RESUMO

Bovine herpesvirus 5 (BHV5) infection of young cattle is frequently associated with fatal neurological disease and, as such, represents an attractive model for studying the pathogenesis of viral-induced meningoencephalitis. Following replication in the nasal mucosa, BHV5 invades the central nervous system (CNS) mainly through the olfactory pathway. The innate immune response triggered by the host face to virus replication through the olfactory route is poorly understood. Recently, an upregulation of conserved pathogen-associated molecular pattern, as Toll-like receptors (TLRs), has been demonstrated in the CNS of BHV5 experimentally infected cows. A new perspective to understand host-pathogen interactions has emerged elucidating microRNAs (miRNAs) network that interact with innate immune response during neurotropic viral infections. In this study, we demonstrated a link between the expression of TLRs 3, 7, and 9 and miR-155 transcription in the olfactory bulbs (OB) of 16 cows suffering from acute BHV5-induced neurological disease. The OBs were analyzed for viral antigens and genome, miR-155 and TLR 3, 7, and 9 expression considering three major regions: olfactory receptor neurons (ORNs), glomerular layer (GL), and mitral cell layer (ML). BHV5 antigens and viral genomes, corresponding to glycol-C gene, were detected in all OBs regions by fluorescent antibody assay (FA) and PCR, respectively. TLR 3, 7, and 9 transcripts were upregulated in ORNs and ML, yet only ORN layers revealed a positive correlation between TLR3 and miR-155 transcription. In ML, miR-155 correlated positively with all TLRs studied. Herein, our results evidence miR-155 transcription in BHV5 infected OB tissue associated to TLRs expression specifically ORNs which may be a new window for further studies.

Assuntos

RESUMO

Rabbits have been used as animal models to study the pathogenesis of neurological infection by bovine herpesvirus type 5 (BHV-5), an important agent of meningoencephalitis in cattle. The olfactory system has been implicated as the main pathway for the virus to reach the brain after replication in the nasal mucosa. To investigate the role of the olfactory route in the pathogenesis of neurological infection, a technique of transfrontal craniotomy for ablation of the main olfactory bulbs (MOBs), using the eyes as the anatomic reference was developed and evaluated. Using this technique, twenty three 30 days-old rabbits were submitted to surgical ablation of the MOBs and subsequently inoculated with BHV-5. After skin, subcutaneous tissue and periosteum incisions, the craniotomy was performed in a point equidistant to the medial corner of the eyes, with a 3 mm drill coupled to a low intensity elyptic drilling machine. The removal of the MOB's tissue was performed by using a number 6 uretral probe coupled to a surgical vaccum pump. The anatomic references used were appropriate in allowing an adequate and easy access to the MOBs. Necropsy performed in three animals after the surgery demonstrated that the surgical procedure was efficient in completely removing the MOB tissue. This was also demonstrated by the interruption of the access of the virus to the brain after intranasal inoculation: only one animal (1/11) in the bulbectomized group developed neurological infection and disease, against 100% (10/10) of the control group. The transfrontal craniotomy using the eyes as the anatomical reference allowed for an adequate access for localization and removal of the MOBs in rabbits. This techique may be used in studies of viral pathogenesis requiring the complete interruption of the olfactory connection to the brain.

Coelhos têm sido utilizados como modelo para o estudo da neuropatogenia da infecção pelo herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5), um importante agente de doença neurológica em bovinos. O sistema olfatório tem sido apontado como a principal via de acesso do vírus ao cérebro após replicação na cavidade nasal. Para investigar a importância da via olfatória na patogenia da infecção neurológica pelo BHV-5, foi elaborada e avaliada uma técnica operatória de craniotomia transfrontal para remoção dos bulbos olfatórios (BOs), definindo-se as órbitas como referência anatômica. Foram utilizados 45 coelhos com 30 dias de idade, sendo 23 submetidos à ablação cirúrgica dos BOs e posteriormente inoculados pela via intranasal (IN) ou no saco conjuntival (IC) com o BHV-5. Após incisões de pele, tecido subcutâneo e periósteo, a craniotomia foi realizada em um ponto eqüidistante entre os cantos mediais dos olhos, com uma broca sulcada de 3mm acoplada a uma perfuratriz elétrica de baixa rotação. A remoção dos BOs foi realizada com uma sonda uretral n°6 acoplada a um aspirador. O estudo macroscópico de três animais após a cirurgia comprovou que o procedimento foi eficiente na remoção total dos BOs. Isso também foi comprovado pela interrupção do acesso do vírus ao córtex cerebral: apenas um animal (1/11 ou 9,1%) no grupo submetido à ablação dos BOs com inoculação IN desenvolveu enfermidade neurológica, contra 100% (10/10) dos coelhos controle. Conclui-se que a técnica de craniotomia transfrontal utilizando a órbita como referência anatômica permite o acesso adequado para localização e remoção dos BOs e pode ser utilizada em estudos de patogenia de infecções por vírus neurotrópicos que exijam a interrupção completa da via olfatória.

RESUMO

Rabbits have been used as animal models to study the pathogenesis of neurological infection by bovine herpesvirus type 5 (BHV-5), an important agent of meningoencephalitis in cattle. The olfactory system has been implicated as the main pathway for the virus to reach the brain after replication in the nasal mucosa. To investigate the role of the olfactory route in the pathogenesis of neurological infection, a technique of transfrontal craniotomy for ablation of the main olfactory bulbs (MOBs), using the eyes as the anatomic reference was developed and evaluated. Using this technique, twenty three 30 days-old rabbits were submitted to surgical ablation of the MOBs and subsequently inoculated with BHV-5. After skin, subcutaneous tissue and periosteum incisions, the craniotomy was performed in a point equidistant to the medial corner of the eyes, with a 3 mm drill coupled to a low intensity elyptic drilling machine. The removal of the MOB's tissue was performed by using a number 6 uretral probe coupled to a surgical vaccum pump. The anatomic references used were appropriate in allowing an adequate and easy access to the MOBs. Necropsy performed in three animals after the surgery demonstrated that the surgical procedure was efficient in completely removing the MOB tissue. This was also demonstrated by the interruption of the access of the virus to the brain after intranasal inoculation: only one animal (1/11) in the bulbectomized group developed neurological infection and disease, against 100% (10/10) of the control group. The transfrontal craniotomy using the eyes as the anatomical reference allowed for an adequate access for localization and removal of the MOBs in rabbits. This techique may be used in studies of viral pathogenesis requiring the complete interruption of the olfactory connection to the brain.

