RESUMO
Currently, there is no effective technique to evaluate the quality of oocytes in fish farming in apractical and affordable way. The cell membrane integrity test with the vital dye trypan blue (TB)could be an option. In this study, Colossoma macropomum and Brycon amazonicus oocytes were exposed to different TB concentrations seeking to verify a possible relationship between the results of staining tests and reproductive rates. Oocytes were exposed to concentrations of 0.05, 0.04, 0.03, 0.02 and 0.01% TB for 1 minute and subsequently were evaluated under a stereomicroscope. The percentage of unstained (viable) oocytes from each sample was correlated with fertilization and hatching rates using a linear regression (P>0.05). We observed a weak correlation between the results of the staining tests and the fertilization and hatching rates in both species. TB integrity tests were not effective in predicting spawning viability in C. macropomum and B. amazonicus.
Atualmente não existem técnicas efetivas para avaliar a qualidade de oócitos na piscicultura deforma prática e acessível. O teste de integridade da membrana celular com corante vital azul detripan (AT) surge como uma alternativa. Nesse estudo, oócitos de Colossoma macropomum e Bryconamazonicus foram expostos a diferentes concentrações de AT, buscando verificar uma possível relação entre os resultados dos testes de coloração e as taxas reprodutivas. Oócitos foram expostos a concentrações de 0,05; 0,04; 0,03; 0,02 e 0,01% de AT durante 1 minuto e, posteriormente avaliados em estereomicroscópio. A porcentagem de oócitos não corados (intactos) de cada amostra foicorrelacionada com as taxas de fertilização e eclosão utilizando análise de regressão linear (P>0,05). Fraca correlação entre resultados dos tratamentos e as taxas de fertilização e eclosão nas duas espécies foi observada. Os testes de integridade com AT foram ineficazes em predizer o sucesso da desova em C. macropomum e B. amazonicus
Assuntos
Animais , Characidae , Células Germinativas , Oócitos , Azul Tripano/análise , Coloração e Rotulagem , OviposiçãoRESUMO
Currently, there is no effective technique to evaluate the quality of oocytes in fish farming in apractical and affordable way. The cell membrane integrity test with the vital dye trypan blue (TB)could be an option. In this study, Colossoma macropomum and Brycon amazonicus oocytes were exposed to different TB concentrations seeking to verify a possible relationship between the results of staining tests and reproductive rates. Oocytes were exposed to concentrations of 0.05, 0.04, 0.03, 0.02 and 0.01% TB for 1 minute and subsequently were evaluated under a stereomicroscope. The percentage of unstained (viable) oocytes from each sample was correlated with fertilization and hatching rates using a linear regression (P>0.05). We observed a weak correlation between the results of the staining tests and the fertilization and hatching rates in both species. TB integrity tests were not effective in predicting spawning viability in C. macropomum and B. amazonicus.(AU)
Atualmente não existem técnicas efetivas para avaliar a qualidade de oócitos na piscicultura deforma prática e acessível. O teste de integridade da membrana celular com corante vital azul detripan (AT) surge como uma alternativa. Nesse estudo, oócitos de Colossoma macropomum e Bryconamazonicus foram expostos a diferentes concentrações de AT, buscando verificar uma possível relação entre os resultados dos testes de coloração e as taxas reprodutivas. Oócitos foram expostos a concentrações de 0,05; 0,04; 0,03; 0,02 e 0,01% de AT durante 1 minuto e, posteriormente avaliados em estereomicroscópio. A porcentagem de oócitos não corados (intactos) de cada amostra foicorrelacionada com as taxas de fertilização e eclosão utilizando análise de regressão linear (P>0,05). Fraca correlação entre resultados dos tratamentos e as taxas de fertilização e eclosão nas duas espécies foi observada. Os testes de integridade com AT foram ineficazes em predizer o sucesso da desova em C. macropomum e B. amazonicus(AU)
Assuntos
Animais , Characidae , Oócitos , Células Germinativas , Azul Tripano/análise , Coloração e Rotulagem , OviposiçãoRESUMO
At the end of its growth, the mammalian oocyte, include in preovulatory follicle, is the largest cell of the organism, with about 120 µmin diameter. The size of oocyte, together with the specific arrangement of its organels and cytoskeleton, makes a real challenge forcryopreservation techniques. For such large cell, methods that do not require equilibrium to cryopreservation, such as vitrification,are more promising. It is important to highlight that the cryopreservation of oocytes is more difficult than zygotes or later stageembryos and this technique is a challenging task because of oocyte sensitive nature to chilling and toxic effects of cryoprotectants.However, the development of a reliable method for oocyte cryopreservation would be an important advance in the field of reproductivebiology for the preservation of genetic resources. The vitrification of mammalian oocytes is influenced by many variables, such asdifferent cryoprotectants, vitrification techniques, presence or absence of cumulus cells, the oocyte structure, metabolism (such aslevel of lipid storage) and meiotic stage. Thus, all these factors should be considered to optimize the techniques and adapt them tooocytes from each species. Therefore, the present review aims to describe the main factors that affect oocyte vitrification in sheepand goats, reporting the main findings in both species, as well as perspectives of future improvements.
