RESUMO
This study aimed to assess and standardize the ELISA and modified ToBI test in vitro methods in order to verify the potency of epsilon toxicoid in comparison with the in vivo TCP method. The following epsilon toxoids were used: NIBSC standard from batches 375/07, 532/08, 551/08, 373/07 and 378/07. These were evaluated using a TCP test, ELISA and ToBI tests. The results indicate that the correlation ratio between the dilutions of standard NIBSC toxicoid and absorbance values of 89.44% obtained with the ELISA method support the use of the curve to evaluate epsilon toxoids. However, it was observed that the absorbance values were similar for all toxoids, thus presenting no significant difference between higher and lower concentration toxoids. For the ToBI test, the correlation ratio of 96.76, obtained in the curve pattern, demonstrates the effectiveness of the curve to be used in the epsilon toxoid evaluation. The correlation ratio between the titration degrees of toxoids obtained through TCP and ToBI tests was higher than 90%. It is concluded that the type of ELISA test used does present discriminative power for toxoids with different concentrations, which does not support the use of this technique for such a purpose. The ToBI test can be used as a screening method for it is sensitive and effective to detect epsilon toxicoid produced by C. perfringens type D...
Teve-se por objetivo avaliar e padronizar as metodologias in vitro, ELISA e ToBI-test modificado, para a análise de toxoide épsilon, em comparação com a metodologia in vivo TCP. Foram utilizados os seguintes toxoides épsilon: padrão NIBSC e os lotes 375/07, 532/08, 551/08, 373/07 e 378/07, os quais foram avaliados por métodos in vivo, TCP, e in vitro, ELISA e ToBI-test. A análise do título de toxoide épsilon por meio dos métodos in vitro foi realizada a partir de uma curva-padrão, estabelecida previamente. Os principais resultados mostram que os valores de absorbância foram semelhantes para todos os toxoides, não apresentando diferença significativa entre os toxoides mais concentrados e menos concentrados. No ToBI-test, o coeficiente de correlação de 96,76%, obtido na curva-padrão, demonstra a eficiência da curva para avaliação do toxoide épsilon. O coeficiente de correlação entre os títulos de toxoide obtidos pelo TCP e ToBI-test foi superior a 90%. Conclui-se que o tipo de ELISA utilizado não apresenta poder discriminativo para toxoides com diferentes concentrações, inviabilizando a técnica para esse fim. O ToBI-test pode ser utilizado como um método de triagem sensível e eficaz para a detecção de toxoide épsilon de C. perfringens tipo D...
Assuntos
Clostridium/isolamento & purificação , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Toxoides/antagonistas & inibidores , Vacinas , Imunoensaio/métodosRESUMO
This study aimed to assess and standardize the ELISA and modified ToBI test in vitro methods in order to verify the potency of epsilon toxicoid in comparison with the in vivo TCP method. The following epsilon toxoids were used: NIBSC standard from batches 375/07, 532/08, 551/08, 373/07 and 378/07. These were evaluated using a TCP test, ELISA and ToBI tests. The results indicate that the correlation ratio between the dilutions of standard NIBSC toxicoid and absorbance values of 89.44% obtained with the ELISA method support the use of the curve to evaluate epsilon toxoids. However, it was observed that the absorbance values were similar for all toxoids, thus presenting no significant difference between higher and lower concentration toxoids. For the ToBI test, the correlation ratio of 96.76, obtained in the curve pattern, demonstrates the effectiveness of the curve to be used in the epsilon toxoid evaluation. The correlation ratio between the titration degrees of toxoids obtained through TCP and ToBI tests was higher than 90%. It is concluded that the type of ELISA test used does present discriminative power for toxoids with different concentrations, which does not support the use of this technique for such a purpose. The ToBI test can be used as a screening method for it is sensitive and effective to detect epsilon toxicoid produced by C. perfringens type D.(AU)
Teve-se por objetivo avaliar e padronizar as metodologias in vitro, ELISA e ToBI-test modificado, para a análise de toxoide épsilon, em comparação com a metodologia in vivo TCP. Foram utilizados os seguintes toxoides épsilon: padrão NIBSC e os lotes 375/07, 532/08, 551/08, 373/07 e 378/07, os quais foram avaliados por métodos in vivo, TCP, e in vitro, ELISA e ToBI-test. A análise do título de toxoide épsilon por meio dos métodos in vitro foi realizada a partir de uma curva-padrão, estabelecida previamente. Os principais resultados mostram que os valores de absorbância foram semelhantes para todos os toxoides, não apresentando diferença significativa entre os toxoides mais concentrados e menos concentrados. No ToBI-test, o coeficiente de correlação de 96,76%, obtido na curva-padrão, demonstra a eficiência da curva para avaliação do toxoide épsilon. O coeficiente de correlação entre os títulos de toxoide obtidos pelo TCP e ToBI-test foi superior a 90%. Conclui-se que o tipo de ELISA utilizado não apresenta poder discriminativo para toxoides com diferentes concentrações, inviabilizando a técnica para esse fim. O ToBI-test pode ser utilizado como um método de triagem sensível e eficaz para a detecção de toxoide épsilon de C. perfringens tipo D.(AU)
Assuntos
Clostridium/isolamento & purificação , Toxoides/antagonistas & inibidores , Vacinas , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Imunoensaio/métodosRESUMO
This study was carried out to assess and standardize the 'Limit of Flocculation' in vitro test to be used in the quality control of vaccine against enterotoxemy. This study used experimental vaccines against enterotoxemy and toxicoid produced from the epsilon toxin of Clostridium perfringens type D, previously evaluated by serum neutralization in mice and TCP test. The 'Limit of Flocculation' technique was performed by mixing variable amounts of antitoxin and a fixed value of toxicoid to each tube. It was proposed, in the first tube to flocculate, that its Fl would be the unit of flocculation of the tested sample. The main results indicated that the lower degree of antitoxin detectable both in rabbit and in sheep serum through the Limit of Flocculation' technique is equivalent to 10 UI/mL. The TCP and 'Limit of Flocculation' correlation ratio was 99.97%. In conclusion, the Limit of Flocculation is suitable to replace in vivo methods for the analysis of epsilon. Nevertheless, the referred technique is less effective to be used for the potency test of vaccines against enterotoxemy in substitution to serum neutralization in mice.
Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar e padronizar o teste in vitro Limite de Floculação, para ser utilizado no controle de qualidade de vacinas contra enterotoxemia. Foram utilizadas vacinas experimentais contra enterotoxemia e toxóides produzidos pelo Clostridium perfringens tipo D, previamente avaliados por métodos in vivo, empregando-se os testes de soroneutralização em camundongo TCP. A técnica Limite de Floculação consistiu em misturar volumes variados de antitoxina com volumes fixos de toxóide em tubos de ensaio. O primeiro tubo a flocular foi dito como sendo o que continha a quantidade mais próxima de antitoxina equivalente à quantidade de antígeno na amostra e se propôs que o Lf contido no tubo foi unidade de Lf da amostra testada. Os principais resultados obtidos indicaram que o nível mínimo de antitoxina detectável em soros de coelhos e carneiros pela técnica limite de floculação é 10 UI/mL. O coeficiente de correlação, obtido entre os títulos de toxóide pelos métodos TCP e Limite de floculação foi 99,97%. Conclui-se que o Limite de Floculação é satisfatório para substituir os tradicionais métodos in vivo utilizados na análise de toxóide epsilon. No entanto, a referida técnica é pouco eficiente para ser utilizada no teste de potência de vacinas contra enterotoxemia, em substituição à soroneutralização em camundongos.