RESUMO
BACKGROUND: Smac/DIABLO is a proapoptotic protein deregulated in breast cancer, with a controversial role as a tumor marker, possibly due to a lack of correlative mRNA and protein analyses. OBJECTIVE: To investigate the association of Smac/DIABLO gene and protein levels with clinical variables in breast cancer patients. METHODS: Smac/DIABLO mRNA expression was analyzed by qPCR in 57 frozen tissues, whereas protein levels were assessed by immunohistochemistry in 82 paraffin-embedded tissues. Survivin mRNA levels were also measured. In vitro assays were performed to investigate possible regulators of Smac/DIABLO. RESULTS: Higher levels of Smac/DIABLO mRNA and protein were found in estrogen receptor (ER)-positive samples (p= 0.0054 and p= 0.0043, respectively) in comparison to ER-negative tumors. A negligible positive association was found between Smac/DIABLO and survivin expression. In vitro assays showed that Smac/DIABLO is not regulated by ER and, conversely, it does not participate in ER expression modulation. CONCLUSIONS: mRNA and protein levels of Smac/DIABLO were increased in ER-positive breast tumors in comparison with ER-negative samples, although the mechanism of this regulation is still unknown. Public databases showed a possible clinical relevance for this association.
Assuntos
Proteínas Reguladoras de Apoptose/genética , Neoplasias da Mama/metabolismo , Proteínas Mitocondriais/genética , Receptores de Estrogênio/metabolismo , Adulto , Idoso , Idoso de 80 Anos ou mais , Feminino , Humanos , Pessoa de Meia-Idade , TransfecçãoRESUMO
PURPOSE: Analyze the expression of caspase-9, Smac/DIABLO, XIAP, let-7a, and let-7b in patients with normal gastric tissue, chronic gastritis, and gastric adenocarcinoma. METHODS: The expression of caspase-9, Smac/DIABLO, XIAP, let-7a, and let-7b by qRT-PCR was analyzed in 158 samples from 53 patients with normal gastric mucosa, 86 with chronic gastritis, and 19 with gastric cancer. RESULTS: The comparison between the gastric cancer and the control group revealed a decreased expression of caspase-9 in gastric cancer tissues; considering the Helicobacter pylor presence, comparable results were revealed. Smac/DIABLO was increased in gastric cancer cells, while XIAP demonstrated no significant difference in the gene expression. The microRNA analysis revealed a decreased expression of let-7a and let-7b in samples positive to H. pylori infection and in gastric cancer group, regardless of the presence of the bacterium. CONCLUSION: Our study provided some evidence of low activity of the intrinsic apoptosis pathway, as well as the influence of H. pylori on let-7a and let-7b expression.
Assuntos
Adenocarcinoma/genética , Apoptose/genética , Biomarcadores Tumorais/genética , Carcinogênese/genética , Neoplasias Gástricas/genética , Adenocarcinoma/patologia , Adulto , Idoso , Proteínas Reguladoras de Apoptose/genética , Biópsia , Caspase 9/genética , Feminino , Mucosa Gástrica/microbiologia , Mucosa Gástrica/patologia , Gastrite/genética , Gastrite/microbiologia , Gastrite/patologia , Perfilação da Expressão Gênica , Regulação Neoplásica da Expressão Gênica , Infecções por Helicobacter/genética , Infecções por Helicobacter/microbiologia , Infecções por Helicobacter/patologia , Helicobacter pylori/isolamento & purificação , Humanos , Masculino , MicroRNAs/genética , Pessoa de Meia-Idade , Proteínas Mitocondriais/genética , Neoplasias Gástricas/microbiologia , Neoplasias Gástricas/patologia , Proteínas Inibidoras de Apoptose Ligadas ao Cromossomo X/genéticaRESUMO
Calicivirus infection causes intrinsic apoptosis, leading to viral propagation in the host. During murine norovirus infection, a reduction in the anti-apoptotic protein survivin has been documented. Here we report that in feline calicivirus infection, a downregulation of the anti-apoptotic proteins survivin and XIAP occur, which correlates with the translocation of the pro-apoptotic protein Smac/DIABLO from the mitochondria to the cytoplasm and the activation of caspase-3. Inhibition of survivin degradation by lactacystin treatment caused a delay in apoptosis progression, reducing virus release, without affecting virus production. However, the overexpression of survivin caused a negative effect in viral progeny production. Overexpression of the leader of the capsid protein (LC), but not of the protease-polymerase NS6/7, results in the downregulation of survivin and XIAP, caspase activation and mitochondrial damage. These results indicate that LC is responsible for the induction of apoptosis in transfected cells and most probably in FCV infection.
