RESUMO

La donación de ovocitos y embriones se ha convertido en un procedimiento frecuente en mujeres infértiles en edad reproductiva avanzada, con una elevada tasa de embarazo. En estos embarazos aumenta la incidencia de eventos obstétricos adversos, como trastornos hipertensivos, diabetes gestacional, parto operatorio, entre otros, y mortalidad perinatal. Los embarazos múltiples aumentan significativamente los riesgos, por lo que se recomienda la transferencia de un solo embrión. Las pacientes deben someterse inicialmente a un examen médico integral que incluya evaluación cardiovascular y psicológica, evitando el tratamiento en mujeres con enfermedades crónicas que aumentan significativamente los riesgos. En este simposio se revisará el manejo de la infertilidad en mujeres en edad reproductiva avanzada con ovocitos propios y donados, las complicaciones obstétricas y perinatales, así como los aspectos éticos y las consideraciones especiales para tener en cuenta en este tipo de tratamientos.

Oocyte and embryo donation has become a frequent procedure in infertile women of advanced reproductive age, with a high pregnancy rate. In these pregnancies, the incidence of adverse obstetric events (hypertensive disorders, gestational diabetes, operative delivery, among others) and perinatal mortality increases. Multiple pregnancies significantly increase the risks, so single embryo transfer is recommended. Patients should have a previous comprehensive medical examination including cardiovascular and psychological evaluation, avoiding treatment in women with chronic diseases that significantly increase risks. This symposium ill review infertility management in women of advanced reproductive age with own and donated oocytes, obstetric and perinatal complications as well as ethical aspects and special considerations to consider in this type of treatment.

RESUMO

Las mujeres retrasan cada vez más la maternidad por diferentes motivos, lo que les ocasiona recurrir a tratamientos de fertilización in vitro (FIV) con óvulos propios u óvulos donados para conseguir embarazo. En los tratamientos de FIV con óvulos donados se realiza una selección estricta de las donantes, quienes son sometidas a estimulación ovárica con posterior aspiración de los folículos. La edad recomendada para donar es entre 21 y 34 años. Se recomienda un máximo de 6 donaciones por donante. La receptora es la persona a quien se le realizará la transferencia del embrión y llevará el embarazo. Las tasas de embarazo con esta técnica de reproducción asistida son altas y las indicaciones más frecuentes son edad materna avanzada y falla ovárica precoz.

Women are increasingly delaying childbearing for different reasons, which causes them to resort to in vitro fertilization (IVF) treatments with their own oocytes or donated oocytes to achieve pregnancy. In IVF treatments with donated oocytes, donors are strictly selected and undergo ovarian stimulation with subsequent follicle aspiration. The recommended age to donate is between 21-34 years old. A maximum of 6 donations per donor is recommended. The recipient is the person to whom the embryo transfer will be performed and who will carry the pregnancy. Pregnancy rates with this assisted reproduction technique are high and the most frequent indications are advanced maternal age and early ovarian failure.

RESUMO

Las características fisiológicas de los gametos caninos que los hace especiales respecto a los de otras especies han dificultado los estudios tendientes a incrementar los porcentajes de éxito en diversas biotecnologías reproductivas. Entre estas características está el inicio de la meiosis de los ovocitos posterior al nacimiento y la ovulación de un gameto inmaduro como ovocito primario, lo que ha complejizado la maduración in vitro de estos ovocitos y, por parte de los espermatozoides, una gran diferencia en la sobrevivencia de los espermatozoides eyaculados versus los congelados-descongelados, que hace imprescindible evaluar la biología reproductiva de estos gametos tendiente a optimizar nuevos protocolos haciendo énfasis previamente en una adecuada evaluación del crecimiento del ovocito in vivo y de la viabilidad espermática en aquellos sometidos a criopreservación(AU)

The physiological characteristics of canine gametes that make them unique compared to those of other species have hindered studies aimed at increasing the success rates in various reproductive biotechnologies. Among these characteristics is the meiosis of the oocytes after birth and the ovulation of an immature gamete as a primary oocyte, which has made the in vitro maturation of these oocytes more complex and, on the part of the spermatozoa, a significant difference in the viability of ejaculated versus frozen-thawed spermatozoa, which makes it essential to evaluate the reproductive biology of these gametes in order to optimize new protocols, previously emphasizing an adequate evaluation of in vivo oocyte growth and sperm viability in those subjected to cryopreservation.(AU)

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RESUMEN Se estudió la biología reproductiva del Bocachico, Prochilodus magdalenae, en el río San Jorge, Colombia. La especie es un pez con proporción sexual hembra: macho de 1,2:1, diferente a lo esperado. Presenta desarrollo ovocitario sincrónico en dos grupos, un desove anual que se extiende de abril a septiembre asociado al ciclo hidrológico del río San Jorge, talla media de madurez sexual estimada en 30,2 cm LT, ovocitos grandes de 950 μm y fecundidad promedio de 109 972 ovocitos, cuya ecuación fue F =7271,6 WO0,60, r =0,93, n =14.

ABSTRACT The reproductive biology of the Bocachico, Prochilodus magdalenae, in the San Jorge River, Colombia, was studied. The species is a fish with sexual proportion female: male of 1.2:1, different than expected. It presents synchronous ovocitary development in two groups, an annual spawning that extends from April to September associated to the hydrological cycle of the San Jorge River, length at first maturity estimated in 30.2 cm TL, large oocytes of 950 μm, and average fecundity of 109 972 oocytes, whose equation was F = 7271,6 OW0,60, r = 0,93, n = 14.

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Abstract Background: Oocyte quality and maturation are influenced by protein supplementation. Objective: To evaluate the influence of fetal bovine serum (FBS) and bovine serum albumin (BSA) concentrations on the recovery and in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes. Methods: The study was divided into Stage 1 (oocyte recovery), and Stage 2 (IVM). In the first stage, three experiments were conducted according to the recovery (R) medium used: (R1) 10 vs. 20% FBS; (R2) 5 vs. 10% BSA; and (R3) the best results from R1, R2, and the combination of FBS+BSA (5+5%). Within the second stage, the maturation medium was supplemented according to three experiments: (M1) 5 vs. 10% FBS; (M2) 0.4 vs. 0.8% BSA; and (M3) better results of M1, M2, and the combination of FBS+BSA (5+0.8%). Results: In Stage 1 (R1 and R2), the media with 10% FBS and 10% BSA showed better oocyte quality results and were defined for experiment R3. In R3, the 10% FBS and the combination of FBS+BSA (5+5%) allowed recovery of better-quality oocytes. In Stage 2 (M1 and M2), media with both levels of FBS (5 and 10%) and 0.8% BSA were defined as better according to the maturation and viability rates of cumulus cells, so they were defined for experiment M3. In M3, no difference was noted among the supplements. Conclusions: For oocyte recovery, 10% FBS and the combination of FBS+BSA (5+5%) can be used to obtain immature oocytes. For the in vitro maturation, FBS (both levels, 5 and 10%) and BSA (0.8%) can be used alone or in combination.

