RESUMO
Os antioxidantes são capazes de proteger as células do estresse oxidativo, podendo ser utilizados em diluentes de refrigeração, a fim de aumentar a viabilidade do sêmen. O presente estudo teve como objetivo verificar os efeitos da adição de diferentes concentrações de trolox sobre espermatozoides suínos diluídos e conservados em leite em pó desnatado (LPD) a 10 °C. Foram utilizados 63 ejaculados, submetidos a 4 tratamentos: T1 = LPD (controle); T2 = LPD+25.000μg de trolox/100mL; T3 =LPD+50.000μg de trolox/100mL; e T4 = LPD+75.000μg de trolox/100mL. Foram realizadas análises diárias (D0 a D4) de vigor e motilidade e nos D0 e D4 foi realizado o teste hiposmótico, vitalidade espermática e integridade acrossomal. As médias de vigor e motilidade do T1 foram superiores em relação aos demais tratamentos, embora não diferentes do T2 e T3 (D0 a D2). O T4 apresentou as piores médias de vigor e motilidade, não diferindo do T3. O percentual de espermatozoides vivos e integridade de membranas plasmática e acrossomal, não foram diferentes entre os tratamentos, tanto no D0 quanto no D4. A adição de trolox ao diluente LPD não promoveu efeitos benéficos sobre a conservação do sêmen. Elevadas concentrações de trolox prejudicaram a qualidade espermática, não sendo aplicáveis na preparação de doses inseminantes. A ausência de efeitos positivos sugere uma possível interferência do diluente LPD sobre a ação antioxidante do trolox. Maiores estudos são necessários, a fim de se poder evidenciar a ação do trolox; bem como sua possível interação com o diluente do sêmen.
Antioxidants are able to protect cells from oxidative stress and may be used in refrigeration extenders to increase the sperm viability. The present study aimed to determine the effects of adding different concentrations of trolox on boar spermatozoa diluted and stored in skimmed milk powder (LPD) at 10 °C. In 63 ejaculates were used and subjected to four treatments: T1 = LPD (control); T2 = LPD+25.000μg of trolox/100mL; T3 = LPD+50.000μg of trolox/100mL; and T4 = LPD+75.000μg of trolox/100mL. Analyzes of vigor and sperm motility were performed daily (D0 to D4). At D0 and D4 hiposmotic, sperm vitality and acrosomal integrity tests were performed. The mean vigour and motility Of T1 were higher compared to the other treatments, although not different from T2 and T3 (D0 toD2). The T4 had the worst average vigour and motility, not differing from T3. The percentages of live sperm and integrity of plasma and acrosomal membranes were not different between treatments, both D0 and in D4. The addition of the trolox in LPD diluent did not promote beneficial effects on the preservation of semen. High concentrations of trolox impaired sperm quality, not being an applicable option in the preparation of insemination doses. The absence of positive effects suggests a possible interference of LPD on the antioxidant activity of trolox. Further studies are necessary to demonstrate the antioxidant activity of trolox, as well its possible interaction with the semen extender.Keywords: boar semen, skimmed milk powder, trolox, antioxidante.
