RESUMO
ABSTRACT Myelodysplastic syndrome with deletion of chromosome 5q (5q-syndrome) has a favorable prognosis and a low risk of transformation to acute myeloid leukemia, when treated with lenalidomide. Azacitidine leads to complete remission even as second-line therapy and in patients with clonal evolution. We report a 70 years old female without previous exposure to myelotoxic drugs, presenting with three weeks with fatigue and dyspnea. She had anemia with normal white blood cell and platelet count. Bone marrow biopsy showed 50% cellularity and the karyotype analysis revealed a (5) (q33q34) deletion in 22% of the metaphases. A diagnosis of 5q-syndrome with low risk calculated using the Revised International Prognostic Scoring System (IPSS-R), was made. Since lenalidomide was not affordable, thalidomide 100 mg/day was initiated, achieving transfusion independence for three years. Afterwards, she developed pancytopenia and a bone marrow biopsy showed erythroid and megakaryocyte dysplasia with a complex karyotype, which worsened prognosis (IPSS-R of five points). Therefore, azacitidine (by donation) was administered. She achieved complete remission with a normal karyotype and completed 12 cycles of treatment. Thereafter, she relapsed and received only supportive care for a year. She suffered an ischemic stroke and died two weeks later.
El síndrome mielodisplásico con deleción del cromosoma 5q (síndrome 5q) tiene un pronóstico favorable y riesgo bajo de transformación a leucemia aguda en pacientes que son tratados con lenalidomida (tratamiento estándar). El uso Azactidina tiene respuestas completas incluso como segunda línea de tratamiento en pacientes con evolución clonal. Presentamos una mujer de 71 años, sin exposición a mielotóxicos que debutó con un síndrome anémico. Se realizó biopsia de medula ósea que mostró celularidad del 50% y en el análisis citogenético se detectó una deleción del cromosoma 5 en 22% de las metafases analizadas, lo que llevó al diagnóstico de Síndrome 5q- de riesgo bajo de acuerdo con el puntaje IPSS-R (Revised International Prognostic Scoring System). Ya que no se pudo costear lenalidomida, se trató con talidomida (100 mg/día). Permaneció tres años sin requerir soporte transfusional. Posteriormente, presentó pancitopenia y en el nuevo aspirado de médula ósea se observó displasia de la serie roja y megacariocitos, con cariotipo complejo y peor pronóstico (IPSS-R 5 puntos). Se trató con 12 ciclos de azacitidina con lo que logró respuesta completa. Recayó 12 meses después y continuó manejo de soporte por un año. Finalmente falleció debido a un accidente vascular cerebral.
Assuntos
Idoso , Feminino , Humanos , Talidomida , Síndromes Mielodisplásicas , Deleção Cromossômica , Inibidores da Angiogênese , Anemia Macrocítica , Talidomida/uso terapêutico , Síndromes Mielodisplásicas/genética , Síndromes Mielodisplásicas/tratamento farmacológico , Cromossomos Humanos Par 5/genética , Resultado do Tratamento , Inibidores da Angiogênese/uso terapêutico , Lenalidomida , Anemia Macrocítica/genética , Anemia Macrocítica/tratamento farmacológicoRESUMO
Objetivo: Describir las características clínicas, sociodemográficas y calidad de vida de los pacientes con síndrome mielodisplasico (MDS). Diseño: Estudio descriptivo de corte transversal. Marco de referencia: Hospital San José de Bogotá (institución de cuarto nivel). Población: Treinta y nueve pacientes con diagnóstico de MDS, mayores de 18 años, obtenidos en el departamento de estadística. Mediciones principales: Frecuencia de variables clínicas, sociodemográficas y calidad de vida medida por la escala FACT-G. Resultados: La edad promedio fue de 74 años, con un predominio en hombres. El diagnóstico más frecuente fue MDS tipo displasia mutilinaje, y la citopenia más prevalente fue anemia. La mayoría de los pacientes fue clasificado como muy bajo riesgo o bajo riesgo por la escala IPSS-R y WPSS, y bajo riesgo y riesgo intermedio -1 por la escala IPSS y MDACC. La progresión a leucemia mieloide aguda se presentó en 7.69%, mientras que la mortalidad en 15.38%. Existió una mayor frecuencia de muerte y transformación a leucemia en los pacientes clasificados como de alto riesgo. La calidad de vida fue inferior en los pacientes con anemia y fue superior en el MDS-(del5q). Conclusiones: Las características de la población estudiada son similares a las reportadas en la literatura (predominio en hombres, subtipo de MDS más frecuente, citopenia predominante y distribución de riesgo). Existieron diferencias con respecto a la edad, frecuencia de comorbilidades y su relación con mortalidad. La calidad de vida se correlacionó con el subtipo de MDS y citopenias. (Acta Med Colomb 2016; 41: 36-41).
