RESUMO

A cinomose é uma enfermidade causada pelo vírus Canine Distemper Virus (CDV). Essa doença afeta principalmente cães, mas também acomete outras espécies domésticas e selvagens. A imunidade do animal está relacionada ao grau que a esse patógeno vai atingir o organismo do indivíduo. Ela afeta a respiração do animal, pode causar vômito, diarreia, convulsões, podendo levar o animal à óbito. O objetivo do presente trabalho foi padronizar um teste ELISA indireto com antígeno de superfície para o diagnostico cinomose utilizando amostras de soro canino. Para padronização da técnica, fez-se necessário o estudo da diluição do antígeno para identificar a melhor concentração para sensibilização da placa. O teste foi aplicado primeiramente com diferentes diluições do antígeno para detecção do melhor desempenho do antígeno. Feito isso, foi testado em um banco de soro de 45 animais comprovadamente positivos no teste ELISA comercial e em soro de 45 animais comprovadamente negativos no teste ELISA comercial, posteriormente foi calculado o ponto de corte, especificidade e sensibilidade do teste. O teste ELISA indireto se mostrou com excelência como um teste de diagnóstico para a cinomose canina, obtendo-se ponto de corte de densidade óptica de 0,229, sensibilidade de 95,5% e especificidade de 84,4%.

Distemper is a disease or the disease by the CDV virus, Distemper Virus. This disease mainly affects dogs, but also affects other domestic and wild species. The animal's immunity is related to the degree to which it will reach the individual's organism. It affects the animal's breathing, can cause vomiting, diarrhea, convulsions, and can lead to death. The aim of the present work test was to standardize an indirect ELISA for distemper diagnosis in experiments using a surface antigen. For the study of technical identification, it was necessary to specify the antigen for the best concentration of plaque sensitization. The test was initially applied with different dilutions of the antigen to detect the best performance of the antigen. This was tested in a serum bank of 45 animals proven positive in the commercial ELISA test and in the serum of 45 animals proven negative in the commercial ELISA test, later it was tested on the cut-off point, specificity and sensitivity of the test. The indirect ELISA test proved to be excellent as a diagnostic test for canine distemper, with an optical density cut-off of 0.229, sensitivity of 95.5% and specificity of 84.4% being obtained.

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The aim of this study was to identify the prevalence and the main risk factors related to the transmission of bovine cysticercosis based on tracking animals sent for slaughter and coming from properties located in the micro-region of Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. The properties were previously evaluated for the occurrence of cysticercosis during post-mortem inspection in the 12 months prior to the beginning of the research, and those with animals with bovine cysticercosis found at least once during this period were considered positive. A cross-sectional study was carried out on 87 properties, from which 1024 bovine serum samples were collected. Indirect ELISA performed serological diagnosis and Immunoblot confirmed positive sera. The prevalence found in this study was 5.1% (95% CI = 3.74-6.42). The risk factors identified were cattle origin (RC = 4.9), grazing (RC = 6.4) and sewage destination on the property (RC = 3.6). These environmental factors suggest that sanitation control measures and the restriction of pastures beyond the property boundary can help prevent disease in the study area. A control system based on risk analysis was discussed and proposed as a strategy to control bovine cysticercosis in the Triângulo Mineiro region and other regions of the country.

Este estudo teve por objetivo identificar a prevalência e os principais fatores de risco relacionados com a transmissão da cisticercose bovina em animais enviados para abate e provenientes de propriedades localizadas na microrregião de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil. As propriedades foram previamente avaliadas quanto à ocorrência de cisticercose durante a inspeção post mortem nos 12 meses antecedentes ao início da pesquisa; aquelas que revelaram animais com cisticercose bovina pelo menos uma vez durante esse período foram consideradas positivas. Foi realizado um estudo de corte transversal em 87 propriedades, onde foram coletadas 1024 amostras de soro bovino. O diagnóstico sorológico foi realizado por triagem pelo teste ELISA indireto, e os soros positivos foram confirmados pelo Immunoblot. A prevalência identificada neste estudo foi de 5,1% (IC 95%= 3,74-6,42). Os fatores de risco identificados foram: a origem dos bovinos (RC=4,9), o pastejo (RC=6,4) e o destino do esgoto da propriedade (RC=3,6). Esses fatores ambientais encontrados sugerem que medidas de controle do saneamento e restrição a pastagens além do limite da propriedade possam auxiliar na prevenção da doença na área de estudo.

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A plataforma de ELISA (ensaio de imunoabsorção por ligação enzimática) tem sido amplamente utilizada para detectar anticorpos anti-SARS-CoV-2 gerados após a exposição ao vírus ou à vacinação. A amostra comumente utilizada para a realização do teste é o soro. Até o momento, nenhum estudo havia investigado a urina do paciente como amostra para detectar anticorpos específicos para o vírus SARS-CoV-2. A urina é um espécime biológico que traz vantagens significativas inerentes ao tipo de amostra, que compreende coleta não invasiva, de fácil manuseio e armazenamento. Neste trabalho, propomos um ELISA indireto in house baseado no uso de urina e proteínas recombinantes do Nucleocapsídeo (N) ou da Spike (S) do vírus SARS-CoV-2. As proteínas recombinantes (r) de SARS-CoV-2, N e as subunidades da proteína S (S-Glic, S1-NGlic e RBD-NGlic), foram avaliadas usando um painel composto por aproximadamente 200 amostras de urina e de soro. A presença de anticorpos anti-SARS-CoV-2 na urina foi detectada com sensibilidade e especificidade similares ou superiores ao soro, nas quais foram obtidos valores de sensibilidade de 94,0%, 75,0%, 81,38% e 89,66%, e especificidade de 100%, 96,0%, 96,77% e 96,77%, frente às proteínas rSARS-CoV-2 N, S-Glic, S1-NGlic e RBDNGlic, respectivamente. Dessa forma, os dados apresentados sugerem que a urina poderia ser considerada como uma potencial amostra biológica para aplicação em plataformas de imunodiagnóstico para a infecção por SARS-CoV-2, trazendo benefícios tanto no contexto individual quanto populacional.

The Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method has been widely used to detect anti-SARS-CoV-2 antibodies generated after exposure to the virus or vaccination. The sample usually used to perform the test is the serum. Thus far, no study has investigated the urine of patients as biological sample to detect specific SARS-CoV-2 antibodies. Urine is a biological specimen with significant advantages inherent to the type of sample, which comprises non-invasive collection, easy handling and storage. In this work, we propose an in house urine-based indirect ELISA using recombinant proteins from Nucleocapsid (N) and Spike (S) of the SARSCoV-2 virus. SARS-CoV-2 recombinant N and S protein subunits (Gly-S, NonGly-S1 and NonGly-RBD) were evaluated in an ELISA platform with a panel composed about 200 urine and serum samples. The presence of anti-SARS-CoV-2 antibodies in urine was detected with similar or superior sensitivity and specificity to serum, in which sensitivity values of 94.0%, 75.0%, 81.38% and 89.66% were obtained, while specificity values were of 100.0%, 96.0%, 96.77% and 96.77%, respectively, against rSARS-CoV-2 N, S-Glic, S1-NGlic and RBD-NGlic proteins. In conclusion, the data presented suggest that urine could be considered as a potential biological sample for application in immunodiagnostic platforms for SARS-CoV-2 infection, with benefits to the individual and population context.

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ABSTRACT Objectives: to describe the use of affinity chromatographies and laboratory serologies in the evaluation of immunodiagnoses during prenatal. Methods: quantitative study, characterized as a descriptive observational research. Data was collected from the records of 46 pregnant women who were in prenatal follow up in the Primary Health Care in a capital in the South of Brazil. The data found was codified and analyzed using descriptive statistics. Results: a mean of 43.1 days was found to take place between the request of laboratory serology and the evaluation by a professional. It was also found that 21.7% of pregnant women did not collect the serologies requested during the first prenatal consultation, and that the affinity chromatographies were only applied in 10.8% of the participants. Conclusions: in spite of the studies for the improvement of prenatal consultations, for the provision of new technologies and for the permanent education offered to the professionals, there are still questions that make the actual implementation of affinity chromatographies more difficult.

RESUMEN Objetivos: describir la utilización de los inmunocromatográficos y de las serologías laboratoriales en la evaluación de inmunodiagnósticos durante el prenatal. Métodos: estudio de abordaje cuantitativo, caracterizado como una investigación observacional del tipo descriptiva. Recogidos datos de los prontuarios de 46 gestantes que realizan acompañamiento prenatal en la Atención Primaria de Salud del Sur de Brasil. Datos obtenidos tuvieron su contenido codificado y analizados mediante estadística descriptiva. Resultados: identificada una mediana de 43,1 días desde la solicitud de las serologías laboratoriales hasta la evaluación profesional. Así, también se verificó que 21,7% de las gestantes no recogieron las serologías solicitadas durante la primera consulta prenatal y que aplicaron inmunocromatográficos en solo 10,8% de los participantes. Conclusiones: sin embargo los estudios para perfeccionamiento de consulta prenatal, provisión de nuevas tecnologías y educación permanente ofertada a los profesionales, aún persisten cuestiones que dificultan la concreta implementación de inmunocromatográficos.

RESUMO Objetivos: descrever a utilização dos testes imunocromatográficos e das sorologias laboratoriais na avaliação de imunodiagnósticos durante o pré-natal. Métodos: estudo de abordagem quantitativa, caracterizado como uma pesquisa observacional do tipo descritiva. Foram coletados dados dos prontuários de 46 gestantes que realizam acompanhamento pré-natal na Atenção Primária à Saúde de uma capital do Sul do Brasil. Os dados obtidos tiveram seu conteúdo codificado e analisados mediante estatística descritiva. Resultados: foi identificada uma média de 43,1 dias desde a solicitação das sorologias laboratoriais até a avalição profissional. Nesse sentido, também foi verificado que 21,7% das gestantes não coletaram as sorologias solicitadas durante a primeira consulta pré-natal e que foram aplicados testes imunocromatográficos em apenas 10,8% dos participantes. Conclusões: apesar dos estudos para o aprimoramento da consulta pré-natal, do fornecimento de novas tecnologias e da educação permanente ofertada aos profissionais, ainda persistem questões que dificultam a concreta implementação dos testes imunocromatográficos.

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Oitenta porcento dos casos de paracoccidioidomicose (PMC) ocorrem no Brasil. As regiões brasileiras com maior número de casos são: sul, sudeste e centro-oeste, sendo emergente no norte e nordeste. A imunodifusão dupla em gel de agarose assume grande importância no diagnóstico, por permitir o monitoramento da doença e por oferecer subsídios para levantamentos soroepidemiológicos. O objetivo deste trabalho foi de avaliar e caracterizar os pacientes atendidos no Laboratório de Imunodiagnóstico das Micoses do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, em 2016. Trata-se de um estudo retrospectivo realizado utilizando-se dados secundários e avaliando-se as seguintes informações: idade, sexo, procedência do pedido médico, resultado e histórico sorológico dos pacientes. Dos 1.408 pacientes, 12,8% apresentaram reatividade sorológica para Paracoccidioides brasiliensis. Destes, 42,5% não possuiam histórico sorológico, sendo considerados como casos novos da doença. A classificação dos pacientes reagentes por gênero demonstrou que 83,4% eram do sexo masculino, com razão de masculinidade de 5:1. A faixa etária variou de um (1) a 92 anos, e aproximadamente 40% dos pacientes eram da faixa etária de 41 a 60 anos. Este estudo demonstra e reforça a importância da implementação dos estudos soroepidemiológicos como ferramenta auxiliar para nortear as ações de vigilância e políticas em saúde na PCM. (AU)

