RESUMO

Experimental research with animals is very important for humanity, as it contributes to discovering new strategies for preventing and treating diseases, developing new surgical techniques, medicines and foods, preceding the final tests that are carried out on the human population. Animal experimentation is fundamental to the advancement of scientific research, as it contributes directly to the development of science and technology. Their contribution helps in the discovery of preventive measures and new treatments for numerous diseases that affect living beings. Examples of scientific contributions through animal studies include the development of vaccines and the production of serums. To establish the protective capacity of serums against the lethal effect of a toxin, potency tests were performed on Swiss mice. This methodology is carried out in the Biological Quality Control routine to release batches of serum produced by the Butantan Institute. The objective of this dissertation is to carry out a critical analysis of the importance and challenges of the use of animals in research.

RESUMO

Diphtheria is an acute infectious disease caused by Corynebacterium diphtheria, producer of the diphtheric toxin. The aim of this paper is to demonstrate the importance of establishing the humanitarian end point in the potency test of antidiphtheric serum. The protective capacity of diphtheria serum is established under the lethal effect of a fixed dose of diphtheric toxin through potency testing in albino guinea pigs (Cavia porcellus), English strain. The potency test is routinely performed in the Biological Quality Control - In Vivo for the purpose of releasing batches of antidiphtheric sera by the Butantan Institute. In the potency test, some guinea pigs show signs of disease and after the onset of symptoms it is impossible to observe any reversal in the effects caused by the disease, therefore, with the introduction of humane endpoint, the guinea pigs are removed from the test, already in the second stage of disease progression, without harming the final result, but reducing the suffering and stress of animals being tested, promoting comfort to the animals. The Biological Quality Control - In Vivo introduced the humanitarian end point in the potency test of antidiphtheria serum, promoting a refinement of the potency test, using one of the pillars of the 3R's, adding quality to the tests.

A difteria é uma doença infecciosa aguda causada pelo Corynebacterium diphtheria, produtor da toxina diftérica. Esse trabalho tem como objetivo demonstrar a importância do estabelecimento do ponto final humanitário no teste de potência do soro antidifitérico. A capacidade protetora do soro antidiftérico é estabelecida sob o efeito letal de uma dose fixa de toxina diftérica através do teste de potência em Cobaias Albinas (Cavia porcellus), variedade inglesa. Rotineiramente o teste de potência é realizado no Controle de Qualidade Biológico - In Vivo com a finalidade de liberar lotes de soros antidiftéricos pelo Instituto Butantan. No teste de potência, algumas cobaias, apresentam sinais de adoecimento e após o início dos sintomas é impossível observar no quadro qualquer reversão nos efeitos ocasionados pela doença, portanto, com a introdução da finalização humanitária, tem-se a retirada prévia das cobaias do teste, já no segundo estágio de evolução da doença, sem prejudicar o resultado final, contudo reduzindo o sofrimento e o estresse dos animais em teste, promovendo conforto aos animais. O Controle de Qualidade Biológico – In Vivo introduziu o ponto final humanitário no teste de potência do soro antidiftérico promovendo um refinamento do teste de potência, utilizando-se um dos pilares do 3R’s agregando qualidade aos testes.

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O tétano é uma doença infecciosa aguda e grave, causada pelo Clostridium tetani, uma bactéria gram-positiva anaeróbia restrita que produz a neurotoxina tetânica. O objetivo desse trabalho foi observar o refinamento do teste de potência do soro antitetânico. Para se estabelecer a capacidade protetora do soro antitetânico sobre o efeito letal de uma dose fixa de toxina tetânica é utilizado o teste de potência em camundongos Swiss. Esta metodologia é realizada na rotina do Controle de Qualidade biológico para liberação dos lotes de soros antitetânicos produzidos pelo Instituto Butantan. No teste de potência, alguns dos animais desenvolvem a doença e após o início dos sintomas, não é possível observar uma reversão dos efeitos causados pela doença, portanto a introdução do ponto final humanitário, a retira prévia dos animais do teste e a alteração do local de inoculação, revelaram uma melhora significativa no bem-estar dos animais. O Controle de Qualidade Biológico realizou o refinamento do teste, não permitindo a evolução da doença, ou seja, a retirada dos camundongos no terceiro estágio de adoecimento, diminuindo o sofrimento, dor e estresse dos animais.