Resumen Antecedentes: La calidad y maduración de los ovocitos son influenciados por la suplementación proteica. Objetivo: Evaluar la influencia de concentraciones de suero fetal bovino (FBS) y albúmina sérica bovina (BSA) en la recuperación y maduración in vitro (IVM) de ovocitos bovinos. Métodos: El estudio se dividió en Etapa 1 (recuperación de ovocitos) y Etapa 2 (IVM). En la primera etapa, tres experimentos se realizaron de acuerdo con el medio de recuperación: (R1) 10 vs. 20% FBS; (R2) 5 vs. 10% BSA; y (R3) los mejores resultados de R1, R2 y la combinación de FBS+BSA (5+5%). En la segunda etapa, el medio de maduración fue suplementado para tres experimentos: (M1) 5 vs. 10% FBS; (M2) 0,4 vs. 0,8% BSA; y (M3) mejores resultados de M1, M2 y la combinación de FBS+BSA (5+0,8%). Resultados: En la Etapa 1 (R1 y R2), los medios con 10% FBS y 10% BSA mostraron mejores resultados de calidad oocitaria y fueron definidos para el experimento R3. En R3, 10% FBS y la combinación de FBS+BSA (5+5%) permitieron la recuperación de ovocitos de mejor calidad. En la Etapa 2 (M1 y M2), los medios con ambos niveles de FBS (5 y 10%) y 0,8% de BSA se definieron como mejores de acuerdo con las tasas de maduración y viabilidad de las células del cumulus, por lo que se definieron para el experimento M3. En M3, no se observó diferencia entre los suplementos. Conclusiones: Para la recuperación de ovocitos, se puede utilizar 10% de FBS y la combinación de FBS+BSA (5+5%) para obtener ovocitos inmaduros. Para la maduración in vitro, FBS (ambos niveles, 5 y 10%) y BSA (0,8%) se pueden usar solos o en combinación.

Resumo Antecedentes: A qualidade e a maturação de oócitos são influenciadas pela suplementação proteica. Objetivo: Avaliar a influência de concentrações de soro fetal bovino (FBS) e albumina sérica bovina (BSA) sobre a recuperação e maturação in vitro (IVM) de oócitos bovinos. Métodos: O estudo foi dividido em Etapa 1 (recuperação de oócitos) e Etapa 2 (IVM). Na primeira etapa, três experimentos foram realizados de acordo com o meio de recuperação: (R1) 10 vs. 20% FBS; (R2) 5 vs. 10% BSA; e (R3) melhores resultados de R1, R2 e a combinação de FBS+BSA (5+5%). Na segunda etapa, o meio de maturação foi suplementado de acordo com três experimentos: (M1) 5 vs. 10% FBS; (M2) 0,4 vs. 0,8% BSA; e (M3) melhores resultados de M1, M2 e a combinação de FBS+BSA (5+0,8%). Resultados: Na Etapa 1 (R1 e R2), os meios com 10% FBS e 10% BSA mostraram melhores resultados de qualidade oocitária e foram definidos para o experimento R3. Em R3, 10% FBS e a combinação de FBS+BSA (5+5%) permitiram a recuperação de oócitos de melhor qualidade. Na segunda etapa (M1 e M2), meios com ambos os níveis de FBS (5 e 10%) e 0,8% BSA foram definidos como os melhores de acordo com as taxas de maturação e viabilidade de células do cumulus, então foram definidos para o experimento M3. No M3, não houve diferença entre os suplementos. Conclusões: Para a recuperação oocitária, 10% FBS e a combinação de FBS+BSA (5+5%) podem ser usados para obter oócitos imaturos. Para maturação in vitro, FBS (ambos os níveis, 5 e 10%) e BSA (0,8%) podem ser usados sozinhos ou em combinação.

RESUMO

Resumen: OBJETIVO: Comparar la tasa de blastocistos euploides obtenida después de la estimulación ovárica en fase folicular con la fase lútea en un mismo ciclo menstrual en pacientes con deficiente respuesta ovárica. MATERIALES Y MÉTODOS: Estudio clínico, prospectivo y comparativo llevado a cabo en el Centro de Reproducción Arcos, Nascere, entre los meses de enero a julio de 2019. Se incluyeron pacientes con pobre respuesta ovárica según los criterios de Bologna y con indicación de PGT-A. Las estimulaciones en fase folicular y lútea se efectuaron con antagonista de la GnRH y FSHr/LHr (2:1) a partir del día 3 del ciclo y 5 días después de la primera recuperación de los ovocitos. Para completar el proceso de maduración ovocitaria se utilizaron análogos de GnRH, se tomó una biopsia de trofoectodermo en día 5-7. RESULTADOS: Se estudiaron 20 pacientes. Al comparar la fase folicular con la lútea la tasa de fertilización fue de 79% (IC95%: 29-46) vs 55% (IC95%: 34-53), la tasa de blastocistos 42% (IC95%: 19-44) vs 45% (IC95%: 24-55) y la tasa de blastocistos euploides 100% (IC95%: 44-53) vs 70% (IC95%: 38-46), respectivamente. Solo la tasa de recuperación de ovocitos en metafase II mostró diferencias significativas entre ambas fases 40% (IC95%: 18-37) vs 59% (IC95%: 31-59), p = 0.0333 en la fase folicular y lútea, respectivamente. CONCLUSIONES: La estimulación ovárica bifásica (folicular-lútea), en el mismo ciclo menstrual (DuoStim), resultó en mayor tasa de recuperación de ovocitos en metafase II durante la fase lútea. Sin embargo, las tasas de desarrollo embrionario a día 5-6 (blastocistos) y de embriones euploides fueron similares entre ambas fases.

Abstract: OBJECTIVE: Euploid blastocyst rate comparison between ovarian stimulation in follicular vs luteal phase performed in the same menstrual cycle in patients with poor ovarian response. MATERIALS AND METHODS: Clinical, prospective and comparative study conducted at Centro de Reproducción Arcos S.C., "Nascere", during january-july, 2019. Patients with PGT-A indication and poor ovarian response according to Bologna criteria were included. Under a short GnRH-antagonist protocol, stimulations, both in follicular and luteal phase were performed using rFSH/rLH (2:1) from day 3 of the cycle and 5 days after the first oocyte retrieval. In addition, ovulation trigger with an GnRH agonist was used, finally, on day 5-6 of embryo development, trophoctoctoderm biopsy was performed. RESULTS: In this study, 20 patients were included; when comparing follicular phase vs luteal phase, we found that fertilization rate was 79% (95%CI 29-46) vs 55% (95%CI 34-53), blastocysts rate was 42% (95%CI 19-44) vs 45% (95%CI 24-55) and euploid embryo rate was 100% (95%CI 44-53) vs 70% (95%CI 38-46). Only the oocyte recovery rate in metaphase II showed significant differences between both phases 40% (IC 95% 18-37) vs 59% (IC 95% 31-59), p=0.0333. CONCLUSION: Biphasic ovarian stimulation (follicular/ luteal) in the same menstrual cycle (DuoStim) resulted in a higher metaphase II ooctye recovery rate during the luteal phase in comparison with the follicular phase. However, the rates of blastocysts and euploid blastocysts were similar between both phases.