Eighty percent of paracoccidioidomycosis (PMC) cases occur in Brazil. The highest numbers occur in south, southeast and center-west region, being emergent in the north and northeast areas. The double immunodiffusion in agarose gel is valuable for its diagnosis, as it allows the monitoring of the disease and offers subsidies for the seroepidemiological surveys. This study evaluated and characterized the patients attended in 2016 at the Mycoses Immunodiagnosis Laboratory of Adolfo Lutz Institute of São Paulo. This retrospective study, based on the secondary data, evaluated the information: age, sex, medical request origin, result and serological history of the patients. Of 1,408 patients, 12.8% presented positive serological reactivity for Paracoccidioides brasiliensis. Of them, 42.5% had no serological history and they were considered as new cases. The classification of reactive patients by gender showed that 83.4% were males, being the masculinity ratio of 5:1. The age range was one (1) to 92 years old, and ±40% of the patients were of age ranging from 41-60 years old. This study reinforces the importance of the implementation of the seroepidemiological studies as to guide the surveillance actions and the public health politics in PCM. (AU)

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Oitenta porcento dos casos de paracoccidioidomicose (PMC) ocorrem no Brasil. As regiões brasileiras com maior número de casos são: sul, sudeste e centro-oeste, sendo emergente no norte e nordeste. A imunodifusão dupla em gel de agarose assume grande importância no diagnóstico, por permitir o monitoramento da doença e por oferecer subsídios para levantamentos soroepidemiológicos. O objetivo deste trabalho foi de avaliar e caracterizar os pacientes atendidos no Laboratório de Imunodiagnóstico das Micoses do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, em 2016. Trata-se de um estudo retrospectivo realizado utilizando-se dados secundários e avaliando-se as seguintes informações: idade, sexo, procedência do pedido médico, resultado e histórico sorológico dos pacientes. Dos 1.408 pacientes, 12,8% apresentaram reatividade sorológica para Paracoccidioides brasiliensis. Destes, 42,5% não possuiam histórico sorológico, sendo considerados como casos novos da doença. A classificação dos pacientes reagentes por gênero demonstrou que 83,4% eram do sexo masculino, com razão de masculinidade de 5:1. A faixa etária variou de um (1) a 92 anos, e aproximadamente 40% dos pacientes eram da faixa etária de 41 a 60 anos. Este estudo demonstra e reforça a importância da implementação dos estudos soroepidemiológicos como ferramenta auxiliar para nortear as ações de vigilância e políticas em saúde na PCM.

Eighty percent of paracoccidioidomycosis (PMC) cases occur in Brazil. The highest numbers occur in south, southeast and center-west region, being emergent in the north and northeast areas. The double immunodiffusion in agarose gel is valuable for its diagnosis, as it allows the monitoring of the disease and offers subsidies for the seroepidemiological surveys. This study evaluated and characterized the patients attended in 2016 at the Mycoses Immunodiagnosis Laboratory of Adolfo Lutz Institute of São Paulo. This retrospective study, based on the secondary data, evaluated the information: age, sex, medical request origin, result and serological history of the patients. Of 1,408 patients, 12.8% presented positive serological reactivity for Paracoccidioides brasiliensis. Of them, 42.5% had no serological history and they were considered as new cases. The classification of reactive patients by gender showed that 83.4% were males, being the masculinity ratio of 5:1. The age range was one (1) to 92 years old, and ±40% of the patients were of age ranging from 41-60 years old. This study reinforces the importance of the implementation of the seroepidemiological studies as to guide the surveillance actions and the public health politics in PCM.

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Objetivou-se analisar os achados hematológicos em sangue periférico e medula óssea em cães infectados por Ehrlichia spp. e Anaplasma spp.. Avaliaram-se 44 cães com suspeita clínica de hemoparasitose, de diferentes raças, idades e de ambos os sexos, submetidos ao exame sorológico pelo SNAP Test, a análises hematológicas e mielograma. Dos 44 cães avaliados, 63,6% (28/44) foram sorologicamente reagentes, sendo 57,1% (16/28) positivos para Ehrlichia spp., 21,4% (6/28) para Anaplasma spp. e 21,4% (6/28) de coinfectados. A trombocitopenia foi a alteração hematológica mais frequente em cães positivos para Ehrlichia spp., presente em 93,7% (15/16) (p=0,015) dos animais, enquanto a anemia macrocítica e hipocrômica prevaleceu em 66,7% (4/6) (p=0,010) dos animais infectados por Anaplasma spp.. Ao mielograma, 62,5% (10/16) (p=0,005) dos animais positivos para Ehrlichia spp. apresentaram hipoplasia medular e 75,0% (12/16) (p=0,044) diminuição do índice mieloide:eritroide (M:E). Nos animais positivos para Anaplasma spp., destacou-se a hiperplasia da série eritroide em 50,0% (3/6) (p=0,022) dos cães. Não houve associação significativa em nenhuma das análises com o grupo coinfecção (p>0,05). Os resultados obtidos neste estudo permitem inferir que o somatório de métodos laboratoriais é essencial na caracterização das hemoparasitoses em cães, agregando valor e permitindo uma efetiva consolidação do diagnóstico relacionado a essas doenças.(AU)

