RESUMO
Se estudió la presencia del ácido desoxirribonucleico (ADN) que codifica para el antígeno de superficie del virus de hepatitis B (AgsHB) en los tejidos de ratones híbridos de transgénicos/BALB-c donde se había expresado el fenotipo previamente. Los órganos extraídos se evaluaron por la técnica de inmunohistoquímica, por un ELISA cuantitativo y reacción en cadena de la polimerasa (RCP) para la detección del ADN viral. En los tejidos estudiados se encontró ADN viral, excepto en el intestino donde no se evidenció su presencia en ninguno de los especímenes. Con la técnica de inmunohistoquímica no se logró detectar expresión de la proteína viral en intestino, músculo y vesícula seminal, sólo muy baja expresión en cerebro. Mediante la técnica inmunoenzimática no se detectó AgsHB en músculo, intestino, cerebro y estómago. Al evaluar el suero de la totalidad de los animales por medio de la técnica inmunoenzimática y con la RPC, 100 % de los sueros fueron positivos.
A study was made on the presence of DNA coding for Hepatitis B surface antigen (HbsAg) in hybrid transgenic /Balb-c mice where the phenotype had not been expressed before. The extracted organs were evaluated by immunohistochemistry, by quantitative ELISA and polymerase chain reaction (PCR) for detecting viral DNA which was found in the studied tissues except for the intestines in which none of the species was evident. The immunohistochemical technique did not manage to detect the expression of viral protein in the intestines, muscles and seminal vesicle, only a very low expression of such protein in the brain. The immunoenzymatic technique did not detect HbsAG in muscles, intestines, brain or stomach. However, when evaluationg the sera of all the animals by immunoenzymatic technique and PCR, 10% pf tje sera were positive to viral DNA.
RESUMO
Se evaluó la influencia de las concentraciones de las partículas asociadas con el virus de hepatitis B desde el punto de vista inmunológico mediante la formación de inmunocomplejos específicos (ICE), se determinó el DNA antes y después de formado el inmunocomplejo. Se utilizaron 10 muestras serológicas de pacientes portadores crónicos con antigenemia baja (menos de 1 mg/mL), a las que se les realizó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (RCP) para detección del ADN viral. A cada muestra se le aplicó la técnica de ICE mediante un estándar de anticuerpos para su formación in vitro, se realizó una purificación con fenol cloroformo para ser procesado por RCP. La amplificación de las muestras con inmunocomplejos demostró que la técnica de ICE poseía capacidad de concentrar el antígeno y éste pudo ser detectado cuando no era posible determinar las concentraciones en una electroforesis de agarosa.
We evaluated the influence of the concentrations of particles associated with Hepatitis B virus from the immunologic viewpoint through the formation of specific antibody-antigen complexes, and also we determined DNA before and after the formation of the complexes. We used 10 serological samples of chronic carrier patients with low antigenemia(less than 1µg/mL) which were subjected to PCR for detecting viral DNA. The antibody-antigen complex technique was used in each sample through standard antibodies for the complex to be formed in vitro, then purification with phenol chrololform to be PCR-processed. The amplification of samples with the antibody-antigen complexes showed that this technique was able to concentrate antigens, so it could be detected when it was impossible to determine antigen concentrations in an agar electrophoresis.
RESUMO
Se introdujo la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa para la caracterización intratípica de Poliovirus. Se usaron cebadores que sólo promueven la ampliación de las cepas vacunales de Sabin, comprobada por corrida electroforética de los productos de ADN amplificados (Sabin 1-97 pb, Sabin 2-71 pb, Sabin 3-44 pb) y cuya especificidad se verificó satisfactoriamente. Se estudiaron por esta técnica 23 cepas cubanas de Poliovirus aisladas e identificadas en el Laboratorio de Enterovirus del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" de 1993 a 1994, y todas resultaron ser del tipo vacunal. Se observó cómo el Poliovirus vacunal de Sabin puede ser causa de meningoencefalitis viral como complicación neurológica más leve. Este estudio aportó una evidencia más a favor de la no circulación del Poliovirus salvaje en Cuba.
The polimerase chain reaction techniques was introduced for the intratypic characterization of Poliovirus. Primers were used only to promote the amplification of the Sabin vaccine strains proved by electrophoretic run of the amplified DNA products (Sabin 1 - 97 pb, Sabin 2 - 71 pb, Sabin 3 - 44 pb) and whose specificity was satisfactorily verified. 23 Cuban poliovirus strains isolated and identified at the Laboratory of Enterovirus of the "Pedro Kourí" Tropical Medicine Institute from 1993 to 1994 were studied by this technique. All of them were of the vaccine type. It was observed how the Sabin vaccine poliovirus may be the cause of viral meningoencephalitis as a milder neurological complication. Tghis study provided one more evidence about the non circulation of the wild poliovirus in Cuba.
Assuntos
Humanos , Poliovirus/classificação , Reação em Cadeia da Polimerase/métodos , Sequência de Bases , Dados de Sequência Molecular , Sondas de Oligonucleotídeos , Poliovirus/genética , Poliovirus/isolamento & purificação , Reação em Cadeia da Polimerase/estatística & dados numéricos , RNA Viral/genéticaRESUMO
Estudios recientes han permitido caracterizar molecularmente el defecto genético o mutación FMR-1 del síndrome frágil X. Esta mutación consiste en variaciones de repeticiones del triplete CGG del gen, que varían del rango normal a la mutación completa y pasan por rangos intermedios o premutaciones. Debido a que el individuo afectado además expresa un porcentaje variable de sitio frágil Xq27.3 (FRAXA) en su cariotipo, en este trabajo se presenta una correlación clínica y citogenética con la caracterización molecular del gen FMR-1 realizada por 2 métodos directos: Southern blot y reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en 5 varones afectados y 5 mujeres portadoras, a propósito del diagnóstico prenatal en una de ellas. El análisis de las caracterizaciones clínicas, físicas y neuropsicológicas previamente delineadas, llevaron a la conclusión de que éstas, así como la frecuencia en porcentaje de FRAXA, se correlacionan en los varones afectados con la elongación que experimenta la mutación al trasmitirse de una generación a la siguiente a través de mujeres portadoras, en quienes por otra parte, estas características son heterogéneas y susceptibles a sobrelapamiento tanto por efecto genómico como por factores ambientales psicofamiliares.
