RESUMO

O desenvolvimento de estudos genéticos e de microdispositivos biológicos tem proporcionado a ampliação do conhecimento sobre os complexos eventos que envolvem a reprodução animal. O desafio ainda é imensurável, mas a criação e surgimentos de novas perspectivas para a pesquisa básica tem-se feito presente. Neste trabalho revisamos de maneira suscinta algumas abordagens recentes, utilizadas pela pesquisa básica, sobretudo com o objetivo de lançar luz sobre o desenvolvimento folicular e oocitário. Dessa forma, essa revisão pretende fornecer uma visão geral do uso das tecnologias ômicas e sistema de microfluídica como auxiliadores na compreensão da foliculogênese. Adicionalmente serão apresentadas particularidades inerentes à fisiologia da gametogênese, que incluem ação de microorganismos e mitocôndrias, além do importante papel da comunicação intercelular através das vesículas extracelulares.

The development of genetic studies and biological microdevices has expanded knowledge about the complex events involving animal reproduction. The challenge is still immeasurable, but the creation and emergence of new perspectives for basic research have been present. This paper briefly reviews some recent approaches used in basic research, mainly to shed light on follicular and oocyte development. Thus, this review intends to provide an overview of the use of omics technologies and microfluidics systems as aids in understanding folliculogenesis. Also, it will present particulars inherent in the physiology of gametogenesis, which include microorganisms and mitochondria, in addition to the important role of intercellular communication through extracellular vesicles.

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Resumen El objetivo de este estudio fue determinar la expresión de proteínas del fluido folicular (FF) y su relación con la calidad del oocito. Se evaluaron 52 ovarios de planta de faenado de vacas Cebú comercial, mediante la técnica de disección y aspiración folicular se obtuvo FF y oocitos. Las evaluaciones realizadas fueron: calidad del oocito por aspecto citoplasmático y células del cúmulos y perfil de proteínas del FF mediante SDS-PAGE. Se realizó el análisis descriptivo, a través del procedimiento MEANS, análisis de varianza (PROC. ANOVA) y para las diferencias estadísticas significativas se usó la prueba de comparación de Bonferroni con un nivel de significancia del 5%, mediante el paquete estadístico SAS®. El 52% de los oocitos se categorizaron con calidad I-II. El análisis unidimensional de las proteínas del FF evidenció la presencia de 25 bandas de proteína entre 9 y 240 kDa. En folículos <3 mm se expresaron 23 bandas, en folículos de 3 y 6 mm 19 bandas y en folículos >6mm 20 bandas. Las bandas de peso molecular (PM) de 26kDa, 57kDa y 68kDa representan la mayor concentración en el FF; 4 bandas de PM 14 KDa, 34 KDa, 76 y 79 KDa, solo en folículos de <3mm, 2 bandas de PM 9 y 91 KDa solo en folículos de >3 mm. La banda de 32 KDa no se observó en folículos > de 6mm. Las bandas de mayor frecuencia de presentación fueron las de 26, 40, 42, 57, 68, 240 KDa. Las bandas de proteína que se asociaron con la calidad del oocito en forma significativa (p<0,05) fueron las de PM 24, 57, 68 y 164 KDa para FF de folículos <3mm y las bandas de PM 13, 26 y 38 kDa entre 3 y 6mm, y la de 26 kDa a folículos > de 6mm. Los resultados nos indican asociaciones de la calidad del oocito con algunas bandas de proteína.

Abstract This study was aimed at determining follicular fluid (FF) protein expression and its relationship with oocyte quality. FF and oocytes were obtained by dissection and follicular aspiration of the ovaries from fifty-two commercial Zebu from a slaughterhouse. Oocyte quality was measured by cytoplasmic aspect and cumulus cells and FF protein profile by SDS-PAGE. The SAS statistical package's PROC MEANS and analysis of variance (ANOVA) were used for descriptive analysis and the Bonferroni comparison test for assessing significant statistical differences (5% significance level); 52% of the oocytes were categorised as having I-II quality. One-dimensional SDS-PAGE analysis of FF proteins revealed 25 protein bands having 9 kDa to 240 kDa molecular weight (MW); 23 bands were expressed in <3 mm follicles, 19 bands in 3 and 6 mm follicles and 20 bands in >6 mm follicles. The 26kDa, 57kDa and 68kDa bands' MW represented the highest FF concentration whereas only four bands (14 kDa, 34 kDa, 76 and 79 kDa MW) were found in <3mm follicles and only 2 bands (9kDa and 91 kDa MW) in >3 mm follicles. The 32 kDa band was not observed in >6mm follicles. The 26, 40, 42, 57, 68 and 240 KDa bands occurred with the greatest frequency. The protein bands which were significantly associated with oocyte quality (p<0.05) were 24, 57, 68 and 164 kDa MW for <3mm follicles, 13, 26 and 38 kDa MW bands for 3 and 6mm follicles and 26 kDa for >6mm follicles. The results indicated oocyte quality association with some protein bands.

