RESUMO

A reconstrução de modelos avançados de pele tridimensional in vitro, que corresponda de forma mais fidedigna ao complexo microambiente da pele humana, depende da utilização de inovações tecnológicas e da adição de novos tipos celulares representativos da pele humana. Desta maneira, estes miméticos fornecem uma plataforma de alta relevância para estudos de fisiopatologia da pele, além de propiciar um sistema para a avaliação da segurança e eficácia de cosméticos e medicamentos alternativo ao uso de animais. Dessa maneira, o Capítulo I compara a performance de uma epiderme reconstruída humana (RHE) bioimpressa com a manual utilizando o teste in vitro de irritação cutânea descrito no guia OCDE número 439. Nossos resultados demonstram que ambos os modelos de pele exibiram morfologia estratificada e a função barreira epidérmica equivalente aos modelos validados. Nos testes de irritação in vitro, ambos modelos distinguiram corretamente as substâncias de referência, classificadas entre irritantes ou não-irritantes de acordo com o limiar de viabilidade de 50%. Esse resultado indica que a bioimpressora poderia ser de grande utilidade para a automação da reconstrução de modelos epidérmicos. O tecido hipodérmico possui importante papel na homeostase da pele humana. O Capítulo II aborda a reconstrução de uma pele tricamada, contendo a camada hipodérmica, além da epiderme e derme. Usando esferoides de adipócitos diferenciados in vitro, um modelo de pele tricamada em matriz de colágeno foi construído. Ao comparar este com a pele bicamada obtivemos maior expressão de loricrina e involucrina no modelo tricamada, indicando um potencial para maior função barreira, além de maior expressão de PPAR-γ. Testes de função barreira através da resistividade elétrica não demonstraram diferenças entre os modelos, mas a aplicação de SDS a 5 mg/ml por 18 horas induziu o aumento da viabilidade na pele tricamada. Além disso, após a aplicação de SDS a 2,5% para induzir uma irritação aguda, seguida de recuperação por 42h, obtivemos maior viabilidade na pele tricamada, indicando melhor recuperação pós-lesão irritativa induzida. A pele tricamada é promissora para estudos do metabolismo da pele humana e recuperação de lesões. A dermatite atópica (DA) é uma doença eczematosa de pele caracterizada por inflamação do tipo Th2 e alteração da barreira epidérmica. IL-13 e IL-4 são centrais no comprometimento da barreira epidérmica na DA. Entre os receptores de IL-13 em queratinócitos, o receptor IL-13Rα2, tem um papel controverso na alteração da barreira cutânea. O objetivo do Capítulo III foi estudar a deleção da expressão de IL-13Rα2 em RHE, que foram expostas a IL-4 e IL-13, e avaliadas conforme a expressão dos receptores e de proteínas alteradas na DA. As epidermes com knockout em IL-13Rα2 apresentaram redução da expressão de NELL2 (p<0,0021), tipicamente aumentadas na DA. Além disso, houve redução da expressão do receptor do IL-2Rγ. Assim, um possível papel de exacerbação da DA do receptor IL-13Rα2 deve ser estudado mais extensamente para ser caracterizado

The reconstruction of advanced three-dimensional in vitro skin models, which more reliably correspond to the complex microenvironment of human skin, depends on the use of technological innovations and the addition of new cell types representative of human skin.In this way, these mimetics provide a highly relevant platform for studies of skin pathophysiology, in addition to providing a system for evaluating the safety and efficacy of cosmetics and medicines alternative to animal use. In this way, Chapter I compares the performance of a bioprinted human reconstructed epidermis (RHE) with a manual one using the in vitro skin irritation test described in OECD guide number 439. Our results demonstrate that both skin models exhibited stratified morphology and the epidermal barrier function equivalent to validated models. In in vitro irritation tests, both models correctly distinguished the reference substances, classified as irritating or non-irritating according to the viability threshold of 50%. This result indicates that the bioprinter could be of great use for automating the reconstruction of epidermal models Hypodermic tissue plays an important role in the homeostasis of human skin. Chapter II addresses the reconstruction of a three-layer skin, containing the hypodermic layer, in addition to the epidermis and dermis. Using in vitro differentiated adipocyte spheroids, a trilayer skin model in collagen matrix was constructed. When comparing this with bilayer skin, we obtained greater expression of loricrin and involucrin in the trilayer model, indicating a potential for greater barrier function, in addition to greater expression of PPAR-γ . Barrier function tests using electrical resistivity did not demonstrate differences between the models, but the application of SDS at 5 mg/ml for 18 hours induced an increase in viability in the three-layer skin. Furthermore, after applying 2.5% SDS to induce acute irritation, followed by recovery for 42 hours, we obtained greater viability in the three-layer skin, indicating better recovery after induced irritant injury. Trilayer skin holds promise for studies of human skin metabolism and injury recovery. Atopic dermatitis (AD) is an eczematous skin disease characterized by Th2-type inflammation and alteration of the epidermal barrier. IL-13 and IL-4 are central to the impairment of the epidermal barrier in AD. Among the IL-13 receptors on keratinocytes, the IL-13Rα2 receptor has a controversial role in altering the skin barrier. The objective of Chapter III was to study the deletion of IL-13Rα2 expression in RHE, which were exposed to IL-4 and IL-13, and evaluated according to the expression of receptors and proteins altered in AD. Epidermis with IL-13Rα2 knockout showed reduced NELL2 expression (p<0.0021), typically increased in AD. Furthermore, there was a reduction in the expression of the IL-2Rγ receptor. Therefore, a possible AD exacerbation role of the IL-13Rα2 receptor should be studied more extensively to be characterized

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After the implementation of the Arouca Law in Brazil, the use of animals in experimentation and teaching began to be strictly controlled. CEUAs are great allies in reducing the use of animals in experimentation protocols, and although many methods can be replaced, many still need to be validated. The 3R’s (replacement, reduction and refinement) are fundamental for implementing and developing new methodologies. Hyperimmune sera represent a large part of the production of biological products at the Butantan Institute, and the assessment of pyrogenic contamination is an essential test for evaluating new products for registration and release of production batches. Currently, the in vivo pyrogen test is in a transition phase for total replacement of the use of laboratory animals, the same way, the anti-tetanus serum potency test, which presentes an alternative method described in the Brazilian Pharmacopoeia but not yet recognized by CONCEA and not fully accepted by ANVISA for total replacement of the use of animals. The proposed results demonstrate the great national and global interest in reducing and completely replacing the use of animals, therefore traditional methods and alternative methods must be understood according to their applications and limitations.

