the insulin analogues, underlined the questions about the brittle diabetes existence as a clinical entity as well as the necessity of define it. The aim of this article was to describe the concept of brittle diabetes in the light of the latest advances in the treatment of type 1 diabetes and propose objective criteria to evaluate the level of glucose liability.