Resumo Este estudo teve como objetivo determinar a expressão de proteínas do fluido folicular (FF) e sua relação com a qualidade do oócito. Avaliou-se 52 ovários de vacas Cebú comercial colhidos em abatedouro e através da técnica de dissecação e aspiração folicular obtivera-se o FF e os oócitos. As avaliações realizadas foram: qualidade do oócito pelo aspecto citoplasmático e células do cúmulos e o perfil de proteínas do FF mediante SDS-PAGE. Realizou-se a análise descritiva, através do procedimento MEANS, análise de variância (PROC. ANOVA) e para identificar as diferenças estatísticas significativas, utilizou-se a prova de comparação de Bonferroni com um nível de significância de 5%, através do pacote estadístico SAS®. O 52% dos oócitos foram classificados como qualidade I e II. As análises unidimensionais das proteínas do FF evidenciaram a presença de 25 bandas de proteína entre 9 y 240 kDa. Em folículos <3 mm expressaram-se 23 bandas, em folículos entre 3 e 6 mm 19 bandas e em folículos >6mm 20 bandas. As bandas de peso molecular (PM) de 26kDa, 57kDa e 68kDa são as mais frequentes no FF; 4 bandas de PM 14 KDa, 34 KDa, 76 y 79 KDa, solo em folículos de <3mm, 2 bandas de PM 9 y 91 KDa solo em folículos de >3 mm. A banda de 32 KDa não foi observada em folículos> de 6mm. As bandas mais frequentes foram 26, 40, 42, 57, 68, 240 KDa. As bandas de proteína que se associaram à qualidade do oócito em forma significativa (p <0,05) foram as de PM 24, 57, 68 e 164 KDa para FF de folículos <3mm e as bandas de PM 13, 26 e 38 kDa entre 3 e 6mm, e a de 26 kDa a folículos >6mm. Os resultados indicam associações entre qualidade do oócito e algumas bandas de proteína.

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OBJETIVO: avaliar a concentração dos hormônios esteroides no fluido folicular (FF) de folículos pequenos (10-14 mm) e grandes (> 18 mm) de mulheres com síndrome dos ovários policísticos (SOP) submetidas à hiperestimulação ovariana controlada (HOC) e ciclos de fertilização in vitro (FIV). MÉTODOS: estudo caso-controle foi conduzido em 13 mulheres inférteis com SOP (17 ciclos) e 31 mulheres inférteis por fator masculino - Grupo Controle (31 ciclos). Os FF foram aspirados individualmente e dividos em 4 grupos: G1 (FF pequeno do Grupo Controle), G2 (FF pequeno do grupo SOP), G3 (FF grande do Grupo Controle) e G4 (FF grande do grupo SOP). A metodologia utilizada para as dosagens de estradiol, progesterona e β-hCG foi a quimioluminescência, e de testosterona e androstenediona o radioimunoensaio. Para a análise das dosagens hormonais no FF entre os grupos SOP e Controle utilizou-se o teste t não-pareado, e para a comparação entre os quatro grupos, o ANOVA. Para a taxa de gravidez, foi utilizado o teste exato de Fisher. RESULTADOS: os folículos pequenos dos dois grupos tiveram valores menores de progesterona (8.435±3.305 ng/mL) comparados aos grandes (10.280±3.475 ng/mL), com valor de p<0,01. Os níveis de progesterona de todos os folículos do grupo SOP (8.095±4.151 ng/mL) foram inferiores ao Controle (9.824±3.128 ng/mL), com valor de p=0,03. Os níveis de testosterona diferiram entre G1 (326,6±124,4 ng/dL) e G3 (205,8±98,91 ng/dL), com valor de p<0,001, e entre G3 (205,8±98,91 ng/dL) e G4 (351,10±122,1 ng/dL), com valor de p<0,001. Os folículos pequenos (508,9±266 ng/dL) apresentaram valores superiores de testosterona comparados aos grandes (245,10±123 ng/dL), com valor de p<0,0001. As taxas de gravidez não diferiram entre os grupos SOP (5/13, 38,5 por cento) e Controle (9/31, 40,9 por cento), com valor de p=072. CONCLUSÕES: mulheres com SOP apresentam altas concentrações de testosterona no FF, independentemente do estágio de desenvolvimento folicular, e níveis de progesterona diminuídos, sugerindo que fatores parácrinos podem inibir sua secreção pelas células foliculares. As taxas de gravidez mostraram que o tratamento de HOC e FIV é uma boa opção para mulheres com infertilidade secundária à SOP.