A partir da implementação da Lei Arouca no Brasil, o uso de animais na experimentação e no ensino começou a ser controlado rigorosamente. As CEUAs são grandes aliadas para redução ao uso de animais nos protocolos de experimentação, e apesar de muitos métodos poderem ser substituídos, muitos ainda precisam ser validados. Os 3R’s (replace, reduction e refinement) são fundamentais para execução e elaboração de novas metodologias. Os soros hiperimunes representam grande parte da produção de produtos biológicos no Instituto Butantan, e a avaliação de contaminação pirogênica é um teste imprescindível para avaliação dos novos produtos para registro e liberação de lotes de produção. Atualmente o teste de pirogênio in vivo está na fase de transição para substituição total ao uso de animais de laboratório, do mesmo modo o teste de potência de soro antitetânico cujo método alternativo já está descrito na Farmacopeia Brasileira mas não está reconhecido pelo CONCEA e não é totalmente aceito pela ANVISA para substituição total ao uso de animais. Os resultados discutidos demostram o grande interesse nacional e mundial para redução e substituição total ao uso de animais, dessa forma os métodos tradicionais e métodos alternativos devem ser compreendidos de acordo com suas aplicações e limitações.

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Em 2017, a Organização Mundial da Saúde voltou a considerar o ofidismo como uma doença tropical negligenciada de maior prioridade. As serpentes do gênero Bothrops têm destaque por serem responsáveis por mais de 90% dos acidentes ocorridos no Brasil. Já o gênero Crotalus apresenta um percentual de 7,7%, com letalidade maior nos acidentes crotálicos (1,87%) (Fundação Nacional de Saúde, 1988). O ensaio em ovos embrionados de galinha (OEG), representa um modelo in vivo, alternativo ao teste convencional em camundongos para teste de letalidade, sendo um método bastante eficaz e versátil para estudos pré-clínicos, podendo também atuar de forma complementar aos testes in vitro. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo analisar, por meio de ensaio em OEG, a determinação da letalidade induzida pelos venenos, obtidos do laboratório de Herpetologia do Instituto Butantan de Bothrops jararaca e Crotalus durissus terrificus. Foi feita a avaliação da aplicabilidade de doses desafio desses venenos para calcular a dose letal 50% (DL50). Nesta pesquisa, foram utilizados 300 ovos fertilizados de galinhas da linhagem Novogen White, SPF, em embriões de 6 e 7 dias de desenvolvimento. Os OEG foram incubados a 37oC e 62% de umidade relativa até o momento de inoculação. Nos OEG, foram inoculados na cavidade alantoide, os venenos de B. jararaca (VBj) as concentrações de VBj: 84,2 μg a 2,63125 μg/ovo e C. durissus terrificus (VCdt) as concentrações de VCdt: 5,74 μg a 0,179375 μg/ovo, tendo como grupos controles o crescimento de ovos sem qualquer inoculação (GC) e controles inoculados com salina (GS) em paralelo. Os embriões foram analisados por meio de ovoscopia manual, após os tempos de incubação, nos intervalos de 24 horas e 48 horas, para avaliação da função vascular. Foi realizada a inspeção macroscópica das lesões dos embriões mortos e registro fotográfico. Os resultados obtidos de dose letal 50% (DL50) em OEG no teste de VCdt foram de DL50=0,8035 μg/ovo nos embriões de 6 dias e DL50=0,09113 μg/ovo nos embriões de 7 dias de desenvolvimento. Já o teste para VBj os valores estimados de DL50 foram de DL50=21,91 μg/ovos nos embriões de 6 dias e DL50=24,37 μg /ovo em embriões de 7 dias de vida embrionária. Os valores de DL50 obtidos em OEG ao serem comparados com os valores de DL50 em camundongos, demostraram ter boa correspondência entres as metodologias. A partir do uso dessa técnica, verificou-se que os OEG podem ser utilizados como alternativo ao método convencional em camundongos.

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Prezados leitores, Desde que recebi o convite para ser editora científica da revista Vigilância Sanitária em Debate: Sociedade, Ciência & Tecnologia (Health Surveillance under Debate: Society, Science & Technology) ­ Visa em Debate, tenho direcionado muita atenção para o fortalecimento da revista como potencial veículo de disseminação de conhecimento em Vigilância Sanitária. As áreas de pesquisa e desenvolvimento tecnológico têm caminhado intrinsecamente, porém outras, como a educação e a formação profissional em Vigilância Sanitária, necessitam de muita promoção e projetos que possibilitem essa formação.

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Introdução: Acidentes com animais peçonhentos são classificados como doenças tropicais negligenciadas e são atualmente a mais frequente causa de intoxicação em humanos no Brasil. O único tratamento disponível é a rápida administração de antivenenos específicos e de qualidade garantida. Para assegurar a eficácia e a segurança desses produtos, são realizados ensaios de determinação da potência in vivo para veneno e antiveneno, desde as etapas de produção até sua liberação final. Apesar dos diversos estudos sobre métodos   alternativos ao ensaio murino, nenhum método foi efetivamente validado. Objetivo: Compilar os métodos alternativos desenvolvidos para os antivenenos botrópicos, avaliando sua disponibilidade, perspectivas e aplicações em laboratórios de produção e controle da qualidade. Método: Foi realizada uma busca nas bases PubMed, BVS e Scopus entre novembro de 2021 e junho de 2022. Foram identificados 89 trabalhos, dos quais 31 foram selecionados de acordo com os critérios de elegibilidade. Resultados: Nos métodos alternativos identificados, observamos a preferência de 42,80% dos estudos por metodologias que utilizem linhagens celulares como método alternativo aos ensaios murinos, sendo que a maioria destes trabalhos 58,30% optou pela linhagem celular Vero. Conclusões: Pela diversidade das toxinas encontradas em cada gênero de serpentes, entende-se que é de extrema importância que o ensaio de potência dos antivenenos tenha como base a avaliação e a quantificação precisa da inibição da atividade biológica dos venenos. Ensaios de citotoxicidade são amplamente utilizados e têm acumulado evidências de sua adequação como importante ferramenta alternativa ao ensaio murino para o controle da qualidade de veneno e antiveneno antibotrópico.

Introduction: Accidents with venomous animals are classified as neglected tropical diseases and are currently the most frequent cause of intoxication in humans in Brazil. The only available treatment is the rapid administration of specific, quality-assured antivenoms. To ensure the efficacy and safety of these products, in vivo potency determination tests for venom and antivenom are performed during the production stages, until final release. Despite several studies on alternative methods to the murine assay, no method has been effectively validated. Objective: To compile alternative methods developed for Bothrops antivenoms, assessing the availability of the methods and the prospects and applications in Bothrops venom and antivenom production and quality control laboratories. Method: A search was conducted in PubMed, BVS, and Scopus databases between November 2021 and June 2022. 89 articles were identified, of which 31 were selected according to the eligibility criteria. Results: We observed in the alternative methods identified a preference of 42.80% of the studies for methodologies that use cell lines as an alternative method to the murine assays, and most of these works (58.30%) opted for a VERO cell line. Conclusions: Due to the diversity of toxins found in each genus of snakes, it is understood that the potency assay for antivenoms should be based on the evaluation and precise quantification of the inhibition of biological activity of venoms. Cytotoxicity assays are widely used and have been accumulating evidence of their suitability as an important alternative tool to the murine assay for quality control for Bothrops venom and antivenom.