Assuntos
Animais , Antioxidantes , Leite Desnatado em Pó , Preservação do Sêmen/métodos , Preservação do Sêmen/veterinária , Estresse Oxidativo , SuínosRESUMO
Os antioxidantes são capazes de proteger as células do estresse oxidativo, podendo ser utilizados em diluentes de refrigeração, a fim de aumentar a viabilidade do sêmen. O presente estudo teve como objetivo verificar os efeitos da adição de diferentes concentrações de trolox sobre espermatozoides suínos diluídos e conservados em leite em pó desnatado (LPD) a 10 °C. Foram utilizados 63 ejaculados, submetidos a 4 tratamentos: T1 = LPD (controle); T2 = LPD+25.000μg de trolox/100mL; T3 =LPD+50.000μg de trolox/100mL; e T4 = LPD+75.000μg de trolox/100mL. Foram realizadas análises diárias (D0 a D4) de vigor e motilidade e nos D0 e D4 foi realizado o teste hiposmótico, vitalidade espermática e integridade acrossomal. As médias de vigor e motilidade do T1 foram superiores em relação aos demais tratamentos, embora não diferentes do T2 e T3 (D0 a D2). O T4 apresentou as piores médias de vigor e motilidade, não diferindo do T3. O percentual de espermatozoides vivos e integridade de membranas plasmática e acrossomal, não foram diferentes entre os tratamentos, tanto no D0 quanto no D4. A adição de trolox ao diluente LPD não promoveu efeitos benéficos sobre a conservação do sêmen. Elevadas concentrações de trolox prejudicaram a qualidade espermática, não sendo aplicáveis na preparação de doses inseminantes. A ausência de efeitos positivos sugere uma possível interferência do diluente LPD sobre a ação antioxidante do trolox. Maiores estudos são necessários, a fim de se poder evidenciar a ação do trolox; bem como sua possível interação com o diluente do sêmen.(AU)
Antioxidants are able to protect cells from oxidative stress and may be used in refrigeration extenders to increase the sperm viability. The present study aimed to determine the effects of adding different concentrations of trolox on boar spermatozoa diluted and stored in skimmed milk powder (LPD) at 10 °C. In 63 ejaculates were used and subjected to four treatments: T1 = LPD (control); T2 = LPD+25.000μg of trolox/100mL; T3 = LPD+50.000μg of trolox/100mL; and T4 = LPD+75.000μg of trolox/100mL. Analyzes of vigor and sperm motility were performed daily (D0 to D4). At D0 and D4 hiposmotic, sperm vitality and acrosomal integrity tests were performed. The mean vigour and motility Of T1 were higher compared to the other treatments, although not different from T2 and T3 (D0 toD2). The T4 had the worst average vigour and motility, not differing from T3. The percentages of live sperm and integrity of plasma and acrosomal membranes were not different between treatments, both D0 and in D4. The addition of the trolox in LPD diluent did not promote beneficial effects on the preservation of semen. High concentrations of trolox impaired sperm quality, not being an applicable option in the preparation of insemination doses. The absence of positive effects suggests a possible interference of LPD on the antioxidant activity of trolox. Further studies are necessary to demonstrate the antioxidant activity of trolox, as well its possible interaction with the semen extender.Keywords: boar semen, skimmed milk powder, trolox, antioxidante.(AU)
Assuntos
Animais , Preservação do Sêmen/métodos , Preservação do Sêmen/veterinária , Antioxidantes , Leite Desnatado em Pó , Suínos , Estresse OxidativoRESUMO
One of the critical points in the cryopreservation process is the use of a proper diluent while lowering the temperature following the resuspension and thawing processes. Here, we tested an alternative diluent for the process of freezing boar semen. We used skimmed dried milk (SDM) during the cooling and post-thawed resuspension steps. To do so, we collected semen from 15 Dalland boars using the glovedhand technique, and incubated each ejaculate sample at 30 C. We then removed two semen aliquots from a pre-dilution. We diluted one of the aliquots in Beltsville thawing solution (BTS - control), and the remaining sample was diluted in SDM. Both aliquots were subsequently held at 30º C for 45 min (1st period of stabilization). At the end of this period, we analysed vigor and motility to determine sperm metabolic activity. We then held the diluted semen at 25 C for 30 min (2nd period of stabilization) and at 17 C for 2 h (3rd period stabilization). We centrifuged the semen at 800 × g and 1600 × g at 5º C for 15 min, discarded the supernatant, and resuspended the sperm pellet in 2 mL of the cooling diluent at 5 C for 1h. We again diluted the samples in 2 mL of the freezing diluent, poured them into straws, and cooled and plunged them into liquid N2. The sêmen samples were thawed in a 39º C water bath, and were resuspended in their respective diluents at the same temperature. We determined the following sperm features: vigor, motility, vitality, acrosomal integrity and membrane functionality. During the first phase of temperature cooling (30º C), semen diluted in SDM exhibited a higher vigor (3.4 ± 0.6) and motility (78.6 ± 13.0) than those diluted BTS (vigor: 3.1 ± 0.7; motility: 69.4±14.3).