Recent studies have allowed to characterize molecularly the genetic defect or FMR-1 mutation of the fragile X syndrome. This mutation consists in variations of repetitions of the gene's CGG triplet that came from the normal range to the complete mutation, passing through intermediate ranges or premutations. Due to the fact that the affected individual also shows a variable percentage of Xq27.3 fragile site (FRAXA) in his karyotype, it is presented in this paper a clinical and cytogenetic correlation with the molecular characterization of the FMR-1 gen carried out by 2 direct methods: Southern Blot and polymerase chain reaction (PCR) in 5 affected males and 5 female carriers, one of them with prenatal diagnosis. The analysis of the clinical, physical and neuropsychological characterizations previously delineated, led to the conclusion that these, as well as the FRAXA frequency in percentage, are correlated among the affected males with the elongation the mutation suffers on being transmitted from one generation to another through female carriers, in whom these characteristics are heterogeneous and susceptible to overlapping as a result of genomic effect and of environmental psychofamilial factors.
RESUMO
Se emplearon 4 juegos de cebadores que permitieron la amplificación de una secuencia nucleotídica con talla única para cada uno de los serotipos del virus del dengue mediante la reacción en cadena de la polimerasa (RCP), con un método que consistió de extracción del ácido ribonucleico (ARN) de sobrenadante de cultivos celulares infectados, transcripción reversa - reacción en cadena de la polimerasa (TR-RCP), todo lo cual pudo ser completado en aproximadamente 7 horas, en un simple tubo. La talla de la secuencia amplificada se evidenció por electroforesis en un gel de agarosa, teñido con bromuro de etidio. El método demostró una sensibilidad de al menos 2,5 unidades formadoras de placa (ufp) por tubo de reacción, siendo útil para la detección e identificación simultánea de los 4 serotipos, a partir de sobrenadante de cultivos infectados de cepas provenientes de varios países del Caribe, América Central y del Sur.
4 primer sets, were used to allow the amplification of a nucleotide sequence with unique size for each of the dengue virus serotypes by polymerase chain reaction (PRC). The method consisted in the extraction of ribonucleic acid from supernatant of infected cell cultures, reverse transcription - polymerase chain reaction (RT-PCR). This was completed in approximately 7 hours in a simple tube. The size of the amplified sequence was evidenced by electrophoresis in Agarose gel stained with ethidium. The method showed a sensitivity of at least 2.5 plate forming units (pfu) per tube of reaction. It es useful for the detection and simultaneous identification of the 4 serotypes, starting from supernatants of infected strains cultures from different countries of the Caribbean, Central America, and South America.
RESUMO
Se describe en este trabajo la detección de Escherichia coli enterotoxigénica LT(+). Este método está basado en la amplificación de un fragmento de DNA de 400 pares de bases mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los oligonucleótidos fueron diseñados por los autores y los patrones característicos se observaron cuando las muestras fueron sometidas a una electroforesis en gel de agarosa al 2 %. La PCR tuvo resultados positivos con las cepa de colección Escherichia coli O:149 K: 88 (LT+) y con 20 cepas aisladas de pacientes con diarreas agudas. Se observaron resultados negativos con Escherichia coli O:101 K:99 NM (ST+), Vibrio cholerae 01 y Acromons hydrophila.
In this paper it is described the detection enteroxigenic Escherichia coli LT (+). This method is based on the amplification of a DNA fragment of 400 pairs of bases by polymerase chain reaction (PRC). The oligonuclotides were designed by the authors and the characteristic patterns were observed when the samples were submitted to an electrophoresis in an Agarose gel at 2 %. The PCR had positive results with the strains of Escherichia coli 0:149 K; 88 (LT+) collection and with 20 strains isolated from patients with acute diarrhea. Negative results were found in Escherichia coli 0:101 K:99 NM (ST+), Vibrio cholerae 01 and Aeromonas hydrophilia.
RESUMO
Por medio de la reacción en cadena de la polimerasa (RPC), se obtuvo una sonda para el gen que codifica la subunidad B de la toxina colérica (CTxB) que portaba una cepa de referencia de Vibrio cholerae 01. La comprobación del producto amplificado se realizó por la técnica de hibridación en colonias. El producto amplificado hibridó con el gen que codifica para la subunidad B de la toxina colérica aislada de Perú y Ecuador, representante de la presente epidemia en América Latina y no lo hizo con las cepas filogenéticamente relacionadas.
By means of the polymerase chain reaction (PCR) it was obtained a probe for the gen that codifies the subunit B of cholerae toxin (CTxB), which carried a Vibrio cholerae 01 reference strain. The checking of the amplified product was performed by using the hybridization techniques in colonies. This product hybridized with the gen that codifies for the subunit B of cholerae toxin isolated from Peru and Ecuador, representing the present epidemics in Latin America, but it did not so with the phylogenetically related strains.