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Pyrogens are substances capable of inducing mild reactions such as fever or severe systemic reactions that can lead to death. Injectable products need to be free of pyrogens when released by the quality control of the pharmaceutical industries, to meet good manufacturing practices. Currently there are 3 types of tests for pyrogen detection, the Monocyte Activation Test, the Bacterial Endotoxin Test and the Pyrogen Test in Rabbits, which is widely used in the release of injectable products. However, the pyrogen test in rabbits requires the use of many animals and cannot be used in certain substances such as anti-inflammatory drugs. The alternative method of bacterial endotoxin testing is not able to detect other pyrogens such as products of the metabolism of fungi, viruses and gram-positive bacteria. The Monocytes Activation Test is an alternative method that covers a wide range of pyrogens, can be used on a large scale for the release of injectable products and is more sensitive because it uses human blood as substrate. This study aimed to evaluate the applicability of the use of the monocytes activation test in place of the pyrogen test in rabbits used in biological quality control in the release of batches of injectable products produced by the Butantan Institute.

Pirogênios são substâncias capazes de induzir reações leves como febre ou reações sistêmicas severas que podem levar à morte. Os produtos injetáveis necessitam ser livres de pirogênios quando da sua liberação pelo controle de qualidade das indústrias farmacêuticas, para atender as Boas Práticas de Fabricação. Atualmente existem 3 tipos de testes para detecção de pirogênio, o teste de Ativação de Monócitos, o Teste de Endotoxina Bacteriana e o Teste de Pirogênio em Coelhos, sendo esse amplamente empregado na liberação dos produtos injetáveis. Porém, o teste de pirogênio em coelhos é um teste que demanda a utilização de muitos animais e não pode ser usado em determinadas substâncias como antinflamatórios. O método alternativo de teste de endotoxina bacteriana não é capaz de detectar outros pirogênios como os produtos do metabolismo de fungos, vírus e bactérias gram-positivas. Já o teste de Ativação de Monócitos é um método alternativo que abrange uma ampla gama de pirogênios, pode ser usado em grande escala para liberação dos produtos injetáveis e é mais sensível, pois utiliza como substrato sangue humano. Este trabalho teve como objetivo avaliar a aplicabilidade da utilização do teste de ativação de monócitos em substituição ao teste de pirogênio em coelhos empregado no Controle Qualidade Biológico na liberação dos lotes dos produtos injetáveis produzidos pelo Instituto Butantan.

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Snake envenomation is classified by the WHO as a neglected tropical disease. Since 2019, due to the 138,000 deaths/year, it has become a target of the organization's plan to reduce deaths and disability. In Brazil, Bothrops jararaca is responsible for 86.8% of accidents, being the subject of many studies to better understand the mechanisms of action of its venom. Toxicity testing commonly involves the use of animal models. Created in 1959, the 3 R’s principle aims to reduce, refine and replace the use of animals with alternative methods with equivalent results. Based on this premise, the objective of this work was to evaluate the toxicity of B. jararaca venom in cell culture as an alternative or complement to toxicity tests performed on animals, aiming at a greater alignment with the 3 R’s principle. RPE-1 cells (15.000 cells/well) were treated with B. jararaca venom between 0.1 μg/mL to 200 μg/mL for 24 h, cell viability and IC50 were calculated by MTT colorimetric assay. Five initial trials established optimal venom concentrations between 10 μg/mL and 200 μg/mL. The results indicated a dose-dependent decrease in cell viability, with a significant drop from 50 μg/mL, presenting viability of 70% and decreasing up to 7% at 200 μg/m. The IC50 calculation resulted in 75.20 μg/mL In conclusion, the work showed that the use of cell culture to analyze cell viability through the MTT test represents an effective method for obtaining data on the cytotoxicity of B. jararaca venom, contributing to the development of alternative methods to the use of animals, according to the principle of the 3 R’s.

O envenenamento por serpentes é classificado pela OMS como uma doença tropical negligenciada. Desde 2019, devido às 138.000 mortes/ano, tornou-se alvo do plano da organização para redução de mortes e invalidez. No Brasil, a espécie Bothrops jararaca é responsável por 86,8% dos acidentes, sendo alvo de muitos estudos para melhor compreensão dos mecanismos de ação de seu veneno. Testes de toxicidade comumente envolvem o uso de modelos animais. Criado em 1959, o princípio dos 3 R’s visa reduzir, refinar e substituir o uso de animais por métodos alternativos com resultados equivalentes. Partindo dessa premissa, o objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade do veneno de B. jararaca em cultura celular como alternativa ou complemento aos testes de toxicidade realizados em animais, visando um maior alinhamento com o princípio dos 3 R’s. Células RPE-1 (15.000 células/poço) foram tratadas com veneno de B. jararaca entre 0,1 μg/mL a 200 μg/mL por 24 h, a viabilidade celular e o IC50 foram calculados através do ensaio colorimétrico de MTT. Cinco ensaios iniciais estabeleceram as concentrações ideais do veneno entre 10 μg/mL e 200 μg/mL. Os resultados indicaram uma diminuição dose-dependente de viabilidade celular, com queda significativa a partir de 50 μg/mL, apresentando viabilidade de 70% e decaindo até 7% em 200 μg/m. O cálculo do IC50 resultou em 75,20 μg/mL Em conclusão, o trabalho mostrou que o uso da cultura celular para análise da viabilidade celular através do teste de MTT representa um método eficaz na obtenção de dados sobre citotoxicidade do veneno de B. jararaca, contribuindo para o desenvolvimento de métodos alternativos ao uso de animais, segundo o princípio dos 3 R’s.