RESUMO

Acidentes com animas peçonhentos são de grande importância no mundo todo. No Brasil os estados mais afetados são Minas Gerais, São Paulo e Bahia, e mais da metade desses acidentes ocorrem por picadas de escorpiões. Contando com mais de 160 espécies no país, o principal responsável por tais acidentes é o Titys serrulatus. A melhor forma de tratamento para ocorrências com esses animais é a utilização do soro, que é produzido a partir do sangue de cavalos imunizados com o veneno. Para que um produto como esse seja utilizado pela população, ele deve ser aprovado pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). Que solicita uma série de testes a serem realizados, como por exemplo testes de esterilidade, pH, proteínas, atividades e potência in vitro e in vivo. Para executar o teste de potência, primeiro é preciso determinar a dose letal 50% do veneno. É sabido que o veneno é composto principalmente por neurotoxinas que acarretam diversas alterações clínicas além de poder levar a morte. Os animais utilizados em tais estudos estão em constante sofrimento e, assim, o objetivo desse estudo foi testar dois potentes analgésicos como forma de melhorar o bem-estar animal sem, é claro, alterar o resultado do teste. O estudo foi dividido em três grupos experimentais: controle; tramadol e morfina. Os animais receberam o analgésico 15 minutos antes do início do teste. Este estudo mostrou uma pequena melhora nos sintomas causados pelo envenenamento, ou seja, promoveu um maior conforto aos animais que receberam tratamento analgésicos, muito embora seja necessário realizar mais testes para refinar a técnica.

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O presente estudo teve como objetivo analisar a correlação e concordância entre três diferentes métodos para quantificação da altura do salto vertical: cinta de Abalakov (AB), tapete de contato (TC) e videogrametria (VG). Treze atletas de vôlei do sexo feminino. Realizaram três saltos verticais máximos com contramovimento sem o auxílio dos membros superiores. Os três métodos mediram a altura do salto simultaneamente. Foram realizados os testes de correlação de Pearson (r) entre cada par de métodos (AB x TC, AB x VG e TC x VG). Por fim, a concordância entre cada par de métodos foi avaliada através da análise gráfica de Bland e Altman. A menor correlação encontrada (r = 0,77; p < 0,01) ocorreu entre os métodos de VG e AB, enquanto que a maior correlação encontrada (r = 0,92; p < 0,01) ocorreu entre os métodos de VG e TC. Não houve concordância satisfatória entre os valores encontrados para os diferentes métodos, sugerindo que profissionais da área tenham cautela na comparação entre resultados de altura do salto vertical obtidos por diferentes métodos.

The purpose of the present study was to analyze the association and the agreement among three different methods to quantify of the vertical jump height: abalakov belt (AB), contact mat (TC) and videogrammetry (VG). Thirteen female volleyball players performed three maximal countermovement jumps, without the help of upper limbs. The three methods were used simultaneously to quantify the jump height. The lowest correlation (r = 0.77; p < 0.01) was found between VG and AB, while the strongest correlation (r = 0.92; p < 0.01) was found between VG and TC methods. In addition, Bland and Altman plots revealed no satisfactory agreement between the methods. These findings suggest precaution to compare the results of vertical jump height from different methods.

