RESUMO
This experimental study proposes to carry out a data collection regarding the viral yield of the production of the monovalent influenza virus, using embryonated chicken eggs with different ages. Considering that it is an experimental work, the main justification for its realization is the constant search for the improvement of industrial production processes, specifically, the possibility of increasing the production capacity of the factory of monovalent influenza viruses. For this, the determination of the best embryonic age will enhance a greater replication of the viral population existing in the microenvironment of the egg surrounding the embryo. All stages of the study procedures, which included the use of various modern equipment and laboratory materials, as well as specific reagents inherent to the process, were in accordance with the parameters established by the Quality Assurance department of the Butantan Institute, being in-process controls essential for the different stages of the artificial incubation stage of embryonated chicken eggs. Embryonated chicken eggs aged between 37 and 44 weeks, strains B/Phuket/3073/2013, B/Austria/1359417/2021, A/Darwin/9/2021, respectively, were used, totaling 9,000 (nine thousand) eggs with 9 (nine), 10 (ten), 11 (eleven) and 12 (twelve) day-old embryos for interpretation of the respective statistical data. The study was carried out in the Laboratory for the Production of Influenza Banks (PBI) building, since it was in compliance with regard to the nature of the laboratory activities monitored by the Institution's support disciplines, as well as being in line with the Good Laboratory Practices, Good Manufacturing Practices and Good Biosafety Practices. The eggs were incubated in specific artificial incubation machines and subjected to a temperature range between 33°C and 35°C, as well as a humidity of approximately 55%, which were the in-process controls chosen for effective viral replication and subjected to following unit operations: receipt of eggs, primary candling, primary incubation, preparation of viral inoculum, test of hemagglutinating units of viral inoculum, viral inoculation, secondary incubation, secondary candling, primary cooling, collection of Allantoic Liquid, secondary cooling, sample purification , determination of sucrose content, UHA and Optical Density of 14 purified samples. The results of this experimental study were submitted to statistical analysis to enhance discussions about the implementation of the use of embryonated chicken eggs, with 11 days and/or 12 days of life, better viral yields found, as strategies to establish new specifications of embryonated eggs, as raw material for the production process.
Este estudo experimental propõe a realização de um levantamento de dados no tocante ao rendimento viral da produção do monovalente do vírus influenza, utilizando ovos de galinha embrionados e com diferentes idades. Considerando que é um trabalho experimental, a principal justificativa para sua realização é pela constante busca do aperfeiçoamento dos processos produtivos industriais, especificamente, na possibilidade de aumentar a capacidade produtiva da fábrica de monovalentes de vírus influenza. Para isto, a determinação da melhor idade embrionária potencializará uma maior replicação da população viral existente no microambiente do ovo circundante ao embrião. Todas as etapas dos procedimentos do estudo, que contou com a utilização de diversos equipamentos modernos e materiais laboratoriais, bem como reagentes específicos inerentes ao processo, estavam em conformidade com os parâmetros estabelecidos pelo departamento de Garantia da Qualidade do Instituto Butantan, sendo controles em processo essenciais para os diferentes estágios da etapa de incubação artificial dos ovos de galinha embrionados. Foram utilizados ovos embrionados de galinha com idades entre 37 e 44 semanas, das cepas B/Phuket/3073/2013, B/Austria/1359417/2021, A/Darwin/9/2021, respectivamente, totalizando 9.000 (nove mil) ovos com embriões de 9 (nove), 10 (dez), 11 (onze) e 12 (doze) dias de idade para interpretação dos respectivos dados estatísticos. O estudo foi realizado no prédio do Laboratório da Produção de Bancos Influenza (PBI), uma vez que estava dentro da conformidade no tocante a natureza das atividades de cunho laboratorial acompanhadas pelas disciplinas de apoio da Instituição, assim como mantinham-se em consonância com as Boas Práticas de Laboratório, Boas Práticas de Fabricação e Boas Práticas de Biossegurança. Os ovos foram incubados em máquinas específicas de incubação artificial e submetidos ao range de temperatura compreendido entre 33°C e 35°C, bem como a umidade de aproximadamente 55%, que foram os controles em processo escolhidos para a efetiva replicação viral e submetidos às seguintes operações unitárias: recebimento dos ovos, ovoscopia primária, incubação primária, preparo do inóculo viral, teste de unidades 12 hemaglutinantes do inóculo viral, inoculação viral, incubação secundária, ovoscopia secundária, resfriamento primário, colheita do Líquido Alantóico, resfriamento secundário, purificação das amostras, determinação do teor de sacarose, UHA e Densidade Óptica das amostras purificadas. Os resultados deste estudo experimental foram submetidos a análises estatísticas para potencializar as discussões sobre a implementação do uso de ovos de galinha embrionados, com 11 dias e/ou 12 dias de vida, melhores rendimentos virais encontrados, como estratégias para estabelecer novas especificações dos ovos embrionados, na condição de matéria prima para o processo produtivo.