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The study of propolis and the amniotic membrane as alternatives to promote the acceleration of healing has grown considerably. These products have shown to be easy to use, have bactericidal or bacteriostatic action and are affordable. The objective of the present study was to evaluate the action of the amniotic membrane of bitches and propolis in the healing of surgical wounds. To evaluate the efficacy of these methods the time for conclusion of the healing process of both groups was compared with a control group. In addition, the inflammatory response of each group was also evaluated to identify which alternative method could induce a better response in the healing process compared to the control group. For this purpose, 27 animals, Rattus norvegicus, variety Wistar, were used. Rats were separated into 3 groups with 9 animals each. Group I represented the 25% alcoholic propolis solution; Group II, Amniotic membrane; Group III was Control group. Wounds were assessed macroscopically for the lesion area, and microscopically for the histological quality of each wound layer and the intensity of inflammation and collagen deposition. After the macroscopic analysis, it was observed that there were no statistical differences among the 3 groups (p> 0.05) relevant to accelerate the healing process in terms of presence of inflammatory cells, fibroblasts, collagen, neovascularization, granulation tissue and re-epithelialization.(AU)

O estudo da própolis e da membrana amniótica como alternativa para promover a aceleração da cicatrização vem crescendo bastante, numa tentativa de buscar métodos alternativos para cicatrização de feridas que apresentem fácil utilização, ação bactericida ou bacteriostática e tenha custo acessível. Com o presente estudo objetivou-se avaliar a ação da membrana amniótica de cadelas e da própolis na cicatrização de feridas cirúrgicas, comparando o tempo no processo de cicatrização com o grupo controle e a resposta inflamatória de cada um, de maneira a identificar qual método alternativo induzirá melhor res-posta no processo de cicatrização em comparação ao grupo controle. Para tanto, foram utilizados 27 animais, Rattus norve-gicus, variedade Wistar, separados em três grupos com nove animais cada, sendo Grupo I solução alcoólica de própolis a 25%; Grupo II Membrana amniótica de cadelas; Grupo III Grupo controle. As feridas foram avaliadas macroscopica-mente quanto à área da lesão, e microscopicamente quanto à qualidade histológica de cada leito da ferida e à intensidade de inflamação e deposição de colágeno. Após a análise macroscópica, constatou-se que não houve diferenças estatísticas (p>0,05) relevantes para acelerar o processo cicatricial, quanto a presença de células inflamatórias, fibroblastos, colágeno, neovasculari-zação, tecido de granulação e reepitelização, perante os tratamentos alternativos e o grupo controle no processo de cicatrização.(AU)

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The study of propolis and the amniotic membrane as alternatives to promote the acceleration of healing has grown considerably. These products have shown to be easy to use, have bactericidal or bacteriostatic action and are affordable. The objective of the present study was to evaluate the action of the amniotic membrane of bitches and propolis in the healing of surgical wounds. To evaluate the efficacy of these methods the time for conclusion of the healing process of both groups was compared with a control group. In addition, the inflammatory response of each group was also evaluated to identify which alternative method could induce a better response in the healing process compared to the control group. For this purpose, 27 animals, Rattus norvegicus, variety Wistar, were used. Rats were separated into 3 groups with 9 animals each. Group I represented the 25% alcoholic propolis solution; Group II, Amniotic membrane; Group III was Control group. Wounds were assessed macroscopically for the lesion area, and microscopically for the histological quality of each wound layer and the intensity of inflammation and collagen deposition. After the macroscopic analysis, it was observed that there were no statistical differences among the 3 groups (p> 0.05) relevant to accelerate the healing process in terms of presence of inflammatory cells, fibroblasts, collagen, neovascularization, granulation tissue and re-epithelialization.

O estudo da própolis e da membrana amniótica como alternativa para promover a aceleração da cicatrização vem crescendo bastante, numa tentativa de buscar métodos alternativos para cicatrização de feridas que apresentem fácil utilização, ação bactericida ou bacteriostática e tenha custo acessível. Com o presente estudo objetivou-se avaliar a ação da membrana amniótica de cadelas e da própolis na cicatrização de feridas cirúrgicas, comparando o tempo no processo de cicatrização com o grupo controle e a resposta inflamatória de cada um, de maneira a identificar qual método alternativo induzirá melhor res-posta no processo de cicatrização em comparação ao grupo controle. Para tanto, foram utilizados 27 animais, Rattus norve-gicus, variedade Wistar, separados em três grupos com nove animais cada, sendo Grupo I – solução alcoólica de própolis a 25%; Grupo II – Membrana amniótica de cadelas; Grupo III – Grupo controle. As feridas foram avaliadas macroscopica-mente quanto à área da lesão, e microscopicamente quanto à qualidade histológica de cada leito da ferida e à intensidade de inflamação e deposição de colágeno. Após a análise macroscópica, constatou-se que não houve diferenças estatísticas (p>0,05) relevantes para acelerar o processo cicatricial, quanto a presença de células inflamatórias, fibroblastos, colágeno, neovasculari-zação, tecido de granulação e reepitelização, perante os tratamentos alternativos e o grupo controle no processo de cicatrização.

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ABSTRACT Objective: Specific legislation regulating the use of animals in research in Brazil was introduced in 2008. However, the viewpoint of the Brazilian population regarding the use of animals in research and teaching activities remains largely unknown. Investigation of the public viewpoint on and understanding of the topic is required given the current shifts in the animal ethics scenario in Brazil. The objective of this study was to provide the first insight into the Brazilian population viewpoint on the use of animals in scientific research and teaching activities. Methods: Data collected in a survey involving 2,115 individuals aged 16 years or older and residing in 130 municipalities distributed across the five Brazilian macroregions (North, Northeast, South, Southeast, and Midwest) were analyzed. The margin of error for entire sample was set at 2%, with a 95% confidence interval. Results: This survey revealed that most Brazilian citizens are in favor of the use animals in research, particularly for medical purposes. Different views depending on the nature of research were identified. Approximately 80% of respondents were also in favor of frequent oversight of laboratories and animal facilities. Conclusion: Survey findings indicate that the opinion of the Brazilian population is divided when it comes to the use of animals in scientific research and teaching. Divided opinions expose a limited understanding of the importance of basic sciences and emphasizes the need for improved communication between the scientific community and the general population. Further strategies aimed to promote animal welfare are discussed.

RESUMO Objetivo: A legislação específica que regula o uso de animais em pesquisa no Brasil foi introduzida em 2008. No entanto, a opinião da população brasileira sobre o uso de animais em atividades de pesquisa e ensino ainda é desconhecida. No atual cenário brasileiro em mudança com relação à ética animal, é necessário avaliar as visões e o conhecimento da população sobre o assunto. O objetivo deste destudo foi realizar o primeiro levantamento da opinião da população brasileira sobre o uso de animais em atividades de ensino e pesquisa científica. Métodos: Analisamos os resultados de uma pesquisa com 2.115 indivíduos com 16 anos ou mais de 130 municípios das cinco macrorregiões brasileiras (Norte, Nordeste, Sul, Sudeste e Centro-Oeste). A margem de erro para toda a amostra foi de 2% dentro de um intervalo de confiança de 95%. Resultados: A pesquisa revelou que a maioria da população brasileira era favorável ao uso de animais em pesquisas, principalmente para fins médicos. Diferentes pontos de vista, dependendo da natureza da pesquisa, também foram identificados. Além disso, aproximadamente 80% dos entrevistados eram favoráveis ao monitoramento frequente de laboratórios e instalações de animais. Conclusão: A opinião da população brasileira está dividida com relação ao uso de animais em pesquisa e ensino científicos. Essa divisão expõe um entendimento limitado da importância das ciências básicas e destaca a necessidade de uma melhor comunicação entre a comunidade científica e a população em geral. Outras ações para alcançar as melhorias desejadas no bem-estar animal são discutidas.

