RESUMO
Trans-sialidase (TS) superfamily of proteins comprises eight subgroups, being the proteins of Group-I (TS-GI) promising immunogens in vaccine approaches against Trypanosoma cruzi. Strikingly, TS-GI antigenic variability among parasite lineages and their influence on vaccine development has not been previously analyzed. Here, a search in GenBank detects 49 TS-GI indexed sequences, whereas the main infecting human different parasite discrete typing units (DTU) are represented. In silico comparison among these sequences indicate that they share an identity above 92%. Moreover, the antigenic regions (T-cell and B-cell epitopes) are conserved in most sequences or present amino acid substitutions that scarcely may alter the antigenicity. Additionally, since the generic term TS is usually used to refer to different immunogens of this broad family, a further in silico analysis of the TS-GI-derived fragments tested in preclinical vaccines was done to determine the coverage and identity among them, showing that overall amino acid identity of vaccine immunogens is high, but the segment coverage varies widely. Accordingly, strong H-2K, H-2I, and B-cell epitopes are dissimilarly represented among vaccine TS-derived fragments depending on the extension of the TG-GI sequence used. Moreover, bioinformatic analysis detected a set of 150 T-cell strong epitopes among the DTU-indexed sequences that strongly bind human HLA-I supertypes. In all currently reported experimental vaccines based on TS-GI fragments, mapping these 150 epitopes showed that they are moderately represented. However, despite vaccine epitopes do not present all the substitutions observed in the DTUs, these regions of the proteins are equally recognized by the same HLAs. Interestingly, the predictions regarding global and South American population coverage estimated in these 150 epitopes are similar to the estimations in experimental vaccines when the complete sequence of TS-GI is used as an antigen. In silico prediction also shows that a number of these MHC-I restricted T-cell strong epitopes could be also cross-recognized by HLA-I supertypes and H-2Kb or H-2Kd backgrounds, indicating that these mice may be used to improve and facilitate the development of new TS-based vaccines and suggesting an immunogenic and protective potential in humans. Further molecular docking analyses were performed to strengthen these results. Taken together, different strategies that would cover more or eventually fully of these T-cell and also B-cell epitopes to reach a high level of coverage are considered.
Assuntos
Trypanosoma cruzi , Camundongos , Humanos , Animais , Trypanosoma cruzi/genética , Trypanosoma cruzi/metabolismo , Epitopos de Linfócito B/genética , Simulação de Acoplamento Molecular , Glicoproteínas/metabolismoRESUMO
HoBi-like pestiviruses (HoBiPeV) constitute a novel group of bovine pestiviruses, genetically and antigenically related to bovine viral diarrhea virus 1 (BVDV-1) and BVDV-2. Recent data shows that HoBiPeV are endemic among Brazilian cattle, yet bovine reproductive/respiratory vaccines contain only BVDV-1 and BVDV-2 strains. The present study investigated the neutralizing antibody response against these pestiviruses induced by two commercial vaccines (VA = attenuated, VI = inactivated) and by three experimental, replicative, vaccine formulations (VAC1 = monovalent, BVDV-1; VAC2 = bivalent, BVDV-1 + BVDV-2; VAC3 = trivalent, BVDV-1 + BVDV-2 and HoBiPeV). Seronegative beef calves were immunized once (replicative vaccines) or twice (inactivated vaccine) and serum samples were tested by virus-neutralization (VN) 30 days after vaccination (dpv) (replicative vaccines) or 30 days after the second dose (VI). We considered a threshold VN titer of ≥60 indicative of protection against clinical disease. At 30 dpv, VA induced protective titers against BVDV-2 in 7/7 animals (GMT=289.8) and against BVDV-1 and HoBiPeV in 5/7 animals (GMTs=97.5 and 80, respectively). VI induced protective titers against BVDV-1 in 1/7 animal (GMT=16.4), 2/7 animals against BVDV-2 (GMT=53.8) and in none of the calves against HoBiPeV (GMT=12.2). When a pool of sera of each vaccine group was tested against individual Brazilian isolates, VA induced protective titers against 3/7 BVDV-1 isolates, to 9/10 (BVDV-2) and 1/8 (HoBiPeV); VI induced protective titers against 1/7 (BVDV-1), 1/10 (BVDV-2) and none (0/8) HoBiPeV isolates. The experimental vaccine VAC1 induced protective titers against BVDV-1 in 9/9 animals (GMT=320) but in no animal against BVDV-2 or HoBiPeV (GMT<10). VAC2 induced protective titers to BVDV-1 and BVDV-2 in 9/9 animals (GMTs=160 and 640, respectively), and against HoBiPeV in 7/9 animals (GMT=108.5). Finally, VAC3 induced protective titers in all animals against BVDV-1 (GMT=234.3), BVDV-2 (294.9) and HoBiPeV (201.1). Testing the pool of sera against pestivirus isolates, VAC1 induced titers ≥ 60 against 4/7 BVDV-1 but to none BVDV-2/HoBiPeV isolate; VAC2 induced protective titers against 4/7 BVDV-1; 10/10 BVDV-2 and 2/8 HoBiPeV; VAC3 induced protective titers against all BVDV-1, BVDV-2 and HoBiPeV isolates. These results indicate that vaccines composed by BVDV-1+BVDV-2, especially those containing inactivated virus, may not induce serological response against a variety of HoBiPeV isolates. Thus, the need of inclusion of HoBiPeV in vaccine formulations should be considered.(AU)
Os pestivírus HoBi-like (HoBiPeV) compõe um grupo novo de pestivírus de bovinos, genética e antigenicamente relacionados com os vírus da diarreia viral bovina 1 e 2 (BVDV-1, BVDV2). Dados recentes indicam que os HoBiPeV são endêmicos na população bovina do Brasil, mas as vacinas respiratórias e reprodutivas bovinas contêm apenas cepas de BVDV-1 e BVDV-2. O presente estudo investigou a atividade neutralizante contra estes pestivírus induzidas por duas vacinas comerciais (VA = atenuada, VI = inativada) e por três vacinas experimentais replicativas (VAC1 = monovalente, BVDV-1; VAC2 = bivalente, BVDV-1 + BVDV-2; VAC3 = trivalente, BVDV-1 + BVDV-2 e HoBiPeV). Bezerros soronegativos foram imunizados uma vez (vacinas replicativas) ou duas (vacina inativada) e amostras de soro foram testadas por vírus-neutralização (VN) 30 dias após a vacinação (dpv) (vacinas replicativas) ou 30 dias após a segunda dose (VI). Títulos neutralizantes ≥60 foram considerados indicativos de proteção contra doença clínica. Nesta data, a VA induziu títulos protetivos contra o BVDV-2 em 7/7 animais (GMT=289,8) e contra BVDV-1 e HoBiPeV em 5/7 animals (GMTs=97,5 e 80, respectivamente). VI induziu títulos protetores contra BVDV-1 em 1/7 animal (GMT=16,4), em 2/7 animais contra BVDV-2 (GMT=53,8) e em nenhum contra HoBiPeV (GMT=12,2). Quando um pool de soro de cada grupo vacinal foi testado frente a isolados Brasileiros, a VA induziu títulos protetores contra 3/7 isolados de BVDV-1, 9/10 (BVDV-2) e 1/8 (HoBiPeV); VI induziu títulos protetores em 1/7 contra BVDV-1, 1/10 (BVDV-2) e em nenhum (0/8) contra isolados de HoBiPeV. A VAC1 induziu títulos protetores contra BVDV-1 em 9/9 animais (GMT=320) mas em nenhum animal contra BVDV-2 ou HoBiPeV (GMT<10). VAC2 induziu títulos protetores contra BVDV-1e BVDV-2 em 9/9 animais (GMTs=160 e 640, respectivamente),e contra HoBiPeV em 7/9 animais (GMT=108,5). Finalmente, VAC3 induziu títulos protetores em todos os animais contra BVDV-1 (GMT=234,3), BVDV-2 (294,9) e HoBiPeV (201,1). No teste de pool de soro contra isolados de pestivírus, VAC1 induziu títulos ≥60 contra 4/7 BVDV-1 mas contra nenhum isolado de BVDV-2/HoBiPeV; VAC2 induziu títulos protetores contra 4/7 BVDV-1; 10/10 BVDV-2 e 2/8 HoBiPeV; VAC3 induziu títulos protetores contra todos BVDV-1, BVDV-2 e HoBiPeV. Esses resultados indicam que vacinas contendo apenas BVDV-1 BVDV-2, especialmente aquelas inativadas, podem não conferir resposta sorológica protetora contra vários isolados de HoBiPeV. Portanto, a necessidade de se incluir cepas de HoBiPeV nas vacinas deve ser considerada.