RESUMO

Devido a contaminação bacteriana, utiliza-se antibióticos nos diluentes de sêmen para inibir o crescimento bacteriano durante a sua estocagem. Assim, este trabalho teve por objetivo determinar o limite de toxicidade de diferentes concentrações antibióticas da penicilina/estreptomicina adicionadas ao meio diluente do sêmen e investigar a influência sobre a motilidade espermática. Para isso, o sêmen de cinco reprodutores híbridos comerciais foi coletado uma vez por semana, durante nove semanas, através da técnica da mão enluvada. Cada ejaculado foi distribuído de forma igual entre todos os tratamentos, que consistiram em diferentes concentrações de solução de antibióticos, sendo: T1 = 0,0g/L (controle); T2 = 4,2g/L; e T3 = 12,6g/L. O sêmen diluído em água de coco em pó (ACP-103@) foi conservado por cinco dias e analisado nos dias: D0 (dia da coleta), D2 e D4 (último dia de conservação) quanto ao vigor e à motilidade espermática. Em D0, o sêmen conservado em diluente acrescido de 12,6g de solução antibiótica apresentou menor valor de vigor espermático em relação aos demais tratamentos (p<0,05). Já em D2 e D4, os tratamentos contendo antibióticos apresentaram resultados de vigor aquém dos obtidos no grupo controle (p<0,05). Em relação à motilidade espermática, os maiores percentuais de células móveis foram observados nas amostras de sêmen conservadas em ACP 0,0g/L (controle) quando comparados aos demais tratamentos (p<0,05). Conclui-se que as concentrações antibióticas utilizadas no estudo (4,2 e 12,6 g/L) mostraram efeitos tóxicos logo após a diluição do sêmen suíno, afetando de forma negativa parâmetros seminais durante a conservação a 17 °C.

Due to bacterial contamination, antibiotics are used in semen extenders to inhibit bacterial growth during storage. Thus, the present study aimed to determine the toxicity limit of different antibiotic concentrations of penicillin/streptomycin added to the semen extender and investigate the influence on sperm motility. For this purpose, semen from five commercial hybrid breeders was collected once a week for 9 weeks, using the gloved hand technique. Each ejaculate was distributed equally among all treatments, which consisted of different concentrations of antibiotic solution: T1 = 0.0g/L (control); T2 = 4.2g/L; T3 = 12.6g/L. The semen diluted in powdered coconut water (ACP-103@) was kept for 5 days and analyzed on the following days: D0 (collection day), D2, and D4 (last conservation day) for sperm vigor and motility. In D0, the semen preserved in the diluent added with 12.6 g of antibiotic solution showed a lower sperm vigor value compared to the other treatments (p<0.05). In D2 and D4, treatments containing antibiotics presented vigor results below those obtained in the control group (p<0.05). Regarding sperm motility, higher percentages of mobile cells were observed in semen samples conserved in ACP 0.0 g/L (control) when compared to the other treatments (p<0.05). It is concluded that the antibiotic concentrations used in the study (4.2 and 12.6 g/L) showed toxic effects soon after the swine semen, negatively affecting seminal parameters during storage at 17 °C.

Assuntos

RESUMO

A manutenção do sêmen suíno sob condições de refrigeração tem se destacado como uma técnica eficiente para a difusão do material genético, através dos programas de inseminação artificial. Neste sentido, a adição de várias substâncias, como antioxidantes, ao diluente vem sendo adotada na conservação do sêmen de diversas espécies domésticas. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar a ação do ácido fítico adicionado ao diluente do sêmen conservado sob refrigeração, através da avaliação dos resultados de fertilidade de fêmeas suínas inseminadas. Foram utilizados quatro reprodutores (Agroceres) e setenta fêmeas para formação de lotes no decorrer de sete semanas. Os lotes de inseminação foram formados com o sêmen diluído em BTS (35 fêmeas) e BTS adicionado de ácido fítico na concentração de 525µM/100mL (35 fêmeas). Na avaliação dos resultados, considerou-se os seguintes aspectos: 1) taxa de fertilidade; 2) taxa de parição; 3) número total de leitões/parto; 4) número de leitões nascidos vivos/parto. Observou-se que as taxas de fertilidade e parição, assim como a prolificidade das porcas inseminadas com BTS e BTS adicionado de ácido fítico não diferiram estatisticamente (p>0,05). A adição do ácido fítico ao diluente BTS não influenciou os resultados reprodutivos das fêmeas suínas. Dessa forma, estudos futuros devem ser realizados a fim de avaliar a eficácia de diferentes concentrações do ácido fítico sobre a fertilidade e prolificidade de fêmeas suínas.