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Angiogenesis is a fundamental physiological process with strong implications in tissue homeostasis. Animal models helping to identify how angiogenesis is regulated are fundamental to answer many biological questions. Chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) assay is one of the most employed methods to study angiogenesis. In this study we applied a scientometric approach to evaluate the employment of CAM assay in published articles. Temporal trends indicated that CAM assay was the preferred method to investigate angiogenesis over time. The publications had a significant number of citations and the impact factor of journals publishing articles is relevant for the scientific community. A total of 52 different research areas have articles published using this particular technique. Oncology is the research field in which CAM assay was mostly used. Accordingly, tumor-derived cell lines were the most frequent sample tested on CAM. We also identified that 73,6% of articles published used only CAM assay to answer questions concerning angiogenesis. We concluded that although the CAM assay is a classical approach, that does not need so much infrastructure and financial support to be performed, it is a well-accepted technique by the scientific community. In addition, this methodology has gain attention in scientific community because no pain is experienced by the chick and they are minor ethical concerns to employ this method. Moreover, this data can help researchers who are unfamiliar with the CAM assay to identify if this particular method is suitable for their research.

A angiogênese é um processo fisiológico fundamental com fortes implicações na homeostase tecidual. Modelos animais que ajudam a entender como a angiogênese é regulada, são fundamentais para responder a muitas questões biológicas. O ensaio de membrana corioalantóide de embrião de galinha (CAM) é um dos métodos mais empregados para estudar a angiogênese. Neste estudo foi aplicada uma abordagem cientométrica para avaliar o emprego do ensaio CAM em artigos científicos já publicados. Tendências temporais indicaram que o ensaio CAM foi o método mais usado para investigar a angiogênese ao longo do tempo. Os artigos científicos que usaram a metodologia CAM foram publicados em periódicos com significativos números de citações e fator de impacto. No total 52 diferentes áreas de conhecimento usaram a técnica CAM, sendo a oncologia o campo o qual produziu maior número de artigos usando essa metodologia. Consequentemente o material biológico mais testado foi as linhagens celulares tumorais. Também foi identificado que 73,6% dos artigos publicados utilizaram apenas o teste CAM para responder questões relacionadas à angiogênese. Pode se concluir que embora o ensaio CAM seja uma abordagem clássica, que não necessita de muita infraestrutura e apoio financeiro para ser realizado, é uma técnica bem aceita pela comunidade científica. Além disso, esta metodologia tem ganhado atenção na comunidade científica porque os animais testados não sofrem dor e por essa razão esse modelo experimental exige mínimas preocupações éticas. Além disso, esses dados podem ajudar os pesquisadores que não estão familiarizados com o ensaio CAM a identificar se esse método específico é adequado para sua pesquisa.

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At the School of Veterinary Medicine and Animal Science, University of São Paulo, Brazil, preliminary surgical training involving live animals has been replaced by the use of embalmed canine cadavers. This study aimed to improve the embalming technique based on the modified Larssen solution by altering the original formulation. Twenty-four canine corpses obtained according to the norms and resolutions described by the animal research ethics committee were used in this study. The cadavers were randomly allocated to two groups, G1 and G2, and treated with modified Larsen solution containing 20% and 10% formalin, respectively. The Larssen solution used in G1 contained a higher volume of distilled water and higher formalin concentration than the one used in G2. Cadavers were used in hands-on surgical training labs for four weeks. The following evaluation criteria were considered: general appearance, muscle tissue color, tissue texture/consistency, joint flexibility, odor development, and skin integrity in the abdominal and other regions involved in surgical training. The cadavers in both groups showed good general appearance and retained satisfactory organoleptic properties for surgical training throughout the experimental period. There was no significant difference between the groups treated with 20% or 10% modified Larssen solution (p > 0.05; chi-square test). The present findings were considered positive, because the dilution of the original formulation exhibited similar efficacy and required smaller amounts of chemicals, thus reducing the formulation cost.(AU)

Na Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, o treinamento cirúrgico inicial em animais vivos foi substituído pelo uso de cadáveres caninos quimicamente preservados. O objetivo deste estudo foi melhorar a técnica de embalsamamento baseada na solução Larssen modificada através de modificações em sua formulação original. Vinte e quatro cadáveres caninos obtidos conforme as normas e resoluções descritas pelo comitê de ética em pesquisa animal foram utilizados neste estudo. Os cadáveres foram divididos aleatoriamente em dois grupos (G1 ou G2) e tratados com solução modificada de Larssen contendo 20% e 10% de formalina, respectivamente. A solução de Larssen usada em G1 continha um maior volume de água destilada e maior concentração de formalina em comparação com o utilizado em G2. Os cadáveres foram utilizados no laboratório de treinamento cirúrgico prático durante quatro semanas. Foram considerados os seguintes critérios de avaliação: aparência geral, cor do tecido muscular, textura/consistência do tecido, flexibilidade das articulações, desenvolvimento de odor e integridade da pele na região abdominal e outras regiões envolvidas no treinamento cirúrgico. Os cadáveres em ambos os grupos apresentaram boa aparência geral e mantiveram as propriedades organolépticas satisfatórias para treinamento cirúrgico ao longo do período experimental. Os cadáveres tratados com 20% ou 10% de solução modificada de Larssen não diferiram significativamente (p> 0,05, teste de qui-quadrado). Os resultados deste estudo foram considerados positivos, visto que a diluição da formulação original produziu eficácia semelhante e, no entanto, exigiu quantidades menores de produtos químicos, diminuindo o custo da formulação.(AU)