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Bovinos/virologia , Vacinas Virais/administração & dosagem , Pestivirus/química , Variação AntigênicaRESUMO
O Plasmodium vivax é a espécie com maior distribuição geográfica no mundo e a que predomina nas Américas, incluindo o Brasil. Comparado ao Plasmodium falciparum, poucas vacinas contra o P. vivax encontram-se em fase de testes clínicos. Um dos antígenos de formas sanguíneas de P. vivax candidato a vacina é o Antígeno 1 de Membrana Apical (PvAMA-1). Entretanto, a diversidade antigênica do mesmo na natureza representa um grande desafio para seu uso no desenvolvimento de uma vacina de ampla cobertura. No presente estudo, avaliamos se os polimorfismos de sequências já descritos são capazes de influenciar na eficácia de uma vacina baseada em PvAMA-1. Para isso, geramos 9 proteínas recombinantes a partir da levedura Pichia pastoris, as quais são representativas de diferentes variantes alélicas do antígeno PvAMA-1, a saber: Belem, Chesson I, Sal-1, Indonesia XIX, SK0814, TC103, PNG_05_ESP, PNG_62_MU e PNG_68_MAS. Após expressão e purificação das proteínas selecionadas, avaliamos comparativamente por ELISA a resposta de anticorpos IgG naturalmente adquiridos em indivíduos expostos a malária, procedentes da Região Amazônica. Todas as proteínas foram obtidas com rendimento e pureza apropriados para os estudos propostos. A prevalência total de indivíduos expostos a malária com anticorpos contra PvAMA-1 Belem foi de 53,68%, em 611 amostras de soro testadas. Entre 100 das amostras sorologicamente positivas para PvAMA-1 Belem, os maiores valores de DO492 foram obtidos para as variantes Chesson I, SK0814 e Sal-1, sugerindo que epítopos comuns ou de reatividade cruzada estão sendo reconhecidos nessas variantes. Por outro lado, níveis mais baixos de DO492 foram obtidos para as variantes Indonesia XIX, TC103, PNG_05_ESP, PNG_62_MU e PNG_68_MAS, o que pode significar que essas variantes são menos prevalentes ou não circulam no Brasil. Soros policlonais de camundongos C57BL/6 previamente imunizados com PvAMA-1 Belem foram testados quanto ao reconhecimento das diferentes variantes por ELISA. Nossos resultados demonstraram que as variantes Chesson I, Indonesia XIX, SK0814, Sal-1 e a proteína homóloga foram predominantemente reconhecidas. Por fim, ensaios de competição baseados em ELISA revelaram que as proteínas Chesson I, Indonesia XIX, SK0814 e Sal-1, na fase solúvel, foram capazes de inibir a ligação de anticorpos à variante Belem aderida a placa, sugerindo a presença de epítopos comuns ou de reatividade cruzada entre as mesmas. Nossos dados sugerem que uma vacina baseada na variante PvAMA-1 Belem gera anticorpos variante-transcendentes. Entretanto, para gerar uma vacina universal baseada em PvAMA-1, uma formulação multi-alélica, incluindo variantes da Tailândia e Papua Nova Guiné, deverão ser testadas
Plasmodium vivax has the largest geographical distribution Plasmodium species in the world, and is predominant in the Americas, including Brazil. Fewer P. vivax vaccines than P. falciparum vaccines have successfully reached clinical trials. One of the candidate antigens for a blood-stage P. vivax vaccine is the apical membrane antigen 1 (PvAMA-1). However, the high natural variability found in this antigen presents a major challenge for its development into a wide-range vaccine. In the present study, we evaluated whether sequence polymorphisms would influence a vaccine based on PvAMA-1. To achieve this, we generated 9 recombinant proteins from the yeast Pichia pastoris, representative of different allelic variants of the PvAMA-1 antigen: Belem, Chesson I, Sal-1, Indonesia XIX, SK0814, TC103, PNG_05_ESP, PNG_62_MU, and PNG_68_MAS. After expression and purification of these proteins, we compared, by ELISA and IgG blocking, the natural acquired response from malaria-exposed individuals in the Amazon Region. All proteins selected had the appropriate yield and purity for the proposed studies. The total prevalence of malaria-exposed individuals with reactivity to PvAMA-1 Belem was 53,68%, from 611 serum samples tested. One hundred of these serologically positive samples were further tested against recombinant proteins representing the other allelic variants. The highest OD values resulted from Sal-1, Chesson I and SK0814 variants, suggesting that common epitopes or cross-reactivity exist across the variants. On the other hand, the lowest OD values resulted from the variants Indonesia XIX, TC103, PNG_05_ESP, PNG_62_MU, and PNG_68_MAS, which may mean these variants are less prevalent or do not circulate in Brazil. Polyclonal sera from C57BL/6 mice immunized with PvAMA-1 Belem were tested for recognition of different variants by ELISA. Our results showed that the variants Chesson I, Sal-1, Indonesia XIX, SK0814 and the homologous protein were predominantly recognized. Lastly, ELISA-based competition assays revealed that Chesson I, Sal-1, Indonesia XIX and SK0814 proteins were able to inhibit antibody binding to the Belem variant, suggesting the presence of common epitopes or cross-reactivity between these variants. Our data suggest that a vaccine based on the PvAMA-1 Belem variant displays strain-transcendent antibodies. However, to generate a universal vaccine based on PvAMA-1, a multiallelic formulation including variants from Thailand and Papua New Guinea must be tested
Assuntos
Plasmodium vivax/metabolismo , Química Farmacêutica , Malária/patologia , Antígenos/imunologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/instrumentação , Variação Antigênica , Eficácia , Formação de Anticorpos/imunologiaRESUMO