Coelhos têm sido utilizados como modelo para o estudo da neuropatogenia da infecção pelo herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5), um importante agente de doença neurológica em bovinos. O sistema olfatório tem sido apontado como a principal via de acesso do vírus ao cérebro após replicação na cavidade nasal. Para investigar a importância da via olfatória na patogenia da infecção neurológica pelo BHV-5, foi elaborada e avaliada uma técnica operatória de craniotomia transfrontal para remoção dos bulbos olfatórios (BOs), definindo-se as órbitas como referência anatômica. Foram utilizados 45 coelhos com 30 dias de idade, sendo 23 submetidos à ablação cirúrgica dos BOs e posteriormente inoculados pela via intranasal (IN) ou no saco conjuntival (IC) com o BHV-5. Após incisões de pele, tecido subcutâneo e periósteo, a craniotomia foi realizada em um ponto eqüidistante entre os cantos mediais dos olhos, com uma broca sulcada de 3mm acoplada a uma perfuratriz elétrica de baixa rotação. A remoção dos BOs foi realizada com uma sonda uretral n°6 acoplada a um aspirador. O estudo macroscópico de três animais após a cirurgia comprovou que o procedimento foi eficiente na remoção total dos BOs. Isso também foi comprovado pela interrupção do acesso do vírus ao córtex cerebral: apenas um animal (1/11 ou 9,1%) no grupo submetido à ablação dos BOs com inoculação IN desenvolveu enfermidade neurológica, contra 100% (10/10) dos coelhos controle. Conclui-se que a técnica de craniotomia transfrontal utilizando a órbita como referência anatômica permite o acesso adequado para localização e remoção dos BOs e pode ser utilizada em estudos de patogenia de infecções por vírus neurotrópicos que exijam a interrupção completa da via olfatória.

RESUMO

Com o objetivo de otimizar a técnica de imunoistoquímica para detecção de herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) em tecidos do sistema nervoso central fixado em formaldeído, foram avaliados diferentes métodos de digestão enzimática, diferentes anticorpos e reagentes para bloqueio de reações inespecíficas. As reações apresentaram a máxima intensidade de coloração específica e a quantidade mínima de coloração de fundo quando foram usadas protease de Streptomyces griseus (0,1%) ou proteinase K de Tritirachium album limber (0,05%), mediante incubação durante 15 minutos a 37ºC. Entre os anticorpos monoclonais analisados, dois foram capazes de detectar BHV-5. As reações inespecíficas foram bloqueadas mais efetivamente pela incubação do tecido com caseína (0,5%), durante cinco minutos, ou leite em pó (2,5%), durante 60 minutos, ou soro eqüino (2,5%), durante 60 minutos. Com a técnica otimizada foi possível a detecção de BHV-5 em material de arquivo.(AU)

In order to optimize immunohistochemical technique (IHC) for detection of Bovine herpesvirus type 5 (BHV-5) on formalin-fixed sections of central nervous system, different methods of enzymatic digestion, use of different antibodies and products for blocking of nonspecific reactivity were evaluated. The reactions showed the highest intensity of specific coloration and the minimum amounts of background when protease from Streptomyces griseus (0.1%) or proteinase K from Tritirachium album limber (0.05%) were used, incubating for 15 minutes at 37°C. Only two of the tested monoclonal antibodies specifically labelled BHV-5 antigen. The nonspecific reactions were blocked through incubation of tissues with casein (0.5%) for five minutes or powdered milk (2.5%) for 60 minutes or equine serum (2.5%) for 60 minutes. The optimized immunohistochemical method allowed the detection of BHV-5 antigen in histopathological archives.(AU)

Assuntos

RESUMO

O herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) é responsável por meningoencefalites necrosantes em bovinos, com prevalência aparentemente mais significativa nos países do hemisfério sul, principalmente Brasil e Argentina. Objetivando um melhor entendimento sobre aspectos de proteção cruzada induzida através da utilização de vacinas contra BHV-1 frente a infecções por BHV-5, o presente estudo envolveu a imunização de coelhos e bovinos com uma vacina recombinante de BHV-1 e subseqüente desafio com uma amostra altamente virulenta de BHV-5. Após o desafio, 2 de 5 coelhos previamente vacinados morreram apresentado sinais neurológicos de meningoencefalite, bem como 3 de 5 coelhos do grupo de animais não vacinados. Quando este experimento foi realizado em bovinos, animais do grupo vacinado desenvolveram sinais brandos de comprometimento nervoso e doença respiratória. No grupo de animais não vacinados, contudo, 2 animais morreram nos dias 7 e 11 pós desafio. No dia 21 pós desafio, 4 de 8 bovinos vacinados e 2 bovinos não vacinados foram sacrificados e apresentaram lesões típicas de BHV-5 no encéfalo. No dia 60 pós desafio, os bovinos remanescentes foram submetidos à administração de dexametasona visando a reativação do vírus. Após a reativação, não foram evidenciados sinais de comprometimento nervoso ou respiratório em ambos os grupos. Contudo, lesões atróficas no encéfalo estavam presentes em 3

RESUMO

O herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) é responsável por meningoencefalites necrosantes em bovinos, com prevalência aparentemente mais significativa nos países do hemisfério sul, principalmente Brasil e Argentina. Objetivando um melhor entendimento sobre aspectos de proteção cruzada induzida através da utilização de vacinas contra BHV-1 frente a infecções por BHV-5, o presente estudo envolveu a imunização de coelhos e bovinos com uma vacina recombinante de BHV-1 e subseqüente desafio com uma amostra altamente virulenta de BHV-5. Após o desafio, 2 de 5 coelhos previamente vacinados morreram apresentado sinais neurológicos de meningoencefalite, bem como 3 de 5 coelhos do grupo de animais não vacinados. Quando este experimento foi realizado em bovinos, animais do grupo vacinado desenvolveram sinais brandos de comprometimento nervoso e doença respiratória. No grupo de animais não vacinados, contudo, 2 animais morreram nos dias 7 e 11 pós desafio. No dia 21 pós desafio, 4 de 8 bovinos vacinados e 2 bovinos não vacinados foram sacrificados e apresentaram lesões típicas de BHV-5 no encéfalo. No dia 60 pós desafio, os bovinos remanescentes foram submetidos à administração de dexametasona visando a reativação do vírus. Após a reativação, não foram evidenciados sinais de comprometimento nervoso ou respiratório em ambos os grupos. Contudo, lesões atróficas no encéfalo estavam presentes em 3