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A fim de garantir a qualidade final de produtos os laboratórios de análise microbiológica fornecem dados sobre a qualidade dos mesmos em todas as suas etapas de produção. A crescente preocupação com a saúde dos pacientes conduz à busca de métodos que forneçam resultados precisos e rápidos, pois possibilitam que ações corretivas sejam tomadas em tempo real. O presente trabalho teve por objetivo avaliar o potencial de tecnologia alternativa no monitoramento de endotoxina bacteriana na água tratada para diálise e dialisato e avaliar o potencial da citometria de fluxo na análise de água. Para isso utilizou-se Portable Test System (PTS®) como método alternativo para detecção de endotoxina bacteriana no monitoramento da água tratada para diálise e dialisato, o qual foi validado frente ao método convencional farmacopeico. Paralelamente realizou-se revisão narrativa da literatura a fim de avaliar a aplicabilidade da citometria de fluxo em análises de água. A análise dos diferentes parâmetros de validação para endotoxina bacteriana no método alternativo mostrou que, exceto para a menor diluição analisada, houve linearidade e precisão nos resultados. Por outro lado a concentração de 0,25 UE/mL foi a menor que apresentou exatidão e especificidade. Observou-se ainda, que o limite de detecção foi de 0,125UE/mL e o de quantificação de 0,25 UE/mL, portanto o intervalo foi de 0,25-1,0 UE/mL. Adicionalmente pela análise de resistência pode-se perceber que ao variar analistas não houve diferença significativa. Em relação ao tempo de análise em uma condição de rotina laboratorial com muitas amostras, o PTS® mostrou-se demorado. Ressalta ainda, que seria importante que a legislação vigente determinasse a análise mensal de endotoxinas no dialisato. A revisão da literatura evidencia o potencial da tecnologia de citometria de fluxo, pois a mesma mostrou-se satisfatória quando comparada a metodologias convencionais para análise de água. O trabalho desenvolvido permitiu concluir que o PTS®) mostrou-se adequado para analisar amostras in loco, permitindo análises em tempo real, que para as quais haja a expectativa de ausência de endotoxinas ou de concentração respeitando o intervalo de 0,25 UE/mL a 1,0 UE/mL. Quanto a citometria de fluxo, esta mostrou-se uma tecnologia promissora em analisar amostras de água, sendo portanto recomendável proceder a estudos de validação e aplicabilidade

In order to guarantee the final quality of products, the microbiological analysis laboratories provide data about their quality at all production stages. The growing concern for patients' health leads to the search for methods that provide accurate and fast results, as they enable corrective actions to be taken in real time. The present work aimed to evaluate the alternative technology potential in the monitoring of bacterial endotoxin in treated water for dialysis and dialysate and to evaluate the potential of flow cytometry in water analysis. The different validation parameters analysis for bacterial endotoxin in alternative method showed that, except for the lowest dilution analyzed, there was linearity and precision in the results. On the other hand, the concentration of 0.25 EU / mL was the lowest that presented accuracy and specificity. It was further observed that the detection limit was 0.125UE / mL and the quantification limit was 0.25 EU / mL, so the range was 0.25-1.0 EU / mL. Additionally by the ruggedness analysis it was possible to perceived that when varying analysts there was no significant difference. Regarding the analysis time in a laboratory routine condition with many samples, the PTS® was was time consuming. It was also observed that it would be important to determine monthly analysis of endotoxins in dialysate. The literature review evidence the flow cytometry technology potential of the because it was satisfactory when compared to conventional methodologies for water analysis. The research showed that the PTS® was suitable for analyzing samples in loco, allowing real-time analyzes, for which there is expectation of endotoxins absence or concentration respecting the range of 0.25 EU / mL to 1.0 EU / mL. For the flow cytometry, it was shown to be a promising technology for analyzing water samples, and it is therefore advisable to carry out validation and applicability studies

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A grande maioria dos estudos que envolvem a investigação da ação de substâncias de origem natural terapeuticamente promissora associadas às fisiopatologias que acometem a musculatura lisa, utiliza-se de modelos de músculo liso isolados de animais de laboratórios, onde dependem unicamente desse método para o desenvolvimento de pesquisas. Na região do Cariri encontram-se inúmeras instituições de ensino que ainda dependem de animais para pesquisa, em especial a Universidade Regional do Cariri-URCA conta com programas de pós-graduação onde algumas linhas de pesquisa dependem unicamente desse método. Os aspectos éticos da utilização de animais em experimentos estimulam a adoção de métodos alternativos sempre que possível. O presente trabalho é um relato de experiência que pretende demonstrar como se encontra a situação da pesquisa científica frente aos métodos alternativos que estão sendo implementados no Laboratório de Fisiofarmacologia das Células Excitáveis da URCA, para substituição ao uso de animais laboratoriais, obedecendo assim, a regra dos 3Rs. São utilizados cordões umbilicais, obtidos de partos normais no bloco de obstetrícia do Hospital e Maternidade São Francisco de Assis, e órgãos suínos providos de animais abatidos para consumo de carne, obtidos do abatedouro Frigorífico Industrial do Cariri. Os experimentos estão sendo desenvolvidos com a técnica de banho de órgãos, verificando o efeito miorrelaxante de produtos naturais. Pesquisas como monografias, dissertações e teses estão sendo desenvolvidas. Os vasos umbilicais e bronquíolos de suínos estão substituindo respectivamente o uso de artéria aorta e traqueia de ratos. Com isso, vimos que é possível reduzir e substituir o número de animais eutanasiados com finalidade de pesquisa científica.

The great majority of the studies involving the investigation of the action of therapeutically promising natural substances associated to the pathophysiologies that affect the smooth muscle, use of smooth muscle models isolated from laboratory animals, where they depend solely on this method for the development of researches. In the Cariri region there are numerous educational institutions that still depend on animals for research, in particular the Regional University of Cariri-URCA has postgraduate programs where some lines of research depend solely on this method. The ethical aspects of using animals in experiments encourage the adoption of alternative methods whenever possible. The present work is an experience report that intends to demonstrate how the situation of the scientific research is faced with the alternative methods being implemented in the Laboratory of Physiopharmacology of Excitable Cells of URCA, to replace the use of laboratory animals, obeying the 3Rs rule. Umbilical cords, obtained from normal deliveries in the obstetric block of the São Francisco de Assis Hospital and Maternity Unit, and swine organs provided with animals slaughtered for meat consumption, obtained from the slaughterhouse Frigorífico Industrial do Cariri, are used. The experiments are being developed with the organ bath technique, verifying the myorelaxant effect of natural products. Researches such as monographs, dissertations and theses are being developed. The umbilical vessels and bronchioles of pigs are respectively replacing the use of the aorta and trachea of rats. With this, we have seen that it is possible to reduce and replace the number of euthanized animals for scientific research purposes.

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A semeadura do sorgo adensado pode influenciar no manejo cultural de plantas daninhas e desempenho produtivo da cultura. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do adensamento na semeadura do sorgo sobre o desenvolvimento agronômico da cultura e supressão de plantas daninhas. O experimento foi conduzido a campo no delineamento blocos casualizados. Os tratamentos foram dispostos em arranjo fatorial 2x2x2, adotando oito repetições. O primeiro fator consistiu em dois espaçamentos entre linhas, 0,50 e 0,25 m; o segundo fator foi composto por duas populações, 180.000 e 270.000 plantas ha-1; por fim, o terceiro fator correspondeu à convivência ou não com a comunidade infestante. Para o sorgo, foi avaliada a altura de plantas, comprimento e massa de panícula, massa de mil grãos e produtividade. Para as plantas daninhas, avaliou-se densidade e massa seca. O espaçamento entre linhas e a população de plantas influenciou os componentes de rendimento do sorgo, sem, contudo, apresentar efeito sobre a produtividade. A interferência das plantas daninhas durante todo o ciclo de desenvolvimento do sorgo promoveu redução na produtividade. O adensamento de plantas no cultivo do sorgo proporcionou redução da densidade de infestação e massa seca de plantas daninhas.(AU)