Objective: To describe the clinical and socio-demographic characteristics and quality of life of patients with myelodysplastic syndrome (MDS). Design: a descriptive cross-sectional study. Framework: Hospital San José de Bogota (fourth level institution). Population: Thirty-nine patients diagnosed with MDS, older than 18 years, obtained in the statistics department. Main measurements: frequency of clinical and sociodemographic variables and quality of life measured by FACT-G scale. Results: The mean age was 74 years, with male predominance. The most frequent diagnosis was type mutilineage MDS dysplasia, and the most prevalent cytopenia was anemia. Most patients were classified as very low risk or low risk by IPSS-R and WPSS scale and low-risk and intermediate risk -1by IPSS and MDACC scale. Progression to acute myeloid leukemia occurred in 7.69%, while mortality occurred in 15.38%. There was a higher incidence of death and transformation to leukemia in patients classified as high risk. The quality of life was lower in patients with anemia and was higher in the MDS-(del 5q). Conclusions: The characteristics of the study population are similar to those reported in the literature (predominantly in men, subtype of MDS more frequent, predominant cytopenia and risk distribution). There were differences with respect to age, frequency of comorbidities and their relationship to mortality. Quality of life was correlated with the subtype of MDS and cytopenias. (Acta Med Colomb 2016; 41: 36-41).
Assuntos
Humanos , Masculino , Idoso , Síndromes Mielodisplásicas , Qualidade de Vida , Azacitidina , Medula Óssea , EritropoetinaRESUMO
CONTEXT: Refractory acute myeloid leukemia (AML) is a difficult disease to control with second or third-line chemotherapy regimens. In this report, we describe using azacitidine in combination with lenalidomide as salvage therapy. CASE REPORT: 52-year-old female was diagnosed with refractory AML and high-risk cytogenetics: complex monosomal karyotype consisting of t (3, 3) in association with monosomy 7 and del 5q. Morphological remission associated with maintenance of the cytogenetic abnormality of chromosome 3 and disappearance of the abnormalities relating to chromosomes 5 and 7 was achieved after three cycles of combination therapy with azacitidine and lenalidomide. CONCLUSION: Azacitidine plus lenalidomide can be a therapeutic option for patients with refractory AML, as illustrated in this case. .
CONTEXTO: A leucemia mieloide aguda (LMA) refratária é considerada doença de difícil controle com regime quimioterápico de segunda ou terceira linha. Neste relato, é descrito o uso de azacitidina em combinação com lenalidomida como esquema de resgate. RELATO DE CASO: Paciente de 52 anos, do sexo feminino, com o diagnóstico de LMA refratária de alto risco citogenético, apresentava cariótipo complexo e monossômico, com t (3, 3), associado à monosomia do 7 e del 5q. Destaca-se que, após três ciclos da terapia combinada com azacitidina e lenalidomida, houve remissão morfológica, com manutenção da anormalidade citogenética relacionada ao cromossomo 3 e desaparecimento da anormalidade relacionada aos cromossomos 5 e 7. CONCLUSÃO: Azacitidina e lenalidomida podem ser opção terapêutica para pacientes com LMA refratária, como demonstrado neste caso. .