RESUMO

O herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) é responsável por meningoencefalites necrosantes em bovinos, com prevalência aparentemente mais significativa nos países do hemisfério sul, principalmente Brasil e Argentina. Objetivando um melhor entendimento sobre aspectos de proteção cruzada induzida através da utilização de vacinas contra BHV-1 frente a infecções por BHV-5, o presente estudo envolveu a imunização de coelhos e bovinos com uma vacina recombinante de BHV-1 e subseqüente desafio com uma amostra altamente virulenta de BHV-5. Após o desafio, 2 de 5 coelhos previamente vacinados morreram apresentado sinais neurológicos de meningoencefalite, bem como 3 de 5 coelhos do grupo de animais não vacinados. Quando este experimento foi realizado em bovinos, animais do grupo vacinado desenvolveram sinais brandos de comprometimento nervoso e doença respiratória. No grupo de animais não vacinados, contudo, 2 animais morreram nos dias 7 e 11 pós desafio. No dia 21 pós desafio, 4 de 8 bovinos vacinados e 2 bovinos não vacinados foram sacrificados e apresentaram lesões típicas de BHV-5 no encéfalo. No dia 60 pós desafio, os bovinos remanescentes foram submetidos à administração de dexametasona visando a reativação do vírus. Após a reativação, não foram evidenciados sinais de comprometimento nervoso ou respiratório em ambos os grupos. Contudo, lesões atróficas no encéfalo estavam presentes em 3

RESUMO

Monoclonal antibodies (mAbs) produced to a Brazilian isolate of bovine herpesvirus type 5 (BHV-5) were used to standardize rapid tests for the diagnostic of BHV-1 and BHV-5 infections. The detection of viral antigens by immunofluorescence in descamative cells (IFDC) was compared to virus isolation in nasal secretions of 16 calves inoculated with BHV-1 (n=6) or BHV-5 (n=10). One hundred and sixty two out of 203 specimens (89.6%) had identical results in both assays (143 positive; 39 negative); the IFDC assay showing a sensitivity of 96.6%, specificity of 70.9% and precision of 89.6%. The mAbs were also used to detect BHV-5 antigens in fresh brain smears of calves from outbreaks of neurological disease; and in cell cultures used in a virus neutralizing (VN) test, allowing the obtention of results in 24 hours. The rapid virus neutralizing test (RVN) showed a sensitivity of 97.3%, specificity of 95.5% and precision of 96.2% comparing to the standard VN test; and a sensitivity of 94.7%, specificity of 97.3% and precision of 96.1% as compared to a commercial ELISA. These results demonstrate that these mAbs are useful in rapid diagnostic tests, which may be very important in field outbreaks, when taking adequate decisions depends on rapid and reliable diagnostic tests.

Anticorpos monoclonais (AcMs) produzidos com uma amostra brasileira do herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) foram utilizados na adaptação e padronização de técnicas rápidas para o diagnóstico de infecções pelo BHV-1 e BHV-5. A detecção de antígenos virais por imunofluorescência em células descamativas (IFCD) foi comparada com o isolamento viral, em secreções nasais de 16 bezerros, sendo 6 inoculados com o BHV-1 e 10 com o BHV-5. De 203 amostras testadas, 182 (89,6%) apresentaram resultados concordantes nos dois testes (143 positivas; 39 negativas). Comparando-se com o isolamento, a IFCD apresentou sensibilidade de 96,6%, especificidade de 70,9%, e precisão de 89,6%. Os AcMs também foram utilizados para detectar antígenos do BHV-5 em impressões frescas do cérebro de bezerros acometidos de enfermidade neurológica e em células de cultivo utilizadas na técnica de soroneutralização (SN), permitindo a obtenção dos resultados em 24 horas. A técnica, denominada de soroneutralização rápida (SNR), apresentou sensibilidade de 97,3%; especificidade de 95,5% e precisão de 96,2% em comparação com a SN tradicional; e sensibilidade de 94,7%, especificidade de 97,3% e precisão de 96,1% em comparação com um ELISA comercial. Esses resultados demonstram que esses AcMs podem ser muito úteis para uso em técnicas rápidas de diagnóstico de infecções suspeitas de BHV-1 ou de BHV-5, sobretudo em situações de surto, quando a tomada de decisões adequadas depende de um diagnóstico rápido e confiável.

RESUMO

The efficiency of the establishment and reactivation of latent infection by bovine herpesviruses types 1 and 5 (BHV-1 and 5) was compared. Calves inoculated intranasally with BHV-1 (SV-265, n=6) or BHV-5 (SV-507, n=6) presented a mild to moderate nasal discharge and shed virus in nasal secretions in titers up to 10(7.81)TCID50/ml (mean tissue culture infectious dose) during an average of 10.5 days (6-15 [BHV-1]) or up to 10(6.7) TCID50/ml during 15.3 days (13-18 [BHV-5]). Dexamethasone administration (Dx; 0.5mg/kg) at day 60pi resulted in reactivation of the infection in all calves. Virus shedding in nasal secretions was detected in titers up to 10(5.5)TCID50/ml during 6 to 9 days (mean: 7.8) in calves inoculated with BHV-1 and in titers up to 10(6.1)TCID50/ml (3 to 12 days, mean: 7.5) in calves inoculated with BHV-5. These results showed that BHV-1 and BHV-5 were capable of establishing and reactivating the latent infection at comparable levels.