The dense sowing of sorghum can influence the crop yield performance. In addition, this practice can also be used in the cultural management of weeds. This study aimed to evaluate the influence of densification on sorghum sowing, agronomic crop development, and weed suppression. The experiment was conducted in the field in the randomized complete block design. The treatments were arranged in factorial arrangement 2x2x2, adopting eight replications. The first factor consisted of two row spacings, 0,50 and 0,25 m; the second factor was composed of two populations, 180,000 and 270,000 plants ha-1; finally, the third factor corresponded to the cohabitation or not with the weeds. For sorghum, the height of plants, length and panicle mass, mass of one thousand grains, and yield were evaluated. Weeds were evaluated for density and dry mass. Row spacing and plant population influenced sorghum yield components, but they did not have effect on the yield. Weed interference during the entire development cycle of sorghum reduced its yield. The densification of plants in sorghum cultivation reduced weed density and weed dry mass.(AU)

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A grande maioria dos estudos que envolvem a investigação da ação de substâncias de origem natural terapeuticamente promissora associadas às fisiopatologias que acometem a musculatura lisa, utiliza-se de modelos de músculo liso isolados de animais de laboratórios, onde dependem unicamente desse método para o desenvolvimento de pesquisas. Na região do Cariri encontram-se inúmeras instituições de ensino que ainda dependem de animais para pesquisa, em especial a Universidade Regional do Cariri-URCA conta com programas de pós-graduação onde algumas linhas de pesquisa dependem unicamente desse método. Os aspectos éticos da utilização de animais em experimentos estimulam a adoção de métodos alternativos sempre que possível. O presente trabalho é um relato de experiência que pretende demonstrar como se encontra a situação da pesquisa científica frente aos métodos alternativos que estão sendo implementados no Laboratório de Fisiofarmacologia das Células Excitáveis da URCA, para substituição ao uso de animais laboratoriais, obedecendo assim, a regra dos 3Rs. São utilizados cordões umbilicais, obtidos de partos normais no bloco de obstetrícia do Hospital e Maternidade São Francisco de Assis, e órgãos suínos providos de animais abatidos para consumo de carne, obtidos do abatedouro Frigorífico Industrial do Cariri. Os experimentos estão sendo desenvolvidos com a técnica de banho de órgãos, verificando o efeito miorrelaxante de produtos naturais. Pesquisas como monografias, dissertações e teses estão sendo desenvolvidas. Os vasos umbilicais e bronquíolos de suínos estão substituindo respectivamente o uso de artéria aorta e traqueia de ratos. Com isso, vimos que é possível reduzir e substituir o número de animais eutanasiados com finalidade de pesquisa científica.(AU)

The great majority of the studies involving the investigation of the action of therapeutically promising natural substances associated to the pathophysiologies that affect the smooth muscle, use of smooth muscle models isolated from laboratory animals, where they depend solely on this method for the development of researches. In the Cariri region there are numerous educational institutions that still depend on animals for research, in particular the Regional University of Cariri-URCA has postgraduate programs where some lines of research depend solely on this method. The ethical aspects of using animals in experiments encourage the adoption of alternative methods whenever possible. The present work is an experience report that intends to demonstrate how the situation of the scientific research is faced with the alternative methods being implemented in the Laboratory of Physiopharmacology of Excitable Cells of URCA, to replace the use of laboratory animals, obeying the 3Rs rule. Umbilical cords, obtained from normal deliveries in the obstetric block of the São Francisco de Assis Hospital and Maternity Unit, and swine organs provided with animals slaughtered for meat consumption, obtained from the slaughterhouse Frigorífico Industrial do Cariri, are used. The experiments are being developed with the organ bath technique, verifying the myorelaxant effect of natural products. Researches such as monographs, dissertations and theses are being developed. The umbilical vessels and bronchioles of pigs are respectively replacing the use of the aorta and trachea of rats. With this, we have seen that it is possible to reduce and replace the number of euthanized animals for scientific research purposes.(AU)

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A semeadura do sorgo adensado pode influenciar no manejo cultural de plantas daninhas e desempenho produtivo da cultura. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do adensamento na semeadura do sorgo sobre o desenvolvimento agronômico da cultura e supressão de plantas daninhas. O experimento foi conduzido a campo no delineamento blocos casualizados. Os tratamentos foram dispostos em arranjo fatorial 2x2x2, adotando oito repetições. O primeiro fator consistiu em dois espaçamentos entre linhas, 0,50 e 0,25 m; o segundo fator foi composto por duas populações, 180.000 e 270.000 plantas ha-1; por fim, o terceiro fator correspondeu à convivência ou não com a comunidade infestante. Para o sorgo, foi avaliada a altura de plantas, comprimento e massa de panícula, massa de mil grãos e produtividade. Para as plantas daninhas, avaliou-se densidade e massa seca. O espaçamento entre linhas e a população de plantas influenciou os componentes de rendimento do sorgo, sem, contudo, apresentar efeito sobre a produtividade. A interferência das plantas daninhas durante todo o ciclo de desenvolvimento do sorgo promoveu redução na produtividade. O adensamento de plantas no cultivo do sorgo proporcionou redução da densidade de infestação e massa seca de plantas daninhas.

The dense sowing of sorghum can influence the crop yield performance. In addition, this practice can also be used in the cultural management of weeds. This study aimed to evaluate the influence of densification on sorghum sowing, agronomic crop development, and weed suppression. The experiment was conducted in the field in the randomized complete block design. The treatments were arranged in factorial arrangement 2x2x2, adopting eight replications. The first factor consisted of two row spacings, 0,50 and 0,25 m; the second factor was composed of two populations, 180,000 and 270,000 plants ha-1; finally, the third factor corresponded to the cohabitation or not with the weeds. For sorghum, the height of plants, length and panicle mass, mass of one thousand grains, and yield were evaluated. Weeds were evaluated for density and dry mass. Row spacing and plant population influenced sorghum yield components, but they did not have effect on the yield. Weed interference during the entire development cycle of sorghum reduced its yield. The densification of plants in sorghum cultivation reduced weed density and weed dry mass.