The maintenance of boar semen under refrigerated conditions has been highlighted as an effective technique for the diffusion of genetic material through artificial insemination programs. In this sense, the addition of several substances, such as antioxidants, to the diluente has been used in the conservation semen from various domestic species. Thus, this study aimed to investigate the action of phytic acid added to the semen extender, conserved under refrigeration by evaluating the fertility results obtained from inseminated swine females. Four boars (Agroceres), which were used for artificial insemination as semen donors, and seventy females were used to compose the lots during the seven weeks of the experiment. The insemination lots were formed with the semen diluted in BTS (35 females) and BTS added with phytic acid at 525µM/100mL (35 females). For results evaluation, the following aspects were considered: 1) fertility rate; 2) farrowing rate; 3) total number of piglets/delivery; 4) number of live birth piglets/delivery. It was observed that the fertility and farrowing rates, as well as the prolificacy of sows inseminated with BTS and BTS added with phytic acid did not differ statistically (p>0.05). The addition of phytic acid to the BTS diluent did not influence the reproductive results of swine. Therefore, further studies must be performed to evaluate the efficacy of different phytic acid concentrations on the fertility and prolificacy of sows.

Assuntos

RESUMO

A criopreservação seminal apresenta baixos resultados produtivos. Objetivou-se testar a Água de Coco em Pó (ACP-103®) como diluente de ressuspensão após a descongelação seminal e avaliar a qualidade espermática durante a curva de resfriamento até a descongelação do sêmen. Para isso, o sêmen de 15 reprodutores foi coletado uma vez por semana, incubado a 30 oC por 15 minutos, e em seguida diluído em Beltsville Thawing Solution BTS (controle) ou em ACP-103®, e submetidos a uma curva de resfriamento lenta, onde foram feitas análises de vigor e motilidade em cada passo. O sêmen descongelado foi ressuspenso em seus respectivos diluentes e analisado quanto às características: vigor, motilidade, vitalidade, integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante as análises de vigor e motilidade que compõem a curva de resfriamento, e na descongelação, para as análises de vitalidade e membrana acrossomal intacta, observou-se que não houve diferença significativa entre os tratamentos. Já após a descongelação, o BTS apresentou melhores resultados de vigor, motilidade espermática e funcionalidade da membrana. No entanto, a curva de resfriamento e o ACP-103® podem ser utilizadas no protocolo de criopreservação do sêmen suíno, visto que ambas asseguraram qualidade da viabilidade espermática.(AU)

Semen cryopreservation is associated with low productivity results. This study aimed to test the Coconut Water Powder (ACP®-103) as a ressuspension diluent after thawing semen, also evaluate sperm quality during the cooling curve until thawing of the semen. For this, the semen was collected from 15 boars once a week, incubated at 30 °C for 15 minutes, and afterwards, the samples were diluted in the diluent Beltsville Thawing Solution BTS (Control) or ACP-103®, and subjected to a slow cooling curve, where the force and the motility were analyzed in each step. The thawed semen was ressuspended in its respective solvents and analyzed in the characteristics of vigor, motility, vitality, acrosome integrity and functionality of the membrane. During the analysis of vigor and motility that make up the cooling curve, and thawing, for analysis of vitality and intact acrosomal membrane, it was observed that there was no significant difference between treatments. Besides, after thawing, the BTS showed better results of sperm vigor, sperm motility and membrane functionality. However, the cooling curve and coconut water powder can be used in the protocol for cryopreservation of boar semen, as both ensured quality of sperm viability that may be used in artificial insemination.(AU)

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RESUMO

Abstract Semen cryopreservation is associated with low productivity results. This study aimed to test the Coconut Water Powder (ACP®-103) as a ressuspension diluent after thawing semen, also evaluate sperm quality during the cooling curve until thawing of the semen. For this, the semen was collected from 15 boars once a week, incubated at 30 ºC for 15 minutes, and afterwards, the samples were diluted in the diluent Beltsville Thawing Solution - BTS (Control) or ACP-103®, and subjected to a slow cooling curve, where the force and the motility were analyzed in each step. The thawed semen was ressuspended in its respective solvents and analyzed in the characteristics of vigor, motility, vitality, acrosome integrity and functionality of the membrane. During the analysis of vigor and motility that make up the cooling curve, and thawing, for analysis of vitality and intact acrosomal membrane, it was observed that there was no significant difference between treatments. Besides, after thawing, the BTS showed better results of sperm vigor, sperm motility and membrane functionality. However, the cooling curve and coconut water powder can be used in the protocol for cryopreservation of boar semen, as both ensured quality of sperm viability that may be used in artificial insemination.