No fim do seu crescimento, o oócito mamífero é a maior célula do organismo, com cerca de 120 µm de diâmetro. O tamanhodo oócito em conjunto com a disposição específica das organelas e do citoesqueleto faz com que ele represente um verdadeirodesafio para as técnicas de criopreservação. Para grandes células, métodos que não exigem equilíbrio para criopreservação,como a vitrificação, são mais promissores. É importante ressaltar que a criopreservação de oócitos é mais difícil que de zigotosou embriões em estádios mais tardios e esta técnica representa um desafio devido à natureza sensível do oócito ao resfriamentoe aos efeitos tóxicos de crioprotetores. Entretanto, o desenvolvimento de uma técnica confiável para a criopreservação oocitáriarepresentaria um avanço importante para a preservação de recursos genéticos. A vitrificação de oócitos em mamíferos é influenciadapor muitas variáveis, tais como diferentes crioprotetores, técnicas de vitrificação, presença ou ausência de células do cumulus,estrutura do oócito, metabolismo (como o nível de armazenamento de lipídios) e estágio meiótico. Assim, todos esses fatoresdevem ser considerados quando o objetivo é otimizar as técnicas e adaptá-las para oócitos de cada espécie. Assim, a presenterevisão tem como objetivo descrever os principais fatores que afetam a vitrificação de oócitos em ovinos e caprinos, relatando osprincipais resultados em ambas as espécies, bem como as perspectivas de melhorias futuras.
Assuntos
Animais , Cabras , Criopreservação/veterinária , Células Germinativas , Ovinos , Oócitos , VitrificaçãoRESUMO
At the end of its growth, the mammalian oocyte, include in preovulatory follicle, is the largest cell of the organism, with about 120 µmin diameter. The size of oocyte, together with the specific arrangement of its organels and cytoskeleton, makes a real challenge forcryopreservation techniques. For such large cell, methods that do not require equilibrium to cryopreservation, such as vitrification,are more promising. It is important to highlight that the cryopreservation of oocytes is more difficult than zygotes or later stageembryos and this technique is a challenging task because of oocyte sensitive nature to chilling and toxic effects of cryoprotectants.However, the development of a reliable method for oocyte cryopreservation would be an important advance in the field of reproductivebiology for the preservation of genetic resources. The vitrification of mammalian oocytes is influenced by many variables, such asdifferent cryoprotectants, vitrification techniques, presence or absence of cumulus cells, the oocyte structure, metabolism (such aslevel of lipid storage) and meiotic stage. Thus, all these factors should be considered to optimize the techniques and adapt them tooocytes from each species. Therefore, the present review aims to describe the main factors that affect oocyte vitrification in sheepand goats, reporting the main findings in both species, as well as perspectives of future improvements.(AU)
No fim do seu crescimento, o oócito mamífero é a maior célula do organismo, com cerca de 120 µm de diâmetro. O tamanhodo oócito em conjunto com a disposição específica das organelas e do citoesqueleto faz com que ele represente um verdadeirodesafio para as técnicas de criopreservação. Para grandes células, métodos que não exigem equilíbrio para criopreservação,como a vitrificação, são mais promissores. É importante ressaltar que a criopreservação de oócitos é mais difícil que de zigotosou embriões em estádios mais tardios e esta técnica representa um desafio devido à natureza sensível do oócito ao resfriamentoe aos efeitos tóxicos de crioprotetores. Entretanto, o desenvolvimento de uma técnica confiável para a criopreservação oocitáriarepresentaria um avanço importante para a preservação de recursos genéticos. A vitrificação de oócitos em mamíferos é influenciadapor muitas variáveis, tais como diferentes crioprotetores, técnicas de vitrificação, presença ou ausência de células do cumulus,estrutura do oócito, metabolismo (como o nível de armazenamento de lipídios) e estágio meiótico. Assim, todos esses fatoresdevem ser considerados quando o objetivo é otimizar as técnicas e adaptá-las para oócitos de cada espécie. Assim, a presenterevisão tem como objetivo descrever os principais fatores que afetam a vitrificação de oócitos em ovinos e caprinos, relatando osprincipais resultados em ambas as espécies, bem como as perspectivas de melhorias futuras.(AU)
Assuntos
Animais , Vitrificação , Oócitos , Criopreservação/veterinária , Cabras , Ovinos , Células GerminativasRESUMO
A constatação da presença de RNAs em espermatozoides trouxe diversos questionamentos a respeito dacontribuição dessa célula para o desenvolvimento embrionário. O gameta masculino, que até então eraconsiderado apenas um transportador do genoma paterno, começou a ser estudado na busca de se descobrir seessa célula tão especializada possuiria outros atributos. Ainda existem muitas dúvidas quanto às funções dosRNAs presentes nos espermatozoides. Acredita-se que essas moléculas possam ter alguma função no início dodesenvolvimento embrionário, ou ainda que possam indicar a qualidade da espermatogênese e estar envolvidascom a fertilidade masculina, no entanto mais estudos são necessários para defini-las.