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At the School of Veterinary Medicine and Animal Science, University of São Paulo, Brazil, preliminary surgical training involving live animals has been replaced by the use of embalmed canine cadavers. This study aimed to improve the embalming technique based on the modified Larssen solution by altering the original formulation. Twenty-four canine corpses obtained according to the norms and resolutions described by the animal research ethics committee were used in this study. The cadavers were randomly allocated to two groups, G1 and G2, and treated with modified Larsen solution containing 20% and 10% formalin, respectively. The Larssen solution used in G1 contained a higher volume of distilled water and higher formalin concentration than the one used in G2. Cadavers were used in hands-on surgical training labs for four weeks. The following evaluation criteria were considered: general appearance, muscle tissue color, tissue texture/consistency, joint flexibility, odor development, and skin integrity in the abdominal and other regions involved in surgical training. The cadavers in both groups showed good general appearance and retained satisfactory organoleptic properties for surgical training throughout the experimental period. There was no significant difference between the groups treated with 20% or 10% modified Larssen solution (p > 0.05; chi-square test). The present findings were considered positive, because the dilution of the original formulation exhibited similar efficacy and required smaller amounts of chemicals, thus reducing the formulation cost.

Na Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, o treinamento cirúrgico inicial em animais vivos foi substituído pelo uso de cadáveres caninos quimicamente preservados. O objetivo deste estudo foi melhorar a técnica de embalsamamento baseada na solução Larssen modificada através de modificações em sua formulação original. Vinte e quatro cadáveres caninos obtidos conforme as normas e resoluções descritas pelo comitê de ética em pesquisa animal foram utilizados neste estudo. Os cadáveres foram divididos aleatoriamente em dois grupos (G1 ou G2) e tratados com solução modificada de Larssen contendo 20% e 10% de formalina, respectivamente. A solução de Larssen usada em G1 continha um maior volume de água destilada e maior concentração de formalina em comparação com o utilizado em G2. Os cadáveres foram utilizados no laboratório de treinamento cirúrgico prático durante quatro semanas. Foram considerados os seguintes critérios de avaliação: aparência geral, cor do tecido muscular, textura/consistência do tecido, flexibilidade das articulações, desenvolvimento de odor e integridade da pele na região abdominal e outras regiões envolvidas no treinamento cirúrgico. Os cadáveres em ambos os grupos apresentaram boa aparência geral e mantiveram as propriedades organolépticas satisfatórias para treinamento cirúrgico ao longo do período experimental. Os cadáveres tratados com 20% ou 10% de solução modificada de Larssen não diferiram significativamente (p> 0,05, teste de qui-quadrado). Os resultados deste estudo foram considerados positivos, visto que a diluição da formulação original produziu eficácia semelhante e, no entanto, exigiu quantidades menores de produtos químicos, diminuindo o custo da formulação.

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El control de calidad de las vacunas resulta fundamental para las actividades de producción, liberación lote a lote y comercialización de las vacunas. Sin embargo, en la actualidad este es un proceso que por su concepción es lento y costoso debido a que se apoya en la realización de extensas pruebas en animales para demostrar la potencia y seguridad de estos productos biológicos. El desarrollo de métodos alternativos inspirados en el principio de las 3Rs (Reducción, Refinamiento y Reemplazo) constituye una tendencia que debe impactar de manera muy significativa en la reducción de los tiempos de liberación y el costo del proceso de control de calidad de vacunas en los próximos años. En particular la sustitución de las pruebas de potencia y toxicidad in vivo por procedimientos alternativos más relevantes, rápidos, exactos, reproducibles, robustos y baratos, que incluyen la serología, la cuantificación directa de antígeno, los ensayos en cultivos celulares y el enfoque a consistencia, por solo mencionar algunos; implica un cambio de paradigma, con indiscutibles repercusiones éticas, logísticas, económicas y científico-técnicas, para el aseguramiento de los parámetros de calidad de los inmunobiológicos con el mejor balance costo-beneficio: las vacunas. Los fundamentos técnicos de estos métodos alternativos, sus ventajas y nivel de implementación a nivel internacional, así como sus principales limitaciones, son abordados en este trabajo(AU)

Vaccine quality control is crucial for the manufacturing, lot release and commercialization activities worldwide. However, the current process is by-design too slow and expensive because is based on large animal assays for assuring the potency and safety of these important biological products. The development of 3Rs alternative methods (Reduction, Refinement and Replacement) is a trend able to significantly reduce the releasing times and costs of the vaccine quality control processes in the next few years. Particularly, the replacement of the animals-based potency and toxicity assays by alternative procedures more relevant, fast, accurate, reproducible and cheap, including serology, direct antigen quantification, cell culture tests and the Consistency Approach, for just mentioning some of them, implies a paradigm shift, with undisputable ethical, logistical, economic, scientific and technical repercussions for ensuring the vaccine quality parameters. Theoretical basements, advantages and implementation levels of the alternatives methods as well as their main limitations are presented in this paper(AU)

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Introduction: The detection of pyrogens is essential for the quality control of injectable products. The Rabbit Pyrogen Test remains widely used, despite the existence of alternative methods such as the Monocyte Activation Test (MAT). Objective: To review the use of alternative methods for pyrogen testing, pointing out advances and perspectives from the recognition of MAT by the European pharmacopoeia and its acceptance for regulatory purposes in Brazil. Method: A search was performed on the PubMed and BVS databases, with further classification, categorization by topic and critical analysis of the results. Results: Twenty-four papers were identified, addressing topics such as applications of MAT, its validation and comparisons with in vivo tests. MAT presented better results when compared to other tests, both in the evaluation of biological products and in the detection of non-endotoxin pyrogens. Limitations to diffusion include difficulties in obtaining whole human blood as a source of monocytes, for which several alternatives have been proposed. Conclusions: MAT is a promising method, with application in safety evaluation of new technologies. Its application in Brazil depends on a national implementation policy, which might include greater integration between BraCVAM, Concea and RENAMA in search for its recognition for regulatory purposes.

Introdução: A detecção de pirogênios é imprescindível no controle da qualidade de produtos injetáveis. O Teste de Pirogênio em coelhos ainda tem larga aplicação, apesar da existência de métodos alternativos como o Teste de Ativação de Monócitos (MAT). Objetivo: Revisar o uso dos métodos alternativos no teste de pirogênio, apontando avanços e perspectivas a partir do reconhecimento do MAT pela Farmacopeia Europeia e sua aceitação para fins regulatórios no Brasil. Método: Uma busca foi realizada nas bases PubMed e BVS, com posterior classificação, categorização por assuntos e análise crítica dos resultados. Resultados: Foram identificados 24 trabalhos, abordando temas como as aplicações do MAT, sua validação e comparação com testes in vivo. O MAT apresentou melhores resultados quando comparado a outros testes, tanto na avaliação de produtos biológicos como na detecção de pirogênios não-endotoxinas. Limitações para sua difusão incluem a dificuldade de obtenção de sangue total humano como fonte de monócitos, para o qual diversas alternativas têm sido propostas. Conclusões: O MAT se mostra um método promissor, com aplicação na avaliação da segurança de novas tecnologias. Sua aplicação no Brasil depende de uma política nacional de implantação, que inclua maior Integração entre BraCVAM, Concea e RENAMA na busca por seu reconhecimento para fins regulatórios.