Assuntos
Feminino , Humanos , Pessoa de Meia-Idade , Inibidores da Angiogênese/uso terapêutico , Antimetabólitos Antineoplásicos/uso terapêutico , Azacitidina/uso terapêutico , Leucemia Mieloide Aguda/tratamento farmacológico , Talidomida/análogos & derivados , Inibidores da Angiogênese/administração & dosagem , Antimetabólitos Antineoplásicos/administração & dosagem , Protocolos de Quimioterapia Combinada Antineoplásica/uso terapêutico , Azacitidina/administração & dosagem , Reprodutibilidade dos Testes , Talidomida/administração & dosagem , Talidomida/uso terapêutico , Resultado do TratamentoRESUMO
O desenvolvimento de métodos que tem por objetivo acelerar e melhorar a qualidade do processo de cicatrização de feridas tem impacto positivo na condução de distúrbios de cicatrização associados a inúmeras condições médicas. Neste estudo, avaliamos os efeitos moleculares, celulares e clínicos da aplicação tópica de 5-azacitidina na cicatrização de feridas em ratos. De acordo com estudos pregressos, a 5-azacitidina reduz a expressão de folistatina, que é um regulador negativo das ativinas. Estas, por sua vez, promovem o crescimento de células em diferentes tecidos, incluindo a pele. Ratos Wistar machos com oito semanas de vida foram submetidos a um ferimento cutâneo com punch de oito milímetros na região dorsal. A seguir os ratos foram aleatoriamente separados em grupo controle (veículo) ou submetidos à aplicação tópica de 5-azacitidina (10 mM), uma vez por dia por até 12 dias, iniciando-se no terceiro dia após a lesão. A documentação fotográfica e coleta de amostras ocorreram nos dias 5, 9 e 15. O emprego desta droga resultou em aceleração da cicatrização da ferida, (99,7±7,0% versus 71,2±2,8% no dia 15, p <0,01). Este resultado clínico foi acompanhado pela redução de aproximadamente três vezes na expressão protéica de folistatina. O exame histológico da pele revelou re-epitelização eficiente com aumento da expressão de queratinócitos e aumento significativo na expressão do gene de TGF-β além da diminuição significativa de citocinas, tais como TNF-α e IL-10. Analisamos também a proliferação celular na lesão de pele através do método de incorporação de BrdU. O número de células positivas para BrdU aumentou significativamente quando comparado ao controle. No entanto, quando folistatina exógena foi aplicada na pele em paralelo ao tratamento tópico de 5-azacitidina a maioria dos benefícios do medicamento foi perdida.
The development of new methods aimed at improving wound healing may have an impact on the outcomes of a number of medical conditions. Here we evaluate the molecular and clinical effects of topical 5-azacytidine, a compound used in myelodysplasia, on the wound healing in rats. According to previous studies, 5-Azacytidine decreases the expression of follistatin 1, which is a negative regulator of activins. Activins, in turn, promote cell growth in different tissues, including the skin. Eight-week old male Wistar rats were submitted to an 8 mm punchwound in the dorsal region. After three days, rats were randomly assigned to either control or topical application of a solution containing 5-azacytidine (10mM), once a day. Photo documentation and collection of samples occurred at days 5, 9 and 15. Overall, 5-azacytidine resulted on a significant acceleration of complete wound healing (99.7% ±0.7.0 vs. 71.2%±2.8 on days 15; n=10; p<0,01). This was accompanied by an up to 3-fold reduction in follistatin expression. Histological examination of the skin revealed efficient reepithelization with increase in gene expression of TGF-β and keratinocytes markers, involucrin and citokeratin, besides the significant decrease of cytokines such as TNF-α and IL-10. In addition, we analyzed cell proliferation in injured skin employing the BrdU incorporation method. The treatment with 5-azacytidine led to a progressive increase of BrdU positive cells. Finally when recombinant follistatin was employed in the skin in parallel to topical 5-azacytidine most of the benefits of the drug were lost. Thus, 5-azacytidine acts, at least in part, through the follistatin/activin pathway to improve wound healing in rats. This study belongs to online research process Caring in Nursing and Health.
Assuntos
Animais , Ratos , Administração Tópica , Azacitidina/administração & dosagem , Cicatrização , Folistatina/administração & dosagem , Proteínas Smad/administração & dosagem , Queratinas/administração & dosagem , Bromodesoxiuridina , Proliferação de Células , Ratos WistarRESUMO
FUNDAMENTO: O potencial de renovação e proliferação dos cardiomiócitos, in vivo, é pequeno, e por isso, o músculo cardíaco apresenta limitada capacidade de repor células perdidas. Na tentativa de minimizar os danos oriundos de lesões hipóxico-isquêmicas e daquelas que acometem o sistema de condução do coração, a terapia celular com células-tronco mesenquimais (MSC) vem sendo utilizada, inclusive com cardiomiócitos diferenciados a partir de MSC. OBJETIVO: O presente trabalho comparou três protocolos distintos de indução de diferenciação objetivando a sugestão de um método viável para a diferenciação de maior número de células funcionais que expressem fenótipo cardiomiogênico. MÉTODOS: Culturas de MSC obtidas de tecido adiposo de ratos jovens da linhagem Lewis transgênicos para proteína verde fluorescente (GFP) foram submetidos a três diferentes meios de diferenciação cardiogênica: Planat-Bérnard, 5-azacitidina e meio Planat-Bérnard + 5-azacitidina e observadas quanto a expressão de marcadores celulares cardíacos. RESULTADOS: Nos três protolocos utilizados observou-se formação da proteína alfa-actinina sarcomérica no citoesqueleto das células submetidas à diferenciação, expressão de conexina 43 na membrana nuclear e citoplasmática e formação de gap junctions, necessárias para a propagação do impulso elétrico no miocárdio, contudo, em nenhum protocolo foi observada contração espontânea das células submetidas à diferenciação cardiogênica. CONCLUSÃO: A indução com 5-azacitidina proporcionou diferenciação celular cadiomiogênica efetiva e similar à encontrada com o meio Planat-Bénard e, por ser um protocolo mais simples, rápido e com menor custo torna-se o método de eleição.