RESUMO

La sobrevida de pacientes con cáncer ha mejorado con el tiempo, especialmente en pacientes en edad fértil. La criopreservación de los ovocitos a través de la estimulación ovárica controlada (EOC) es la técnica más frecuente de preservación de la fertilidad. El objetivo del presente estudio es realizar un análisis descriptivo de los ciclos de pacientes que, previo al tratamiento de cáncer, realizaron un tratamiento de preservación de fertilidad. Se analizaron datos demográficos como edad, diagnóstico de ingreso y resultados clínicos, tales como tipo de protocolo de estimulación utilizado, número de ovocitos obtenidos, duración de la estimulación y momento de inicio en el ciclo. Resultados: La edad promedio fue 28.9 años. La duración media de la estimulación fue de 12 días, con un promedio de ovocitos obtenidos en total de 12. Se utilizaron 2 protocolos de estimulación ovárica, obteniendo mejores resultados con el esquema de antagonistas de GnRH asociado a letrozole y doble gatillante. Respecto al momento del ciclo en que se inició la estimulación ovárica, no hubo diferencias. Conclusiones: Es posible realizar preservación de la fertilidad previo a un tratamiento oncológico con buenos resultados en pacientes jóvenes, por lo que sugerimos realizarlo en todos los pacientes con diagnóstico oncológico antes el tratamiento del cáncer. Es recomendable comenzar la estimulación ovárica en cualquier fase del ciclo ya que se obtienen los mismos resultados y permite un pronto inicio de la terapia oncológica.

Survival of patients with cancer has been improving over time, especially in young patient with fertility intention. Cryopreservation of oocytes through controlled ovarian stimulation (EOC) is the most frequent technique of fertility preservation. We analyzed the data obtained from oncological patients who attended IVI Chile between January 2008 and May 2017 in search of fertility preservation. Demographic data were obtained: age, diagnosis of admission, type of stimulation protocol used, number of oocytes obtained, duration of stimulation and pregnancy rate. Results: The average age: 28,9 years; average duration of stimulation:12 days. Number of oocytes obtained in total: 12. Two ovarian stimulation protocols were used. The one with the best results was the protocol with GnRH antagonists associated with letrozole and double triggering. Regarding the moment of the cycle where to start ovarian stimulation, there were no differences. Conclusions: It is possible to carry out a fertility preservation treatment prior to an oncological treatment with good results in young patients, so we suggest the preservation of fertility in all patients with an oncological diagnosis before oncological treatment. It is recommended to start ovarian stimulation at any phase of the cycle since the same results are obtained.

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Resumen El objetivo de este estudio fue evaluar el consumo de agua tratada proveniente de la producción petrolera en la calidad seminal del macho bovino reproductor, para ello se seleccionaron 16 toros entre 4 y 5 años distribuidos en dos grupos en los centros de investigaciones La Libertad de Agrosavia en Villavicencio y el Área de sostenibilidad agroenergetica, ASA en Acacias con disponibilidad de agua tratada de los campos petroleros, Apiay (A) y Castilla (C) respectivamente. Los animales seleccionados fueron distribuidos al azar para cada localidad en 4 tratamientos: 1) Consumo del 100 % agua de producción tratada; 2) consumo de mezcla 50 % agua de producción tratada y 50 % agua cruda; 3) consumo de mezcla 25 % agua de producción tratada y 75 % agua cruda; y 4) consumo 100 % agua cruda. Las variables consideradas fueron: calidad seminal para A y C determinadas por un sistema computarizado y de fertilidad in vitro para A evaluada por tinción fluorescente, Hoechst 33342. Los datos se analizaron estadística descriptiva, análisis de varianza (ANOVA) y pruebas de comparación de medias, Tukey, en un modelo de medidas repetidas en el tiempo. Los resultados indicaron, para calidad seminal, que los tratamientos que consumieron A y C en cada localidad presentaron diferencias (P < 0,05) para motilidad, 75,00±4,50, 69,24±4,13, espermatozoides motiles/100 células evaluadas, en el tratamiento dos respectivamente y en A para morfología, 76,67±2,06 espermatozoides normales/100 en el tratamiento cuatro, el índice de calidad espermática (ICE) no mostró diferencia (P > 0,05). Los resultados de unión espermatozoide - zona pelúcida mostraron diferencias entre tratamientos (P < 0,05), al igual que en fecundación in vitro, sin embargo, el comportamiento de estos cambios no indica asociación con el consumo de este tipo de agua. El estudio muestra que no se observan cambios contundentes o negativos que demuestren efecto en la fertilidad del toro por consumo de agua de producción tratada.

Abstract The objective of this study was to evaluate the consumption of treated water from oil production in the seminal quality of the breeding male; To this end, 16 bulls between 4 and 5 years old were selected, distributed in two groups at Agrosavia's La Libertad centers in Villavicencio and the Agroenergetic Sustainability Area, ASA in Acacias with availability of treated water from the oil fields, Apiay (A) and Castilla (C) respectively. The selected animals were distributed randomly to each location in 4 treatments: 1) Consumption of 100% treated production water; 2) 50% consumption of treated production water and 50% raw water consumption; 3) mixing consumption 25% treated production water and 75% raw water; and 4) 100% raw water consumption. The variables considered were: seminal quality for A and C determined by a computerized system, and in vitro fertility for A evaluated by fluorescent staining, Hoechst 33342. The data were analyzed descriptive statistics, analysis of variance (ANOVA) and means comparison tests, Tukey, in a model of measures repeated over time. The results indicated, for seminal quality, that the treatments that consumed A and C in each locality presented differences (P <0,05) for motility, 75,00 ± 4,50, 69,24 ± 4,13, motile sperm / 100 cells evaluated, in treatment two respectively and in A for morphology, 76,67 ± 2,06 normal sperm / 100 in treatment four, the sperm quality index (SQI) showed no difference (P> 0,05). The results of sperm-pellucid zone binding showed differences between treatments (P <0,05), as in in vitro fertilization, however, the behavior of these changes does not indicate an association with the consumption of this type of water. The study shows that there are no strong or negative changes that show an effect on the fertility of the bull due to the consumption of treated production water.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar o consumo de água tratada da produção de óleo na qualidade seminal do macho reprodutor; Para tanto, foram selecionados 16 touros entre 4 e 5 anos, distribuídos em dois grupos nos centros de La Libertad de Agrosavia em Villavicencio e na Área de Sustentabilidade Agroenergética, ASA em Acacias com disponibilidade de água tratada dos campos de petróleo, Apiay (A ) e Castilla (C) respectivamente. Os animais selecionados foram distribuídos aleatoriamente para cada local em 4 tratamentos: 1) Consumo de água de produção tratada 100%; 2) 50% de consumo de água de produção tratada e 50% de consumo de água bruta; 3) consumo de mistura 25% de água de produção tratada e 75% de água bruta; e 4) 100% de consumo de água bruta. As variáveis ​​consideradas foram: qualidade seminal para A e C, determinada por sistema computadorizado, e fertilidade in vitro para A, avaliada por coloração fluorescente, Hoechst 33342. Os resultados indicaram, para qualidade seminal, que os tratamentos que consumiram A e C em cada localidade apresentaram diferenças (P <0,05) para motilidade, 75,00 ± 4,50, 69,24 ± 4,13, espermatozóides móveis / 100 células avaliadas, no tratamento dois respectivamente e em A para morfologia, 76,67 ± 2,06 espermatozóides normais / 100 no tratamento quatro, o índice de qualidade espermática (IQE) não apresentou diferença (P> 0,05). Os resultados de ligação das zonas pelúcidas de espermatozóides mostraram diferenças entre os tratamentos (P <0,05), como na fertilização in vitro, entretanto, o comportamento dessas mudanças não indica uma associação com o consumo desse tipo de água. O estudo mostra que não há mudanças fortes ou negativas que mostram um efeito sobre a fertilidade do touro devido ao consumo de água de produção tratada.