PURPOSE: to evaluate the concentration of steroid hormones in follicular fluid (FF) of small (10-14 mm) and large (> 18 mm) follicles of women with polycystic ovary syndrome (PCOS) submitted to controlled ovarian hyperstimulation (COH) and in vitro fertilization (IVF) cycles. METHODS: a case-control study was conducted on 13 infertile women with PCOS (17 cycles) and 31 infertile women due to male factor - Control Group (31 cycles). FF was aspirated individually and divided into four groups: G1 (FF of small follicles of the Control Group), G2 (FF of small follicles of the PCOS group), G3 (FF of large follicles of the Control Group) and G4 (FF of large follicles of the PCOS group). Estrogen, progesterone and β-hCG were determined by chemiluminescence, and testosterone and androstenedione by radioimmunoassay. The unpaired t-test was used to compare the hormone determinations in the FF of the PCOS and Control Groups, and the four groups were compared by ANOVA. Fisher's exact test was used to compare the pregnancy rates. RESULTS: the small follicles of the two groups had lower progesterone levels (8,435±3,305 ng/mL) than large follicles (10,280±3,475 ng/mL), p-value <0.01. The progesterone levels of all follicles of group PCOS (8,095±4,151 ng/mL) were lower than Control (9,824±3,128 ng/mL), p-value =0.03. Testosterone differed between G1 (326.6±124.4 ng/dL) and G3 (205.8±98.91 ng/dL), p-value <0.001, and between G3 (205.8±98.91 ng/dL) and G4 (351.10±122.1ng/dL), p-value <0.001. Small follicles had higher testosterone levels (508.9±266 ng/dL) than large follicles (245.10±123 ng/dL), p-value <0.0001. The pregnancy rates did not differ between the PCOS (5/13, 38.5 percent) and the Control groups (9/31, 40.9 percent), p-value =072. CONCLUSIONS: women with PCOS had high testosterone concentrations in the FF, regardless of the stage of follicle development, and reduced progesterone levels, suggesting that paracrine factors may inhibit the secretion of the latter by follicular cells. The pregnancy rates showed that treatment with COH and IVF is a good option for women with infertility secondary to PCOS.

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Objetivo: establecer la correlación entre los niveles séricos de grelina y los hallados en fluido folicular, el IMC, y los niveles séricos de estradiol y progesterona. Establecer la asociación entre los niveles plasmáticos de grelina y los resultados reproductivos en cueanto a tasa de embarazo. Diseño: estudio prospectivo de cohortes. Materiales y métodos: se incluyeron para el análisis los procedimientos de alta complejidad realizados entre junio y diciembre de 2007 (n=492). Todas las pacientes tuvieron un IMC menor de 26 kg/m2, ritmos menstruales conservados, FSH basal menor de 12 mUI/ml y edad menor de 40 años. Se excluyeron los ciclos con síndrome de ovario poliquístico y/o insulinorresistencia, antecedente de falla previa de fertilización in vitro o ciclos con muestras de espermatozoides provenientes de biopsia de testículo. El grupo de estudio (Grupo A) fue definido por aquellas pacientes con un IMC menor de 20 kg/m2 y se logró incluir un total de 19 ciclos. El grupo control (Grupo B) quedó definido por ciclos con IMC entre 20-25 kg/m2 , los ciclos del grupo B fueron seleccionados de los realizados en el mismo día del grupo A en una relación !:!. De una muestra tomada en el día de la punción ovárica, se realizó el dosaje sérico de grelina, estradiol y progesterona; se utilizó el fluido folicular del primer folículo aspirado libre de medio de lavado. Se evaluó causa de esterilidad, FSH basal, IMC, ovocitos captados, ovocitos metafase II (M II), ovocitos fertilizados, calidad embrionaria, tasas de implantación y embarazo. Resultado: se halló una correlación positiva entre los niveles séricos de grelina y fluido folicular (r=0,72m p<0,05), así como una correlación indirecta significativa entre los niveles de grelina y estradiol y progesterona (r=0,44 y r=0,43 respectivamente, ambos con p<0,05). No se hallaron diferencias significativas en cuanto a la edad, % esterilidad primaria,...(AU)