This study aimed to analyze the hematological and cytomorphological findings in the peripheral blood and bone marrow of dogs infected with Ehrlichia spp. and Anaplasma spp. Forty-four dogs with clinically suspected hemoparasitosis, belonging to different breeds, ages, and both sexes, underwent serological examination by SNAP Assay, hematological analysis, and myelogram. Among them, 63.6% (28/44) tested serologically positive; among the serologically positive dogs, 57.1% (16/28) tested positive for Ehrlichia spp., 21.4% (6/28) for Anaplasma spp., and 21.4% (6/28) were coinfected. Thrombocytopenia was the most frequent hematologic alteration in dogs positive for Ehrlichia spp., present in 93.7% (15/16) (p=0.015) of the infected animals, while macrocytic and hypochromic anemia were observed in 66.7% (4/6) (p=0.010) of the animals infected with Anaplasma spp. In the myelogram, 62.5% (10/16, p=0.005) and 75.0% (12/16, p=0,044) of the animals positive for Ehrlichia spp. presented with bone marrow hypoplasia and decrease in the myeloid: erythroid (M:E) ratio, respectively. Hyperplasia of the erythroid series was observed in 50.0% (3/6) (p=0.022) of the animals positive for Anaplasma spp. No significant association was observed between the hematological alterations and the coinfection group (p >0.05). On the basis of these hematological observations, it can be inferred that the aforementioned laboratory examinations could be employed for the characterization and confirmative diagnosis of hemoparasitosis in dogs.(AU)

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A imuno-histoquímica (IHQ) é considerada uma ferramenta rápida e precisa para a identificação de protozoários, como Toxoplasma gondii, em tecidos fetais e placentários. Neste estudo foi avaliada a imunodetecção de Toxoplasma gondii em tecido placentário de cabras naturalmente infectadas. Foram coletadas e analisadas 80 amostras de placentas de cabras procedentes de único rebanho com sorologia positiva para T. gondii na técnica de ELISA. Na histopatologia, 27/80 amostras apresentaram lesões sugestivas de infecção por protozoários. Após a avaliação histopatológica, procedeu-se à realização da técnica de imuno-histoquímica, obtendo-se 85,2% (23/27) de amostras com marcação positiva. A imunodetecção ocorreu no epitélio de revestimento das vilosidades coriônicas e foi classificada de acordo com o grau de intensidade da imunomarcação. Também foi evidenciada imunomarcação no interior dos vasos sanguíneos fetais em 8,69% (2/23) das amostras. Este estudo demonstrou que a técnica de IHQ se comportou como uma ferramenta valiosa no diagnóstico da infeção por T. gondii em tecido placentário de cabras naturalmente infectadas e complementou, de forma decisiva, o diagnóstico, além de agregar maior valor aos resultados obtidos nas análises histopatológica e sorológica.(AU)

Immunohistochemistry (IHC) is considered to be a rapid and accurate tool for the identification of protozoa such as Toxoplasma gondii in fetal and placental tissues. In this study, we evaluated the immunodetection of Toxoplasma gondii in placental tissue from naturally infected goats. A total of 80 samples of goat placentas from a single herd with positive ELISA serology for T. gondii were collected and analyzed. In the histopathology, 27/80 samples presented lesions suggestive of protozoal infection. After the histopathological evaluation, the immunohistochemistry technique was performed, obtaining 85.2% (23/27) of samples with positive marking. Immunodetection occurred in the lining epithelium of the chorionic villi and was classified according to the degree of intensity of the immunostaining. Immunostaining within the fetal blood vessels was also evidenced in 8.69% (2/23) of the samples. This study demonstrated that the IHQ technique behaved as a valuable tool in the diagnosis of T. gondii infection in placental tissue of naturally infected goats completing the diagnosis in a decisive way and adding greater value to the results obtained in the histopathological and serological analysis.(AU)

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Brucellosis is an infectious disease caused by bacteria of the genus Brucella spp. with diagnosis based on use of serological techniques. The present study aimed to develop and standardize a western blotting (WB) test for detection of antibodies against B. abortus. Samples from two groups of cattle were analyzed: group I: 60 serum samples from true positive and true negative vaccinated animals (30 positive samples from infected animals according to rose bengal test (RBT), 2-mercaptoethanol, serum agglutination test (SAT) and complement fixation test (CFT) and 30 RBT negatives samples); group II: 383 field samples (90 positive and 293 CFT negative sera). The most reactive band in the western blotting, which properly identified and separated infected from non - infected had a molecular weight of ≤ 20kDa. The sensitivity, specificity and accuracy of the WB compared to RBT was 93%, 99%, 98%, respectively and k= 0.938. When compared to CFT, the sensitivity, specificity and accuracy of the WB was 97%, 98% and 97%, respectively and k= 0.929. The WB developed and standardized in the present study is a serological test with potential use as a confirmatory test for the diagnosis of bovine brucellosis.(AU)

A brucelose é uma doença infectocontagiosa, causada por bactérias do gênero Brucella spp., com diagnóstico baseado no emprego de técnicas sorológicas. Objetivou-se neste estudo desenvolver e padronizar um teste Western blotting (WB) para detecção de anticorpos contra B. abortus. Foram analisados dois grupos de amostras bovinas: grupo I, com 60 amostras de animais verdadeiros positivos e verdadeiros negativos vacinados (30 amostras positivas de animais infectados e positivos nos testes de antígeno acidificado tamponado (AAT), 2 - mercaptoetanol (2 - ME), soroaglutinação lenta em tubos (SAT) e fixação do complemento e de 30 amostras negativas no AAT); grupo II, com 383 amostras de campo, sendo 90 soropositivas e 293 soronegativas no TFC. O resultado da análise do WB revelou peso molecular ≤20kDa como sendo a área mais reativa e característica para identificação e separação dos animais infectados dos não infectados. A sensibilidade, a especificidade e a acurácia do WB, quando este foi comparado com o AAT, foram, respectivamente, 93%, 99% e 98%, e k= 0,938. Quando comparadas com a TFC, a sensibilidade, a especificidade e a acurácia foram 97%, 98% e 97%, respectivamente, e k= 0,929. O WB padronizado neste estudo mostrou-se um teste sorológico com potencial uso como teste confirmatório no diagnóstico da brucelose bovina.(AU)