RESUMO

Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) is an important bovine pathogen that is responsible for causing respiratory diseases and reproductive failures. The presence of BoHV-1 in an in vitro embryo production system affects fertilization, maturation, and embryonic development. The objective of this study was to evaluate the developmental capacity of oocytes from naturally infected cows with no reproductive history. Moreover, this study investigated the presence of viral DNA in cumulus oophorus complexes (COCs). Experimental groups were differentiated by titrating the antibodies detected through seroneutralization assays, establishing three groups: seronegative animals (titer lower than 2), low titer (2 to 8), and animals with a titer above or equal to 16. COCs were obtained from 15 donors during 22 sessions of ultrasound-guided follicular aspiration. DNA was extracted from a pool of COCs obtained from all aspirations from the same donor as well as from whole blood and nested PCR reactions were performed. Only COCs with a compact layer of cumulus cells, an intact zona pellucida, and homogeneous cytoplasm were selected for in vitro culture and evaluation of nuclear maturation rate. After culturing for 24 hours, the oocytes were fixed and stained to evaluate the meiotic cell cycle stage. Oocytes that showed a chromosomal configuration in metaphase II were considered to have reached nuclear maturation. Compared with the other groups, the oocyte nuclear maturation rate in animals with a titer greater than or equal to 16 (50%) was compromised (P<0.05). However, the viral titer did not influence the maturation rate of bovine oocytes in animals exhibiting low titration (62.2%) when compared with the control group (76.7%). Viral DNA was not observed in the blood samples but was detected in the COC pool from three seropositive donors. In view of the results obtained, we conclude that natural infections by the BoHV-1 virus can compromise the nuclear maturation rate in cows, depending on the titration levels of antibodies against the virus. Moreover, viral DNA could be present in COCs, contradicting the hypothesis that seropositive animals with no history of clinical symptomatology pose a negligible risk of transmitting BoHV-1 by COCs.(AU)

Herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) é um importante patógeno bovino, responsável por causar doenças respiratórias e falhas reprodutivas. A presença do BoHV-1 em sistema de produção in vitro de embriões afeta a fertilização, a maturação e o desenvolvimento embrionário. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de desenvolvimento de ovócitos oriundos de vacas infectadas naturalmente sem histórico reprodutivo. Além disso, este estudo investigou a presença do DNA viral em Complexos Cumulus Ooforus (COCs). Os tratamentos foram definidos a partir do título de anticorpos detectados pelos ensaios de soroneutralização, sendo estabelecidos três grupos: animais soronegativos (título menor do que 2), título baixo (2 a 8) e animais com título maior ou igual a 16. Os COCs foram obtidos de 15 doadoras durante 22 sessões de aspiração folicular guiada por ultrassom. A extração do DNA foi realizada em um pool de COCs de todas as aspirações de uma mesma doadora e no sangue total para a realização das reações de Nested-PCR. Para avaliação da taxa de maturação nuclear, foram selecionados para o cultivo in vitro somente os COCs com camada compacta de células do cumulus, zona pelúcida íntegra e citoplasma homogêneo. Após 24 horas de cultivo, os ovócitos foram fixados e corados em lâmina para a avaliação do estádio do ciclo celular meiótico. Os ovócitos que apresentaram configuração cromossômica em metáfase II foram considerados como tendo alcançado a maturação nuclear. Verificou-se comprometimento na taxa de maturação nuclear ovocitária (P<0.05) nos animais de título maior ou igual a 16 (50%). No entanto, não houve influência do título viral na taxa de maturação de ovócitos bovinos em animais que apresentaram titulação baixa (62,2%) quando comparados com o grupo controle (76,7%). O DNA viral não foi identificado nas amostras de sangue, mas foi detectado no pool de COCs de três doadoras soropositivas. Diante dos resultados encontrados conclui-se que vacas infectadas naturalmente pelo vírus BoHV-1 apresentam comprometimento na taxa de maturação nuclear, dependendo do grau de titulação de anticorpos contra o vírus. Ademais, o DNA viral pode estar presente em COCs contrariando a hipótese de que animais sorologicamente positivos e sem histórico de sintomatologia clínica oferecem risco negligível de transmissão do BoHV-1 por COCs.(AU)

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Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) is an important bovine pathogen that is responsible for causing respiratory diseases and reproductive failures. The presence of BoHV-1 in an in vitro embryo production system affects fertilization, maturation, and embryonic development. The objective of this study was to evaluate the developmental capacity of oocytes from naturally infected cows with no reproductive history. Moreover, this study investigated the presence of viral DNA in cumulus oophorus complexes (COCs). Experimental groups were differentiated by titrating the antibodies detected through seroneutralization assays, establishing three groups: seronegative animals (titer lower than 2), low titer (2 to 8), and animals with a titer above or equal to 16. COCs were obtained from 15 donors during 22 sessions of ultrasound-guided follicular aspiration. DNA was extracted from a pool of COCs obtained from all aspirations from the same donor as well as from whole blood and nested PCR reactions were performed. Only COCs with a compact layer of cumulus cells, an intact zona pellucida, and homogeneous cytoplasm were selected for in vitro culture and evaluation of nuclear maturation rate. After culturing for 24 hours, the oocytes were fixed and stained to evaluate the meiotic cell cycle stage. Oocytes that showed a chromosomal configuration in metaphase II were considered to have reached nuclear maturation. Compared with the other groups, the oocyte nuclear maturation rate in animals with a titer greater than or equal to 16 (50%) was compromised (P<0.05). However, the viral titer did not influence the maturation rate of bovine oocytes in animals exhibiting low titration (62.2%) when compared with the control group (76.7%). Viral DNA was not observed in the blood samples but was detected in the COC pool from three seropositive donors. In view of the results obtained, we conclude that natural infections by the BoHV-1 virus can compromise the nuclear maturation rate in cows, depending on the titration levels of antibodies against the virus. Moreover, viral DNA could be present in COCs, contradicting the hypothesis that seropositive animals with no history of clinical symptomatology pose a negligible risk of transmitting BoHV-1 by COCs.(AU)

Herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) é um importante patógeno bovino, responsável por causar doenças respiratórias e falhas reprodutivas. A presença do BoHV-1 em sistema de produção in vitro de embriões afeta a fertilização, a maturação e o desenvolvimento embrionário. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de desenvolvimento de ovócitos oriundos de vacas infectadas naturalmente sem histórico reprodutivo. Além disso, este estudo investigou a presença do DNA viral em Complexos Cumulus Ooforus (COCs). Os tratamentos foram definidos a partir do título de anticorpos detectados pelos ensaios de soroneutralização, sendo estabelecidos três grupos: animais soronegativos (título menor do que 2), título baixo (2 a 8) e animais com título maior ou igual a 16. Os COCs foram obtidos de 15 doadoras durante 22 sessões de aspiração folicular guiada por ultrassom. A extração do DNA foi realizada em um pool de COCs de todas as aspirações de uma mesma doadora e no sangue total para a realização das reações de Nested-PCR. Para avaliação da taxa de maturação nuclear, foram selecionados para o cultivo in vitro somente os COCs com camada compacta de células do cumulus, zona pelúcida íntegra e citoplasma homogêneo. Após 24 horas de cultivo, os ovócitos foram fixados e corados em lâmina para a avaliação do estádio do ciclo celular meiótico. Os ovócitos que apresentaram configuração cromossômica em metáfase II foram considerados como tendo alcançado a maturação nuclear. Verificou-se comprometimento na taxa de maturação nuclear ovocitária (P<0.05) nos animais de título maior ou igual a 16 (50%). No entanto, não houve influência do título viral na taxa de maturação de ovócitos bovinos em animais que apresentaram titulação baixa (62,2%) quando comparados com o grupo controle (76,7%). O DNA viral não foi identificado nas amostras de sangue, mas foi detectado no pool de COCs de três doadoras soropositivas. Diante dos resultados encontrados conclui-se que vacas infectadas naturalmente pelo vírus BoHV-1 apresentam comprometimento na taxa de maturação nuclear, dependendo do grau de titulação de anticorpos contra o vírus. Ademais, o DNA viral pode estar presente em COCs contrariando a hipótese de que animais sorologicamente positivos e sem histórico de sintomatologia clínica oferecem risco negligível de transmissão do BoHV-1 por COCs.(AU)

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ABSTRACT Objective. Evaluate mRNA expression of GDF9, BMP15, FGF2 and their main receptors, transforming growth factor beta receptor 1 (TGFβ-R1), bone morphogenetic protein receptor, type IB (BMPR-IB) and fibroblast growth factor receptor 2 (FGFR2) in bovine follicular cells. Materials and methods. Total RNA was isolated from pooled samples of oocytes (OOs), cumulus cells (CCs) of cumulus oocyte complexes (COCs) and follicular cell pellets (PCs) of 70 ovaries obtained from 96 beef heifers, collected at a local abattoir. The expression pattern of growth factors and their receptors in follicular bovine cells was evaluated by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Results. The mRNA transcripts encoding GDF9, BMP15, FGF2, TGFβ-R1, BMPR-IB and FGFR2 genes were detected, by RT-PCR, in all studied cells. This is the first time that the expression of TGFβ-R1 and BMPR-IB receptors is reported in bovine oocytes. Conclusions. The presence of growth factors and receptor transcripts in the studied cells indicate that these factors could act as paracrine and autocrine regulators of folliculogenesis.

RESUMEN Objetivo. Evaluar la expresión de los factores de crecimiento GDF9, BMP15, FGF2 y sus principales receptores: el receptor 1 del factor de crecimiento transformante beta (TGFβ-R1), el receptor de la proteína morfogénica del hueso tipo IB (BMPR-IB) y el receptor del factor de crecimiento fibroblástico 2 (FGFR2) en células foliculares bovinas. Materiales y métodos. Se realizó la extracción de ARN total de pooles de ovocitos (OOs) y células del cumulus (CCs) de complejos cumulus-ovocito (COCs) y del pellet de células foliculares (PCs) provenientes de 70 ovarios obtenidos de 96 vaquillonas para carne, colectados en un frigorífico local. Los patrones de expresión de los factores de crecimiento y sus receptores en las células foliculares bovinas fueron evaluados por retro-transcripción seguida de la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR). Resultados. La presencia de los transcriptos de ARNm de los genes GDF9, BMP15, FGF2, TGFβ-R1, BMPR-IB y FGFR2 fue detectada por RT-PCR en todas las células estudiadas. Es la primera vez que se reporta en ovocitos bovinos la expresión de los receptores TGFβ-R1 y BMPR-IB. Conclusiones. La presencia de transcriptos de factores de crecimiento y sus receptores en las células estudiadas, indica que estos factores podrían actuar como reguladores paracrinos y autocrinos de la foliculogénesis.

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El incremento del uso de la criopreservación de ovocitos empieza después de la introducción de la técnica de vitrificación y el nacimiento del primer bebe logrado con este método en 1999. Usando esta poderosa herramienta, los científicos han ayudado a las mujeres a criopreservar sus gametos ya sea a través de la vitrificación de ovocitos o de corteza ovárica. Durante una década, fuertes avances en la tecnología de la vitrificación han mejorado la eficiencia clínica y sus resultados. Con estos avances se ha reducido la dependencia de la habilidad del operador y se ha elevado la tasa de éxito a niveles altos y homogéneos. Como resultado, la vitrificación se ha vuelto confiable y la tendencia actual está mostrando un incremento definitivo en su uso en comparación de la congelación lenta. El nuevo y avanzado método conocido como 'Método Cryotech' asegura que se logre 100% de viabilidad en ovocitos y embriones en cualquier estadio. La técnica se establece para asegurar y definir cambios en la técnica de criopreservación en el mundo entero. Debido al gran efecto emocional que causa el diagnóstico de cáncer y la necesidad de su inmediato tratamiento, los potenciales efectos gonadotóxicos del cáncer o de este tratamiento no son normalmente discutidos a la hora del diagnóstico. La preservación de la fertilidad es un reciente esfuerzo y muchos pacientes con cáncer y trabajadores de salud no están familiarizados con el desarrollo rápido que ha tenido tanto en la parte de investigación como en la implementación en la práctica clínica. Se han establecido algunas técnicas de preservación de fertilidad como la vitrificación de ovocitos y otros como vitrificación de corteza ovárica que ha sido validada en los últimos 5 años con niños saludables nacidos sin tratamiento de fertilidad, incluso cuando aún siguen considerándose casos experimentales. Combinando todos los conocimientos que ahora tenemos sobre vitrificación de ovocitos y corteza ovárica con la estimulación hormonal del ovario incluso en la fase lútea y la efectividad del proceso de la reproducción asistida, podemos afirmar que es posible preservar vidas reproductivas de pacientes con cáncer incluso en pacientes pediátricos.

The increase in the use of oocyte cryopreservation occurred after the introduction of the vitrification technique and the birth of the first baby with this method in 1999. Using this powerful tool, scientists have helped women to cryopreserve their gametes by oocyte or ovarian cortex vitrification. For a decade, important advances in vitrification technology have improved clinical efficiency and results. This progress has reduced the dependence on the operator skill and has increased the success rate to high and homogeneous levels. As a result, vitrification has become reliable and the current trend shows a definite increase in its use compared to slow freezing. The new and advanced method known as â€oeCryotech method” ensures achievement of 100% viability in oocytes and embryos at any stage. The technique is set to make definite changes in the procedure of cryopreservation in the whole world. Due to the great emotional effect caused by cancer diagnosis and the need for immediate treatment, the potential gonadotoxic effects of cancer or its treatment are not normally discussed at the time of diagnosis. Fertility preservation is a recent effort, and many cancer patients and health workers are not familiar with its rapid development on research and on implementation in clinical practice. Some techniques of fertility preservation as oocyte or ovarian cortex vitrification have been validated in the past 5 years with healthy children born without fertility treatment, even when these continue to be experimental cases. Combining all the knowledge we now have on oocytes and ovarian cortex vitrification with hormonal stimulation of the ovary even in the luteal phase and the effectiveness of the process of assisted reproduction, we can say that it is possible to preserve reproductive lives of patients with cancer even in pediatric patients.