Nesse estudo, comparou-se a eficiência de estabelecimento e reativação da infecção latente pelos herpesvírus bovinos tipos 1 e 5 (BHV-1 e 5) em bezerros. Bezerros inoculados pela via intranasal com uma amostra de BHV-1 (SV-265, n=6) ou BHV-5 (SV-507, n=6) apresentaram corrimento nasal discreto a moderado e excretaram vírus em secreções nasais em títulos de até 10(7,81)DICC50/ml (dose infectante para 50% dos cultivos celulares) durante um período médio de 10,5 dias (6-15 [BHV-1]) ou títulos de até 10(6,7) DICC50/ml durante 15,3 dias (13-18 [BHV-5]). A administração de dexametasona (Dx; 0,5mg/kg, via endovenosa) aos 60 dias pós-inoculação (pi) resultou em reativação da infecção em todos os animais inoculados. O vírus foi detectado em secreções nasais dos bezerros inoculados com o BHV-1 em títulos de até 10(5,5)DICC50/ml por 6 a 9 dias (x:7,8) e em títulos de até 10(6,1)DICC50/ml (durante 3 a 12 dias, x: 7,5 dias) nos bezerros inoculados com o BHV-5. Os resultados obtidos demonstraram que tanto o BHV-1 quanto o BHV-5 foram capazes de estabelecer e reativar a infecção latente em níveis semelhantes.

RESUMO

The efficiency of the establishment and reactivation of latent infection by bovine herpesviruses types 1 and 5 (BHV-1 and 5) was compared. Calves inoculated intranasally with BHV-1 (SV-265, n=6) or BHV-5 (SV-507, n=6) presented a mild to moderate nasal discharge and shed virus in nasal secretions in titers up to 10(7.81)TCID50/ml (mean tissue culture infectious dose) during an average of 10.5 days (6-15 [BHV-1]) or up to 10(6.7) TCID50/ml during 15.3 days (13-18 [BHV-5]). Dexamethasone administration (Dx; 0.5mg/kg) at day 60pi resulted in reactivation of the infection in all calves. Virus shedding in nasal secretions was detected in titers up to 10(5.5)TCID50/ml during 6 to 9 days (mean: 7.8) in calves inoculated with BHV-1 and in titers up to 10(6.1)TCID50/ml (3 to 12 days, mean: 7.5) in calves inoculated with BHV-5. These results showed that BHV-1 and BHV-5 were capable of establishing and reactivating the latent infection at comparable levels.

Nesse estudo, comparou-se a eficiência de estabelecimento e reativação da infecção latente pelos herpesvírus bovinos tipos 1 e 5 (BHV-1 e 5) em bezerros. Bezerros inoculados pela via intranasal com uma amostra de BHV-1 (SV-265, n=6) ou BHV-5 (SV-507, n=6) apresentaram corrimento nasal discreto a moderado e excretaram vírus em secreções nasais em títulos de até 10(7,81)DICC50/ml (dose infectante para 50% dos cultivos celulares) durante um período médio de 10,5 dias (6-15 [BHV-1]) ou títulos de até 10(6,7) DICC50/ml durante 15,3 dias (13-18 [BHV-5]). A administração de dexametasona (Dx; 0,5mg/kg, via endovenosa) aos 60 dias pós-inoculação (pi) resultou em reativação da infecção em todos os animais inoculados. O vírus foi detectado em secreções nasais dos bezerros inoculados com o BHV-1 em títulos de até 10(5,5)DICC50/ml por 6 a 9 dias (x:7,8) e em títulos de até 10(6,1)DICC50/ml (durante 3 a 12 dias, x: 7,5 dias) nos bezerros inoculados com o BHV-5. Os resultados obtidos demonstraram que tanto o BHV-1 quanto o BHV-5 foram capazes de estabelecer e reativar a infecção latente em níveis semelhantes.

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Monoclonal antibodies (mAbs) produced to a Brazilian isolate of bovine herpesvirus type 5 (BHV-5) were used to standardize rapid tests for the diagnostic of BHV-1 and BHV-5 infections. The detection of viral antigens by immunofluorescence in descamative cells (IFDC) was compared to virus isolation in nasal secretions of 16 calves inoculated with BHV-1 (n=6) or BHV-5 (n=10). One hundred and sixty two out of 203 specimens (89.6%) had identical results in both assays (143 positive; 39 negative); the IFDC assay showing a sensitivity of 96.6%, specificity of 70.9% and precision of 89.6%. The mAbs were also used to detect BHV-5 antigens in fresh brain smears of calves from outbreaks of neurological disease; and in cell cultures used in a virus neutralizing (VN) test, allowing the obtention of results in 24 hours. The rapid virus neutralizing test (RVN) showed a sensitivity of 97.3%, specificity of 95.5% and precision of 96.2% comparing to the standard VN test; and a sensitivity of 94.7%, specificity of 97.3% and precision of 96.1% as compared to a commercial ELISA. These results demonstrate that these mAbs are useful in rapid diagnostic tests, which may be very important in field outbreaks, when taking adequate decisions depends on rapid and reliable diagnostic tests.

Anticorpos monoclonais (AcMs) produzidos com uma amostra brasileira do herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) foram utilizados na adaptação e padronização de técnicas rápidas para o diagnóstico de infecções pelo BHV-1 e BHV-5. A detecção de antígenos virais por imunofluorescência em células descamativas (IFCD) foi comparada com o isolamento viral, em secreções nasais de 16 bezerros, sendo 6 inoculados com o BHV-1 e 10 com o BHV-5. De 203 amostras testadas, 182 (89,6%) apresentaram resultados concordantes nos dois testes (143 positivas; 39 negativas). Comparando-se com o isolamento, a IFCD apresentou sensibilidade de 96,6%, especificidade de 70,9%, e precisão de 89,6%. Os AcMs também foram utilizados para detectar antígenos do BHV-5 em impressões frescas do cérebro de bezerros acometidos de enfermidade neurológica e em células de cultivo utilizadas na técnica de soroneutralização (SN), permitindo a obtenção dos resultados em 24 horas. A técnica, denominada de soroneutralização rápida (SNR), apresentou sensibilidade de 97,3%; especificidade de 95,5% e precisão de 96,2% em comparação com a SN tradicional; e sensibilidade de 94,7%, especificidade de 97,3% e precisão de 96,1% em comparação com um ELISA comercial. Esses resultados demonstram que esses AcMs podem ser muito úteis para uso em técnicas rápidas de diagnóstico de infecções suspeitas de BHV-1 ou de BHV-5, sobretudo em situações de surto, quando a tomada de decisões adequadas depende de um diagnóstico rápido e confiável.