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A imuno-histoquímica (IHQ) é considerada uma ferramenta rápida e precisa para a identificação de protozoários, como Toxoplasma gondii, em tecidos fetais e placentários. Neste estudo foi avaliada a imunodetecção de Toxoplasma gondii em tecido placentário de cabras naturalmente infectadas. Foram coletadas e analisadas 80 amostras de placentas de cabras procedentes de único rebanho com sorologia positiva para T. gondii na técnica de ELISA. Na histopatologia, 27/80 amostras apresentaram lesões sugestivas de infecção por protozoários. Após a avaliação histopatológica, procedeu-se à realização da técnica de imuno-histoquímica, obtendo-se 85,2% (23/27) de amostras com marcação positiva. A imunodetecção ocorreu no epitélio de revestimento das vilosidades coriônicas e foi classificada de acordo com o grau de intensidade da imunomarcação. Também foi evidenciada imunomarcação no interior dos vasos sanguíneos fetais em 8,69% (2/23) das amostras. Este estudo demonstrou que a técnica de IHQ se comportou como uma ferramenta valiosa no diagnóstico da infeção por T. gondii em tecido placentário de cabras naturalmente infectadas e complementou, de forma decisiva, o diagnóstico, além de agregar maior valor aos resultados obtidos nas análises histopatológica e sorológica.(AU)

Immunohistochemistry (IHC) is considered to be a rapid and accurate tool for the identification of protozoa such as Toxoplasma gondii in fetal and placental tissues. In this study, we evaluated the immunodetection of Toxoplasma gondii in placental tissue from naturally infected goats. A total of 80 samples of goat placentas from a single herd with positive ELISA serology for T. gondii were collected and analyzed. In the histopathology, 27/80 samples presented lesions suggestive of protozoal infection. After the histopathological evaluation, the immunohistochemistry technique was performed, obtaining 85.2% (23/27) of samples with positive marking. Immunodetection occurred in the lining epithelium of the chorionic villi and was classified according to the degree of intensity of the immunostaining. Immunostaining within the fetal blood vessels was also evidenced in 8.69% (2/23) of the samples. This study demonstrated that the IHQ technique behaved as a valuable tool in the diagnosis of T. gondii infection in placental tissue of naturally infected goats completing the diagnosis in a decisive way and adding greater value to the results obtained in the histopathological and serological analysis.(AU)

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RESUMO

Brucellosis is an infectious disease caused by bacteria of the genus Brucella spp. with diagnosis based on use of serological techniques. The present study aimed to develop and standardize a western blotting (WB) test for detection of antibodies against B. abortus. Samples from two groups of cattle were analyzed: group I: 60 serum samples from true positive and true negative vaccinated animals (30 positive samples from infected animals according to rose bengal test (RBT), 2-mercaptoethanol, serum agglutination test (SAT) and complement fixation test (CFT) and 30 RBT negatives samples); group II: 383 field samples (90 positive and 293 CFT negative sera). The most reactive band in the western blotting, which properly identified and separated infected from non - infected had a molecular weight of ≤ 20kDa. The sensitivity, specificity and accuracy of the WB compared to RBT was 93%, 99%, 98%, respectively and k= 0.938. When compared to CFT, the sensitivity, specificity and accuracy of the WB was 97%, 98% and 97%, respectively and k= 0.929. The WB developed and standardized in the present study is a serological test with potential use as a confirmatory test for the diagnosis of bovine brucellosis.(AU)

A brucelose é uma doença infectocontagiosa, causada por bactérias do gênero Brucella spp., com diagnóstico baseado no emprego de técnicas sorológicas. Objetivou-se neste estudo desenvolver e padronizar um teste Western blotting (WB) para detecção de anticorpos contra B. abortus. Foram analisados dois grupos de amostras bovinas: grupo I, com 60 amostras de animais verdadeiros positivos e verdadeiros negativos vacinados (30 amostras positivas de animais infectados e positivos nos testes de antígeno acidificado tamponado (AAT), 2 - mercaptoetanol (2 - ME), soroaglutinação lenta em tubos (SAT) e fixação do complemento e de 30 amostras negativas no AAT); grupo II, com 383 amostras de campo, sendo 90 soropositivas e 293 soronegativas no TFC. O resultado da análise do WB revelou peso molecular ≤20kDa como sendo a área mais reativa e característica para identificação e separação dos animais infectados dos não infectados. A sensibilidade, a especificidade e a acurácia do WB, quando este foi comparado com o AAT, foram, respectivamente, 93%, 99% e 98%, e k= 0,938. Quando comparadas com a TFC, a sensibilidade, a especificidade e a acurácia foram 97%, 98% e 97%, respectivamente, e k= 0,929. O WB padronizado neste estudo mostrou-se um teste sorológico com potencial uso como teste confirmatório no diagnóstico da brucelose bovina.(AU)

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Objetivou-se analisar os achados hematológicos em sangue periférico e medula óssea em cães infectados por Ehrlichia spp. e Anaplasma spp.. Avaliaram-se 44 cães com suspeita clínica de hemoparasitose, de diferentes raças, idades e de ambos os sexos, submetidos ao exame sorológico pelo SNAP Test, a análises hematológicas e mielograma. Dos 44 cães avaliados, 63,6% (28/44) foram sorologicamente reagentes, sendo 57,1% (16/28) positivos para Ehrlichia spp., 21,4% (6/28) para Anaplasma spp. e 21,4% (6/28) de coinfectados. A trombocitopenia foi a alteração hematológica mais frequente em cães positivos para Ehrlichia spp., presente em 93,7% (15/16) (p=0,015) dos animais, enquanto a anemia macrocítica e hipocrômica prevaleceu em 66,7% (4/6) (p=0,010) dos animais infectados por Anaplasma spp.. Ao mielograma, 62,5% (10/16) (p=0,005) dos animais positivos para Ehrlichia spp. apresentaram hipoplasia medular e 75,0% (12/16) (p=0,044) diminuição do índice mieloide:eritroide (M:E). Nos animais positivos para Anaplasma spp., destacou-se a hiperplasia da série eritroide em 50,0% (3/6) (p=0,022) dos cães. Não houve associação significativa em nenhuma das análises com o grupo coinfecção (p>0,05). Os resultados obtidos neste estudo permitem inferir que o somatório de métodos laboratoriais é essencial na caracterização das hemoparasitoses em cães, agregando valor e permitindo uma efetiva consolidação do diagnóstico relacionado a essas doenças.