Assuntos

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Foi efetuada a comparação em hamsters da proteção conferida e dos níveis de anticorpos induzidos por duas bacterinas comerciais antileptospirose. Os ensaios empregados foram o teste oficial de potência com desafio (TP), o ensaio proposto, teste de inibição de crescimento de leptospiras in vitro (ICLIV) e a soroaglutinação microscópica (SAM). O protocolo de imunização foi representado por duas aplicações individuais de 0,25 mL das bacterinas, puras ou de suas diluições geométricas de razão dois variando de 200 a 51.200 para a bacterina A e de 200 a 3.200 para a bacterina B, por via subcutânea com o intervalo de 15 dias. Decorridos 15 dias da segunda aplicação de vacina, um grupo de animais foi desafiado com 0,2 mL de cultivos de leptospiras, por indivíduo, respectivamente dos sorovares Canicola (bacterinas A e B) ou Kennewicki (bacterina A). Os números de doses infectantes empregados nos desafios foram de 100 e 631 respectivamente, para os sorovares Canicola e Kennewicki. Decorridos 21 dias do desafio, os grupos de animais utilizados nos testes de ICLIV e SAM foram sangrados e os seus soros foram reunidos em pools (n = 5). No TP, adotando-se os critérios internacionais, as bacterinas foram aprovadas. A comparação do desempenho das bacterinas para os sorovares adotados, segundo sua concentração, por meio das proporções de animais sobreviventes ao TP e a média dos títulos de anticorpos identificados no teste de ICLIV, indicou que um título igual ou superior a 0,77 log corresponde ao nível de aprovação da bacterina no TP.

It was performed a comparison between the protection afforded in hamsters and the antibody levels induced by two commercial vaccines against leptospirosis. The assays used were the official challenge test (TP), the in vitro leptospires growth inhibition test (ICLIV) and microscopic agglutination test (MAT). The immunization protocol consisted of two single applications, 15 days from each other, of 0.25 mL of the bacterins, pure or its two-fold serial dilutions: 200 to 51,200 for bacterin A and 200 to 3.200 bacterin B, both of them administered subcutaneously. A group of animals was challenged, after 15 days from the second vaccine application, with 0.2 mL/animal of live leptospire cultures, with Canicola (bacterin A and B) or Kennewicki (bacterin A) serovars. The numbers of infective doses employed in the challenges were 100 and 631 for Canicola and Kennewicki serovars, respectively. After 15 days from the second vaccine dose the groups of animals used in ICLIV and SAM tests were bled and their sera were collected in pools (n = 5). In TP, adopting the criteria established by the Code Federal Regulation, both bacterins were approved. The comparison of the performance of the tested bacterins with the adopted serovars, according to its concentration, by the proportions of surviving animals to the challenge assay and the average of the neutralizing antibodies titers, established a neutralizing antibodies titer equal or higher than 0.77 log corresponding with the bacterin level of approval in the potency assay.

Assuntos

RESUMO

Foi efetuada a comparação em hamsters da proteção conferida e dos níveis de anticorpos induzidos por duas bacterinas comerciais antileptospirose. Os ensaios empregados foram o teste oficial de potência com desafio (TP), o ensaio proposto, teste de inibição de crescimento de leptospiras in vitro (ICLIV) e a soroaglutinação microscópica (SAM). O protocolo de imunização foi representado por duas aplicações individuais de 0,25 mL das bacterinas, puras ou de suas diluições geométricas de razão dois variando de 200 a 51.200 para a bacterina A e de 200 a 3.200 para a bacterina B, por via subcutânea com o intervalo de 15 dias. Decorridos 15 dias da segunda aplicação de vacina, um grupo de animais foi desafiado com 0,2 mL de cultivos de leptospiras, por indivíduo, respectivamente dos sorovares Canicola (bacterinas A e B) ou Kennewicki (bacterina A). Os números de doses infectantes empregados nos desafios foram de 100 e 631 respectivamente, para os sorovares Canicola e Kennewicki. Decorridos 21 dias do desafio, os grupos de animais utilizados nos testes de ICLIV e SAM foram sangrados e os seus soros foram reunidos em pools (n = 5). No TP, adotando-se os critérios internacionais, as bacterinas foram aprovadas. A comparação do desempenho das bacterinas para os sorovares adotados, segundo sua concentração, por meio das proporções de animais sobreviventes ao TP e a média dos títulos de anticorpos identificados no teste de ICLIV, indicou que um título igual ou superior a 0,77 log corresponde ao nível de aprovação da bacterina no TP(AU)