Assuntos
Apoptose , Infecções por Caliciviridae/metabolismo , Calicivirus Felino/fisiologia , Proteínas do Capsídeo/metabolismo , Regulação para Baixo , Survivina/genética , Proteínas Inibidoras de Apoptose Ligadas ao Cromossomo X/genética , Animais , Infecções por Caliciviridae/virologia , Proteínas do Capsídeo/química , Gatos , Linhagem Celular , Expressão Gênica , Interações Hospedeiro-Patógeno , Proteínas Mitocondriais/metabolismo , Transporte Proteico , Survivina/metabolismo , Proteínas Virais/biossíntese , Replicação ViralRESUMO
O fato de o melanoma ser uma doença com comportamento clínico muito peculiar a cada paciente, a despeito dos aspectos clínicos e epidemiológico já bem estabelecidos e, por nem sempre essas variáveis serem suficientes para predizer com acurácia o prognóstico específico, justifica-se este trabalho, onde foi avaliada a expressão das proteínas inibidoras de apoptose c-IAP2, XIAP, Survivina e Smac/Diablo em amostras de melanomas primários com espessura igual ou maior que 1 mm, com e sem micrometástases em linfonodo sentinela, recuperadas em prontuários de 63 pacientes tratados no período de 1997 a 2007 cujas informações atendiam aos critérios de inclusão para esta investigação. Após a devida revisão das lâminas e blocos para confirmação diagnóstica e para estabelecimento dos parâmetros prognósticos, as áreas representativas dos tumores foram cuidadosamente selecionadas em lâminas coradas por HE, e os blocos com tecido tumoral foram utilizados para a construção de tissue microarrays (TMAs). Os resultados foram classificados em positivos ou negativos, de acordo com a intensidade da reação e porcetagem do tumor acometido. Esses achados foram correlacionados com a sobrevida câncer-específica e livre da doença em cinco anos. Os aspectos epidemiológicos, clínicos e histológicos desses melanomas cutâneos são apresentados descritivamente. Foi observada expressão positiva de XIAP em 93,9% das amostras; de Smac/Diablo em 84,6%; de c-IAP-2 em 72,1%; e de Survivina em 23,4% das amostras. Não houve associação significativa entre a expressão dessas proteínas e a sobrevida câncer-específica e livre da doença dos pacientes em cinco anos.
Expression of inhibitor of apoptosis protein c-IAP2, XIAP, Survivin, and Smac/Diablo was assessed in samples of > 1 mm primary melanomas with or without sentinel lymph nodes micro metastasis collected from the files of 63 patients treated along 1997 to 2007 whose information was in accordance with the inclusion criteria adopted for this investigation. After due revision of slides and blocks for confirming diagnosis and establishing prognostic parameters, representative tumor areas were carefully selected in slides stained by HE, and tissue microarrays (TMAs) were constructed using the blocks with tumor tissue. Two fragments of each sample from different tumor areas were deposited in the receptor block, and slides were read in optical microscopy by the same pathologist. Positive or negative results were classified according the intensity of the reaction. Such findings were correlated with cancer-specific and disease-free survival in five years. Epidemiologic, clinical, and histological findings are described. XIAP was positive in 93.9%, Smac/Diablo in 84.6%, c-IAP-2 in 72.1%, and Survivin in 23.4% of the specimens. There were no significant associations between the expression of the studied inhibitor of apoptosis proteins and cancer-specific or disease-free survival in five years
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Idoso , Idoso de 80 Anos ou mais , Proteínas Inibidoras de Apoptose , Melanoma , Neoplasias Cutâneas , Análise de Sobrevida , Proteínas Inibidoras de Apoptose Ligadas ao Cromossomo X , Proteína 3 com Repetições IAP de Baculovírus , SurvivinaRESUMO