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Descreve-se a relação entre fecundidade (F) e tamanho individual, bem como entre fecundidade relativa à massa das gônadas (Frg) e F, em 17 espécies de teleósteos do litoral do Paraná. Fêmeas adultas de Clupeidae, Ariidae, Mugilidae, Stromateidae, Centropomidae, Carangidae, Sciaenidae e Paralichthyidae foram obtidas junto à pesca artesanal. Mensuraram-se comprimento total e massa ovárica, e em microscópio estereoscópico foram contados os ovócitos vitelogênicos. Em 15 das 17 espécies, a fecundidade aumentou com o tamanho do indivíduo. A diferença entre F máxima e mínima variou de 56,9% a 98,2% da F máxima, dependendo da espécie, expressa por F(máx-mín)=8405 + 0,7587.Fmáx (r=0,96; n=17). Em geral, Frg aumentou com F, Frg=1,15.F0,7603 (r=0,74; n=228), portanto espécies com maior F tenderam a produzir ovócitos menores. Para as 17 espécies, tamanhos estratégicos de conservação são recomendados, em geral, aqueles em que F máxima foi registrada. A eficácia da adoção de tamanhos máximos de captura como medida de gestão requer, na pesca profissional, estudos sobre seletividade das redes e, na amadora, orientação aos praticantes.(AU)

The relationships between fecundity (F) and body size, and between the relative fecundity to the gonad weight (Frg) and F, are described for 17 teleost species of the families Clupeidae, Ariidae, Mugilidae, Stromateidae, Centropomidae, Carangidae, Sciaenidae and Paralichthyidae. Adult females were obtained from artisanal fisheries in Parana coast, Southern Brazil. From each specimen data on total length and ovary weight were taken, and on stereoscopic microscopic vitellogenic oocytes were counted. Results have showed that F increases with the individual size in 15 from 17 species. Differences between F maximum and F minimum have varied from 56.9% to 98.2% of F maximum, depending on species, being represented by F(máx-mín)= 8405 + 0.7587.Fmáx (n= 17; r= 0.96). Frg was commonly proportional to F: Frg= 1.15.F0.7603 (r= 0.74; n= 228). Species with larger F values have usually presented oocytes smaller than those with small F values. Strategic sizes for conservation are recommended for the 17 species studied, corresponding to the total lengths in which the F maximum was found. Efficacy of using the maximum size in management rules requires studies on gillnets selectivity, addressed to professional fishing, and educative actions, to recreational one.(AU)

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Descreve-se a relação entre fecundidade (F) e tamanho individual, bem como entre fecundidade relativa à massa das gônadas (Frg) e F, em 17 espécies de teleósteos do litoral do Paraná. Fêmeas adultas de Clupeidae, Ariidae, Mugilidae, Stromateidae, Centropomidae, Carangidae, Sciaenidae e Paralichthyidae foram obtidas junto à pesca artesanal. Mensuraram-se comprimento total e massa ovárica, e em microscópio estereoscópico foram contados os ovócitos vitelogênicos. Em 15 das 17 espécies, a fecundidade aumentou com o tamanho do indivíduo. A diferença entre F máxima e mínima variou de 56,9% a 98,2% da F máxima, dependendo da espécie, expressa por F(máx-mín)=8405 + 0,7587.Fmáx (r=0,96; n=17). Em geral, Frg aumentou com F, Frg=1,15.F0,7603 (r=0,74; n=228), portanto espécies com maior F tenderam a produzir ovócitos menores. Para as 17 espécies, tamanhos estratégicos de conservação são recomendados, em geral, aqueles em que F máxima foi registrada. A eficácia da adoção de tamanhos máximos de captura como medida de gestão requer, na pesca profissional, estudos sobre seletividade das redes e, na amadora, orientação aos praticantes.

The relationships between fecundity (F) and body size, and between the relative fecundity to the gonad weight (Frg) and F, are described for 17 teleost species of the families Clupeidae, Ariidae, Mugilidae, Stromateidae, Centropomidae, Carangidae, Sciaenidae and Paralichthyidae. Adult females were obtained from artisanal fisheries in Parana coast, Southern Brazil. From each specimen data on total length and ovary weight were taken, and on stereoscopic microscopic vitellogenic oocytes were counted. Results have showed that F increases with the individual size in 15 from 17 species. Differences between F maximum and F minimum have varied from 56.9% to 98.2% of F maximum, depending on species, being represented by F(máx-mín)= 8405 + 0.7587.Fmáx (n= 17; r= 0.96). Frg was commonly proportional to F: Frg= 1.15.F0.7603 (r= 0.74; n= 228). Species with larger F values have usually presented oocytes smaller than those with small F values. Strategic sizes for conservation are recommended for the 17 species studied, corresponding to the total lengths in which the F maximum was found. Efficacy of using the maximum size in management rules requires studies on gillnets selectivity, addressed to professional fishing, and educative actions, to recreational one.

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The extract of Auxemma oncocalyx (A. oncocalyx) and its main component, oncocalyxone A (onco A), possess anti-tumoral activity that may affect fertility. There is limited literature on the action of these substances regarding caprine folliculogenesis. In this study, we evaluated the effect of A. oncocaly and onco A on the in vitro culture of isolated secondary follicles (Experiment 1) and on the in vitro maturation (IVM) of oocytes from caprine antral follicles grown in vivo (Experiment 2). Isolated secondary follicles were distributed in six groups: the non-cultured control was immediately fixed in 4% paraformaldehyde. The remaining follicles were cultured for 7 days in α-minimal essential medium (α-MEM+ ) alone (control) or with dimethyl sulfoxide (DMSO), doxorubicin (DXR), A. oncocalyx, or onco A. After culture, the follicles were evaluated for antrum formation, growth rate, apoptosis (TUNEL), cellular proliferation (PCNA), as well as the expression of BCL2 and BAX. In addition, cumulus oocyte complexes (COCs) were aspirated and allocated into five treatments for IVM: control, cultured only in maturation base medium (TCM 199+ ); or supplemented with DMSO; DXR; A. oncocalyx or onco A. After IVM, oocyte chromatin configuration and viability were assessed. After 7 days of culture, a reduction was noted in the percent of morphologically intact follicles, antrum formation, growth rate, and numbers of PCNApositive granulosa cells (P < 0.05). After culture, the DXR treatment showed a higher percent of TUNELpositive follicles and relative BAX:BCL2 mRNA ratios (P < 0.05). After IVM of the COCs, DXR, A. oncocalyx, and onco A treatments showed a greater percent (P < 0.05) of abnormal oocytes and a lower percent of viable oocytes as compared with the control group (P < 0.05)...(AU)