It was performed a comparison between the protection afforded in hamsters and the antibody levels induced by two commercial vaccines against leptospirosis. The assays used were the official challenge test (TP), the in vitro leptospires growth inhibition test (ICLIV) and microscopic agglutination test (MAT). The immunization protocol consisted of two single applications, 15 days from each other, of 0.25 mL of the bacterins, pure or its two-fold serial dilutions: 200 to 51,200 for bacterin A and 200 to 3.200 bacterin B, both of them administered subcutaneously. A group of animals was challenged, after 15 days from the second vaccine application, with 0.2 mL/animal of live leptospire cultures, with Canicola (bacterin A and B) or Kennewicki (bacterin A) serovars. The numbers of infective doses employed in the challenges were 100 and 631 for Canicola and Kennewicki serovars, respectively. After 15 days from the second vaccine dose the groups of animals used in ICLIV and SAM tests were bled and their sera were collected in pools (n = 5). In TP, adopting the criteria established by the Code Federal Regulation, both bacterins were approved. The comparison of the performance of the tested bacterins with the adopted serovars, according to its concentration, by the proportions of surviving animals to the challenge assay and the average of the neutralizing antibodies titers, established a neutralizing antibodies titer equal or higher than 0.77 log corresponding with the bacterin level of approval in the potency assay(AU)

Assuntos

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This study was carried out to assess and standardize the 'Limit of Flocculation' in vitro test to be used in the quality control of vaccine against enterotoxemy. This study used experimental vaccines against enterotoxemy and toxicoid produced from the epsilon toxin of Clostridium perfringens type D, previously evaluated by serum neutralization in mice and TCP test. The 'Limit of Flocculation' technique was performed by mixing variable amounts of antitoxin and a fixed value of toxicoid to each tube. It was proposed, in the first tube to flocculate, that its Fl would be the unit of flocculation of the tested sample. The main results indicated that the lower degree of antitoxin detectable both in rabbit and in sheep serum through the Limit of Flocculation' technique is equivalent to 10 UI/mL. The TCP and 'Limit of Flocculation' correlation ratio was 99.97%. In conclusion, the Limit of Flocculation is suitable to replace in vivo methods for the analysis of epsilon. Nevertheless, the referred technique is less effective to be used for the potency test of vaccines against enterotoxemy in substitution to serum neutralization in mice.

Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar e padronizar o teste in vitro Limite de Floculação, para ser utilizado no controle de qualidade de vacinas contra enterotoxemia. Foram utilizadas vacinas experimentais contra enterotoxemia e toxóides produzidos pelo Clostridium perfringens tipo D, previamente avaliados por métodos in vivo, empregando-se os testes de soroneutralização em camundongo TCP. A técnica Limite de Floculação consistiu em misturar volumes variados de antitoxina com volumes fixos de toxóide em tubos de ensaio. O primeiro tubo a flocular foi dito como sendo o que continha a quantidade mais próxima de antitoxina equivalente à quantidade de antígeno na amostra e se propôs que o Lf contido no tubo foi unidade de Lf da amostra testada. Os principais resultados obtidos indicaram que o nível mínimo de antitoxina detectável em soros de coelhos e carneiros pela técnica limite de floculação é 10 UI/mL. O coeficiente de correlação, obtido entre os títulos de toxóide pelos métodos TCP e Limite de floculação foi 99,97%. Conclui-se que o Limite de Floculação é satisfatório para substituir os tradicionais métodos in vivo utilizados na análise de toxóide epsilon. No entanto, a referida técnica é pouco eficiente para ser utilizada no teste de potência de vacinas contra enterotoxemia, em substituição à soroneutralização em camundongos.

Assuntos

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A critical study of the guinea pigs potency test for efficiency evaluation of antirabies vaccines was performed by using 198 batches of High Egg Passage Flury vaccine. The results revealed a low reproductivity: 88 (44.5%) tests did not get the minimum standards limits (mortality of at least 80% in the control group), and 60 (30,3%) tests although satisfying such requirements did not give enough information to quantify the amount of challenge virus really employed. The authors suggest that this test might include as a judgment criteria a mortality between 80% and less than 1 0 0% of the animals from the control group.