HoBi-like pestiviruses (HoBiPeV) constitute a novel group of bovine pestiviruses, genetically and antigenically related to bovine viral diarrhea virus 1 (BVDV-1) and BVDV-2. Recent data shows that HoBiPeV are endemic among Brazilian cattle, yet bovine reproductive/respiratory vaccines contain only BVDV-1 and BVDV-2 strains. The present study investigated the neutralizing antibody response against these pestiviruses induced by two commercial vaccines (VA = attenuated, VI = inactivated) and by three experimental, replicative, vaccine formulations (VAC1 = monovalent, BVDV-1; VAC2 = bivalent, BVDV-1 + BVDV-2; VAC3 = trivalent, BVDV-1 + BVDV-2 and HoBiPeV). Seronegative beef calves were immunized once (replicative vaccines) or twice (inactivated vaccine) and serum samples were tested by virus-neutralization (VN) 30 days after vaccination (dpv) (replicative vaccines) or 30 days after the second dose (VI). We considered a threshold VN titer of ≥60 indicative of protection against clinical disease. At 30 dpv, VA induced protective titers against BVDV-2 in 7/7 animals (GMT=289.8) and against BVDV-1 and HoBiPeV in 5/7 animals (GMTs=97.5 and 80, respectively). VI induced protective titers against BVDV-1 in 1/7 animal (GMT=16.4), 2/7 animals against BVDV-2 (GMT=53.8) and in none of the calves against HoBiPeV (GMT=12.2). When a pool of sera of each vaccine group was tested against individual Brazilian isolates, VA induced protective titers against 3/7 BVDV-1 isolates, to 9/10 (BVDV-2) and 1/8 (HoBiPeV); VI induced protective titers against 1/7 (BVDV-1), 1/10 (BVDV-2) and none (0/8) HoBiPeV isolates. The experimental vaccine VAC1 induced protective titers against BVDV-1 in 9/9 animals (GMT=320) but in no animal against BVDV-2 or HoBiPeV (GMT<10). VAC2 induced protective titers to BVDV-1 and BVDV-2 in 9/9 animals (GMTs=160 and 640, respectively), and against HoBiPeV in 7/9 animals (GMT=108.5). Finally, VAC3 induced protective titers in all animals against BVDV-1 (GMT=234.3), BVDV-2 (294.9) and HoBiPeV (201.1). Testing the pool of sera against pestivirus isolates, VAC1 induced titers ≥ 60 against 4/7 BVDV-1 but to none BVDV-2/HoBiPeV isolate; VAC2 induced protective titers against 4/7 BVDV-1; 10/10 BVDV-2 and 2/8 HoBiPeV; VAC3 induced protective titers against all BVDV-1, BVDV-2 and HoBiPeV isolates. These results indicate that vaccines composed by BVDV-1+BVDV-2, especially those containing inactivated virus, may not induce serological response against a variety of HoBiPeV isolates. Thus, the need of inclusion of HoBiPeV in vaccine formulations should be considered.(AU)
Os pestivírus HoBi-like (HoBiPeV) compõe um grupo novo de pestivírus de bovinos, genética e antigenicamente relacionados com os vírus da diarreia viral bovina 1 e 2 (BVDV-1, BVDV2). Dados recentes indicam que os HoBiPeV são endêmicos na população bovina do Brasil, mas as vacinas respiratórias e reprodutivas bovinas contêm apenas cepas de BVDV-1 e BVDV-2. O presente estudo investigou a atividade neutralizante contra estes pestivírus induzidas por duas vacinas comerciais (VA = atenuada, VI = inativada) e por três vacinas experimentais replicativas (VAC1 = monovalente, BVDV-1; VAC2 = bivalente, BVDV-1 + BVDV-2; VAC3 = trivalente, BVDV-1 + BVDV-2 e HoBiPeV). Bezerros soronegativos foram imunizados uma vez (vacinas replicativas) ou duas (vacina inativada) e amostras de soro foram testadas por vírus-neutralização (VN) 30 dias após a vacinação (dpv) (vacinas replicativas) ou 30 dias após a segunda dose (VI). Títulos neutralizantes ≥60 foram considerados indicativos de proteção contra doença clínica. Nesta data, a VA induziu títulos protetivos contra o BVDV-2 em 7/7 animais (GMT=289,8) e contra BVDV-1 e HoBiPeV em 5/7 animals (GMTs=97,5 e 80, respectivamente). VI induziu títulos protetores contra BVDV-1 em 1/7 animal (GMT=16,4), em 2/7 animais contra BVDV-2 (GMT=53,8) e em nenhum contra HoBiPeV (GMT=12,2). Quando um pool de soro de cada grupo vacinal foi testado frente a isolados Brasileiros, a VA induziu títulos protetores contra 3/7 isolados de BVDV-1, 9/10 (BVDV-2) e 1/8 (HoBiPeV); VI induziu títulos protetores em 1/7 contra BVDV-1, 1/10 (BVDV-2) e em nenhum (0/8) contra isolados de HoBiPeV. A VAC1 induziu títulos protetores contra BVDV-1 em 9/9 animais (GMT=320) mas em nenhum animal contra BVDV-2 ou HoBiPeV (GMT<10). VAC2 induziu títulos protetores contra BVDV-1e BVDV-2 em 9/9 animais (GMTs=160 e 640, respectivamente),e contra HoBiPeV em 7/9 animais (GMT=108,5). Finalmente, VAC3 induziu títulos protetores em todos os animais contra BVDV-1 (GMT=234,3), BVDV-2 (294,9) e HoBiPeV (201,1). No teste de pool de soro contra isolados de pestivírus, VAC1 induziu títulos ≥60 contra 4/7 BVDV-1 mas contra nenhum isolado de BVDV-2/HoBiPeV; VAC2 induziu títulos protetores contra 4/7 BVDV-1; 10/10 BVDV-2 e 2/8 HoBiPeV; VAC3 induziu títulos protetores contra todos BVDV-1, BVDV-2 e HoBiPeV. Esses resultados indicam que vacinas contendo apenas BVDV-1 BVDV-2, especialmente aquelas inativadas, podem não conferir resposta sorológica protetora contra vários isolados de HoBiPeV. Portanto, a necessidade de se incluir cepas de HoBiPeV nas vacinas deve ser considerada.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Bovinos/virologia , Vacinas Virais/administração & dosagem , Pestivirus/química , Variação AntigênicaRESUMO
Hobi-like viruses comprise an unclassified group of bovine pestiviruses related to bovine viral diarrhea virus 1 (BVDV-1) and 2 (BVDV-2). These viruses were originally identified in fetal bovine serum from Brazilian origin and, subsequently, isolated from diseased animals in several countries. Herein we performed an antigenic characterization of eight Brazilian HoBi-like viruses isolated from persistently infected (PI) animals and from gastroenteric disease (2007-2015). Phylogenetic analysis based on the 5' unstranslated region (UTR) clustered these viruses with other HoBi-like viruses from European and Asiatic origin. Monoclonal antibody (MAb) binding indicated variability in the Hobi-like virus glycoprotein E2 and significant differences from the homologous BVDV-1 and BVDV-2 glycoprotein. Analysis of antigenic relatedness based on virus-neutralizing titers using virus-specific antisera revealed that HoBi-like viruses are antigenically very different from BVDV-1 and, to a lesser extent, from BVDV-2. Cross-neutralizing assays between pairs of HoBi-like viruses and their respective antisera indicated the existence of antigenic variability among these viruses, even for viruses isolated from the same herd in different occasions. Moreover, the identification of a HoBi-like isolate with low antigenic similarity with the other isolates indicates the potential existence of antigenic subgroups among HoBi-like virus isolates. Finally, sera of lambs immunized with commercial BVDV vaccines showed low or undetectable neutralizing activity against HoBi-like isolates. These results indicate significant antigenic differences between BVDV genotypes and Brazilian HoBi-like viruses and the existence of antigenic variability within this atypical group of pestiviruses. These findings extend the knowledge about the antigenic diversity of HoBi-like viruses and reinforce the need for their inclusion in current BVDV vaccines.