RESUMO

Calves were immunized with two vaccines against bovine herspevirus type 1 (BHV-1; vaccine A, n=28; B, n=28) or with a vaccine containing BHV-1 and BHV-5 antigens (vaccine C, n=32) and the serum neutralizing activity against BHV-1 and BHV-5 was measured after three vaccine administrations. Neutralizing activity to BHV-1 was detected in sera of 100% (n=88) of the animals (geometric mean titers [GMT] of 13.1; 14.8 and 34.3 for vaccines A, B and C, respectively) whereas 82 sera (93.2%) reacted to BHV-5 (GMTs: 10.6; 11.5 and 29.8). In all three groups, the mean BHV-1 titers did not differ from BHV-5 titers. However, comparison among the vaccines demonstrated that the mean titers to BHV-1 and BHV-5 were higher in animals receiving vaccine C (p 0.01). This vaccine also induced a higher proportion of reagents to BHV-5 (96.9%; against 85.7% for vaccine A and 92.9% for vaccine B). These results demonstrate that vaccine C induced higher neutralizing antibody titers against both viruses; and that antibodies induced by BHV-1 antigens (vaccines A and B) cross-reacted and displayed relevant neutralizing activity against BHV-5.

Bezerros foram imunizados com duas vacinas contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1; vacina A, n=28; B, n=28) ou com uma vacina contendo antígenos do BHV-1 e BHV-5 (n=32) e a atividade neutralizante sérica antiBHV-1 e BHV-5 foi testada após três doses vacinais. Todos os animais (n=88) produziram anticorpos com atividade neutralizante antiBHV-1 (títulos médios geométricos [GMT] de 13,1; 14,8 e 34,3 para as vacinas A, B e C, respectivamente) e 82 animais (93,2%) desenvolveram atividade neutralizante antiBHV-5 (GMTs: 10,6; 11,5 e 29,8, respectivamente). Nos três grupos vacinais, os títulos médios antiBHV-1 não diferiram dos títulos antiBHV-5. No entanto, comparando-se os títulos médios entre as vacinas, os títulos neutralizantes para o BHV-1 e BHV-5 foram superiores nos animais do grupo C (p 0,01 ). Esse grupo também apresentou a maior proporção de reagentes ao BHV-5 (96,9%; contra 85,7% da vacina A e 92,9% da vacina B). Esses resultados demonstram que a vacina C induziu títulos neutralizantes superiores contra os dois vírus e que anticorpos induzidos por antígenos do BHV-1 (vacinas A e B) possuem atividade neutralizante relevante também contra o BHV-5.

RESUMO

Calves were immunized with two vaccines against bovine herspevirus type 1 (BHV-1; vaccine A, n=28; B, n=28) or with a vaccine containing BHV-1 and BHV-5 antigens (vaccine C, n=32) and the serum neutralizing activity against BHV-1 and BHV-5 was measured after three vaccine administrations. Neutralizing activity to BHV-1 was detected in sera of 100% (n=88) of the animals (geometric mean titers [GMT] of 13.1; 14.8 and 34.3 for vaccines A, B and C, respectively) whereas 82 sera (93.2%) reacted to BHV-5 (GMTs: 10.6; 11.5 and 29.8). In all three groups, the mean BHV-1 titers did not differ from BHV-5 titers. However, comparison among the vaccines demonstrated that the mean titers to BHV-1 and BHV-5 were higher in animals receiving vaccine C (p 0.01). This vaccine also induced a higher proportion of reagents to BHV-5 (96.9%; against 85.7% for vaccine A and 92.9% for vaccine B). These results demonstrate that vaccine C induced higher neutralizing antibody titers against both viruses; and that antibodies induced by BHV-1 antigens (vaccines A and B) cross-reacted and displayed relevant neutralizing activity against BHV-5.

Bezerros foram imunizados com duas vacinas contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1; vacina A, n=28; B, n=28) ou com uma vacina contendo antígenos do BHV-1 e BHV-5 (n=32) e a atividade neutralizante sérica antiBHV-1 e BHV-5 foi testada após três doses vacinais. Todos os animais (n=88) produziram anticorpos com atividade neutralizante antiBHV-1 (títulos médios geométricos [GMT] de 13,1; 14,8 e 34,3 para as vacinas A, B e C, respectivamente) e 82 animais (93,2%) desenvolveram atividade neutralizante antiBHV-5 (GMTs: 10,6; 11,5 e 29,8, respectivamente). Nos três grupos vacinais, os títulos médios antiBHV-1 não diferiram dos títulos antiBHV-5. No entanto, comparando-se os títulos médios entre as vacinas, os títulos neutralizantes para o BHV-1 e BHV-5 foram superiores nos animais do grupo C (p 0,01 ). Esse grupo também apresentou a maior proporção de reagentes ao BHV-5 (96,9%; contra 85,7% da vacina A e 92,9% da vacina B). Esses resultados demonstram que a vacina C induziu títulos neutralizantes superiores contra os dois vírus e que anticorpos induzidos por antígenos do BHV-1 (vacinas A e B) possuem atividade neutralizante relevante também contra o BHV-5.

RESUMO

An experimental oil-adjuvanted, inactivated vaccine against bovine herpesvirus type 1 (BHV-1.1), was produced and evaluated in its capacity to induce neutralizing antibodies against bovine herpesvirus type 1 (BHV-1, subtypes 1.1 and 1.2) and bovine herpesvirus type 5 (BHV-5). Cattle were vaccinated and revaccinated 90 days later. Antibodies were measured at days 0, 30, 90, 120, 180, 270 and 450 days after the first dose of vaccine (DPV). Antibody titres to BHV-1.1 and BHV-1.2 were significantly higher than to BHV-5 throughout the experiment. While all calves seroconverted to BHV-1.1 and BHV-1.2 after the first dose of vaccine, only two out of 23 (8,7%) calves seroconverted to BHV-5. However, after the booster injection all animals seroconverted to the three virus types. At 450 DPV, 79% (15/19 cattle) and 84% (16/19) were still positive for antibodies to BHV 1.1 and BHV 1.2, whereas 50% (10/19) of the calves remained seropositive for BHV-5. It was concluded that although a potent BHV-1 vaccine may induce crossreactive neutralizing antibodies to BHV-5, the levels of such antibodies are significantly lower and of shorter duration than antibodies to BHV-1.1 or BHV-1.2.