Uma apreciação crítica do teste de potência em cobaias para a avaliação da eficiência de vacinas anti-rábicas foi realizada utilizando-se 198 partidas de vacina Flury de alta passagem (H.E.P). O estudo revelou uma baixa reprodutividade deste procedimento expressa, de um lado, pelo elevado número de provas, 88 (44,5%) que deixaram de satisfazer os critérios mínimos de julgamento (mortalidade de pelo menos 80% dos animais do grupo-controle) e, de outro, pela expressiva parcela de provas, 60 (30,3%) que, embora satisfazendo tais requisitos não propiciaram elementos suficientes para garantir a comparabilidade de seus resultados em virtude da morte de todos os animais do grupo-testemunha, não possibilitando determinar-se a quantidade de vírus-desafio efetivamente empregada. Os autores sugerem que, ressalvadas as demais características desta prova, um critério mais conveniente para julgamento de seus resultados deveria estabelecer uma mortalidade entre 80% e menos 100% dos animais do grupo testemunha.

RESUMO

A comparative study between the mice viability test and the guinea pig potency test for the efficiency evaluation of the Flury HEP vaccines revealed a strong positive association between the mice titer and the protection percent of the vaccinated guinea pigs. Although the mice viability test is not able to demonstrate the vaccine immune response, titers of 103,5 or higher constitute a good indication that the vaccine will be approved by the guinea pig potency test.

Estudando comparativamente os testes de viabilidade em camundongos e de potência em cobaias com vistas à avaliação da eficiência de vacinas anti-rábica, Flury HEP verificou-se a existência de uma estreita relação positiva entre o título infectante em camundongos e a percentagem de proteção dos cobaios. Constatou-se ainda que, embora o teste não se constitua em prova para a verificação da capacidade imunizante da vacina, títulos infectantes iguais ou superiores a 1 0 indicam que a vacina seria aprovada no teste de potência em cobaios.

RESUMO

A comparative study between the mice viability test and the guinea pig potency test for the efficiency evaluation of the Flury HEP vaccines revealed a strong positive association between the mice titer and the protection percent of the vaccinated guinea pigs. Although the mice viability test is not able to demonstrate the vaccine immune response, titers of 103,5 or higher constitute a good indication that the vaccine will be approved by the guinea pig potency test.

Estudando comparativamente os testes de viabilidade em camundongos e de potência em cobaias com vistas à avaliação da eficiência de vacinas anti-rábica, Flury HEP verificou-se a existência de uma estreita relação positiva entre o título infectante em camundongos e a percentagem de proteção dos cobaios. Constatou-se ainda que, embora o teste não se constitua em prova para a verificação da capacidade imunizante da vacina, títulos infectantes iguais ou superiores a 1 0 indicam que a vacina seria aprovada no teste de potência em cobaios.

RESUMO

A critical study of the guinea pigs potency test for efficiency evaluation of antirabies vaccines was performed by using 198 batches of High Egg Passage Flury vaccine. The results revealed a low reproductivity: 88 (44.5%) tests did not get the minimum standards limits (mortality of at least 80% in the control group), and 60 (30,3%) tests although satisfying such requirements did not give enough information to quantify the amount of challenge virus really employed. The authors suggest that this test might include as a judgment criteria a mortality between 80% and less than 1 0 0% of the animals from the control group.

Uma apreciação crítica do teste de potência em cobaias para a avaliação da eficiência de vacinas anti-rábicas foi realizada utilizando-se 198 partidas de vacina Flury de alta passagem (H.E.P). O estudo revelou uma baixa reprodutividade deste procedimento expressa, de um lado, pelo elevado número de provas, 88 (44,5%) que deixaram de satisfazer os critérios mínimos de julgamento (mortalidade de pelo menos 80% dos animais do grupo-controle) e, de outro, pela expressiva parcela de provas, 60 (30,3%) que, embora satisfazendo tais requisitos não propiciaram elementos suficientes para garantir a comparabilidade de seus resultados em virtude da morte de todos os animais do grupo-testemunha, não possibilitando determinar-se a quantidade de vírus-desafio efetivamente empregada. Os autores sugerem que, ressalvadas as demais características desta prova, um critério mais conveniente para julgamento de seus resultados deveria estabelecer uma mortalidade entre 80% e menos 100% dos animais do grupo testemunha.