Assuntos
Anticorpos Monoclonais/imunologia , Anticorpos Antivirais/sangue , Variação Antigênica , Doenças dos Bovinos/imunologia , Infecções por Pestivirus/veterinária , Pestivirus/imunologia , Animais , Bovinos , Doenças dos Bovinos/virologia , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 1/genética , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 1/imunologia , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 1/isolamento & purificação , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 2/genética , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 2/imunologia , Vírus da Diarreia Viral Bovina Tipo 2/isolamento & purificação , Vírus da Diarreia Viral Bovina/genética , Vírus da Diarreia Viral Bovina/imunologia , Vírus da Diarreia Viral Bovina/isolamento & purificação , Imunização/veterinária , Pestivirus/genética , Pestivirus/isolamento & purificação , Infecções por Pestivirus/imunologia , Infecções por Pestivirus/virologia , Filogenia , OvinosRESUMO
Serotype 1 is one of the most common causes of pneumococcal disease worldwide. Pneumococcal protein vaccines are currently being developed as an alternate intervention strategy to pneumococcal conjugate vaccines. Pre-requisites for an efficacious pneumococcal protein vaccine are universal presence and minimal variation of the target antigen in the pneumococcal population, and the capability to induce a robust human immune response. We used in silico analysis to assess the prevalence of seven protein vaccine candidates (CbpA, PcpA, PhtD, PspA, SP0148, SP1912, SP2108) among 445 serotype 1 pneumococci from 26 different countries, across four continents. CbpA (76%), PspA (68%), PhtD (28%), PcpA (11%) were not universally encoded in the study population, and would not provide full coverage against serotype 1. PcpA was widely present in the European (82%), but not in the African (2%) population. A multi-valent vaccine incorporating CbpA, PcpA, PhtD and PspA was predicted to provide coverage against 86% of the global population. SP0148, SP1912 and SP2108 were universally encoded and we further assessed their predicted amino acid, antigenic and structural variation. Multiple allelic variants of these proteins were identified, different allelic variants dominated in different continents; the observed variation was predicted to impact the antigenicity and structure of two SP0148 variants, one SP1912 variant and four SP2108 variants, however these variants were each only present in a small fraction of the global population (<2%). The vast majority of the observed variation was predicted to have no impact on the efficaciousness of a protein vaccine incorporating a single variant of SP0148, SP1912 and/or SP2108 from S. pneumoniae TIGR4. Our findings emphasise the importance of taking geographic differences into account when designing global vaccine interventions and support the continued development of SP0148, SP1912 and SP2108 as protein vaccine candidates against this important pneumococcal serotype.
Assuntos
Variação Antigênica , Antígenos de Bactérias/genética , Proteínas de Bactérias/genética , Infecções Pneumocócicas/prevenção & controle , Vacinas Pneumocócicas/administração & dosagem , Streptococcus pneumoniae/genética , Streptococcus pneumoniae/patogenicidade , África , Alelos , Sequência de Aminoácidos , Antígenos de Bactérias/química , Antígenos de Bactérias/imunologia , Ásia , Proteínas de Bactérias/química , Proteínas de Bactérias/imunologia , Europa (Continente) , Geografia , Saúde Global , Humanos , Modelos Moleculares , Infecções Pneumocócicas/imunologia , Infecções Pneumocócicas/patologia , Infecções Pneumocócicas/virologia , Vacinas Pneumocócicas/biossíntese , Vacinas Pneumocócicas/genética , Vacinas Pneumocócicas/imunologia , Sorogrupo , América do Sul , Streptococcus pneumoniae/classificação , Streptococcus pneumoniae/imunologia , Cobertura Vacinal/estatística & dados numéricos , Vacinas de Subunidades Antigênicas , VirulênciaRESUMO
Trypanosoma brucei rhodesiense and T. brucei gambiense, the causative agents of Human African Trypanosomiasis, are transmitted by tsetse flies. Within the vector, the parasite undergoes through transformations that prepares it to infect the human host. Sequentially these developmental stages are the replicative procyclic (in which the parasite surface is covered by procyclins) and trypo-epimastigote forms, as well as the non-replicative, infective, metacyclic form that develops in the vector salivary glands. As a pre-adaptation to their life in humans, metacyclic parasites begin to express and be densely covered by the Variant Surface Glycoprotein (VSG). Once the metacyclic form invades the human host the parasite develops into the bloodstream form. Herein the VSG triggers a humoral immune response. To avoid this humoral response, and essential for survival while in the bloodstream, the parasite changes its cover periodically and sheds into the surroundings the expressed VSG, thus evading the consequences of the immune system activation. Additionally, tools comparable to quorum sensing are used by the parasite for the successful parasite transmission from human to insect. On the other hand, the human host promotes clearance of the parasite triggering innate and adaptive immune responses and stimulating cytokine and chemokine secretion. All in all, the host-parasite interaction is extremely active and leads to responses that need multiple control sites to develop appropriately.
RESUMO
Infection with Bovine Viral Diarrhea Viruses (BVDV) in cattle results in a wide range of clinical manifestations, ranging from mild respiratory disease to fetal death and mucosal disease, depending on the virulence of the virus and the immune and reproductive status of the host. In this study 30 Argentinean BVDV isolates were characterized by phylogenetic analysis. The isolates were genotyped based on comparison of the 5' untranslated region (5' UTR) and the E2 gene. In both phylogenetic trees, 76% of the viruses were assigned to BVDV 1b, whereas BVDV 1a, 2a and 2b were also found. Eight of the BVDV 1b isolates were further characterized by cross-neutralization tests using guinea pig antisera and sera from bovines vaccinated with two different commercial vaccines. The results demonstrated the presence of a marked antigenic diversity among Argentinean BVDV isolates and suggest the need to incorporate BVDV 1b isolates in diagnostic strategies.
Assuntos
Variação Antigênica/imunologia , Doença das Mucosas por Vírus da Diarreia Viral Bovina/imunologia , Vírus da Diarreia Viral Bovina/imunologia , Filogenia , Regiões 5' não Traduzidas/genética , Sequência de Aminoácidos , Animais , Variação Antigênica/genética , Argentina , Sequência de Bases , Doença das Mucosas por Vírus da Diarreia Viral Bovina/genética , Bovinos , Vírus da Diarreia Viral Bovina/genética , Cobaias , Dados de Sequência Molecular , Testes de Neutralização/veterinária , RNA Viral/química , RNA Viral/genética , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa/veterinária , Alinhamento de Sequência , Análise de Sequência de DNA , Proteínas do Envelope Viral/química , Proteínas do Envelope Viral/genéticaRESUMO
Os resultados dos testes de virusneutralização (VN) contra os genótipos do vírus da diarreia viral bovina (BVDV-1 e BVDV-2), bem como os respectivos títulos de anticorpos, foram comparados em 1.925 amostras de soro sanguíneo obtidas de rebanhos bovinos naturalmente infectados e não vacinados contra o BVDV, provenientes dos Estados de São Paulo e Minas Gerais. A proporção de amostras reagentes entre os genótipos foi analisada pelo Teste de McNemar, e os títulos de anticorpos das amostras reagentes ao BVDV-1 e ao BVDV-2 foram comparados pelo Teste de Wilcoxon. Não foi verificada discordância na proporção de bovinos reagentes ao BVDV-1 e ao BVDV-2 (P>0,05). No entanto, houve discordância entre os títulos de anticorpos detectados nos testes de VN contra os genótipos 1 e 2 do BVDV (P<0,0001). Embora a proporção de animais reagentes contra ambos os genótipos do BVDV tenha sido semelhante, resultados falso-negativos seriam obtidos se 67 amostras (3,5 por cento) tivessem sido submetidas apenas ao teste de VN, para o BVDV-1, e em 51 amostras (2,65 por cento), apenas para o BVDV-2. Alguns rebanhos apresentaram títulos de anticorpos superiores para o BVDV-1, enquanto outros para BVDV-2, demonstrando assim a ocorrência da infecção pelos diferentes genótipos do vírus entre os rebanhos analisados. Portanto, tais resultados demonstraram a necessidade da inclusão de ambos os genótipos do BVDV nos testes de VN.
The virusneutralization test (VN) results against bovine viral diarrhoea virus genotypes (BVDV-1 and BVDV-2), and the respective titers of antibodies, were compared in 1,925 serum samples collected from unvaccinated and naturally infected cattle herds, located in the states of São Paulo and Minas Gerais, Brazil. The proportion of reagent samples among the genotypes was evaluated by McNemar test and the antibody titers against BVDV-1 and BVDV-2 were compared by Wilcoxon test. There were no disagreement in the proportion of BVDV-1 and BVDV-2 reagent samples (P>0.05). However, there was a disagreement among titers of antibodies detected in the VN tests against BVDV genotypes (P<0.0001). Although the proportion of reagent animals to BVDV genotypes was similar, false negative results would be obtained if 67 samples (3.5 percent) had been submitted only to VN test against BVDV-1, and 51 samples (2.65 percent) only against BVDV-2. Some herds had higher titers of antibodies for BVDV-1, while others for BVDV-2, thus demonstrating the occurrence of infection by different virus genotypes among the analyzed herds. Therefore, these results demonstrated the need for inclusion of both BVDV genotypes in VN tests.