Foi avaliada a capacidade de uma vacina experimental oleosa inativada contra o herpesvírus bovino tipo 1 induzir anticorpos contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1.1 e BHV-1.2) e herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5). Bovinos foram vacinados com duas doses de vacina, aplicadas com um intervalo de 90 dias. Foi medido o título de anticorpos nos dias 0, 30, 90, 120, 180, 270 e 450 após a primeira vacinação (DPV). Os títulos de anticorpos contra BHV-1.1 e BHV-1.2 foram significativamente maiores que os contra BHV-5, ao longo do experimento. Enquanto todos os animais soroconverteram para BHV-1.1 e BHV-1.2 após a primeira dose de vacina, apenas dois em 23 animais (8,7%) soroconverteram para o BHV-5. No entanto, após o reforço, todos os animais soroconverteram contra BHV-1.1, 1.2 e BHV-5. Aos 450 DPV, 79% (15/19 animais) e 84% (10/19) ainda se encontravam soropositivos para BHV-1.1 e BHV-1.2, enquanto apenas 50% dos animais (10/19) se demonstraram positivos contra o BHV-5. Foi concluído que, embora uma vacina com alta capacidade de indução de anticorpos contra o BHV-1 possa induzir anticorpos capazes de neutralizar o BHV-5, os níveis de tais anticorpos são significativamente mais baixos e de menor duração do que aqueles induzidos contra BHV-1.1 e BHV-1.2.

RESUMO

Four inactivated vaccines formulated with a bovine herpesvirus tipe 5 (BHV-5) strain isolated from an outbreak of bovine meningoencephalitis in Rio Grande do Sul, Brazil, were administred in forty cattle as to evaluate its immunogenicity. The vaccines A and B used mineral oil and vaccines C and D used aluminum hydroxide (Al2(OH)3) as adjuvant. The titer of the viral suspension used in all vaccines was 10(7.50) TCID50 / 25 mul. Immunostin®, a Mycobacterium derived immunostimulant, was added to vaccines B and D. After receiving three doses of vaccines, at 30 days intervals, only the animals of the groups A (90%) and B (100%) developed significant antibody titers. The responses to these vaccines were adjusted to linear regression, showing that the antiboby titers increased progressively with the number of immunizations. The use of Immunostin® enhanced the immunogenicity of the vaccine with aluminum hidroxide but was ineffective when associated with oil adjuvants. It was concluded that inactivated BHV-5 vaccines prepared with high titer viral suspensions and oil adjuvants induce adequate levels of antibodies in a high proportion of the vaccinees after the third dose.

Quatro vacinas inativadas, produzidas com uma amostra do herpesvírus bovino tipo 5 ( BHV-5) isolada de um surto de meningoencefalite no Rio Grande do Sul, foram administradas em quarenta bovinos visando a avaliar a sua capacidade imunogênica. As vacinas A e B foram formuladas com adjuvante oleoso e as vacinas C e D com hidróxido de alumínio [ Al2 (OH)3] . O título da suspensão viral utilizada nas vacinas foi de 10(7,5) DICT 50 / 25miL. Immunostin®, um imunoestimulante derivado de Mycobacterium, foi adicionado às vacinas B e D. Após receberem três doses de vacina com intervalos de 30 dias, somente os animais dos grupos A (90%) e B (100%) desenvolveram uma resposta sorológica significativa. As respostas sorológicas às vacinas A e B foram ajustadas por regressão linear, demonstrando que os títulos de anticorpos aumentaram significativamente à medida que foram repetindo-se as aplicações das vacinas. O Immunostin® potencializou a capacidade imunogênica da vacina D mas, aparentemente, não foi eficiente na vacina B. Concluiu-se que as vacinas inativadas, produzidas a partir de suspensões virais de BHV-5 com títulos altos e com adjuvante oleoso induzem a produção de níveis consideráveis de anticorpos neutralizantes em mais de 80% dos animais vacinados após a terceira dose.

RESUMO

Four inactivated vaccines formulated with a bovine herpesvirus tipe 5 (BHV-5) strain isolated from an outbreak of bovine meningoencephalitis in Rio Grande do Sul, Brazil, were administred in forty cattle as to evaluate its immunogenicity. The vaccines A and B used mineral oil and vaccines C and D used aluminum hydroxide (Al2(OH)3) as adjuvant. The titer of the viral suspension used in all vaccines was 10(7.50) TCID50 / 25 mul. Immunostin®, a Mycobacterium derived immunostimulant, was added to vaccines B and D. After receiving three doses of vaccines, at 30 days intervals, only the animals of the groups A (90%) and B (100%) developed significant antibody titers. The responses to these vaccines were adjusted to linear regression, showing that the antiboby titers increased progressively with the number of immunizations. The use of Immunostin® enhanced the immunogenicity of the vaccine with aluminum hidroxide but was ineffective when associated with oil adjuvants. It was concluded that inactivated BHV-5 vaccines prepared with high titer viral suspensions and oil adjuvants induce adequate levels of antibodies in a high proportion of the vaccinees after the third dose.

Quatro vacinas inativadas, produzidas com uma amostra do herpesvírus bovino tipo 5 ( BHV-5) isolada de um surto de meningoencefalite no Rio Grande do Sul, foram administradas em quarenta bovinos visando a avaliar a sua capacidade imunogênica. As vacinas A e B foram formuladas com adjuvante oleoso e as vacinas C e D com hidróxido de alumínio [ Al2 (OH)3] . O título da suspensão viral utilizada nas vacinas foi de 10(7,5) DICT 50 / 25miL. Immunostin®, um imunoestimulante derivado de Mycobacterium, foi adicionado às vacinas B e D. Após receberem três doses de vacina com intervalos de 30 dias, somente os animais dos grupos A (90%) e B (100%) desenvolveram uma resposta sorológica significativa. As respostas sorológicas às vacinas A e B foram ajustadas por regressão linear, demonstrando que os títulos de anticorpos aumentaram significativamente à medida que foram repetindo-se as aplicações das vacinas. O Immunostin® potencializou a capacidade imunogênica da vacina D mas, aparentemente, não foi eficiente na vacina B. Concluiu-se que as vacinas inativadas, produzidas a partir de suspensões virais de BHV-5 com títulos altos e com adjuvante oleoso induzem a produção de níveis consideráveis de anticorpos neutralizantes em mais de 80% dos animais vacinados após a terceira dose.