This study aimed to analyze the hematological and cytomorphological findings in the peripheral blood and bone marrow of dogs infected with Ehrlichia spp. and Anaplasma spp. Forty-four dogs with clinically suspected hemoparasitosis, belonging to different breeds, ages, and both sexes, underwent serological examination by SNAP Assay, hematological analysis, and myelogram. Among them, 63.6% (28/44) tested serologically positive; among the serologically positive dogs, 57.1% (16/28) tested positive for Ehrlichia spp., 21.4% (6/28) for Anaplasma spp., and 21.4% (6/28) were coinfected. Thrombocytopenia was the most frequent hematologic alteration in dogs positive for Ehrlichia spp., present in 93.7% (15/16) (p=0.015) of the infected animals, while macrocytic and hypochromic anemia were observed in 66.7% (4/6) (p=0.010) of the animals infected with Anaplasma spp. In the myelogram, 62.5% (10/16, p=0.005) and 75.0% (12/16, p=0,044) of the animals positive for Ehrlichia spp. presented with bone marrow hypoplasia and decrease in the myeloid: erythroid (M:E) ratio, respectively. Hyperplasia of the erythroid series was observed in 50.0% (3/6) (p=0.022) of the animals positive for Anaplasma spp. No significant association was observed between the hematological alterations and the coinfection group (p >0.05). On the basis of these hematological observations, it can be inferred that the aforementioned laboratory examinations could be employed for the characterization and confirmative diagnosis of hemoparasitosis in dogs.

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A dengue é um problema grave para a saúde pública no Brasil e vários fatores agravam a situação, um deles é que a dengue pode ser confundida com outras doenças infecciosas. Este trabalho teve como objetivo a produção de um polipetídeo quimérico do vírus da dengue para a produção de um kit de imunodiagnóstico de baixo custo. Foi usada a proteína E do envelope viral do domínio III, fusionada ao Polipeptídeo Elastina-Like (ELP), a expressão foi feita em N. benthamiana. Os resultados do Western blotting mostraram que a fusão com a cauda de ELP foi melhor expressa do que a não fusionada. O teste de ELISA apresentou diferença significativa nas médias de absorbância entre pacientes positivos e negativos para dengue e de diferenciar pacientes com dengue positivo e de zika positivo, cujo os resultados de absorbâncias se equipararam aos resultados de pacientes negativos.

Dengue is a serious problem for public health in Brazil and several factors aggravate the situation, one of which is that dengue can be mistaken for other infectious diseases. This work aimed at the production of a chimeric dengue virus polypeptide for the production of a low cost immunodiagnostic kit. Domain E viral envelope protein E, fused to the Elastin-Like Polypeptide (ELP), was used in N. benthamiana. Western blotting results showed that fusion with the ELP tail was better expressed than the non-fused. The ELISA test showed a significant difference in the absorbance means between positive and negative patients for dengue and to differentiate patients with dengue positive and positive zika, whose absorbance results were similar to the results of negative patients.

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Os diagnósticos indiretos de afecções helmínticas são muito importantes para o devido combate dessas helmintoses quer na população humana, quer na população animal. Esse diagnóstico, quando da sua suspeita, se realizado de forma prévia, pode contribuir decisivamente para que esses agentes possam ser controlados ou banidos de um grupo animal ou grupo populacional humano em risco. O grande desafio para essas metodologias é assegurar que elas sejam eficazes, ou seja, possam apresentar elevadas sensibilidades e especificidades. Esse presente trabalho tem como objetivo apresentar as metodologias, em especial, as sorológicas, que se apresentam promissoras para o diagnóstico de importantes enfermidades causadas pelos mais importantes helmintos que são responsáveis por importantes e prevalentes enfermidades para o homem e para algumas espécies animais. Neste trabalho, será apresentado um apanhado dessas metodologias que devem se apresentar como práticas, sensíveis, específicas, baratas e disponíveis.

Indirect diagnoses of helminthic conditions are very important for the proper combat of these helminthes both in the human population and in the animal population. This diagnosis, if suspected, if carried out in advance, can contribute decisively to the fact that these agents can be controlled or banned from an animal group or human population group at risk. The great challenge for these methodologies is to ensure that they are effective, that is, they can have high sensitivities and specificities. This present work aims to present the methodologies, especially the serological methods, which are promising for the diagnosis of important diseases caused by the most important helminths that are responsible for important and prevalent diseases for man and for some animal species. In this work, collections of these methodologies are presented as practices, sensible, specific, cheap and available.

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Os diagnósticos indiretos de afecções helmínticas são muito importantes para o devido combate dessas helmintoses quer na população humana, quer na população animal. Esse diagnóstico, quando da sua suspeita, se realizado de forma prévia, pode contribuir decisivamente para que esses agentes possam ser controlados ou banidos de um grupo animal ou grupo populacional humano em risco. O grande desafio para essas metodologias é assegurar que elas sejam eficazes, ou seja, possam apresentar elevadas sensibilidades e especificidades. Esse presente trabalho tem como objetivo apresentar as metodologias, em especial, as sorológicas, que se apresentam promissoras para o diagnóstico de importantes enfermidades causadas pelos mais importantes helmintos que são responsáveis por importantes e prevalentes enfermidades para o homem e para algumas espécies animais. Neste trabalho, será apresentado um apanhado dessas metodologias que devem se apresentar como práticas, sensíveis, específicas, baratas e disponíveis.(AU)