RESUMO
The virusneutralization test (VN) results against bovine viral diarrhoea virus genotypes (BVDV-1 and BVDV-2), and the respective titers of antibodies, were compared in 1,925 serum samples collected from unvaccinated and naturally infected cattle herds, located in the states of São Paulo and Minas Gerais, Brazil. The proportion of reagent samples among the genotypes was evaluated by McNemar test and the antibody titers against BVDV-1 and BVDV-2 were compared by Wilcoxon test. There were no disagreement in the proportion of BVDV-1 and BVDV-2 reagent samples (P>0.05). However, there was a disagreement among titers of antibodies detected in the VN tests against BVDV genotypes (P 0.0001). Although the proportion of reagent animals to BVDV genotypes was similar, false negative results would be obtained if 67 samples (3.5%) had been submitted only to VN test against BVDV-1, and 51 samples (2.65%) only against BVDV-2. Some herds had higher titers of antibodies for BVDV-1, while others for BVDV-2, thus demonstrating the occurrence of infection by different virus genotypes among the analyzed herds. Therefore, these results demonstrated the need for inclusion of both BVDV genotypes in VN tests.
Os resultados dos testes de virusneutralização (VN) contra os genótipos do vírus da diarreia viral bovina (BVDV-1 e BVDV-2), bem como os respectivos títulos de anticorpos, foram comparados em 1.925 amostras de soro sanguíneo obtidas de rebanhos bovinos naturalmente infectados e não vacinados contra o BVDV, provenientes dos Estados de São Paulo e Minas Gerais. A proporção de amostras reagentes entre os genótipos foi analisada pelo Teste de McNemar, e os títulos de anticorpos das amostras reagentes ao BVDV-1 e ao BVDV-2 foram comparados pelo Teste de Wilcoxon. Não foi verificada discordância na proporção de bovinos reagentes ao BVDV-1 e ao BVDV-2 (P>0,05). No entanto, houve discordância entre os títulos de anticorpos detectados nos testes de VN contra os genótipos 1 e 2 do BVDV (P 0,0001). Embora a proporção de animais reagentes contra ambos os genótipos do BVDV tenha sido semelhante, resultados falso-negativos seriam obtidos se 67 amostras (3,5%) tivessem sido submetidas apenas ao teste de VN, para o BVDV-1, e em 51 amostras (2,65%), apenas para o BVDV-2. Alguns rebanhos apresentaram títulos de anticorpos superiores para o BVDV-1, enquanto outros para BVDV-2, demonstrando assim a ocorrência da infecção pelos diferentes genótipos do vírus entre os rebanhos analisados. Portanto, tais resultados demonstraram a necessidade da inclusão de ambos os genótipos do BVDV nos testes de VN.
RESUMO
The virusneutralization test (VN) results against bovine viral diarrhoea virus genotypes (BVDV-1 and BVDV-2), and the respective titers of antibodies, were compared in 1,925 serum samples collected from unvaccinated and naturally infected cattle herds, located in the states of São Paulo and Minas Gerais, Brazil. The proportion of reagent samples among the genotypes was evaluated by McNemar test and the antibody titers against BVDV-1 and BVDV-2 were compared by Wilcoxon test. There were no disagreement in the proportion of BVDV-1 and BVDV-2 reagent samples (P>0.05). However, there was a disagreement among titers of antibodies detected in the VN tests against BVDV genotypes (P 0.0001). Although the proportion of reagent animals to BVDV genotypes was similar, false negative results would be obtained if 67 samples (3.5%) had been submitted only to VN test against BVDV-1, and 51 samples (2.65%) only against BVDV-2. Some herds had higher titers of antibodies for BVDV-1, while others for BVDV-2, thus demonstrating the occurrence of infection by different virus genotypes among the analyzed herds. Therefore, these results demonstrated the need for inclusion of both BVDV genotypes in VN tests.
Os resultados dos testes de virusneutralização (VN) contra os genótipos do vírus da diarreia viral bovina (BVDV-1 e BVDV-2), bem como os respectivos títulos de anticorpos, foram comparados em 1.925 amostras de soro sanguíneo obtidas de rebanhos bovinos naturalmente infectados e não vacinados contra o BVDV, provenientes dos Estados de São Paulo e Minas Gerais. A proporção de amostras reagentes entre os genótipos foi analisada pelo Teste de McNemar, e os títulos de anticorpos das amostras reagentes ao BVDV-1 e ao BVDV-2 foram comparados pelo Teste de Wilcoxon. Não foi verificada discordância na proporção de bovinos reagentes ao BVDV-1 e ao BVDV-2 (P>0,05). No entanto, houve discordância entre os títulos de anticorpos detectados nos testes de VN contra os genótipos 1 e 2 do BVDV (P 0,0001). Embora a proporção de animais reagentes contra ambos os genótipos do BVDV tenha sido semelhante, resultados falso-negativos seriam obtidos se 67 amostras (3,5%) tivessem sido submetidas apenas ao teste de VN, para o BVDV-1, e em 51 amostras (2,65%), apenas para o BVDV-2. Alguns rebanhos apresentaram títulos de anticorpos superiores para o BVDV-1, enquanto outros para BVDV-2, demonstrando assim a ocorrência da infecção pelos diferentes genótipos do vírus entre os rebanhos analisados. Portanto, tais resultados demonstraram a necessidade da inclusão de ambos os genótipos do BVDV nos testes de VN.
RESUMO
The virusneutralization test (VN) results against bovine viral diarrhoea virus genotypes (BVDV-1 and BVDV-2), and the respective titers of antibodies, were compared in 1,925 serum samples collected from unvaccinated and naturally infected cattle herds, located in the states of São Paulo and Minas Gerais, Brazil. The proportion of reagent samples among the genotypes was evaluated by McNemar test and the antibody titers against BVDV-1 and BVDV-2 were compared by Wilcoxon test. There were no disagreement in the proportion of BVDV-1 and BVDV-2 reagent samples (P>0.05). However, there was a disagreement among titers of antibodies detected in the VN tests against BVDV genotypes (P 0.0001). Although the proportion of reagent animals to BVDV genotypes was similar, false negative results would be obtained if 67 samples (3.5%) had been submitted only to VN test against BVDV-1, and 51 samples (2.65%) only against BVDV-2. Some herds had higher titers of antibodies for BVDV-1, while others for BVDV-2, thus demonstrating the occurrence of infection by different virus genotypes among the analyzed herds. Therefore, these results demonstrated the need for inclusion of both BVDV genotypes in VN tests.
Os resultados dos testes de virusneutralização (VN) contra os genótipos do vírus da diarreia viral bovina (BVDV-1 e BVDV-2), bem como os respectivos títulos de anticorpos, foram comparados em 1.925 amostras de soro sanguíneo obtidas de rebanhos bovinos naturalmente infectados e não vacinados contra o BVDV, provenientes dos Estados de São Paulo e Minas Gerais. A proporção de amostras reagentes entre os genótipos foi analisada pelo Teste de McNemar, e os títulos de anticorpos das amostras reagentes ao BVDV-1 e ao BVDV-2 foram comparados pelo Teste de Wilcoxon. Não foi verificada discordância na proporção de bovinos reagentes ao BVDV-1 e ao BVDV-2 (P>0,05). No entanto, houve discordância entre os títulos de anticorpos detectados nos testes de VN contra os genótipos 1 e 2 do BVDV (P 0,0001). Embora a proporção de animais reagentes contra ambos os genótipos do BVDV tenha sido semelhante, resultados falso-negativos seriam obtidos se 67 amostras (3,5%) tivessem sido submetidas apenas ao teste de VN, para o BVDV-1, e em 51 amostras (2,65%), apenas para o BVDV-2. Alguns rebanhos apresentaram títulos de anticorpos superiores para o BVDV-1, enquanto outros para BVDV-2, demonstrando assim a ocorrência da infecção pelos diferentes genótipos do vírus entre os rebanhos analisados. Portanto, tais resultados demonstraram a necessidade da inclusão de ambos os genótipos do BVDV nos testes de VN.