RESUMO

Experimental inoculation of lambs with bovine herpesvirus type 5 (BHV-5) reproduced several aspects of the BHV-5 infection in cattle. Intranasal inoculation was followed by efficient viral replication and shedding, establishment and reactivation of latency, and even the development of meningoencephalitis in one animal. Lambs inoculated with the brazilian isolate EVI-88 showed transient hipertermia, nasal hiperemia and discharge ranging from serous to muco-purulent. The animals shed virus in nasal secretions in titers up to 107.11 TCID50/ml during up to 16 days. One lamb showed clinical signs of encephalitis on day 10 post inoculation (pi), being euthanized in extremis on day 13. Infectious virus was recovered from several areas of the brain of this lamb, including anterior and posterior cerebrum, dorso- and ventro-lateral hemisphere, cerebellum, pons, midbrain and olfactory bulb. Histological changes were observed in several regions of the brain, most consistently in the anterior cerebrum, ventro-lateral cortex and midbrain, and consisted mainly of meningitis, perivascular mononuclear cuffing, focal gliosis, neuronal necrosis and intranuclear inclusions. Four lambs used as sentinels acquired the infection and shed virus starting at the 2nd day pi during up to 7 days. Lambs inoculated with the argentinian isolate A663 showed only mild respiratory signs, although they shed virus for up to 15 days. Administration of dexamethazone to the animals starting at day 50 pi was followed by reactivation of the latent infection and viral shedding during up to 11 days by 76.9% (10/13) of the inoculated lambs and 100% (3/3) of the sentinels. These results demonstrate that sheep are susceptible to BHV-5 acute and latent infection and suggest that natural infections by this virus in sheep may potentially occur. In this sense, a possible role of this species in the epidemiology of BHV-5 infections awaits further investigation.

Infecção experimental de ovinos com o herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) reproduziu vários aspectos da infecção pelo BHV-5 em bovinos. Inoculação intranasal foi seguida de extensiva replicação viral na cavidade nasal, excreção e transmissão do vírus a outros animais, estabelecimento e reati-vação de latência, e o desenvolvimento de meningoencefalite clínica em um animal. Ovinos inoculados com a amostra brasileira EVI-88 apresentaram hipertermia transitória, hiperemia da mucosa nasal e corrimento nasal de seroso a muco-purulento. Os animais eliminaram vírus em secreções nasais em títulos de até 107,11DICC50/ml por até 16 dias. Um cordeiro apresentou sinais clínicos de encefalite no dia 10 pós-inoculação, sendo sacrificado in extremis no início do dia 13. Infectividade foi detectada em várias regiões do encéfalo desse animal, incluindo os hemisférios anterior e posterior, córtex dorso- e ventro-lateral, ponte, pedúnculo cerebral, cerebelo e bulbo olfatório. Alterações histológicas foram observadas em várias regiões do encéfalo, principalmente no hemisfério anterior, córtex ventro-lateral e pedúnculos cerebrais, e consistiram de meningite mononuclear, manguitos perivasculares, gliose focal, necrose e inclusões intranucleares em neurônios . Quatro ovinos mantidos como sentinelas adquiriram a infecção e eliminaram vírus a partir do final do segundo dia, até 7 dias. Ovinos inoculados com a amostra argentina A663 apresentaram apenas hiperemia e umidecimento da mucosa nasal, embora eliminassem vírus nas secreções nasais por até 15 dias. Tratamento dos animais com dexametasona a partir do dia 50 pós-inoculação provocou reativação da infecção latente e eliminação viral durante até 11 dias por 76,9% (10/13) dos animais inoculados e por 100% (3/3) dos animais sentinela. Esses resultados demonstram que ovinos são susceptíveis à infecção aguda e latente pelo BHV-5 e sugerem que infecções naturais de ovinos por este vírus podem potencialmente ocorrer. Ness sentido, uma possível participação da espécie ovina como reservatório natural desse vírus deve ser melhor investigada.

RESUMO

Fifteen outbreaks of bovine herpesvirus-type 5 (BHV-5) infection were diagnosed from August 1993 to December 1996. Fourteen outbreaks occurred in the State of Mato Grosso do Sul and one in the State of São Paulo. Cattle 6 to 60 months old were affected. Morbidity reached 0.05% to 5% and case fatality rate was nearly 100%. The disease occurred in different municipalities and at different times of the year. Clinical signs were exclusively nervous, and the clinical course varied from 1 to 15 days. The main histologic lesions were meningitis, diffuse encephalitis and necrosis of the cerebral cortex with intranuclear inclusion bodies in astrocytes and neurons. BHV-5 was isolated from 11 out of 12 brains of infected animals inoculated in calf testis cells and MDBK cells. The virus was identified by immunoperoxidase staining with use of monoclonal specific antibodies. Outbreaks of infection by BHV-5 represent 5% of the total number of bovine cases submitted for diagnosis to the Clinical Hospital of the University of Mato Grosso do Sul. These results indicate the importance of the disease in Mato Grosso do Sul and the need for its differentiation from other diseases which affect the nervous system.

Quinze focos de meningoencefalite por herpesvírus bovino-5 (BHV-5) foram diagnosticados entre agosto de 1993 e dezembro de 1996, sendo 14 provenientes do estado do Mato Grosso do Sul e um do estado de São Paulo. A doença ocorreu em diversos municípios e em diferentes épocas do ano. Foram afetados bovinos de 6 a 60 meses de idade, com uma morbidade de 0,05% a 5% e letalidade próxima a 100%. Os sinais clínicos foram exclusivamente nervosos e o curso da enfermidade variou de 1 a 15 dias. As principais lesões histológicas detectadas foram meningite e encefalite difusa com malacia do córtex cerebral e presença de corpúsculos de inclusão intranucleares em astrócitos e neurônios. O vírus foi isolado do cérebro de 11 de um total de 12 animais, e sua identidade confirmada por imunoperoxidase, utilizando-se anticorpos monoclonais específicos. Os surtos de encefalite por BHV-5 representam 5% dos diagnósticos realizados em bovinos pelo Hospital Veterinário da Universidade Federal do Mato Grosso do Sul. Os resultados deste trabalho evidenciam a importância da doença no Mato Grosso do Sul e indicam a necessidade de incluir a encefalite por BHV-5 no diagnóstico diferencial de outras doenças do sistema nervoso de bovinos frequentes no Estado.