Indirect diagnoses of helminthic conditions are very important for the proper combat of these helminthes both in the human population and in the animal population. This diagnosis, if suspected, if carried out in advance, can contribute decisively to the fact that these agents can be controlled or banned from an animal group or human population group at risk. The great challenge for these methodologies is to ensure that they are effective, that is, they can have high sensitivities and specificities. This present work aims to present the methodologies, especially the serological methods, which are promising for the diagnosis of important diseases caused by the most important helminths that are responsible for important and prevalent diseases for man and for some animal species. In this work, collections of these methodologies are presented as practices, sensible, specific, cheap and available.(AU)

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A dengue é um problema grave para a saúde pública no Brasil e vários fatores agravam a situação, um deles é que a dengue pode ser confundida com outras doenças infecciosas. Este trabalho teve como objetivo a produção de um polipetídeo quimérico do vírus da dengue para a produção de um kit de imunodiagnóstico de baixo custo. Foi usada a proteína E do envelope viral do domínio III, fusionada ao Polipeptídeo Elastina-Like (ELP), a expressão foi feita em N. benthamiana. Os resultados do Western blotting mostraram que a fusão com a cauda de ELP foi melhor expressa do que a não fusionada. O teste de ELISA apresentou diferença significativa nas médias de absorbância entre pacientes positivos e negativos para dengue e de diferenciar pacientes com dengue positivo e de zika positivo, cujo os resultados de absorbâncias se equipararam aos resultados de pacientes negativos.(AU)

Dengue is a serious problem for public health in Brazil and several factors aggravate the situation, one of which is that dengue can be mistaken for other infectious diseases. This work aimed at the production of a chimeric dengue virus polypeptide for the production of a low cost immunodiagnostic kit. Domain E viral envelope protein E, fused to the Elastin-Like Polypeptide (ELP), was used in N. benthamiana. Western blotting results showed that fusion with the ELP tail was better expressed than the non-fused. The ELISA test showed a significant difference in the absorbance means between positive and negative patients for dengue and to differentiate patients with dengue positive and positive zika, whose absorbance results were similar to the results of negative patients.(AU)

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Oitenta porcento dos casos de paracoccidioidomicose (PMC) ocorrem no Brasil. As regiões brasileiras com maior número de casos são: sul, sudeste e centro-oeste, sendo emergente no norte e nordeste. A imunodifusão dupla em gel de agarose assume grande importância no diagnóstico, por permitir o monitoramento da doença e por oferecer subsídios para levantamentos soroepidemiológicos. O objetivo deste trabalho foi de avaliar e caracterizar os pacientes atendidos no Laboratório de Imunodiagnóstico das Micoses do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, em 2016. Trata-se de um estudo retrospectivo realizado utilizando-se dados secundários e avaliando-se as seguintes informações: idade, sexo, procedência do pedido médico, resultado e histórico sorológico dos pacientes. Dos 1.408 pacientes, 12,8% apresentaram reatividade sorológica para Paracoccidioides brasiliensis. Destes, 42,5% não possuiam histórico sorológico, sendo considerados como casos novos da doença. A classificação dos pacientes reagentes por gênero demonstrou que 83,4% eram do sexo masculino, com razão de masculinidade de 5:1. A faixa etária variou de um (1) a 92 anos, e aproximadamente 40% dos pacientes eram da faixa etária de 41 a 60 anos. Este estudo demonstra e reforça a importância da implementação dos estudos soroepidemiológicos como ferramenta auxiliar para nortear as ações de vigilância e políticas em saúde na PCM. (AU)

Eighty percent of paracoccidioidomycosis (PMC) cases occur in Brazil. The highest numbers occur in south, southeast and center-west region, being emergent in the north and northeast areas. The double immunodiffusion in agarose gel is valuable for its diagnosis, as it allows the monitoring of the disease and offers subsidies for the seroepidemiological surveys. This study evaluated and characterized the patients attended in 2016 at the Mycoses Immunodiagnosis Laboratory of Adolfo Lutz Institute of São Paulo. This retrospective study, based on the secondary data, evaluated the information: age, sex, medical request origin, result and serological history of the patients. Of 1,408 patients, 12.8% presented positive serological reactivity for Paracoccidioides brasiliensis. Of them, 42.5% had no serological history and they were considered as new cases. The classification of reactive patients by gender showed that 83.4% were males, being the masculinity ratio of 5:1. The age range was one (1) to 92 years old, and ±40% of the patients were of age ranging from 41-60 years old. This study reinforces the importance of the implementation of the seroepidemiological studies as to guide the surveillance actions and the public health politics in PCM.(AU)

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The aim of this study was to identify possible infection of Toxoplasma gondii among cats in a shelter and a set of condominiums in the city of Rio de Janeiro, through changes to the cats serological status between two different times in 2014 and 2015. One group was made up of captive cats at the municipal shelter and the other comprised stray cats that circulated in condominiums in the city. On the first occasion, cats were caught and tagged through application of microchips; in this manner, blood samples were obtained from 261 captive cats and 172 stray cats. On the second occasion, blood samples were obtained from 94 captive cats and 56 recaptured stray cats. The serological diagnosis was made by means of the indirect hemagglutination assay (IHA) and indirect immunofluorescence reaction (IFAT) (cutoff ≥ 64). The frequency of T. gondii infection among the captive cats was 24.5% and among the stray cats, 18%. With the second analysis, it was possible to verify modifications to the serological status of anti-T. gondii antibodies, in 18% of both populations of animals. The presence of seroconversion shows that infection was possibly occurring in the region at the time of the study.(AU)