The findings of spermatozoa RNAs brought several questions regarding potential contributions of thiscell to embryo development. The male gamete, considered until recently as a simple transporter of male genome,began to be studied to discover if such a specialized cell would also have other functions. There are still manydoubts related to the functions of RNAs found on spermatozoa, it is believed that these molecules may have somerole in early embryonic development, or may indicate the quality of spermatogenesis and be related to malefertility, but further studies are necessary to better define them.
Assuntos
Masculino , Animais , RNA , Desenvolvimento Embrionário/fisiologia , Desenvolvimento Embrionário/genética , Espermatozoides/fisiologiaRESUMO
A constatação da presença de RNAs em espermatozoides trouxe diversos questionamentos a respeito dacontribuição dessa célula para o desenvolvimento embrionário. O gameta masculino, que até então eraconsiderado apenas um transportador do genoma paterno, começou a ser estudado na busca de se descobrir seessa célula tão especializada possuiria outros atributos. Ainda existem muitas dúvidas quanto às funções dosRNAs presentes nos espermatozoides. Acredita-se que essas moléculas possam ter alguma função no início dodesenvolvimento embrionário, ou ainda que possam indicar a qualidade da espermatogênese e estar envolvidascom a fertilidade masculina, no entanto mais estudos são necessários para defini-las.(AU)
The findings of spermatozoa RNAs brought several questions regarding potential contributions of thiscell to embryo development. The male gamete, considered until recently as a simple transporter of male genome,began to be studied to discover if such a specialized cell would also have other functions. There are still manydoubts related to the functions of RNAs found on spermatozoa, it is believed that these molecules may have somerole in early embryonic development, or may indicate the quality of spermatogenesis and be related to malefertility, but further studies are necessary to better define them.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Espermatozoides/fisiologia , RNA/genética , Desenvolvimento Embrionário/genética , Desenvolvimento Embrionário/fisiologiaRESUMO
Background: The application of cryopreservation in human and animal reproductive medicine has stimulated several studies about the effects of low temperatures and freezing processes on cells and tissues, in order to develop efficient protocols for gamete and embryo preservation. Moreover, cryopreservation is a fundamental tool for the establishment of animal germplasm banks, allowing the preservation of genetic material from several species and breeds or for further study and/or recovery of desirable characteristics. For the success of cryopreservation, the addition of an intracellular cryoprotectant agent in the freezing solution is indispensable. However, issues related to intracellular cryoprotectant agents used, e.g., their metabolism and potential toxicity, must be examined carefully so we can choose the cryoprotectant most suitable for a specific structure. Review: In this regard, this review introduces several aspects of cryopreservation, such as basic principles and methods used (slow freezing and vitrification), describing the fundamental steps of cryoprotectant agents exposure, cooling, storage, thawing or warming and removal of the cryoprotectant agent. The addition of an intracellular cryoprotectant to the freezing solution is essential, but does not guarantee the success of the cryopreservation protocol, due to its toxic effect, which requires a perfect balance between cryoprotectant concentration, temperature and exposure time to the structure which will be cryopreserved. Some studies attribute the toxicity of these agents mainly to the secondary metabolites formed when the cell resumes its activi ty and gradually begins to metabolize the cryoprotectant agent.[...]
Assuntos
Crioprotetores/análise , Folículo Ovariano , Oócitos , CriopreservaçãoRESUMO
Background: The application of cryopreservation in human and animal reproductive medicine has stimulated several studies about the effects of low temperatures and freezing processes on cells and tissues, in order to develop efficient protocols for gamete and embryo preservation. Moreover, cryopreservation is a fundamental tool for the establishment of animal germplasm banks, allowing the preservation of genetic material from several species and breeds or for further study and/or recovery of desirable characteristics. For the success of cryopreservation, the addition of an intracellular cryoprotectant agent in the freezing solution is indispensable. However, issues related to intracellular cryoprotectant agents used, e.g., their metabolism and potential toxicity, must be examined carefully so we can choose the cryoprotectant most suitable for a specific structure. Review: In this regard, this review introduces several aspects of cryopreservation, such as basic principles and methods used (slow freezing and vitrification), describing the fundamental steps of cryoprotectant agents exposure, cooling, storage, thawing or warming and removal of the cryoprotectant agent. The addition of an intracellular cryoprotectant to the freezing solution is essential, but does not guarantee the success of the cryopreservation protocol, due to its toxic effect, which requires a perfect balance between cryoprotectant concentration, temperature and exposure time to the structure which will be cryopreserved. Some studies attribute the toxicity of these agents mainly to the secondary metabolites formed when the cell resumes its activi ty and gradually begins to metabolize the cryoprotectant agent.[...](AU)