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Objetivo: establecer la correlación entre los niveles séricos de grelina y los hallados en fluido folicular, el IMC, y los niveles séricos de estradiol y progesterona. Establecer la asociación entre los niveles plasmáticos de grelina y los resultados reproductivos en cueanto a tasa de embarazo. Diseño: estudio prospectivo de cohortes. Materiales y métodos: se incluyeron para el análisis los procedimientos de alta complejidad realizados entre junio y diciembre de 2007 (n=492). Todas las pacientes tuvieron un IMC menor de 26 kg/m2, ritmos menstruales conservados, FSH basal menor de 12 mUI/ml y edad menor de 40 años. Se excluyeron los ciclos con síndrome de ovario poliquístico y/o insulinorresistencia, antecedente de falla previa de fertilización in vitro o ciclos con muestras de espermatozoides provenientes de biopsia de testículo. El grupo de estudio (Grupo A) fue definido por aquellas pacientes con un IMC menor de 20 kg/m2 y se logró incluir un total de 19 ciclos. El grupo control (Grupo B) quedó definido por ciclos con IMC entre 20-25 kg/m2 , los ciclos del grupo B fueron seleccionados de los realizados en el mismo día del grupo A en una relación !:!. De una muestra tomada en el día de la punción ovárica, se realizó el dosaje sérico de grelina, estradiol y progesterona; se utilizó el fluido folicular del primer folículo aspirado libre de medio de lavado. Se evaluó causa de esterilidad, FSH basal, IMC, ovocitos captados, ovocitos metafase II (M II), ovocitos fertilizados, calidad embrionaria, tasas de implantación y embarazo. Resultado: se halló una correlación positiva entre los niveles séricos de grelina y fluido folicular (r=0,72m p<0,05), así como una correlación indirecta significativa entre los niveles de grelina y estradiol y progesterona (r=0,44 y r=0,43 respectivamente, ambos con p<0,05). No se hallaron diferencias significativas en cuanto a la edad, % esterilidad primaria,...

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Estudou-se o efeito da pré-maturação em fluido folicular bovino (FFb) sobre o potencial de desenvolvimento de ovócitos bovinos imaturos. Complexo cumulus- ovócitos (CCO) e FFb foram obtidos de ovários coletados em matadouro. O FFb foi inativado e os CCOs imaturos distribuídos em quatro tratamentos: (T1) 70 por cento de FFb em Talp Hepes, (T2) 100 por cento de FFb, (T3) 100 por cento de Talp Hepes, e (T4) controle. Em T1, T2 e T3 os CCOs foram pré - maturados por cinco horas a 37ºC em ar e posteriormente maturados in vitro. Em T4 a maturação ocorreu logo após a aspiração. Depois de fecundados in vitro, os ovócitos foram co-cultivados com células do cumulus por 10 dias. Avaliaram-se as taxas de clivagem, de produção de blastocistos no sétimo e oitavo dias pós- fecundação (PF), de produção total e de blastocistos eclodidos no oitavo e nono dias PF. Calcularam-se as taxas de blastocistos no sétimo e oitavo dia e de blastocistos eclodidos em função do total de blastocistos produzidos. As taxas de clivagem, de produção total e de blastocistos eclodidos não diferiram entre os tratamentos (P>0,05), entretanto a produção de blastocistos no sétimo dia foi menor nos tratamentos com FFb e Talp Hepes (P<0,05). Concluiu-se que FFb e Talp Hepes na pré-maturação por cinco horas atrasam o desenvolvimento embrionário sem comprometer a taxa de produção total de embriões ou sua viabilidade.(AU)

