RESUMO
A modification of a protocol used to induce tobacco microspore embryogenesis was tested in eggplant (Solanum melongena L.). In tobacco, uninucleate microspores are subjected to stress treatment by culturing in mannitol containing "B" medium at 33ºC for six days. The microspores are then transferred to maltose containing AT3 medium for further development. In the experiment presented here late uninucleate and bi-nucleate microspores of the eggplant cultivar Bambino were pre-cultured in B medium and then incubated at +4ºC, 25ºC and 33ºC, respectively, for two days. After the pre-treatments, microspore cultures were transferred to AT3 medium containing 0.25 M maltose and maintained at 25ºC in the dark. Presence of symmetrical division and multinucleate structures was checked with DAPI staining of the nucleus after one and two weeks. Symmetrical division of the nucleus and multinucleate structures were observed only in uni-nucleate microspores pre-treated at 33ºC for two days. The frequency of multinucleate structures was 19.4% under these conditions. We demonstrated that eggplant is responsive to the modified tobacco protocol in the production of symmetrically division and multinucleate structures. These results may be used as a basis for adaptation fully of the tobacco system in eggplant.
Uma modificação de um protocolo utilizado para induzir embriogênese a partir de micrósporos de tabaco foi testada em berinjela (Solanum melongena L.). Em tabaco, micrósporos uninucleados são submetidos a um tratamento de estresse em meio "B" contendo manitol a 33ºC por seis dias. Os micrósporos são então transferidos para um meio AT3 contendo maltose para as fases posteriores de desenvolvimento. Neste estudo, micrósporos uninucleados e binucleados tardios do cultivar de berinjela Bambino foram pré-cultivados em meio "B" e, posteriormente, incubados a 4ºC, 25ºC e 33ºC por dois dias. Após os pré-tratamentos, as culturas de micrósporos foram transferidas para o meio AT3 contendo maltose 0,25 M e mantidas a 25ºC no escuro. A presença de divisão simétrica e estruturas multinucleadas foram verificadas com coloração DAPI do núcleo após uma e duas semanas. Foram observadas divisões simétricas dos núcleos e estruturas multinucleadas somente em micrósporos uninucleados, pré-tratados a 33ºC por dois dias. A frequência de estruturas multinucleadas foi de 19,4% sob essas condições. Nós demonstramos que a berinjela responde ao protocolo modificado de tabaco para produção de divisões simétricas e estruturas multinucleadas. Esses resultados podem ser utilizados como base para uma completa adaptação do sistema de tabaco em berinjela.
RESUMO
A modification of a protocol used to induce tobacco microspore embryogenesis was tested in eggplant (Solanum melongena L.). In tobacco, uninucleate microspores are subjected to stress treatment by culturing in mannitol containing "B" medium at 33ºC for six days. The microspores are then transferred to maltose containing AT3 medium for further development. In the experiment presented here late uninucleate and bi-nucleate microspores of the eggplant cultivar Bambino were pre-cultured in B medium and then incubated at +4ºC, 25ºC and 33ºC, respectively, for two days. After the pre-treatments, microspore cultures were transferred to AT3 medium containing 0.25 M maltose and maintained at 25ºC in the dark. Presence of symmetrical division and multinucleate structures was checked with DAPI staining of the nucleus after one and two weeks. Symmetrical division of the nucleus and multinucleate structures were observed only in uni-nucleate microspores pre-treated at 33ºC for two days. The frequency of multinucleate structures was 19.4% under these conditions. We demonstrated that eggplant is responsive to the modified tobacco protocol in the production of symmetrically division and multinucleate structures. These results may be used as a basis for adaptation fully of the tobacco system in eggplant.
Uma modificação de um protocolo utilizado para induzir embriogênese a partir de micrósporos de tabaco foi testada em berinjela (Solanum melongena L.). Em tabaco, micrósporos uninucleados são submetidos a um tratamento de estresse em meio "B" contendo manitol a 33ºC por seis dias. Os micrósporos são então transferidos para um meio AT3 contendo maltose para as fases posteriores de desenvolvimento. Neste estudo, micrósporos uninucleados e binucleados tardios do cultivar de berinjela Bambino foram pré-cultivados em meio "B" e, posteriormente, incubados a 4ºC, 25ºC e 33ºC por dois dias. Após os pré-tratamentos, as culturas de micrósporos foram transferidas para o meio AT3 contendo maltose 0,25 M e mantidas a 25ºC no escuro. A presença de divisão simétrica e estruturas multinucleadas foram verificadas com coloração DAPI do núcleo após uma e duas semanas. Foram observadas divisões simétricas dos núcleos e estruturas multinucleadas somente em micrósporos uninucleados, pré-tratados a 33ºC por dois dias. A frequência de estruturas multinucleadas foi de 19,4% sob essas condições. Nós demonstramos que a berinjela responde ao protocolo modificado de tabaco para produção de divisões simétricas e estruturas multinucleadas. Esses resultados podem ser utilizados como base para uma completa adaptação do sistema de tabaco em berinjela.