RESUMO

Experimental inoculation of lambs with bovine herpesvirus type 5 (BHV-5) reproduced several aspects of the BHV-5 infection in cattle. Intranasal inoculation was followed by efficient viral replication and shedding, establishment and reactivation of latency, and even the development of meningoencephalitis in one animal. Lambs inoculated with the brazilian isolate EVI-88 showed transient hipertermia, nasal hiperemia and discharge ranging from serous to muco-purulent. The animals shed virus in nasal secretions in titers up to 107.11 TCID50/ml during up to 16 days. One lamb showed clinical signs of encephalitis on day 10 post inoculation (pi), being euthanized in extremis on day 13. Infectious virus was recovered from several areas of the brain of this lamb, including anterior and posterior cerebrum, dorso- and ventro-lateral hemisphere, cerebellum, pons, midbrain and olfactory bulb. Histological changes were observed in several regions of the brain, most consistently in the anterior cerebrum, ventro-lateral cortex and midbrain, and consisted mainly of meningitis, perivascular mononuclear cuffing, focal gliosis, neuronal necrosis and intranuclear inclusions. Four lambs used as sentinels acquired the infection and shed virus starting at the 2nd day pi during up to 7 days. Lambs inoculated with the argentinian isolate A663 showed only mild respiratory signs, although they shed virus for up to 15 days. Administration of dexamethazone to the animals starting at day 50 pi was followed by reactivation of the latent infection and viral shedding during up to 11 days by 76.9% (10/13) of the inoculated lambs and 100% (3/3) of the sentinels. These results demonstrate that sheep are susceptible to BHV-5 acute and latent infection and suggest that natural infections by this virus in sheep may potentially occur. In this sense, a possible role of this species in the epidemiology of BHV-5 infections awaits further investigation.

Infecção experimental de ovinos com o herpesvírus bovino tipo 5 (BHV-5) reproduziu vários aspectos da infecção pelo BHV-5 em bovinos. Inoculação intranasal foi seguida de extensiva replicação viral na cavidade nasal, excreção e transmissão do vírus a outros animais, estabelecimento e reati-vação de latência, e o desenvolvimento de meningoencefalite clínica em um animal. Ovinos inoculados com a amostra brasileira EVI-88 apresentaram hipertermia transitória, hiperemia da mucosa nasal e corrimento nasal de seroso a muco-purulento. Os animais eliminaram vírus em secreções nasais em títulos de até 107,11DICC50/ml por até 16 dias. Um cordeiro apresentou sinais clínicos de encefalite no dia 10 pós-inoculação, sendo sacrificado in extremis no início do dia 13. Infectividade foi detectada em várias regiões do encéfalo desse animal, incluindo os hemisférios anterior e posterior, córtex dorso- e ventro-lateral, ponte, pedúnculo cerebral, cerebelo e bulbo olfatório. Alterações histológicas foram observadas em várias regiões do encéfalo, principalmente no hemisfério anterior, córtex ventro-lateral e pedúnculos cerebrais, e consistiram de meningite mononuclear, manguitos perivasculares, gliose focal, necrose e inclusões intranucleares em neurônios . Quatro ovinos mantidos como sentinelas adquiriram a infecção e eliminaram vírus a partir do final do segundo dia, até 7 dias. Ovinos inoculados com a amostra argentina A663 apresentaram apenas hiperemia e umidecimento da mucosa nasal, embora eliminassem vírus nas secreções nasais por até 15 dias. Tratamento dos animais com dexametasona a partir do dia 50 pós-inoculação provocou reativação da infecção latente e eliminação viral durante até 11 dias por 76,9% (10/13) dos animais inoculados e por 100% (3/3) dos animais sentinela. Esses resultados demonstram que ovinos são susceptíveis à infecção aguda e latente pelo BHV-5 e sugerem que infecções naturais de ovinos por este vírus podem potencialmente ocorrer. Ness sentido, uma possível participação da espécie ovina como reservatório natural desse vírus deve ser melhor investigada.

RESUMO

Bovine Herpesviruses (BHV) type 1 (BHV-1) and type 5 (BHV-5) were analysed by immunoperoxidase staining with a panel of monoclonal antibodies (Mabs) prepared against BHV antigens. One of the Mabs recognized all BHV isolates tested. The remainder four mabs recognized only BHV-1 samples, including standard laboratory strains. All isolates associated with clinical cases of encephalitis (BHV-5) displayed a pattern of reactivity distinct from that of viruses isolated from syndromes associated with BHV-1 infections. The results obtained indicate that such Mabs allowed the differentiation between BHV-1 and BHV-5, with a perfect correlation between the clinical pictures and the patterns of reactivity in vitro.

Amostras de herpesvírus bovinos (BHV) tipo 1 (Virus da Rinotraqueíte Infecciosa Bovina/Vulvovaginite Pustular Infecciosa; BHV-1) e tipo 5 (Herpesvírus da Encefalite Bovina; BHV-5) tiveram seu perfil de reatividade analisado em testes de imunoperoxidase frente a um painel composto por cinco anticorpos monoclonais (AcM) produzidos contra antígenos de BHV-1. Um dos AcM reconheceu todas as amostras de BHV examinadas. Os quatro AcM restantes reconheceram somente amostras de BHV-1. Todas as amostras isoladas de casos de encefalites (BHV-5) apresentaram um padrão de reação distinto daquelas isoladas de outros síndromes associados à infecção pelo BHV-1. Os resultados obtidos indicam que os AcM avaliados permitem a diferenciação entre amostras de BHV-1 e BHV-5, havendo perfeita correlação entre os quadros clínicos observados com os perfis de reatividade obtidos in vitro.