RESUMO
The availability of medicines to the population necessarily goes through a long regulatory path, where several steps must be fulfilled. In this scenario, ANVISA is the national regulatory agency responsible for establishing the regulations that companies, producers and developers must follow. The objective of this work is to map the different regulatory processes involved in the approval of a vaccine, a type of biological medicine, developed by companies or national research institutions. Therefore, there is a focus on local regulations that involves the regulatory approval of a vaccine. The steps from the initial stages of development of a vaccine are accompanied by processes that are guided by regulatory requirements, often complex and with different directions. Until final release to the public, the rules governing this release involve several approvals that must be strictly followed by developers. Thus, the scope of this work is to delineate the regulatory processes from the initial stages of development of a vaccine, through the distinct phases of clinical trials, to its final approval for distribution to the general public, contributing to a global comprehension by researchers of the regulatory process as a whole.
A disponibilização de medicamentos à população passa necessariamente por um longo caminho regulatório, onde várias etapas devem ser cumpridas. Neste cenário, a ANVISA é o órgão responsável pelo estabelecimento da regulamentação que as empresas, produtores e desenvolvedores devem seguir. O objetivo deste trabalho é mapear os diversos processos regulatórios envolvidos na aprovação de uma vacina, que é um tipo de medicamento biológico, desenvolvido por empresas ou instituições de pesquisa nacionais. Desta forma, foca-se na regulamentação local que envolve a aprovação regulatória de um produto biológico. Os passos desde as etapas iniciais de desenvolvimento de uma vacina são acompanhados de processos que são norteados por requisitos regulatórios, muitas vezes complexos e envolvendo diferentes direcionamentos. Até a disponibilização final ao público, as normativas que determinam essa liberação envolvem diversas aprovações que devem ser rigorosamente seguidas pelos desenvolvedores. Desta forma, o escopo deste trabalho é delinear os processos regulatórios desde as fases iniciais de desenvolvimento de uma vacina, passando pelas diferentes fases de ensaios clínicos, até a sua aprovação final para a disponibilização à população, contribuindo para fornecer uma compreensão global aos pesquisadores do processo regulatório como um todo.
RESUMO
Influenza A viruses A H1N1, A H3N2 and type B (Victoria lineage), are part of the current trivalent Influenza vaccine composition produced by the Instituto Butantan. The WHO recommendation is based on data about viruses circulation around the globe. Due to this constant change of strains, the production time, from the announcement of the strains to be used until the start of the annual campaign, is just over 7 months. Therefore, the quest for vaccine producers to streamline any and all procedures, without compromising quality, is constant. In this context, obtaining a good dose/egg yield is a crucial point, being directly proportional to the success of the strain replication and, therefore, to the production yield. Vaccine production begins with master seed lots and working seed lots production, subsequently used for bulk batches production. The precise, accurate and quicly quantification can improve yield. In this study, the standardization of an RT-qPCR methodology for the quantification of viral nucleic acid copies number was performed following a statistical correlation between virus data determined by EID50/mL. To achieve the objectives, a standard curve of synthetic DNA was prepared for each Influenza virus (A H1N1, A H3N2 and B (Victoria)), which allowed the quantification of copies number by the standardized methodology. The methodologies were applied to the viral strains and validated by the parameters of linearity, limits of detection and quantification, precision and specificity, reaching the acceptance criteria. A good correlation was established between the number of copies and EDI50/mL, with r of ~0.99 for each of the 3 standardized methods, demonstrating the possibility of using the methodologies in the steps that need the most exact quantification of viruses, generating data for viral replication monitoring and optimizing production processes
Os vírus Influenza A H1N1, H3N2 e tipo B (Victoria) fazem parte da composição atual da vacina trivalente produzida pelo Instituto Butantan e ela é produzida com os vírus recomendadas pela Organização Mundial da Saúde (OMS). Essa recomendação é realizada anualmente baseada em dados obtidos pelo monitoramento de sua circulação ao redor do planeta. Por conta desta mudança constante de cepas, o tempo de produção, desde o anúncio das cepas a serem utilizadas até o início da campanha anual, é de pouco mais de 7 meses. Portanto, a busca pelos produtores de vacinas para agilizar todo e qualquer procedimento, sem comprometimento da qualidade, é uma constante. Dentro desse contexto, a obtenção de um bom rendimento dose/ovo é um ponto crucial, sendo diretamente proporcional ao sucesso da replicação das cepas e, portanto, ao rendimento da produção. A produção da vacina tem início com a produção de bancos de vírus semente e bancos de vírus trabalho que são utilizados, posteriormente para a produção de todos os lotes de monovalentes, e sua quantificação de maneira precisa, exata e rápida pode auxiliar na melhoria do rendimento. Neste estudo foi realizada a padronização de uma metodologia de RT-qPCR para a quantificação do número de cópias de ácido nucleico viral visando uma correlação estatística com os dados de vírus determinado por EID50/mL. Para atingir os objetivos, inicialmente foi preparada uma curva padrão de DNA sintético para cada um dos vírus Influenza (A H1N1, A H3N2 e B (Victoria)) que permitiu a quantificação exata do número de cópias pela metodologia padronizada. A seguir, as metodologias foram aplicadas às cepas virais e validadas pelos parâmetros de linearidade, limites de detecção e quantificação, precisão e especificidade, sendo atingidos os critérios de aceitação. Foi estabelecida uma boa correlação entre o número de cópias e EID50/mL, com r de ~0,99 para cada um dos 3 métodos padronizados, demonstrando a possibilidade de utilização das metodologias nas etapas que necessitem a quantificação mais exata de vírus, gerando dados para o acompanhamento da replicação viral e otimização dos processos de produção.