RESUMO
The low in vitro regeneration of some indica rice cultivars, limits the use of anther culture techniques as a tool to reduce the time for releasing new cultivars. The identification of genomic regions associated with callus formation and in vitro regeneration from anther culture, will facilitate selection of these traits through marker assisted techniques. Two backcross populations were used to study and map these traits, Taipei 309// BRS 7 "Taim"/Taipei 309 (53 genotypes) and BRS 7 "Taim"// BRS 7 "Taim"/Taipei 309 (74 genotypes). Two hundred immature anthers, from each genotype used in this study, were inoculated in liquid NL medium for callus induction and, after 40 days, the formed callus were transferred to solid MS medium for plant regeneration. Each anther donor plant was used for DNA extraction and seven RAPD primers were used to assess genomic regions associated to callus formation and plant regeneration. As results, callus formation ranged from 2.27 up to 3.36% and plant regeneration ranged from 1.38 up to 1.82%, no significant differences were observed. Six linkage groups were obtained, being three from each population. One QTL was detected associated to callus formation, with LOD score 3.10, in the population Taipei 309 // BRS 7 "Taim" / Taipei 309. No QTL association was detected to the trait plant regeneration.
A baixa taxa de regeneração in vitro de alguns cultivares de arroz da subespécie indica limita a utilização de técnicas de cultura de anteras como ferramenta para o desenvolvimento de novos cultivares. A identificação de regiões genômicas associadas à formação de calos e regeneração de plantas, a partir do cultivo de anteras, poderá permitir a transferência do caráter por seleção assistida. Duas populações de retrocruzamento foram utilizadas para o mapeamento genético e estudo destes caracteres, sendo Taipei 309// BRS 7 "Taim"/Taipei 309 (53 genótipos) e BRS 7 "Taim"// BRS 7 "Taim"/Taipei 309 (74 genótipos). Duzentas anteras imaturas de cada genótipo utilizado no estudo foram inoculadas em meio NL líquido e, após 40 dias, os calos formados foram transferidos para o meio MS sólido para regeneração de plantas. Todas as plantas doadoras de anteras foram usadas na extração de DNA genômico e sete primers RAPD foram utilizados na geração de marcadores para a construção dos mapas de ligação dos retrocruzamentos estudados. A taxa de formação de calos variou de 2,27 a 3,36% e a taxa de regeneração de plantas 1,38 a 1,82%, não se diferenciando significativamente. Seis grupos de ligação foram obtidos, três em cada população. Um QTL com LOD 3,10 foi detectado para o caráter formação de calos na população Taipei 309 // BRS 7 "Taim" / Taipei 309. Nenhum QTL foi detectado para a característica regeneração de plantas.
RESUMO
The low in vitro regeneration of some indica rice cultivars, limits the use of anther culture techniques as a tool to reduce the time for releasing new cultivars. The identification of genomic regions associated with callus formation and in vitro regeneration from anther culture, will facilitate selection of these traits through marker assisted techniques. Two backcross populations were used to study and map these traits, Taipei 309// BRS 7 "Taim"/Taipei 309 (53 genotypes) and BRS 7 "Taim"// BRS 7 "Taim"/Taipei 309 (74 genotypes). Two hundred immature anthers, from each genotype used in this study, were inoculated in liquid NL medium for callus induction and, after 40 days, the formed callus were transferred to solid MS medium for plant regeneration. Each anther donor plant was used for DNA extraction and seven RAPD primers were used to assess genomic regions associated to callus formation and plant regeneration. As results, callus formation ranged from 2.27 up to 3.36% and plant regeneration ranged from 1.38 up to 1.82%, no significant differences were observed. Six linkage groups were obtained, being three from each population. One QTL was detected associated to callus formation, with LOD score 3.10, in the population Taipei 309 // BRS 7 "Taim" / Taipei 309. No QTL association was detected to the trait plant regeneration.
A baixa taxa de regeneração in vitro de alguns cultivares de arroz da subespécie indica limita a utilização de técnicas de cultura de anteras como ferramenta para o desenvolvimento de novos cultivares. A identificação de regiões genômicas associadas à formação de calos e regeneração de plantas, a partir do cultivo de anteras, poderá permitir a transferência do caráter por seleção assistida. Duas populações de retrocruzamento foram utilizadas para o mapeamento genético e estudo destes caracteres, sendo Taipei 309// BRS 7 "Taim"/Taipei 309 (53 genótipos) e BRS 7 "Taim"// BRS 7 "Taim"/Taipei 309 (74 genótipos). Duzentas anteras imaturas de cada genótipo utilizado no estudo foram inoculadas em meio NL líquido e, após 40 dias, os calos formados foram transferidos para o meio MS sólido para regeneração de plantas. Todas as plantas doadoras de anteras foram usadas na extração de DNA genômico e sete primers RAPD foram utilizados na geração de marcadores para a construção dos mapas de ligação dos retrocruzamentos estudados. A taxa de formação de calos variou de 2,27 a 3,36% e a taxa de regeneração de plantas 1,38 a 1,82%, não se diferenciando significativamente. Seis grupos de ligação foram obtidos, três em cada população. Um QTL com LOD 3,10 foi detectado para o caráter formação de calos na população Taipei 309 // BRS 7 "Taim" / Taipei 309. Nenhum QTL foi detectado para a característica regeneração de plantas.