Esse estudo objetivou testar um diluente alternativo, a base de leite em pó desnatado, durante as etapas de resfriamento e ressuspensão pós descongelação durante a congelação do sêmen suíno. Para isso o sêmen de 15 varrões da raça Dalland, foi coletado através da técnica da mão enluvada. Visando o início da curva de congelação, cada ejaculado foi incubado a 30 C. Em seguida, foram retiradas duas alíquotas de sêmen para uma pré-diluição. Uma das alíquotas foi diluída no diluente Beltsville Thawing Solution (BTS - Controle) e a outra em leite em pó desnatado (LPD), onde permaneceram a essa temperatura por 45 minutos. O sêmen pré-diluído passou por três tempos de estabilização. Ao final do primeiro tempo (30 C - 45 minutos) foi realizada análise de vigor e motilidade a fim de acompanhar a atividade metabólica espermática. Em seguida o sêmen diluído passou pelas temperaturas: 25C 30 minutos e 17 C - 2 horas. Ao final, o sêmen foi centrifugado (à 5 C - 800g - 1600 rpm - 15 minutos), sendo desprezado o sobrenadante, enquanto que o pellet de espermatozoides foi ressuspenso em 2 mL do diluente de resfriamento e mantido a 5 C por 1 hora. Ao final, foi realizada a 2ª diluição com 2 mL do diluente de congelação, seguida do envaze das amostras, rampa de congelação e submergidas em N2 líquido. O sêmen foi descongelado em banho-maria (39 C), ressuspendido em seus respectivos diluentesà mesma temperatura e só então analisado quanto às características de vigor, motilidade, vitalidade,integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante a primeira fase de abaixamento de temperatura (30 °C), observou-se que o sêmen diluído em LPD em comparação ao BTS, apresentou valores superiores de vigor (3,4±0,6 e 3,1±0,7, respectivamente) e motilidade (78,6±13,0 e 69,4±14,3 respectivamente).
Assuntos
Animais , Congelamento , Leite Desnatado em Pó , Preservação do Sêmen/veterinária , SuínosRESUMO
One of the critical points in the cryopreservation process is the use of a proper diluent while lowering the temperature following the resuspension and thawing processes. Here, we tested an alternative diluent for the process of freezing boar semen. We used skimmed dried milk (SDM) during the cooling and post-thawed resuspension steps. To do so, we collected semen from 15 Dalland boars using the glovedhand technique, and incubated each ejaculate sample at 30 C. We then removed two semen aliquots from a pre-dilution. We diluted one of the aliquots in Beltsville thawing solution (BTS - control), and the remaining sample was diluted in SDM. Both aliquots were subsequently held at 30º C for 45 min (1st period of stabilization). At the end of this period, we analysed vigor and motility to determine sperm metabolic activity. We then held the diluted semen at 25 C for 30 min (2nd period of stabilization) and at 17 C for 2 h (3rd period stabilization). We centrifuged the semen at 800 × g and 1600 × g at 5º C for 15 min, discarded the supernatant, and resuspended the sperm pellet in 2 mL of the cooling diluent at 5 C for 1h. We again diluted the samples in 2 mL of the freezing diluent, poured them into straws, and cooled and plunged them into liquid N2. The sêmen samples were thawed in a 39º C water bath, and were resuspended in their respective diluents at the same temperature. We determined the following sperm features: vigor, motility, vitality, acrosomal integrity and membrane functionality. During the first phase of temperature cooling (30º C), semen diluted in SDM exhibited a higher vigor (3.4 ± 0.6) and motility (78.6 ± 13.0) than those diluted BTS (vigor: 3.1 ± 0.7; motility: 69.4±14.3).(AU)
