RESUMO
The objective of this research was to identify Mycobacterium bovis in lesions suggestive of tuberculosis in bovine carcasses in the State of Ceará, by means of bacteriological and molecular diagnostic tests. Between August 2017 and January 2019, the State inspection service (SIE) inspected 59,512 cattle, of which 7.4% (44 / 59,512) presented suggestive lesions. Of these animals, 68 samples were sent, of which 4.5% (31/68) located in the lung, 2.9% (20/68) in lymph nodes, 2.0% (14/68) in the liver, and 0.4% in the carcass (3/68). When performing bacteriological isolation, 15.9% (7/44) of bovines showed colony growth in the samples. The smears of the isolates were submitted to Zielh-Neelsen staining and all confirmed acid-fast bacilli. The polymerase chain reaction identified all isolates 100% (7/7) as M. bovis. The association of diagnostic techniques allowed to identify the presence of the agent in the State and the molecular analysis proved to be a beneficial technique in the monitoring of bovine tuberculosis and can be used as an auxiliary method in the bovine tuberculosis control and eradication program in the State of Ceará.
O objetivo do trabalho foi pesquisar Mycobacterium bovis em lesões sugestivas de tuberculose nas carcaças de bovinos no estado do Ceará, por meio dos testes de diagnóstico bacteriológico e molecular. Entre agosto de 2017 e janeiro de 2019, o Serviço de Inspeção Estadual (SIE) inspecionou 59.512 bovinos; destes, 7,4% (44/59.512) apesentaram lesões sugestivas. Desses animais foram enviadas 68 amostras, das quais 4,5% (31/68) estavam localizadas no pulmão, 2,9% (20/68) nos linfonodos, 2,0% (14/68) no fígado e 0,4% (3/68) na carcaça. Ao realizar o isolamento bacteriológico, 15,9% (7/44) dos bovinos evidenciaram crescimento de colônias nas amostras. Os esfregaços dos isolados foram submetidos à coloração de Zielh-Neelsen e todos eles confirmaram bacilo álcool-ácido resistente. A reação em cadeia da polimerase identificou todos os isolados, 100% (7/7), como M. bovis. A associação das técnicas de diagnóstico permitiu identificar a presença do agente no estado, e a análise molecular demonstrou ser uma técnica benéfica no monitoramento da tuberculose bovina, podendo ser utilizada como um método auxiliar no programa de controle e erradicação da tuberculose bovina no estado do Ceará.
Assuntos
Animais , Bovinos , Tuberculose Bovina/diagnóstico , Tuberculose Bovina/epidemiologia , Mycobacterium bovis/isolamento & purificação , Doenças dos Bovinos/microbiologia , Matadouros , Reação em Cadeia da Polimerase Multiplex/veterináriaRESUMO
The aim of the present study was to detect and identify Mycobaterium spp. in 50 samples of coalho cheese sold in the Northeast region of Brazil. Of the 50 analyzed samples, 35 were produced by the artisanal process, using raw milk, and 15 originated from industrialized establishments that pasteurize milk. Conventional and real-time nested PCR for the rv2807 gene of the M. tuberculosis complex was performed directly from the 50 analyzed samples. Samples of coalho cheese were grown simultaneously in Stonebrink medium, and conventional PCR was performed from the bacterial isolates with primers that flank differentiation region 4 (DR4), specific to M. bovis, mb400F. Bacterial isolates negative by PCR for RD4 were subjected to PCR for hsp65 of Mycobacterium spp., with subsequent DNA sequencing. The cultures were negative for the M. tuberculosis complex, but two samples (4%) from the artisanal process (with raw milk) exhibited identity with hsp65 of Mycobacterium lehmanii (Sequence ID: KY933786.1, identities: 312/363 [86%]); and Mycobacterium rutilum (sequence ID: LT629971.1, identities: 331/371 [89%]), showing to be indicative environmental contamination. Non-tuberculous mycobacteria are emergent and ubiquitous microorganisms; therefore, they deserve greater attention in the cheese production chain, both in terms of Good Agricultural Practices (GAP)
O presente estudo teve como objetivo detectar e identificar Mycobaterium spp. em 50 amostras de queijo de coalho comercializados na região Nordeste do Brasil. Das 50 amostras analisadas, 35 foram produzidas pelo processo artesanal, com leite cru e 15 provenientes de estabelecimentos industrializados que realizam a pasteurização do leite. Nested-PCR convencional e em tempo real para o gene rv2807 do Complexo M. tuberculosis foi realizada diretamente das cinquenta amostras analisadas. Paralelamente, as amostras de queijo de coalho foram cultivadas em meio de Stonebrink e dos isolados bacterianos foi realizada PCR convencional com iniciadores que flanqueiam a região de diferenciação 4 (RD4), específica de M. bovis, mb400F. Os isolados bacterianos negativos na PCR para RD4 foram submetidos à PCR para hsp65 de Mycobacterium spp., com posterior sequenciamento do DNA. As culturas mostraram-se negativas para o Complexo M. tuberculosis, porém duas amostras oriundas do processo artesanal (com leite cru) (4%) apresentaram identidade com hsp65 de Mycobacterium lehmanii (ID da sequência: KY933786.1, identidades: 312/363 [86%]); e Mycobacterium rutilum (ID da sequência: LT629971.1, identidades: 331/371 [89%]), apontando-se como indicativos de contaminação ambiental. As micobactérias-não-tuberculosas (MNT) são microrganismos emergentes e de natureza ubíqua. Devido a essas características merecem maior atenção na cadeia produtiva de queijos, tanto nas boas práticas agropecuárias (BPAs) quanto nas boas práticas de fabricação de alimentos (BPFs).