BACKGROUND: Cardiomyocytes have small potential for renovation and proliferation in vivo. Consequently, the heart muscle has limited capacity of self-renewal. Mesenchymal stem cells (MSC) therapy, as well as MSC differentiated into cardiomyocytes, has been used in the attempt to minimize the effects of ischemic-hypoxic lesions and those affecting the electrical conduction system of the heart. OBJECTIVE: The present study compared three distinct protocols for induced differentiation of MSC into cardiomyocytes aimed at finding a viable method for producing a large number of functional cells expressing cardiomyogenic phenotype. METHODS: Mesenchymal stem cells were obtained from the adipose tissue of young transgenic Lewis rats expressing green fluorescent protein (GFP), and submitted to three distinct differentiation-inducing media: 1) Planat-Bérnard, 2) 5-azacytidine, and 3) Planat-Bérnard + 5-azacytidine; further, these cells were identified based on the expression of cardiac cell markers. RESULTS: All three protocols detected the expression of sarcomeric-alpha-actinin protein in the exoskeleton of cells, expression of connexin-43 in the nuclear and cytoplasmic membrane, and formation of gap junctions, which are necessary for electrical impulse propagation in the myocardium. However, no spontaneous cell contraction was observed with any of the tested protocols. CONCLUSION: Induction with 5-azacytidine provided an effective cadiomyogenic cellular differentiation similar to that obtained with Planat-Bénard media. Therefore, 5-azacytidine was the method of choice for being the simplest, fastest and lowest-cost protocol for cell differentiation.
Assuntos
Animais , Ratos , Adipócitos/citologia , Tecido Adiposo/citologia , Diferenciação Celular , Técnicas de Cultura de Células/métodos , Células-Tronco Mesenquimais/citologia , Miócitos Cardíacos/citologia , Adipócitos/efeitos dos fármacos , Azacitidina/farmacologia , Células Cultivadas , Diferenciação Celular/efeitos dos fármacos , Citometria de Fluxo , Imunofluorescência , Ratos Endogâmicos Lew , Reprodutibilidade dos TestesRESUMO
Uma das áreas mais promissoras na pesquisa sobre o câncer de mama é a identificação de marcadores moleculares que possam ser utilizados na detecção precoce da doença, na predição do prognóstico do paciente ou no desenvolvimento de abordagens terapêuticas alternativas, reduzindo, assim, as taxas de mortalidade e morbidade associadas à doença. Alterações epigenéticas têm sido associadas à tumorigênese, e a metilação do DNA é um dos mecanismos epigenéticos mais estudados. A metilação do DNA está associada ao silenciamento gênico e alterações no padrão de metilação têm sido utilizadas com freqüência na caracterização de genes relacionados ao câncer, assim como marcador tumoral para o diagnóstico e prognóstico da doença. Neste trabalho, nós identificamos genes silenciados por metilação do DNA em linhagens celulares tumorais de mama, como uma forma de aumentar o número de marcadores moleculares disponíveis para o câncer de mama. Para tanto, 3 linhagens celulares tumorais de mama (MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-435) foram tratadas com o agente desmetilante 5-aza-2'-deoxicitidina, capaz de induzir a expressão de genes silenciados por metilação do DNA. RNA total extraído de culturas celulares submetidas ou não ao tratamento com o agente desmetilante foi utilizado para a construção de bibliotecas subtrativas de cDNA utilizando a metodologia de RaSH (Rapid Subtraction Hybridization). Duas bibliotecas diferentes foram construídas para cada linhagem celular: uma utilizando como tester cDNA sintetizado a partir de RNA extraído da linhagem celular tratada com o agente desmetilante, e contendo genes induzidos pelo tratamento; e a outra, utilizando como tester cDNA da linhagem celular não submetida ao tratamento, e que foi utilizada como controle da subtração. Um total de 2367 seqüências foram geradas a partir de 3 bibliotecas subtraídas utilizando o cDNA das linhagens MCF-7, MDA-MB-435 e MDA-MB-231 tratadas como tester. A comparação entre cada biblioteca subtrativa e seu experimento controle possibilitou a exclusão de um total de 50 falso-positivos. A comparação das seqüências oriundas