RESUMO
Infectious Bovine Keratoconjunctivitis (IBK) is still the most important ocular disease of cattle in the MERCOSUL region. The etiologic agent of IBK, the bacterium Moraxella bovis, has genetic differences responsible for antigenic and antibiotic susceptibility variability that interfere in its control. In this review, molecular, antigenic and antimicrobial susceptibility studies of strains recovered during the last 20 years in our region are discussed and compared with results obtained abroad.
A Ceratoconjuntivite Infecciosa Bovina (CIB) continua sendo a mais importante enfermidade ocular dos bovinos da região do MERCOSUL. O agente etiológico da CIB, a bactéria Moraxella bovis, apresenta diferenças genéticas que determinam variações antigênicas e de susceptibilidade aos fármacos, que dificultam seu controle. São discutidos, neste trabalho, resultados de estudos moleculares, antigênicos e de susceptibilidade a antimicrobianos realizados com cepas isoladas durante os últimos vinte anos na região e comparados com os de outras regiões.
RESUMO
Infectious Bovine Keratoconjunctivitis (IBK) is still the most important ocular disease of cattle in the MERCOSUL region. The etiologic agent of IBK, the bacterium Moraxella bovis, has genetic differences responsible for antigenic and antibiotic susceptibility variability that interfere in its control. In this review, molecular, antigenic and antimicrobial susceptibility studies of strains recovered during the last 20 years in our region are discussed and compared with results obtained abroad.
A Ceratoconjuntivite Infecciosa Bovina (CIB) continua sendo a mais importante enfermidade ocular dos bovinos da região do MERCOSUL. O agente etiológico da CIB, a bactéria Moraxella bovis, apresenta diferenças genéticas que determinam variações antigênicas e de susceptibilidade aos fármacos, que dificultam seu controle. São discutidos, neste trabalho, resultados de estudos moleculares, antigênicos e de susceptibilidade a antimicrobianos realizados com cepas isoladas durante os últimos vinte anos na região e comparados com os de outras regiões.
RESUMO
The serological response induced by three inactivated commercial vaccines against bovine viral diarrhea virus (BVDV) was evaluated in calves immunized three times (days 0, 30 and 180) and examined at different intervals after vaccination. Thirty days after the second vaccination, 74.5% (70/94) of the calves had developed neutralizing antibodies titers against BVDV-1 and 52.1% (49/94) against BVDV-2. The geometric mean titers (GMT) and the number of animals with antibodies to BVDV-1 were 109.3(32/36); 54.6(22/28) and 25.5(16/30) for vaccines A, B e C, respectively and 19(27/36), 42.3(12/28) and 18.4(10/30) to BVDV-2. The antibody titers decreased by day 180, when 31.9%(30/94) of the calves showed no neutralizing activity against BVDV-1 and 63.8%(60/94) to BVDV-2. At that time, the GMTs and the number of animals seropositive to BVDV-1 were 28.3 (30/36), 28.3(20/28) and 16.1(14/30); and to BVDV-2 were 16.8(18/36), 21.6(10/28) and 28.3(6/30) for vaccines A, B and C, respectively. After the third dosis (day 180), the antibody titers to BVDV-1 increased significantly in all groups whereas a significant increase in BVDV-2 titers was observed only for vaccine A. At day 210, GMTs and the number of positive animals to BVDV-1 were 104.8(23/24), 50.3(24/26) and 43.7(24/28) and to BVDV-2 were 33.4(23/24), 23.3(22/26) and 15.7(22/28) for vaccines A, B and C. The neutralizing activity against BVDV-1 was higher than to BVDV-2 in all groups at day 210. Sera from five seropositive animals of each vaccine group were tested against four Brazilian BVDV-1 and two BVDV-2 isolates. In addition to the low and moderate titers, the cross-neutralization assays revealed a highly variable neutralizing activity against the Brazilian field isolates. These results demonstrated that the vaccination did not induce an adequate serological response in most animals, mainly due to the high antigenic variability of BVDV.
A resposta sorológica induzida por três vacinas comerciais inativadas contra o vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV) foi avaliada em bovinos imunizados três vezes (dias 0, 30 e 180) e testados a diferentes intervalos após a vacinação. Trinta dias após a segunda vacinação, 74,5% (70/94) dos animais apresentavam anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 e 52,1% (49/94) contra o BVDV-2. Os títulos médios (GMT) e o número de animais reagentes contra o BVDV-1 eram de 109,3(32/36); 54,6(22/28) e 25,5(16/30) para as vacinas A, B e C, respectivamente; e de 19(27/36), 42,3(12/28) e 18,4(10/30) contra o BVDV-2. Os títulos reduziram-se aos 180 dias, sendo que 31,9%(30/94) dos animais já não apresentavam atividade neutralizante frente ao BVDV-1 e 63,8%(60/94) frente ao BVDV-2. Nesta data, os títulos médios e o número de animais positivos frente ao BVDV-1 eram de 28,3 (30/36), 28,3(20/28) e 16,1(14/30) e frente ao BVDV-2 de 16,8(18/36), 21,6(10/28) e 28,3(6/30) para as vacinas A, B e C, respectivamente. Após o reforço (dia 180), os títulos médios contra o BVDV-1 aumentaram significativamente nos três grupos vacinais e contra o BVDV-2 apenas no grupo A. Trinta dias após, os títulos médios e o número de reagentes contra o BVDV-1 eram de 104,8(23/24), 50,3(24/26) e 43,7(24/28) e contra o BVDV-2 de 33,4(23/24), 23,3(22/26) e 15,7(22/28) para as vacinas A, B e C. Os títulos contra o BVDV-1 no dia 210 foram estatisticamente superiores aos títulos contra o BVDV-2 nos três grupos vacinais. O soro de alguns animais positivos de cada grupo foi testado frente a quatro amostras brasileiras de BVDV-1 e duas de BVDV-2. Além dos títulos baixos a moderados, os testes de neutralização cruzada revelaram variações marcantes na atividade neutralizante frente a isolados de campo antigenicamente diferentes. Esses resultados demonstram que a vacinação não induziu uma resposta sorológica de magnitude e duração adequadas na maioria dos animais, principalmente frente à grande diversidade antigênica das amostras de BVDV.