O objetivo deste estudo foi identificar uma possível infecção por Toxoplasma gondii entre gatos de abrigo e de um conjunto de condomínios na cidade do Rio de Janeiro, por meio de mudanças no status sorológico dos gatos em dois momentos diferentes em 2014 e 2015. O grupo foi formado por gatos, denominados cativos, de um abrigo municipal, e o outro por gatos de rua que circulavam em condomínios da cidade. Na primeira ocasião, os gatos foram capturados, microchipados e coletadas amostras de sangue de 261 gatos cativos e de 172 gatos de rua. Na segunda ocasião, as amostras de sangue foram obtidas de 94 gatos cativos e 56 de gatos de rua recapturados. O diagnóstico sorológico foi realizado por meio do ensaio de hemaglutinação indireta (HAI) e pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) (ponto de corte ≥ 64). A frequência de infecção por T. gondii entre os gatos cativos foi de 24,5% e entre os gatos de rua 18%. Com a segunda análise, foi possível verificar modificações no status sorológico de anticorpos anti-T. gondii, em 18% em ambas populações de animais. A presença de soroconversão mostra que a infecção possivelmente ocorreu na região no momento do estudo.(AU)

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Abstract The aim of this study was to identify possible infection of Toxoplasma gondii among cats in a shelter and a set of condominiums in the city of Rio de Janeiro, through changes to the cats' serological status between two different times in 2014 and 2015. One group was made up of captive cats at the municipal shelter and the other comprised stray cats that circulated in condominiums in the city. On the first occasion, cats were caught and tagged through application of microchips; in this manner, blood samples were obtained from 261 captive cats and 172 stray cats. On the second occasion, blood samples were obtained from 94 captive cats and 56 recaptured stray cats. The serological diagnosis was made by means of the indirect hemagglutination assay (IHA) and indirect immunofluorescence reaction (IFAT) (cutoff ≥ 64). The frequency of T. gondii infection among the captive cats was 24.5% and among the stray cats, 18%. With the second analysis, it was possible to verify modifications to the serological status of anti-T. gondii antibodies, in 18% of both populations of animals. The presence of seroconversion shows that infection was possibly occurring in the region at the time of the study.

Resumo O objetivo deste estudo foi identificar uma possível infecção por Toxoplasma gondii entre gatos de abrigo e de um conjunto de condomínios na cidade do Rio de Janeiro, por meio de mudanças no status sorológico dos gatos em dois momentos diferentes em 2014 e 2015. O grupo foi formado por gatos, denominados cativos, de um abrigo municipal, e o outro por gatos de rua que circulavam em condomínios da cidade. Na primeira ocasião, os gatos foram capturados, microchipados e coletadas amostras de sangue de 261 gatos cativos e de 172 gatos de rua. Na segunda ocasião, as amostras de sangue foram obtidas de 94 gatos cativos e 56 de gatos de rua recapturados. O diagnóstico sorológico foi realizado por meio do ensaio de hemaglutinação indireta (HAI) e pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) (ponto de corte ≥ 64). A frequência de infecção por T. gondii entre os gatos cativos foi de 24,5% e entre os gatos de rua 18%. Com a segunda análise, foi possível verificar modificações no status sorológico de anticorpos anti-T. gondii, em 18% em ambas populações de animais. A presença de soroconversão mostra que a infecção possivelmente ocorreu na região no momento do estudo.

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In areas where human tuberculosis and bovine tuberculosis coexist, differentiation between M. bovis and M. tuberculosis is important for monitoring the spread of M. bovis among cattle and from cattle to humans. The objective of this study was to isolate and identify M. bovis in bovines with positive diagnosis identified on tuberculin test in the State of Paraíba, Northeastern Brazil. Thirty-two bovines that tested positive in the comparative tuberculin test were used, from which samples of any organ with lesions suggestive of tuberculosis were collected, as well as lymph nodes, when no gross lesions were observed. Samples were submitted to histopathological exam, mycobacterial culture, Ziehl-Neelsen staining and molecular diagnosis. Twenty-one (65.6%) animals presented lesions suggestive of tuberculosis. As to body region 77.7% of lesions were found in the thoracic cavity, 12.4% in the head and 9.9% in the abdominal cavity. Among 55 samples submitted to mycobacterial culture, mycobacteria were isolated in 31 (56.4%), being 13 (41.9%) identified as M. bovis and 18 (58.1%) as Mycobacterium spp. Conclusion is that isolation and identification of M. bovis and Mycobacterium spp. in cattle suggests that humans are exposed to the risk of infection. This reinforces the need for intensification and optimization of prevention and control measures foreseen in the Brazilian National Program for the Control and Eradication of Bovine Brucellosis and Tuberculosis. Mycobacteria isolation and identification surveys are, therefore, encouraged in other Northeastern states.(AU)

Em áreas onde a tuberculose humana e a tuberculose bovina coexistem, a diferenciação entre M. bovis e M. tuberculosis é importante para monitorar a disseminação de M. bovis entre bovinos e destes para os seres humanos. Objetivou-se neste estudo isolar e identificar M. bovis em bovinos com diagnóstico positivo pelo teste de tuberculinização no estado da Paraíba, nordeste do Brasil. Foram submetidos 32 bovinos positivos ao teste de tuberculinização comparativa, dos quais foram colhidas amostras de qualquer órgão com lesões sugestivas de tuberculose, e, nos casos em que não foram observadas lesões sugestivas, foram colhidas amostras de linfonodos. As amostras foram submetidas a exame histopatológico, cultivo micobacteriológico, coloração de Ziehl-Neelsen e diagnóstico molecular. Apresentaram lesões sugestivas de tuberculose 21 animais (65,6%). Com relação à distribuição das lesões de acordo com a região corporal, 77,7% localizavam-se na cavidade torácica, 12,4% na cabeça e 9,9% na cavidade abdominal. De 55 amostras submetidas ao cultivo de micobactérias, em 31 (56,4%) foram isoladas micobactérias, sendo que em 13 (41,9%) foi identificado M. bovis, e nas 18 restantes (58,1%) foi identificado Mycobacterium spp. Conclui-se que o isolamento e a identificação de M. bovis e Mycobacterium spp. em bovinos indicam que os seres humanos estão expostos ao risco de infecção. Isso reforça a necessidade de intensificação e otimização de medidas de prevenção e controle previstas no Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Bovina. Sugere-se a realização de estudos de isolamento e identificação de micobactérias em outros estados do Nordeste.(AU)

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