Resumo A criopreservação seminal apresenta baixos resultados produtivos. Objetivou-se testar a Água de Coco em Pó (ACP-103®) como diluente de ressuspensão após a descongelação seminal e avaliar a qualidade espermática durante a curva de resfriamento até a descongelação do sêmen. Para isso, o sêmen de 15 reprodutores foi coletado uma vez por semana, incubado a 30 ºC por 15 minutos, e em seguida diluído em Beltsville Thawing Solution - BTS (controle) ou em ACP-103®, e submetidos a uma curva de resfriamento lenta, onde foram feitas análises de vigor e motilidade em cada passo. O sêmen descongelado foi ressuspenso em seus respectivos diluentes e analisado quanto às características: vigor, motilidade, vitalidade, integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante as análises de vigor e motilidade que compõem a curva de resfriamento, e na descongelação, para as análises de vitalidade e membrana acrossomal intacta, observou-se que não houve diferença significativa entre os tratamentos. Já após a descongelação, o BTS apresentou melhores resultados de vigor, motilidade espermática e funcionalidade da membrana. No entanto, a curva de resfriamento e o ACP-103® podem ser utilizadas no protocolo de criopreservação do sêmen suíno, visto que ambas asseguraram qualidade da viabilidade espermática.

RESUMO

A criopreservação seminal apresenta baixos resultados produtivos. Objetivou-se testar a Água de Coco em Pó (ACP-103®) como diluente de ressuspensão após a descongelação seminal e avaliar a qualidade espermática durante a curva de resfriamento até a descongelação do sêmen. Para isso, o sêmen de 15 reprodutores foi coletado uma vez por semana, incubado a 30 oC por 15 minutos, e em seguida diluído em Beltsville Thawing Solution – BTS (controle) ou em ACP-103®, e submetidos a uma curva de resfriamento lenta, onde foram feitas análises de vigor e motilidade em cada passo. O sêmen descongelado foi ressuspenso em seus respectivos diluentes e analisado quanto às características: vigor, motilidade, vitalidade, integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante as análises de vigor e motilidade que compõem a curva de resfriamento, e na descongelação, para as análises de vitalidade e membrana acrossomal intacta, observou-se que não houve diferença significativa entre os tratamentos. Já após a descongelação, o BTS apresentou melhores resultados de vigor, motilidade espermática e funcionalidade da membrana. No entanto, a curva de resfriamento e o ACP-103® podem ser utilizadas no protocolo de criopreservação do sêmen suíno, visto que ambas asseguraram qualidade da viabilidade espermática.

Semen cryopreservation is associated with low productivity results. This study aimed to test the Coconut Water Powder (ACP®-103) as a ressuspension diluent after thawing semen, also evaluate sperm quality during the cooling curve until thawing of the semen. For this, the semen was collected from 15 boars once a week, incubated at 30 °C for 15 minutes, and afterwards, the samples were diluted in the diluent Beltsville Thawing Solution – BTS (Control) or ACP-103®, and subjected to a slow cooling curve, where the force and the motility were analyzed in each step. The thawed semen was ressuspended in its respective solvents and analyzed in the characteristics of vigor, motility, vitality, acrosome integrity and functionality of the membrane. During the analysis of vigor and motility that make up the cooling curve, and thawing, for analysis of vitality and intact acrosomal membrane, it was observed that there was no significant difference between treatments. Besides, after thawing, the BTS showed better results of sperm vigor, sperm motility and membrane functionality. However, the cooling curve and coconut water powder can be used in the protocol for cryopreservation of boar semen, as both ensured quality of sperm viability that may be used in artificial insemination.

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RESUMO

A identificação de proteínas presentes no sêmen possibilitará a busca por marcadores decongelabilidade. O presente trabalho teve como objetivo identificar proteínas espermáticas relacionadas com aproteção durante a criopreservação. O sêmen de quatorze reprodutores foi coletado uma vez por semana,descongelado, ressuspenso e analisado. Para o estudo da proteômica, estes foram submetidos à eletroforesebidimensional. A busca por marcadores de congelabilidade, foi feita pela divisão dos animais em dois grupos:congelabilidade boa (GFEs) e ruim (PFEs), através dos resultados de vigor e motilidade após a descongelação.Isto possibilitou comparar as proteínas presentes em cada grupo e correlacioná-las com a criopreservação dosêmen. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso. A análise estatística foi processadaatravés da avaliação das médias e desvios padrões, com os testes de Mann-Witney e o teste t de Student. Paracomparação foi utilizado o teste ANOVA com pós-teste de Tukey (5%). Os animais de GFEs = 2,2 ± 0,8 e 41,8± 22,9 e os de PFEs = 1,9 ± 0,6 e 26,8 ± 17,5. Foram encontrados 263 ± 62,2 spots por gel e um total de 234,2 ±54,6 spots de forma consistente nos géis dos animais. Foram encontrados 5 spots que divergiram entre os grupos(3 mais expressos no PFES e 2 spots no GFEs). No estudo da composição proteica da membrana espermática, oscinco spots detectados podem atuar como possíveis marcadores de congelabilidade para o sêmen suíno.