O extrato da Auxemma oncocalyx (A. oncocalyx) e seu componente, Oncocalyxona A (onco A), possui atividade antitumoral, podendo afetar a fertilidade. Entretanto, estudos sobre a ação dessas substâncias em relação à foliculogênese caprina são desconhecidos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da A. oncocalyx e onco A no cultivo in vitro de folículos secundários isolados (Experimento 1) e na maturação in vitro (MIV) de oócitos de folículos antrais caprinos crescidos in vivo (Experimento 2). Folículos secundários isolados foram distribuídos em seis grupos, em que o controle não-cultivado foi imediatamente fixado em paraformaldeído 4%. Os folículos restantes foram cultivados durante 7 dias em α-MEM+ sozinho (controle) ou suplementado com DMSO, doxorrubicina (DXR), A. oncocalyx ou onco A. Após o cultivo, os folículos foram avaliados quanto à formação de antro, taxa de crescimento, apoptose (TUNEL) e proliferação celular (PCNA), bem como a expressão dos genes BCL2 e BAX. Além disso, os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram aspirados e distribuídos em cinco tratamentos para MIV: o controle em meio de maturação (TCM 199+), e os demais tratamentos suplementados com DMSO, DXR, A. oncocalyx ou onco A. Depois da MIV, a configuração da cromatina e viabilidade oocitária foram avaliadas. Após 7 dias de cultivo, observou-se redução na percentagem de folículos morfologicamente intactos, na formação de antro, na taxa de crescimento e no número de células PCNA positivas (P < 0,05). Depois do cultivo, no tratamento DXR foi observada maior percentagem de folículos TUNEL positivos (P < 0,05) e também aumento na taxa de RNAm BAX: BCL2 (P < 0,05). Após MIV dos CCOs, nos tratamentos com DXR, A. oncocalyx e onco A, observou-se maior (P < 0,05) percentagem de oócitos anormais e menor de oócitos viáveis quando comparados ao grupo controle (P < 0,05)...(AU)

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The extract of Auxemma oncocalyx (A. oncocalyx) and its main component, oncocalyxone A (onco A), possess anti-tumoral activity that may affect fertility. There is limited literature on the action of these substances regarding caprine folliculogenesis. In this study, we evaluated the effect of A. oncocaly and onco A on the in vitro culture of isolated secondary follicles (Experiment 1) and on the in vitro maturation (IVM) of oocytes from caprine antral follicles grown in vivo (Experiment 2). Isolated secondary follicles were distributed in six groups: the non-cultured control was immediately fixed in 4% paraformaldehyde. The remaining follicles were cultured for 7 days in α-minimal essential medium (α-MEM+ ) alone (control) or with dimethyl sulfoxide (DMSO), doxorubicin (DXR), A. oncocalyx, or onco A. After culture, the follicles were evaluated for antrum formation, growth rate, apoptosis (TUNEL), cellular proliferation (PCNA), as well as the expression of BCL2 and BAX. In addition, cumulus oocyte complexes (COCs) were aspirated and allocated into five treatments for IVM: control, cultured only in maturation base medium (TCM 199+ ); or supplemented with DMSO; DXR; A. oncocalyx or onco A. After IVM, oocyte chromatin configuration and viability were assessed. After 7 days of culture, a reduction was noted in the percent of morphologically intact follicles, antrum formation, growth rate, and numbers of PCNApositive granulosa cells (P < 0.05). After culture, the DXR treatment showed a higher percent of TUNELpositive follicles and relative BAX:BCL2 mRNA ratio’s (P < 0.05). After IVM of the COCs, DXR, A. oncocalyx, and onco A treatments showed a greater percent (P < 0.05) of abnormal oocytes and a lower percent of viable oocytes as compared with the control group (P < 0.05)...

O extrato da Auxemma oncocalyx (A. oncocalyx) e seu componente, Oncocalyxona A (onco A), possui atividade antitumoral, podendo afetar a fertilidade. Entretanto, estudos sobre a ação dessas substâncias em relação à foliculogênese caprina são desconhecidos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da A. oncocalyx e onco A no cultivo in vitro de folículos secundários isolados (Experimento 1) e na maturação in vitro (MIV) de oócitos de folículos antrais caprinos crescidos in vivo (Experimento 2). Folículos secundários isolados foram distribuídos em seis grupos, em que o controle não-cultivado foi imediatamente fixado em paraformaldeído 4%. Os folículos restantes foram cultivados durante 7 dias em α-MEM+ sozinho (controle) ou suplementado com DMSO, doxorrubicina (DXR), A. oncocalyx ou onco A. Após o cultivo, os folículos foram avaliados quanto à formação de antro, taxa de crescimento, apoptose (TUNEL) e proliferação celular (PCNA), bem como a expressão dos genes BCL2 e BAX. Além disso, os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram aspirados e distribuídos em cinco tratamentos para MIV: o controle em meio de maturação (TCM 199+), e os demais tratamentos suplementados com DMSO, DXR, A. oncocalyx ou onco A. Depois da MIV, a configuração da cromatina e viabilidade oocitária foram avaliadas. Após 7 dias de cultivo, observou-se redução na percentagem de folículos morfologicamente intactos, na formação de antro, na taxa de crescimento e no número de células PCNA positivas (P < 0,05). Depois do cultivo, no tratamento DXR foi observada maior percentagem de folículos TUNEL positivos (P < 0,05) e também aumento na taxa de RNAm BAX: BCL2 (P < 0,05). Após MIV dos CCOs, nos tratamentos com DXR, A. oncocalyx e onco A, observou-se maior (P < 0,05) percentagem de oócitos anormais e menor de oócitos viáveis quando comparados ao grupo controle (P < 0,05)...

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Objetivou-se avaliar a expressão do mRNA para o gene do fator de crescimento IGF-2 em oócitos e células do cumulus de ovelhas em diferentes estágios do desenvolvimento folicular. Os folículos classificados morfologicamente como antrais (terciários e pré-ovulatórios) foram aspirados manualmente para obtenção dos oócitos e células do cumulus. Os folículos pré-antrais (secundários) foram extraídos do córtex ovariano, por microdissecção, e os oócitos retirados. Nos dois grupos, os oócitos foram desnudados e agrupados em "pools" de dez células cada (Grupo A, n=10; Grupo B, n=10) e dez amostras com grupos de células do cumulus (Grupo A1, n=10, B1, n=10). O mRNA foi extraído e convertido em cDNA utilizando a técnica da RT-PCR, utilizando Oligo DT randômico para o mRNA. A análise da expressão confirmou a expressão gênica para IGF-2 nos grupos de oócitos e células do cumulus. Houve um aumento da expressão relativa do mRNA para IGF-2 nos grupos de oócitos durante a fase mais tardia do desenvolvimento folicular e as diferenças foram consideradas significantes (p<0,05). Não houve variação significante da expressão de IGF2 entre os grupos de células do cumulus. Conclui-se que o fator de crescimento IGF-2 tem níveis mais elevados de expressão em oócitos ovinos, na segunda fase do desenvolvimento folicular, mas expressão semelhante em células do cumulus durante as fases estudadas do desenvolvimento folicular.(AU)

The aim of this study was to analyze the mRNA expression of IGF-2 growth factor in oocytes and cumulus cells from native sheep follicles at different stages of follicular development. The classified morphologically as antral follicles (tertiary preovulatory) were aspirated manually to obtain the oocyte and the cumulus cells. The preantral follicles (secondary) were extracted from the ovarian cortex by microdissection, and oocytes were removed. In both groups, oocytes were denuded and grouped into "pools" of ten cells each (Group A, n=10, Group B, n=10) and ten samples with groups of cumulus cells (Group A1, n=10; B1, n=10). The mRNA was extracted and converted to cDNA using the RT-PCR technique. The expression analysis confirmed the expression of IGF-2 gene for groups of oocyte and the cumulus cells. There was an increase in the relative expression of mRNA for IGF-2 for groups of oocytes during the later stage of follicular development and differences were considered significant (p<0.05). There was no significant variation in the expression of IGF2 between groups of cumulus cells. It is concluded that the growth factor IGF-2 has higher levels of expression in sheep oocytes in the second stage of follicular development in the conditions adopted and similar expression in cumulus cells during various stages of follicular development.(AU)

