RESUMO
Objetivo: Determinar los mecanismos de resistencia antibiótica y la epidemiología molecular de aislados clínicos de Klebsiella pneumoniae resistentes a carbapenémicos. Materiales y métodos: 30 aislados multirresistentes de K. pneumoniae fueron obtenidos a partir de: urocultivo, aspirado traqueal, secreción de herida, sonda vesical, hemocultivo, líquido peritoneal, punta de catéter, colección abdominal y secreción bronquial. Los aislados fueron colectados de noviembre de 2012 a abril de 2013. La identificación y susceptibilidad antibiótica fue determinada por el sistema automatizado VITEK 2. Para la amplificación de genes de resistencia se empleó PCR, la determinación de las Secuencias Tipo (ST) fue obtenida por tipificación multilocus de secuencias (MLST) y la relación clonal fue establecida por electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE). Resultados: Todos los aislados mostraron fenotipos multirresistentes, excepto a colistina y tigeciclina. El 100% de los aislados fue productor de la carbapenemasa KPC-2. La determinación de la presencia de genes codificantes de β-lactamasas de Espectro Extendido mostró que el 67% de los aislados fue positivo para el gen blaCTX-M, el 100% fue positivo para el gen blaSHV y 93% fue positivo para el gen blaTEM. El análisis de la relación clonal de los 30 aislados agrupó a 20 en un mismo pulso tipo. El análisis por MLST demostró que la ST predominante fue ST258 presente en el 60% de la población, seguida de ST1199 presente en el 20% de la población analizada. Conclusiones: Los resultados obtenidos demuestran la importancia de implementar y combinar estudios epidemiológicos, clínicos y moleculares para comprender la distribución de la resistencia entre bacterias de interés clínico.
Objective: To determine the mechanism of antibiotic resistance and molecular epidemiology of carbapenem resistant isolates of Klebsiella pneumoniae. Materials and Methods: 30 multidrug resistant isolates of K. pneumoniae were obtained from urine culture, tracheal aspirate, wound secretion, bladder catheter, blood culture, peritoneal fluid, catheter tip, abdominal collection, and bronchial secretion. K. pneumoniae isolates were collected between November 2012 and April 2013. Identification and susceptibility were determined by the VITEK 2 system. Resistance genes were identified by PCR, sequence type (ST) was established by multilocus sequence typing (MLST), and clonal relationship was defined by pulsed field gel electrophoresis (PFGE). Results: All isolates were multidrug resistant and susceptible to colistin and tigecycline. 100% of isolates produced KPC-2 carbapenemase. This study detected Extended Spectrum β-Lactamases enconding genes. 67% of isolates were positive for blaCTX-M, 100% were positive for blaSHV, and 93% of isolates were positive for blaTEM. Analysis of the clonal relationship clustered 20 isolates in the same clonal complex. Multilocus sequence typing showed the predominant sequence type ST 258 in 60% of population. ST 1199 were present in 20% of bacterial population. Conclusion: Molecular epidemiology, clinical research and molecular biology studies improve understanding of mechanisms of resistance distribution among bacteria of clinical interest.
Assuntos
Humanos , Enterobacteriáceas Resistentes a Carbapenêmicos , Klebsiella pneumoniae , Resistência Microbiana a Medicamentos , Estudos Epidemiológicos , Amplificação de Genes , Tipagem de Sequências Multilocus , Estudos Clínicos como AssuntoRESUMO
INTRODUCTION: Carbapenems resistance is a growing phenomenon and a threat to public health because of the reduced therapeutic options for resistant infections. METHODS: A retrospective case-control study was conducted in 2 tertiary-care hospitals in Medellín, Colombia. Fifty patients infected with ertapenem-resistant enterobacteriaceae were compared with a control group consisting of 100 patients with infections caused by ertapenem susceptible enterobacteriaceae. A multivariate logistic regression model was used to identify factors that best explain ertapenem-resistant enterobacteriaceae infections. RESULTS: The factors associated with ertapenem-resistant enterobacteriaceae infections were prior exposure to carbapenems (adjusted OR 3.43; 95% IC 1.08-10.87) and prior exposure to cefepime (adjusted OR 6.46; 95% IC 1.08-38.38). CONCLUSION: Prior exposure to antibiotics is the factor that best explains the ertapenem-resistant enterobacteriaceae infection in this population, highlighting the importance of antimicrobial stewardship programs in hospitals.