The identification of proteins present in the semen wil enable the search for freezin markers. This studyaimed identify the spermatic proteins that are related to the protection during cryopreservation. The semen fromfourteen boars was collected once a week, thawed, ressuspended and analyzed. For the study of proteomic, theywere subjected to two-dimensional electrophoresis. To search for freezability markers, was made a division ofthe animals into two groups: good and bad freezability, through the results of vigour and motility after thawing.This made possible the comparison of the proteins present in each group and correlation between them andsemen cryopreservation. The experimental lineation was in randomized blocks. The statistical analysis wasmade by evaluating the means and standard deviations, in which were applied the Mann-Whitney and Student ttest. For comparison was used the ANOVA test with Tukey post-test was used (5%). The animals of GFEs = 2.2± 0.8 and 41.8 ± 22.9 and the PFEs = 1.9 ± 0.6 and 26.8 ± 17.5. Were found 263 ± 62.2 spots per gel and a totalof 234.2 ± 54.6 spots was consistently detected in the gels of the animals. The five spots that differed betweengroups were found (3 with greater intensity in PFES and 2 spots in GFEs). In the study of protein composition ofthe membrane sperm, the five spots detected can act as potential markers for boar semen freezability.

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RESUMO

A identificação de proteínas presentes no sêmen possibilitará a busca por marcadores decongelabilidade. O presente trabalho teve como objetivo identificar proteínas espermáticas relacionadas com aproteção durante a criopreservação. O sêmen de quatorze reprodutores foi coletado uma vez por semana,descongelado, ressuspenso e analisado. Para o estudo da proteômica, estes foram submetidos à eletroforesebidimensional. A busca por marcadores de congelabilidade, foi feita pela divisão dos animais em dois grupos:congelabilidade boa (GFEs) e ruim (PFEs), através dos resultados de vigor e motilidade após a descongelação.Isto possibilitou comparar as proteínas presentes em cada grupo e correlacioná-las com a criopreservação dosêmen. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso. A análise estatística foi processadaatravés da avaliação das médias e desvios padrões, com os testes de Mann-Witney e o teste t de Student. Paracomparação foi utilizado o teste ANOVA com pós-teste de Tukey (5%). Os animais de GFEs = 2,2 ± 0,8 e 41,8± 22,9 e os de PFEs = 1,9 ± 0,6 e 26,8 ± 17,5. Foram encontrados 263 ± 62,2 spots por gel e um total de 234,2 ±54,6 spots de forma consistente nos géis dos animais. Foram encontrados 5 spots que divergiram entre os grupos(3 mais expressos no PFES e 2 spots no GFEs). No estudo da composição proteica da membrana espermática, oscinco spots detectados podem atuar como possíveis marcadores de congelabilidade para o sêmen suíno.(AU)

The identification of proteins present in the semen wil enable the search for freezin markers. This studyaimed identify the spermatic proteins that are related to the protection during cryopreservation. The semen fromfourteen boars was collected once a week, thawed, ressuspended and analyzed. For the study of proteomic, theywere subjected to two-dimensional electrophoresis. To search for freezability markers, was made a division ofthe animals into two groups: good and bad freezability, through the results of vigour and motility after thawing.This made possible the comparison of the proteins present in each group and correlation between them andsemen cryopreservation. The experimental lineation was in randomized blocks. The statistical analysis wasmade by evaluating the means and standard deviations, in which were applied the Mann-Whitney and Student ttest. For comparison was used the ANOVA test with Tukey post-test was used (5%). The animals of GFEs = 2.2± 0.8 and 41.8 ± 22.9 and the PFEs = 1.9 ± 0.6 and 26.8 ± 17.5. Were found 263 ± 62.2 spots per gel and a totalof 234.2 ± 54.6 spots was consistently detected in the gels of the animals. The five spots that differed betweengroups were found (3 with greater intensity in PFES and 2 spots in GFEs). In the study of protein composition ofthe membrane sperm, the five spots detected can act as potential markers for boar semen freezability.(AU)

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