Esse estudo objetivou testar um diluente alternativo, a base de leite em pó desnatado, durante as etapas de resfriamento e ressuspensão pós descongelação durante a congelação do sêmen suíno. Para isso o sêmen de 15 varrões da raça Dalland, foi coletado através da técnica da mão enluvada. Visando o início da curva de congelação, cada ejaculado foi incubado a 30 C. Em seguida, foram retiradas duas alíquotas de sêmen para uma pré-diluição. Uma das alíquotas foi diluída no diluente Beltsville Thawing Solution (BTS - Controle) e a outra em leite em pó desnatado (LPD), onde permaneceram a essa temperatura por 45 minutos. O sêmen pré-diluído passou por três tempos de estabilização. Ao final do primeiro tempo (30 C - 45 minutos) foi realizada análise de vigor e motilidade a fim de acompanhar a atividade metabólica espermática. Em seguida o sêmen diluído passou pelas temperaturas: 25C 30 minutos e 17 C - 2 horas. Ao final, o sêmen foi centrifugado (à 5 C - 800g - 1600 rpm - 15 minutos), sendo desprezado o sobrenadante, enquanto que o pellet de espermatozoides foi ressuspenso em 2 mL do diluente de resfriamento e mantido a 5 C por 1 hora. Ao final, foi realizada a 2ª diluição com 2 mL do diluente de congelação, seguida do envaze das amostras, rampa de congelação e submergidas em N2 líquido. O sêmen foi descongelado em banho-maria (39 C), ressuspendido em seus respectivos diluentesà mesma temperatura e só então analisado quanto às características de vigor, motilidade, vitalidade,integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante a primeira fase de abaixamento de temperatura (30 °C), observou-se que o sêmen diluído em LPD em comparação ao BTS, apresentou valores superiores de vigor (3,4±0,6 e 3,1±0,7, respectivamente) e motilidade (78,6±13,0 e 69,4±14,3 respectivamente).(AU)
Assuntos
Animais , Leite Desnatado em Pó , Preservação do Sêmen/veterinária , Congelamento , SuínosRESUMO
Inúmeros trabalhos tem sido realizados com o propósito de melhorar a conservação do sêmen suíno, seja com o uso de diluentes ou faixas de temperaturas alternativas, ou ainda adicionando antioxidantes ou aminoácidos ao diluente. O presente estudo teve por objetivo definir um diluente e temperatura alternativa de conservação do sêmen suíno e avaliar os efeitos da inclusão de trolox ou betaína na manutenção da qualidade espermática. O sêmen de oito reprodutores foram coletados semanalmente através da técnica da mão enluvada e no laboratório foram submetidos às análises de vigor e motilidade no dia da coleta e durante o período de conservação (D0 a D4), avaliados quanto a vitalidade, integridade de acrossoma e teste hiposmótico no D0 e D4. Inicialmente os ejaculados foram conservados em três diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS), água de coco em pó (ACP) e leite em pó desnatado (LPD); e submetidos a duas temperaturas de armazenamento 17 e 10 °C, totalizando seis tratamentos. Definido o melhor tratamento, adicionou-se três diferentes concentrações de trolox (1000, 2000 e 3000 ?M/ 100 mL) e de betaína (1, 2 e 3g/ 100 mL). Dos diluentes testados, o LPD a 10 °C proporcionou uma melhor conservação da motilidade e vigor espermáticos, além de maior taxa de vitalidade e maior percentual de células com acrossoma íntegro. Diante desses resultados, o LPD a 10 °C apresentou-se como melhor diluente para a realização das etapas seguintes. As amostras acrescidas de diferentes concentrações de trolox não foram melhores quando comparadas ao tratamento controle em nenhuma das análises realizadas. Concentrações elevadas de trolox (2000 e 3000 ?M) apresentaram efeitos negativos sobre o vigor e a motilidade espermática. Quanto às amostras acrescidas de betaína, também não foram observados efeitos benéficos. A betaína provavelmente devido a seus efeitos osmóticos, reduziu o vigor e motilidade das amostras, esse efeito foi maior quando se elevou a concentração desse aminoácido. O LPD pode ser utilizado como diluente para o sêmen suíno acondicionado a 10 °C para ser utilizado por até 24 horas após a diluição. Não se pode comprovar os efeitos benéficos do trolox na conservação do sêmen suíno em meio à base de LPD. E a betaína apresentou efeitos negativos sobre a qualidade espermática quando adicionada ao diluente à base de LPD, em concentrações acima de 1% em temperatura de conservação a 10 °C.