Assuntos
Infecções por Mycobacterium/diagnóstico , Mycobacterium/classificação , Padrão de Identidade e Qualidade para Produtos e Serviços , Queijo/economia , Queijo/microbiologiaRESUMO
The aim of the present study was to detect and identify Mycobaterium spp. in 50 samples of coalho cheese sold in the Northeast region of Brazil. Of the 50 analyzed samples, 35 were produced by the artisanal process, using raw milk, and 15 originated from industrialized establishments that pasteurize milk. Conventional and real-time nested PCR for the rv2807 gene of the M. tuberculosis complex was performed directly from the 50 analyzed samples. Samples of coalho cheese were grown simultaneously in Stonebrink medium, and conventional PCR was performed from the bacterial isolates with primers that flank differentiation region 4 (DR4), specific to M. bovis, mb400F. Bacterial isolates negative by PCR for RD4 were subjected to PCR for hsp65 of Mycobacterium spp., with subsequent DNA sequencing. The cultures were negative for the M. tuberculosis complex, but two samples (4%) from the artisanal process (with raw milk) exhibited identity with hsp65 of Mycobacterium lehmanii (Sequence ID: KY933786.1, identities: 312/363 [86%]); and Mycobacterium rutilum (sequence ID: LT629971.1, identities: 331/371 [89%]), showing to be indicative environmental contamination. Non-tuberculous mycobacteria are emergent and ubiquitous microorganisms; therefore, they deserve greater attention in the cheese production chain, both in terms of Good Agricultural Practices (GAP)(AU)
O presente estudo teve como objetivo detectar e identificar Mycobaterium spp. em 50 amostras de queijo de coalho comercializados na região Nordeste do Brasil. Das 50 amostras analisadas, 35 foram produzidas pelo processo artesanal, com leite cru e 15 provenientes de estabelecimentos industrializados que realizam a pasteurização do leite. Nested-PCR convencional e em tempo real para o gene rv2807 do Complexo M. tuberculosis foi realizada diretamente das cinquenta amostras analisadas. Paralelamente, as amostras de queijo de coalho foram cultivadas em meio de Stonebrink e dos isolados bacterianos foi realizada PCR convencional com iniciadores que flanqueiam a região de diferenciação 4 (RD4), específica de M. bovis, mb400F. Os isolados bacterianos negativos na PCR para RD4 foram submetidos à PCR para hsp65 de Mycobacterium spp., com posterior sequenciamento do DNA. As culturas mostraram-se negativas para o Complexo M. tuberculosis, porém duas amostras oriundas do processo artesanal (com leite cru) (4%) apresentaram identidade com hsp65 de Mycobacterium lehmanii (ID da sequência: KY933786.1, identidades: 312/363 [86%]); e Mycobacterium rutilum (ID da sequência: LT629971.1, identidades: 331/371 [89%]), apontando-se como indicativos de contaminação ambiental. As micobactérias-não-tuberculosas (MNT) são microrganismos emergentes e de natureza ubíqua. Devido a essas características merecem maior atenção na cadeia produtiva de queijos, tanto nas boas práticas agropecuárias (BPAs) quanto nas boas práticas de fabricação de alimentos (BPFs).(AU)