RESUMO
The serological response induced by three inactivated commercial vaccines against bovine viral diarrhea virus (BVDV) was evaluated in calves immunized three times (days 0, 30 and 180) and examined at different intervals after vaccination. Thirty days after the second vaccination, 74.5% (70/94) of the calves had developed neutralizing antibodies titers against BVDV-1 and 52.1% (49/94) against BVDV-2. The geometric mean titers (GMT) and the number of animals with antibodies to BVDV-1 were 109.3(32/36); 54.6(22/28) and 25.5(16/30) for vaccines A, B e C, respectively and 19(27/36), 42.3(12/28) and 18.4(10/30) to BVDV-2. The antibody titers decreased by day 180, when 31.9%(30/94) of the calves showed no neutralizing activity against BVDV-1 and 63.8%(60/94) to BVDV-2. At that time, the GMTs and the number of animals seropositive to BVDV-1 were 28.3 (30/36), 28.3(20/28) and 16.1(14/30); and to BVDV-2 were 16.8(18/36), 21.6(10/28) and 28.3(6/30) for vaccines A, B and C, respectively. After the third dosis (day 180), the antibody titers to BVDV-1 increased significantly in all groups whereas a significant increase in BVDV-2 titers was observed only for vaccine A. At day 210, GMTs and the number of positive animals to BVDV-1 were 104.8(23/24), 50.3(24/26) and 43.7(24/28) and to BVDV-2 were 33.4(23/24), 23.3(22/26) and 15.7(22/28) for vaccines A, B and C. The neutralizing activity against BVDV-1 was higher than to BVDV-2 in all groups at day 210. Sera from five seropositive animals of each vaccine group were tested against four Brazilian BVDV-1 and two BVDV-2 isolates. In addition to the low and moderate titers, the cross-neutralization assays revealed a highly variable neutralizing activity against the Brazilian field isolates. These results demonstrated that the vaccination did not induce an adequate serological response in most animals, mainly due to the high antigenic variability of BVDV.
A resposta sorológica induzida por três vacinas comerciais inativadas contra o vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV) foi avaliada em bovinos imunizados três vezes (dias 0, 30 e 180) e testados a diferentes intervalos após a vacinação. Trinta dias após a segunda vacinação, 74,5% (70/94) dos animais apresentavam anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 e 52,1% (49/94) contra o BVDV-2. Os títulos médios (GMT) e o número de animais reagentes contra o BVDV-1 eram de 109,3(32/36); 54,6(22/28) e 25,5(16/30) para as vacinas A, B e C, respectivamente; e de 19(27/36), 42,3(12/28) e 18,4(10/30) contra o BVDV-2. Os títulos reduziram-se aos 180 dias, sendo que 31,9%(30/94) dos animais já não apresentavam atividade neutralizante frente ao BVDV-1 e 63,8%(60/94) frente ao BVDV-2. Nesta data, os títulos médios e o número de animais positivos frente ao BVDV-1 eram de 28,3 (30/36), 28,3(20/28) e 16,1(14/30) e frente ao BVDV-2 de 16,8(18/36), 21,6(10/28) e 28,3(6/30) para as vacinas A, B e C, respectivamente. Após o reforço (dia 180), os títulos médios contra o BVDV-1 aumentaram significativamente nos três grupos vacinais e contra o BVDV-2 apenas no grupo A. Trinta dias após, os títulos médios e o número de reagentes contra o BVDV-1 eram de 104,8(23/24), 50,3(24/26) e 43,7(24/28) e contra o BVDV-2 de 33,4(23/24), 23,3(22/26) e 15,7(22/28) para as vacinas A, B e C. Os títulos contra o BVDV-1 no dia 210 foram estatisticamente superiores aos títulos contra o BVDV-2 nos três grupos vacinais. O soro de alguns animais positivos de cada grupo foi testado frente a quatro amostras brasileiras de BVDV-1 e duas de BVDV-2. Além dos títulos baixos a moderados, os testes de neutralização cruzada revelaram variações marcantes na atividade neutralizante frente a isolados de campo antigenicamente diferentes. Esses resultados demonstram que a vacinação não induziu uma resposta sorológica de magnitude e duração adequadas na maioria dos animais, principalmente frente à grande diversidade antigênica das amostras de BVDV.
RESUMO
Nucleotide sequencing and phylogenetic analysis of 17 Brazilian isolates of bovine viral diarrhea virus (BVDV) identified four isolates (23.5%) belonging to genotype 1a (BVDV-1a), nine isolates (52.9%) of the genotype 1b (BVDV-1b) and four isolates (23.5%) belonging to genotype 2 (BVDV-2). The Brazilian BVDV type 2 isolates were shown to be genotypically different from the BVDV type 2 identified so far in North America and Europe, suggesting they might belong to a new subgenotype. Antigenic characterization of these isolates by cross-neutralization revealed a very low serologic cross-reactivity with vaccine BVDV strains. The immune serum raised in lambs to three vaccine strains presented a very low and even negligible neutralizing activity against some Brazilian BVDV type 1 and 2 isolates. Up to 128-fold differences in serum neutralizing antibody titers were observed between the vaccine strains and some Brazilian BVDV isolates. The potential impact of the antigenic variability of BVDV on serologic diagnosis was investigated by testing field serum samples by serum-neutralization (SN) against viruses of both genotypes. Two hundred and eighty samples (24.7%) had neutralizing antibodies against BVDV. Out of these, 215 (76.8%) had neutralizing activity against viruses of both genotypes, 37 samples (13.2%) reacted only against BVDV type 2 and 28 (10%) were positive only to BVDV type 1. These results demonstrate that SN tests using only one virus may result in a significant number of false-negative results. The reduced neutralizing activity of the antisera to vaccine strains against some Brazilian isolates raises the question about the degree of protection conferred by these vaccines and indicates the need of producing vaccines based on local viruses and/or including viruses of both genotypes.
Seqüenciamento e análise filogenética de 17 amostras do vírus da diarréia viral bovina (BVDV) isoladas no Brasil identificaram quatro amostras (23,5%) do genótipo 1a (BVDV-1a), nove amostras (52,9%) do genótipo 1b (BVDV tipo 1b) e quatro amostras (23,5%) do genótipo 2 (BVDV tipo 2). As amostras brasileiras de BVDV tipo 2 apresentaram-se genotipicamente distintas dos BVDV tipo 2 até então identificados na América do Norte e Europa, sugerindo pertencerem a um novo subgenótipo. A caracterização antigênica dessas amostras por neutralização cruzada revelou reatividade sorológica muito reduzida com cepas vacinais do BVDV. O anti-soro produzido contra três cepas vacinais do BVDV apresentou atividade neutralizante muito reduzida contra várias amostras brasileiras de BVDV tipos 1 e 2. Diferenças de até 128 vezes nos títulos de anticorpos neutralizantes foram observadas entre cepas vacinais e amostras brasileiras do BVDV. Nos testes de soroneutralização (SN) contra o vírus dos tipos 1 e 2, de 1134 amostras testadas, 280 (24,7%) possuiam anticorpos neutralizantes anti-BVDV e dessas, 215 (76,8%) apresentaram atividade neutralizante contra ambos os vírus, 37 (13,2%) reagiram apenas contra o BVDV tipo 2 e 28 amostras (10%) foram positivas apenas contra o BVDV tipo 1. Esses resultados demonstram que testes de SN utilizando vírus de apenas um genótipo podem resultar em um número significativo de falsos-negativos e indica a necessidade da formulação de vacinas com amostras locais de BVDV e/ou contendo vírus dos dois genótipos.
RESUMO
Seven cytopathic isolates of bovine viral diarrhea virus (BVDV) isolated from clinical cases and blood of calves from herds with reproductive problems were analysed. All isolates contained a mixture of cytopathic (cp) and noncytopathic (ncp) viruses which were biologically cloned yielding pure populations of viruses of either biotype. The cp and ncp viruses obtained by cloning were characterized antigenically with a panel of monoclonal antibodies (MAbs) and regarding to the expression of the non-structural polypeptide NS3. The analysis of MAb binding revealed two patterns of reactivity: 1. In five isolates, the cp and ncp viruses from the same isolate were antigenically very similar to each other, suggesting they represent true "pairs"of viruses. 2. Two isolates, however, yielded cp and ncp viruses antigenically different from each other. Western immunoblot analysis of non-structural polypeptides of ncp viruses revealed a unique band of reactivity, with a mass of approximately 125kDa, corresponding to the NS23 of the standard BVDV Singer strain. In addition to NS23, the cp viruses expressed a polypeptide of approximatelly 80kDa, corresponding to the NS3. The NS23 of two cp viruses displayed an altered migration in SDS-PAGE compared to the other viruses. In one virus, the NS23 had a molecular mass lower than expected whereas in other virus, two bands of reactivity were observed: one smaller and another bigger than the standard NS23, respectively. Our findings confirm previous results that cytopathic BVDV field isolates usually contain a mixture of viruses of both biotypes and that cytopathogenicity correlates with the expression of NS3. The isolation of cp viruses from the blood of clinically normal cattle, however, demonstrates that their occurrence is not restricted to cases of mucosal disease.