The effect of the pre-maturation with bovine follicular fluid (bFF) on developmental competence of immature bovine oocytes was studied. Cumulus-oocytes complexes (COC) and bFF were obtained from ovaries collected at slaughterhouse. bFF was inactivated prior to use and COCs were distributed in four treatments: (T1) 70% of bFF in Talp hepes, (T2) 100% of bFF, (T3) 100% of Talp Hepes medium, and (T4) control group. In T1, T2, and T3, COCs were incubated during 5h at 37ºC before proceeding with in vitro maturation. In T4, maturation was performed soon after follicular aspiration. After in vitro fertilization, the presumptive zygotes were co-cultured with cumulus cells during 10 days. It was evaluated cleavage, blastocyst on seventh and eighth days post-fertilization (PF), overall blastocyst and hatched blastocyst on eighth and ninth days PF. It was also calculated the ratio of blastocyst on seventh and eighth days, and hatched blastocyst in function of overall blastocyst production. Cleavage, overall blastocyst and hatched blastocyst rates were similar (P>0.05) among treatments. However, blastocyst production on seventh day was lower (P<0.05) for bFF and Talp Hepes. These results indicate that bFF and Talp Hepes in pre-maturation for five hours caused a delay on embryonic development, although the overall blastocyst production and viability were not affected.(AU)

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This study aimed to evaluate the effects of active immunization against swine follicular liquid in Limousin cows and heifers, based on progesterone plasma levels, estrous cycle length and ovulation rate. Two immunization procedures were performed with 15 days interval, administering an immunogenic substance containing the proteic content of 25ml of swine follicular fluid, plus 1ml aluminum hydroxide gel, subcutaneous. The ovulation was measured by rectal palpation and ultra-sonographic evaluation, seven to nine days after each estrus period. Results show that after the last immunization, the animals presented higher double ovulation incidence (41.7%). The average ovulation before and after immunization were 1.00±0.00 and 1.40±0.31 ovulations/cycle, respectively (P 0.01; chi2). The immunization method used was effective to stimulate a higher ovulation number. No differences on mean estrous cycle length and progesterone levels were observed. Physiological inhibin action may be an alternative method to induce multiple ovulations of bovines.

O presente estudo objetivou avaliar os efeitos da imunização ativa contra proteínas do líquido folicular suíno sobre a taxa de ovulação, duração do ciclo estral e concentração plasmática de progesterona em vacas e novilhas da raça Limousin. Realizaram-se duas imunizações com 15 dias de intervalo, aplicando-se um imunógeno composto do conteúdo protéico de 25ml de fluido folicular suíno adicionados de 1ml de gel de hidróxido de alumínio, via subcutânea. O número de ovulações foi mensurado por palpação retal e ultra-sonografia sete a nove dias após cada período de estro. Após a última imunização, os animais apresentaram maior incidência de ovulações duplas (41,7%). As médias de ovulações pré e pós-imunização foram 1,00+0,00 e 1,40+0,31 ovulações/ciclo, respectivamente (P 0,01;chi2). A imunização foi efetiva em aumentar o número de ovulações. Não foram observadas diferenças na duração do ciclo estral e na concentração de progesterona nos diferentes dias do ciclo. A manipulação das ações fisiológicas da inibina pode ser utilizada como alternativa para indução de ovulações múltiplas em bovinos.

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The objective of this study was to identify a possible biochemical marker from bovine follicles with a diameter of more than 10 mm, which could be useful to identify dominant follicles in this species. Follicular liquid (FL) was aspirated from follicles with diameters less than 5 mm, between 5 and 10 mm and more than 10 mm, from both ovaries of 37 slaughtered bovine females. After aspiration, FL was conditioned in identified eppendorfs and frozen. The eletrophoretic patterns in SDS PAGE from FL proteins were determined and it was verified that, the follicles with more than 10 mm presented a polipeptide with a molecular weight between 39 and 43 KDa identified like the IGF-binding protein-3 (IGFBP-3), which wasn"t observed in follicles less than 5 mm and between 5 and 10 mm. This study suggests that this polipeptide may be utilized like a biochemical marker from follicles of more than 10 mm.

O objetivo deste estudo foi identificar um marcador bioquímico de folículos bovinos com diâmetro maior do que 10 mm, o qual poderia ser utilizado para identificar folículos dominantes nesta espécie. Líquido folicular era aspirado de folículos com diâmetros menores do que 5 mm, entre 5 e 10 mm e maiores do que 10 mm, provenientes de ovários de 37 fêmeas bovinas abatidas. Após aspiração, o líquido folicular (LF) era acondicionado em ependorfs etiquetados e congelados. Os padrões eletroforéticos em SDS-PAGE das proteínas do LF foram determinados e verificou-se que os folículos com diâmetro maior do que 10 mm apresentaram um polipeptídeo com PM entre 39 e 43 KDa identificado como a proteína ligante de IGF-3 (IGFBP-3), o qual não foi observado em folículos com diâmetro menor do que 5 mm e entre 5 e 10 mm. Este estudo sugere que este polipeptídeo possa ser utilizado como marcador bioquímico de folículos maiores do que 10 mm.