dessas bibliotecas com seqüências depositadas em bancos de dados públicos, permitiu a identificação de 533 genes induzidos pelo tratamento e possivelmente regulados por metilação. Para a identificação de genes induzidos na linhagem MDA-MB-231, foi realizado um experimento de Northern Blot Reverso, e 4 genes que apresentaram indução superior a 3 vezes foram escolhidos para validação por PCR em Tempo Real. Ao todo, 41 candidatos foram selecionados para validação experimental por PCR em Tempo Real utilizando o cDNA sintetizado a partir do mesmo RNA utilizado para a construção das bibliotecas de RaSH. Dos 37 genes para os quais foi possível padronizar a reação de PCR em Tempo Real, 5 genes mostraram aumento da expressão de pelo menos 2 vezes após o tratamento (Sequestosome 1, SQSTM1; Superoxide dismutase 2, SOD2; Connective Tissue Growth Factor, CTGF; Small Ubiquitin-like Modifier 2, SUMO2 e Fibronectin 1, FN1). Uma análise preliminar do padrão de expressão destes genes em 18 amostras de tumores de mama revelou a redução da expressão do gene SUMO2 em 10 amostras tumorais de mama quando comparadas a um pool de amostras de mama normal.
One of the most promising areas in breast cancer research is the identification of molecular markers that can be used in the early detection of the disease, for prediction patient prognosis and for the development of alternative therapeutic approaches, reducing, in this mortality and morbidity associated with the disease. Epigenetic alterations have been frequently associated with tumorigenesis, and DNA methylation is one of the most studied epigenetic mechanisms. DNA methylation is associated with gene silencing and changes in the methylation pattern have been used frequently in the characterization of cancer-related genes, as well as a tumor marker for the diagnosis and prognosis of the disease. In this work, we identified genes silenced by DNA methylation in breast tumor cell lines, as a way to enlarge the number of molecular markers available for breast cancer. For this purpose, 3 breast tumor cell lines (MCF-7, MDA-MB-435, MDA-MB-231) were treated with the demethylating agent 5-aza-2'-deoxycytidine (5aza-dC), which can induce the the expression of genes silenced by DNA methylation. Total RNA extracted from cell cultures submitted or not to treatment with the demethylating agent was used for the construction of subtractive cDNA libraries using the RaSH (Rapid Subtraction Hybridization) methodology. Two different libraries were constructed for each cell line: one using as a tester cDNA synthesized from RNA extracted from the cell line treated with the demethylating agent, and containing genes induced by the treatment; and the other using as a tester cDNA from the cell line not submitted to treatment, and that was used as control for the subtracion. A total of 2367 sequences were generated from 3 cDNA libraries subtracted using cDNA of the treated MCF-7, MDA-MB-435 and MDA-MB-231 cell lines as a tester. The comparison between each subtractive library and its control allowed the exclusion of a total of 50 false-positives candidate genes. Comparison of the sequences generated from these libraries with sequences submitted to public databases allowed the identification of 533 genes induced by treatment and possibly regulated by DNA methylation. For the identification of induced genes in the MDA-MB-231 cell line, a reverse Northern blot exeriment was performed, and 4 genes with a more than three-fold induction were selected for validation by Real-Time PCR. In all, 41 candidates were selected for experimental validation by Real-Time PCR using the cDNA synthesized from the same RNA source used for the construction of the RaSH libraries. From the 37 genes for which it was possible to carry on Real-Time PCR analysis, 5 genes showed more than 2-fold intuction upon treatment (Sequestosome 1, SQSTM1; Superoxide dismutase 2, SOD2; Connective Tissue Growth Factor, CTGF; Small Ubiquitin-like Modifier 2, SUMO2 and Fibronectin 1, FN1). A preliminary analysis of the expression pattern of these genes in 18 breast tumor samples revealed reduction expression of the SUMO2 gene, in 10 breast tumor samples when compared to a pool of normal breast samples.