Sete amostras citopáticas do vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV) isoladas de casos clínicos e do sangue de bezerros de rebanhos com problemas reprodutivos foram analisadas. Todas as amostras caracterizadas possuíam uma mistura de vírus citopáticos (cp) e não-citopáticos (ncp), que foram clonados biologicamente, originando populações puras de vírus de cada biotipo. Os clones cp e ncp obtidos foram caracterizados antigenicamente com um painel de anticorpos monoclonais (MAbs) e quanto à expressão da proteína não-estrutural NS3. A análise de reconhecimento pelos MAbs revelou dois padrões de reatividade: 1. Em cinco casos, os vírus cp e ncp de uma mesma amostra mostraram-se antigenicamente muito semelhantes entre si, indicando tratar-se de verdadeiros "pares" de vírus, nos quais o vírus cp origina-se do ncp através de mutações ou recombinações; 2. Duas amostras, no entanto, continham vírus cp e ncp com diferenças antigênicas consideráveis entre si. A análise de polipeptídeos não-estruturais das amostras ncp através de Western immunoblot revelou uma única banda de reatividade, de massa aproximada de 125kDa, correspondente à proteína nãoestrutural NS23. As amostras cp expressaram, além da NS23, um polipeptídeo de massa aproximada de 80kDa, correspondente à NS3. Duas amostras cp apresentaram diferenças na migração da NS23. Uma amostra apresentou a NS23 com massa menor do que 125kDa, enquanto outra amostra apresentou duas bandas de reatividade, com massas menor e maior que a NS23 dos demais vírus, respectivamente. Esses resultados confirmam achados anteriores de que amostras de campo citopáticas do BVDV geralmente possuem vírus dos dois biotipos e que o fenótipo citopático está associado à expressão da proteína NS3. O isolamento de amostras citopáticas do sangue de animais clinicamente normais e de um feto, no entanto, demonstra que a ocorrência de vírus cp não se restringe à casos da Doença das Mucosas.
RESUMO
Seven cytopathic isolates of bovine viral diarrhea virus (BVDV) isolated from clinical cases and blood of calves from herds with reproductive problems were analysed. All isolates contained a mixture of cytopathic (cp) and noncytopathic (ncp) viruses which were biologically cloned yielding pure populations of viruses of either biotype. The cp and ncp viruses obtained by cloning were characterized antigenically with a panel of monoclonal antibodies (MAbs) and regarding to the expression of the non-structural polypeptide NS3. The analysis of MAb binding revealed two patterns of reactivity: 1. In five isolates, the cp and ncp viruses from the same isolate were antigenically very similar to each other, suggesting they represent true "pairs"of viruses. 2. Two isolates, however, yielded cp and ncp viruses antigenically different from each other. Western immunoblot analysis of non-structural polypeptides of ncp viruses revealed a unique band of reactivity, with a mass of approximately 125kDa, corresponding to the NS23 of the standard BVDV Singer strain. In addition to NS23, the cp viruses expressed a polypeptide of approximatelly 80kDa, corresponding to the NS3. The NS23 of two cp viruses displayed an altered migration in SDS-PAGE compared to the other viruses. In one virus, the NS23 had a molecular mass lower than expected whereas in other virus, two bands of reactivity were observed: one smaller and another bigger than the standard NS23, respectively. Our findings confirm previous results that cytopathic BVDV field isolates usually contain a mixture of viruses of both biotypes and that cytopathogenicity correlates with the expression of NS3. The isolation of cp viruses from the blood of clinically normal cattle, however, demonstrates that their occurrence is not restricted to cases of mucosal disease.
Sete amostras citopáticas do vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV) isoladas de casos clínicos e do sangue de bezerros de rebanhos com problemas reprodutivos foram analisadas. Todas as amostras caracterizadas possuíam uma mistura de vírus citopáticos (cp) e não-citopáticos (ncp), que foram clonados biologicamente, originando populações puras de vírus de cada biotipo. Os clones cp e ncp obtidos foram caracterizados antigenicamente com um painel de anticorpos monoclonais (MAbs) e quanto à expressão da proteína não-estrutural NS3. A análise de reconhecimento pelos MAbs revelou dois padrões de reatividade: 1. Em cinco casos, os vírus cp e ncp de uma mesma amostra mostraram-se antigenicamente muito semelhantes entre si, indicando tratar-se de verdadeiros "pares" de vírus, nos quais o vírus cp origina-se do ncp através de mutações ou recombinações; 2. Duas amostras, no entanto, continham vírus cp e ncp com diferenças antigênicas consideráveis entre si. A análise de polipeptídeos não-estruturais das amostras ncp através de Western immunoblot revelou uma única banda de reatividade, de massa aproximada de 125kDa, correspondente à proteína nãoestrutural NS23. As amostras cp expressaram, além da NS23, um polipeptídeo de massa aproximada de 80kDa, correspondente à NS3. Duas amostras cp apresentaram diferenças na migração da NS23. Uma amostra apresentou a NS23 com massa menor do que 125kDa, enquanto outra amostra apresentou duas bandas de reatividade, com massas menor e maior que a NS23 dos demais vírus, respectivamente. Esses resultados confirmam achados anteriores de que amostras de campo citopáticas do BVDV geralmente possuem vírus dos dois biotipos e que o fenótipo citopático está associado à expressão da proteína NS3. O isolamento de amostras citopáticas do sangue de animais clinicamente normais e de um feto, no entanto, demonstra que a ocorrência de vírus cp não se restringe à casos da Doença das Mucosas.
RESUMO
Microscopic Agglutination Test (MAT) described as a diagnostic test for Leptospirosis was used to check antigenicity on 47 samples of Arcobacter cryaerophilus and two samples of Arcobacter butzleri isolated from pigs in Rio Grande do Sul, Brazil. Rabbit antisera used in the test were produced against reference strains of Arcobacter spp. Antigenic heterogenicity among the samples was shown. Only four samples provoked titres higher than 1.600 with standard antisera. 48.97% of the antigens confirmed the genetic classification of the microrganisms. MAT was used also to identify serum samples from sows with reproductive problems from farms where Arcobacter spp had been isolated. There is no reference in the literature on the use of the test as diagnostic tool in Arcobacter infections. Serologic tests in sows showed titres as high as 1,600, suggesting that there was presence of agglutinins in serum samples.
O teste de aglutinação microscópica, usando a técnica descrita para o diagnóstico de leptospirose, foi utilizado para verificar a antigenicidade de 47 amostras de Arcobacter cryaerophilus e duas amostras de Arcobacter butzleri isoladas de suínos no Rio Grande do Sul, Brasil, em frente a soros hiperimunes produzidos em coelhos a partir de amostras padrões das bactérias. Verificou-se grande heterogeneidade antigênica e apenas quatro amostras provocaram títulos acima de 1.600 com os anti-soros padrões. A classificação genética dos microorganismos foi confirmada no teste em 48,97% dos antígenos. Igualmente, utilizando a técnica de aglutinação microscópica, foram testadas amostras de soro de porcas que apresentaram problemas reprodutivos, procedentes de granjas de onde foram isoladas amostras de Arcobacter spp. Não existe registro anterior na literatura sobre o uso do referido teste em infecções por Arcobacter spp. Os exames sorológicos em fêmeas suínas reprodutoras revelaram títulos de até 1.600, possibilitando indicar que houve a presença de aglutininas para Arcobacter spp.