El virus de la Lengua azul (VLA) es un ARN virus de doble cadena que induce apoptosis tanto en cultivos celulares como en tejidos blanco. Con el fin de dilucidar el mecanismo de apoptosis en la infección por el VLA, en el presente trabajo examinamos en detalle, por la técnica de Western blot, las señales celulares de caspasas, Bax, citocromo c, Smac/DIABLO y factor nuclear kappa B (NF-kB) que se activan en la infección viral. Hemos comprobado que luego de la infección in vitro con el VLA, se detectó la activación de la caspasa 8 y con ello el mecanismo extrínseco de la apoptosis. También detectamos por primera vez no sólo la activación de miembros de la familia Bcl-2 (Bax), sino también la liberación del citocromo c y la proteína Smac/DIABLO, confirmando que en la infección por el VLA está involucrado el mecanismo secuencial intrínseco de la apoptosis. Asimismo, demostramos que la infección por el VLA activa el NF-kB y que la apoptosis es sustancialmente reducida mediante la inhibición del mismo. La activación de las señales celulares tales como Bax, citocromo c, Smac/DIABLO y NF-kB presentados en este trabajo, esclarecen los mecanismos apoptóticos durante la infección por el VLA para una mayor comprensión del papel primario que juega la apoptosis en la patogénesis del virus.
Bluetongue (BTV) is a double-stranded RNA virus that induces apoptosis both in mammalian cell cultures and in target tissues. To elucidate the apoptosis pathways in BTV infection, we have examined in detail the apoptosis mechanism by examination of caspases, Bax, cytochrome c, Smac/DIABLO and NF-kB signalling pathways. In this report, after cell infection with BTV, the activation of caspase 8 was detected, proving the extrinsic receptor binding apoptotic pathway. Apoptosis followed a sequential pathway involving the detection of activated Bcl-2 family members. Furthermore, its translocation to the mitochondria, as well as the release of cytochrome c and Smac/Diablo confirmed that BTV apoptosis involves the sequential intrinsic pathway. In addition, we demonstrated that NF-kB was activated following BTV infection and cell treatment with an inhibitor peptide before BTV infection, prevented NF-kB activation and substantially reduced cellular apoptosis. Our accumulating data concerning the activation of Bax, cytochrome c, Smac/DIABLO and NF-kB clarify the mechanism of apoptosis during BTV infection, and confer a better understanding of the primary role of apoptosis in BTV pathogenesis.
Assuntos
Humanos , Apoptose/fisiologia , Vírus Bluetongue/fisiologia , Transdução de Sinais/fisiologia , Efeito Citopatogênico Viral , Caspases/metabolismo , Citocromos c/metabolismo , Ativação Enzimática , Células HeLa/virologia , Peptídeos e Proteínas de Sinalização Intracelular/metabolismo , Mitocôndrias/fisiologia , Proteínas Mitocondriais/metabolismo , NF-kappa B/antagonistas & inibidores , NF-kappa B/metabolismo , Peptídeos/farmacologiaRESUMO
Leucemia mielóide crônica (LMC) é uma doença mieloproliferativa com expansão clonal de células malignas. O cromossomo Philadelphia, derivado da translocação recíproca entre os cromossomos 9 e 22, resulta em um gene quimérico chamado BCR-ABL, encontrado em 90 (por cento) dos pacientes com LMC, sendo atribuída a essa quimera a patogênese da LMC. Imatinibe, um fármaco alvo-específico, liga-se e estabiliza a forma inativa da Bcr-Abl impedindo os efeitos da proteína. O desenvolvimento de resistência ao Imatinibe e a persistência de doença residual mínima tem desanimado os investigadores, além disso, respostas ao Imatinibe são menos freqüentes e mais curtas em pacientes que se encontram nos estágios mais avançados da LMC. Levando em conta que a resistência ao Imatinibe poder ser multifatorial, a identificação dos mecanismos de envolvidos na resistência pode levar a ganhos em sobrevida para os pacientes...