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The aim of the experiment was to determine whether charcoal-treated bovine follicular fluid (bFF) removed from visible ( 22 mm) follicles altered the secretion of follicle-stimulating hormone (FSH) in intact and ovariectomized prepubertal heifers. After a 10-ml injection of bFF given at three consecutive 8-h intervals, secretion of FSH was depressed in approximately 44% of the ovariectomized heifers but there was no effect in intact heifers. When the bFF treatment ceased, there were no rebound effects on FSH concentrations above that of controls pretreatment levels. These results suggest that proteins from bFF act at the pituitary level to inhibit FSH secretion and, differently of the intact, the ovariectomized heifer is an adequate model to put this effect in evidence, particularly when the bFF have low FSH suppressing activity.

O presente trabalho objetivou determinar o efeito do líquido folicular bovino tratado com carvão ativado (LFb) na secreção do hormônio folículo estimulante (FSH) de novilhas pré-púberes ovariectomizadas ou intatas. A aplicação de LFb (quatro injeções de 10 ml com intervalo de 8 horas) provocou uma queda de aproximadamente 44% na concentração plasmática de FSH nas novilhas ovariectomizadas, mas não teve efeito nas novilhas intatas. Não foi observada hipersecreção de FSH após o término da aplicação do LFb. Esses resultados sugerem que proteínas presentes no LFb atuam ao nível hipofisiário para inibir a secreção de FSH e, diferentemente das intatas, as novilhas ovariectomizadas constituem um modelo adequado para evidenciar esse efeito, particularmente quando o LFb possui reduzida atividade supressora do FSH.

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Ten multiparous non-lactating cows were randomly assigned to one of two groups. On days 8 to 12 after estrus, the first group was given 100 ml antiserum against steroid-free bovine follicular fluid (anti-bFF), which was produced in ovariectomized sheep. The second group (control) was given 100 ml nonimmune ovariectomized sheep serum. Six hours after injection, both groups were superovulated with FSH (18 NIH-FSH-S1 units) and LH (0.29 NIH-LH-S1 units) in a 4-day decreasing regime. On the morning of the third day a luteolytic dose of prostaglandin F2alpha analogue (cloprostenol) was given. Artificial inseminations (AI) were done 48 and 60 h later. Embryos were collected 7 days after AI by a nonsurgical method. Blood samples were taken throughout the experimental period and plasma concentrations of FSH, LH and progesterone were determined by radioimmunoassay. All cows from the immunized group, and 3 out of 5 cows in the control group, had more than 2 CL. There was no significant difference (P>;0.05) in the ovulation rate between immunized and control groups (14.4 and 9.9, respectively). The number of recovered embryos was not significantly different (P>;0.05) between groups, although cows immunized against bFF had a greater number of transferable embryos (3.4 ± 1.0 versus 0.8 ± 0.4, P 0.05). Plasma gonadotrophin concentrations were not correlated with either ovulation rat

Dez vacas multíparas, secas, foram distribuídas aleatoriamente em dois grupos de cinco animais cada. Nos dias 8 a 12 do diestro, o primeiro grupo recebeu 100 ml de anti-soro contra líquido folicular livre de esteróides (anti-LFb) produzido em ovelhas ovariectomizadas. O segundo grupo (controle) recebeu 100 ml de soro de ovelhas não-imunizadas. Seis horas após a aplicação, os dois grupos foram superovulados com FSH (18 NIH-FSH-S1 unidades) e LH (0,29 NIH-LH-S1 unidades) administrados em quantidades decrescentes durante quatro dias. Na manhã do terceiro dia, foi administrada uma dose luteolítica de cloprostenol. Duas inseminações foram realizadas 48 e 60 horas após. Os embriões foram recuperados pelo método cervical 7 dias após a primeira inseminação. Amostras de sangue foram coletadas durante todo o período experimental para determinar, por radioimunoensaio, as concentrações plasmáticas de FSH, LH e progesterona. Todas as vacas do grupo imunizado e 3 do grupo controle apresentaram mais de 2 CL. Não existiu diferença significativa (P>;0,05) na taxa de ovulação entre os grupos imunizado e controle (14,4 e 9,9, respectivamente). O número de embriões recuperado não foi significativamente diferente (P>;0,05) entre os grupos, embora o grupo imunizado tenha apresentado maior número de embriões transferíveis (3,4 ± 1,0 versus 0,8 ± 0,4, P 0,05). As concentrações de gonadotrofin