Assuntos
Infecção Hospitalar/microbiologia , Infecções por Enterobacteriaceae/microbiologia , Enterobacteriaceae/efeitos dos fármacos , Ertapenem/farmacologia , Centros de Atenção Terciária/estatística & dados numéricos , Resistência beta-Lactâmica , Idoso , Gestão de Antimicrobianos , Carbapenêmicos/uso terapêutico , Estudos de Casos e Controles , Cefepima/uso terapêutico , Colômbia/epidemiologia , Infecção Hospitalar/tratamento farmacológico , Infecção Hospitalar/epidemiologia , Grupos Diagnósticos Relacionados , Enterobacteriaceae/isolamento & purificação , Infecções por Enterobacteriaceae/tratamento farmacológico , Infecções por Enterobacteriaceae/epidemiologia , Feminino , Humanos , Modelos Logísticos , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Estudos Retrospectivos , Fatores de RiscoRESUMO
Após o surgimento e disseminação das ß-lactamases de amplo espectro em membros da família Enterobacteriaceae, os antibióticos carbapenêmicos (imipenem, meropenemeertapenem) têm sido considerados a terapia de escolha devido à estabilidade apresentada contra estas enzimas. A desvantagem destes antibióticos é a sua capacidade de induzir resistência aos ß-lactâmicos e a outros antibióticos quimicamente não relacionados. O imipenem tem favorecido a indução de cefalosporinases cromossômicas (AmpC) e também tem sido relacionado, in vivo, com a seleção de mecanismos intrínsecos de resistência, contribuindo com o perfil multi -droga resistente (MDR). Esse perfil é freqüentemente associado à diminuição da permeabilidade por alteração na síntese de porinas em conjunto com um aumento da atividade de bombas de efluxo, as quais não permitem o estabelecimento de uma concentração ativa do antibiótico no interior da célula bacteriana. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o estabelecimento do perfil MDR em enterobactérias provenientes de isolados clínicos em função da exposição a diferentes concentrações de imipenemin vitro. A seleção do grupo das amostras estudadas foi feito por meio da determinação do perfil de sensibilidade dos isolados, tipagem molecular e ensaio de hidrólise de Imipenem. Nos isolados selecionados para a indução foi realizada numa etapa inicial (etapa basal) a análise de porinas de membrana externa por SDS-PAGE e o estudo de genes codificadores de ß-lactamases pela técnica de PCR. O estudo do estabelecimento do perfil MDR foi feito por meio de passagens sucessivas das amostras em meio contendo concentrações sub-inibitórias de imipenem seguido de análise fenotípica (CIM e acúmulo do antibiótico intracelular e SDS-PAGE), e a análise da expressão gênica de genes associados a permeabilidade de membrana (ompC, ompF eAcrA) e genes reguladores(marA e ompR). Após a indução com o imipenem, 77% dos isolados induzidos aumentaram a CIM para os carbapenêmicos, mudando assim o perfil de resistência observado na etapa basal Também foi afetado o perfil de resistência para outros antibióticos não relacionados a ß-lactámicos, porém numa percentagem menor. Com relação à alteração da permeabilidade, a perda de porina foi observada apenas para um isolado, no entanto a diminuição na expressão gênica de Omp36 foi significativa desde o começo da indução. A expressão da bomba de efluxoAcrAB foi afetada pela indução com imipenem, aumentando significativamente a expressão de AcrA, enquanto os reguladores estudados, MarA e OmpR tiveram a sua expressão induzida pelo imipenem. Foi possível observar também associação do nível de expressão gênica do regulador MarA com a expressão de AcrA,porém não foi possível observar uma associação estatisticamente significativa deste regulador com o perfil de expressão de OMPs. A indução de OmpR foi associado com um aumento da expressão de RNAm de Omp35, já para Omp36 foi possível observar apenas uma tendência na repressão deste gene. O estudo da resposta destes genes reguladores e determinantes de resistência, em resposta à exposição ao com o imipenem in vitro, permitiu reportar o comportamento molecular da bactéria numa resposta adaptativa no estagio inicial do estabelecimento do fenótipo MDR. A utilização de isolados clínicos com diversos determinantes de resistência permitiu observar a variabilidade nas respostas adaptativas das enterobacterias, o que é fundamental para a compreensão dos mecanismos de adaptação da bactéria e sua contribuição na falha terapêutica
After emergence and broad dissemination of extended spectrum ß-lactamases into the Enterobacteriaceae family, the carbapenemic antibiotics (imipenem, meropenem and ertapenem) have been considered the chosen therapy in the treatment of nosocomial infections by the stability that these antibiotics show to these enzymes. The disadvantage of carbapenems is theirs capacity to induce resistance against ß-lactamics and to other chemically unrelated antibiotics. The imipenem has been shown to induce chromosomal cephalosporinases (AmpC) and it was also related, in vivo, with the selection of intrinsic mechanism leading to multi-drug resistance profile (MDR). This profile is usually associated with membrane impermeability due to reduced outer membrane porin synthesis with an incremented activity of efflux pumps, which results in a reduced concentration of antibiotics inside the bacteria. This study aimed to evaluate the establishment of the MDR profile in Enterobacteriaceae from clinical isolates by exposure to different concentrations of imipenem in vitro. The selection of the study group was performed by determination of antibiotic susceptibility profile,molecular typing and hydrolysis assay of imipenem. In the selected isolates submitted to induction, in an initial step (baseline), was performed the outer membrane porin analysis by SDS-PAGE and the gene-specific amplification of B-lactamase enzymes by PCR. The study of the establishment of MDR was performed by progressive passages with subclinical concentrations of imipenem, followed each one by the evaluation of phenotypic profile (MIC, accumulation antibiotic in celland SDS-PAGE) and gene expression analysisof genes related to membrane permeability (ompC, ompF and acrA) and regulatory genes(MarA and ompR). After induction with imipenem, 77 % of the isolates increased the MIC for the carbapenems, changing the resistance profile at the baseline. In a lesser percentage, the resistance profile to other ß-lactams-unrelated antibiotics was also affected. Loss of porin was observed only for an isolated, however a significantly decreased Omp36 mRNA expression was observed from the start of induction. The expression of the efflux pump AcrAB ,was also affected by the imipenem induction, significantly increasing the AcrA gene expression, whereas the studied regulatory genes,MarA and OmpR,were induced by the imipenem. It was also possible to observe an association between the expression of the regulator MarA and the expression of AcrA, nevertheless no association was observed between this regulator and OMPs . OmpR induction was associated with an increased Omp35mRNA expression, however only a trend for the repression of Omp36was observed. The study of the response of these regulatory genes and genetic determinants of resistance, in response to the imipenem exposure in vitro, allowed to report the molecular behavior of the bacteria in an adaptive response in the initial stage of the establishment of a MDR phenotype. The use of clinical isolates with diverse resistance determinants allowed observing the variability in adaptive responses in enterobacteria, which is important to understand the adaptive mechanisms of bacteria to this antibiotic, the involvement in the emergence of the MDR profile and its contribution to the treatment failure