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Objetivou-se avaliar a expressão do mRNA para o gene do fator de crescimento IGF-2 em oócitos e células do cumulus de ovelhas em diferentes estágios do desenvolvimento folicular. Os folículos classificados morfologicamente como antrais (terciários e pré-ovulatórios) foram aspirados manualmente para obtenção dos oócitos e células do cumulus. Os folículos pré-antrais (secundários) foram extraídos do córtex ovariano, por microdissecção, e os oócitos retirados. Nos dois grupos, os oócitos foram desnudados e agrupados em pools de dez células cada (Grupo A, n=10; Grupo B, n=10) e dez amostras com grupos de células do cumulus (Grupo A1, n=10, B1, n=10). O mRNA foi extraído e convertido em cDNA utilizando a técnica da RT-PCR, utilizando Oligo DT randômico para o mRNA. A análise da expressão confirmou a expressão gênica para IGF-2 nos grupos de oócitos e células do cumulus. Houve um aumento da expressão relativa do mRNA para IGF-2 nos grupos de oócitos durante a fase mais tardia do desenvolvimento folicular e as diferenças foram consideradas significantes (p<0,05). Não houve variação significante da expressão de IGF2 entre os grupos de células do cumulus. Conclui-se que o fator de crescimento IGF-2 tem níveis mais elevados de expressão em oócitos ovinos, na segunda fase do desenvolvimento folicular, mas expressão semelhante em células do cumulus durante as fases estudadas do desenvolvimento folicular.(AU)

The aim of this study was to analyze the mRNA expression of IGF-2 growth factor in oocytes and cumulus cells from native sheep follicles at different stages of follicular development. The classified morphologically as antral follicles (tertiary preovulatory) were aspirated manually to obtain the oocyte and the cumulus cells. The preantral follicles (secondary) were extracted from the ovarian cortex by microdissection, and oocytes were removed. In both groups, oocytes were denuded and grouped into pools of ten cells each (Group A, n=10, Group B, n=10) and ten samples with groups of cumulus cells (Group A1, n=10; B1, n=10). The mRNA was extracted and converted to cDNA using the RT-PCR technique. The expression analysis confirmed the expression of IGF-2 gene for groups of oocyte and the cumulus cells. There was an increase in the relative expression of mRNA for IGF-2 for groups of oocytes during the later stage of follicular development and differences were considered significant (p<0.05). There was no significant variation in the expression of IGF2 between groups of cumulus cells. It is concluded that the growth factor IGF-2 has higher levels of expression in sheep oocytes in the second stage of follicular development in the conditions adopted and similar expression in cumulus cells during various stages of follicular development.(AU)

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ABSTRACT Objective. The reproductive biology of Liseta Leporinus muyscorum (Steindachner, 1901) in the Sinu river, Colombia, was studied. Materials and methods. Individuals were collected between March 2006 and February 2007, with lengths and weights ranging 20.5-41.0 (30.0 ± 3.7) cm of total length and 97.6-728.0 (320.9±117.9) g, respectively. The gonads were placed in Gilson solution, the Vazzoler scale was applicated and sexual proportion, sexual maturity index, spawning season, the length at first maturity, ovocites's diameter and fecundity were estimated. Results. 344 individuals were collected, of which 249 were females and 95 were males, with sexual proportion female: male of 2.6:1, different from expected. The length at first maturity was estimated in 28.9, 28.1 y 28.8 cm TL for females, males and combined sexes, respectively, ovocites's diameter was 977 µ and fecundity was estimated in 30793 oocytes. Conclusions. The Liseta is a fish with synchronous oocyte development in two groups, whose spawning season extends from February to September, with large oocytes and high fecundity, strongly associated with ovarian weight.

RESUMEN Objetivo . Se estudió la biología reproductiva de la Liseta Leporinus muyscorum (Steindachner, 1901) en el río Sinú, Colombia. Materiales y métodos. Los individuos fueron colectados entre marzo 2006 y febrero 2007, con tallas y pesos entre 20.5-41.0 (30.0±3.7) cm de longitud total y 97.6-728.0 (320.9±117.9) g, respectivamente. Las gónadas se conservaron en solución Gilson, se utilizó la escala de Vazzoler y se estimaron proporción sexual, índices de madurez sexual, época de desove, talla media de madurez sexual, diámetro de ovocitos y fecundidad. Resultados. Se colectaron 344 individuos, de los cuales 249 fueron hembras y 95 machos, con proporción sexual hembra: macho de 2.6:1, diferente a lo esperado. La talla media de madurez fue estimada en 28.9, 28.1 y 28.8 cm LT para hembras, machos y sexos combinados, respectivamente, el diámetro de los ovocitos fue 977 µ y la fecundidad promedio fue estimada en 30793 ovocitos. Conclusiones. La Liseta es un pez con desarrollo ovocitario sincrónico en dos grupos, cuya época o período de reproducción se extiende de febrero a septiembre, con ovocitos grandes y alta fecundidad, fuertemente asociada al peso de los ovarios.

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La producción de leche en el ganado taurina presenta una serie de obstáculos en las regiones tropicales como Brasil. Una de estas barreras es la tensión térmica (ET), lo que implica una pérdida económica importante para los productores. La pérdida de capital debe caer en gran medida en la producción de leche y fallas reproductivas asociadas con ET. Ya se ha demostrado varios cambios reproductivos derivados de la ET. A nivel celular se observó entre las células foliculares de comunicación a través de vesículas extracelulares (EVs). Se observó la comunicación entre las células del cúmulo y células de la granulosa de los vehículos eléctricos. Lo que esta revisión se pretende correlacionar los vehículos eléctricos producidos en el interior de los folículos con los efectos de ET en ovocitos bovinos.

The production of taurine cattle milk presents a number of obstacles in tropical regions like Brazil. One of these barriers is the thermal stress (ET), which entails a major economic loss for producers. The loss of capital should largely fall in milk production and reproductive failures associated with ET. Already it has been demonstrated several reproductive changes arising from the ET. At the cellular level, it was noted between the communication follicular cells through extracellular vesicles (EVs). Communication was observed between cumulus cells and granulosa cells by EVs. Therefore, this review intends to correlate the EVs produced inside the follicles with the effects of ET on bovine oocytes.

A produção de leite de bovinos taurinos apresenta uma série de entraves em regiões tropicais como o Brasil. Um desses entraves é o estresse térmico (ET), que acarreta uma perda econômica importante para os produtores. A perda de capital se deve em grande parte à queda na produção de leite e nas falhas reprodutivas associadas ao ET. Já foram demonstradas várias alterações reprodutivas oriundas do ET. A nível celular, foi notada a comunicação entre células foliculares, por meio de vesículas extracelulares (EVs). Foi observada a comunicação entre células do cummuluse células da granulosa por meio de EVs. Sendo assim, esta revisão tem por finalidade correlacionar as EVs produzidas no interior dos folículos com os efeitos do ET sobre os oócitos bovinos.

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