RESUMO
Enterobacter cloacae is an emerging pathogen isolated in healthcare-associated infections. A major virulence factor of this bacterium is the type VI secretion system (T6SS). The genome of E. cloacae harbors two T6SS gene clusters (T6SS-1 and T6SS-2), and the functional characterization of both systems showed that these two T6SSs are not expressed under the same conditions. Here, we report that the major histone-like protein HU positively regulates the expression of both T6SSs and, therefore, the function that each T6SS exerts in E. cloacae. Single deletions of the genes encoding the HU subunits (hupA and hupB) decreased mRNA levels of both T6SS. In contrast, the hupA hupB double mutant dramatically affected the T6SS expression, diminishing its transcription. The direct binding of HU to the promoter regions of T6SS-1 and T6SS-2 was confirmed by electrophoretic mobility shift assay. In addition, single and double mutations in the hup genes affected the ability of inter-bacterial killing, biofilm formation, adherence to epithelial cells, and intestinal colonization, but these phenotypes were restored when such mutants were trans-complemented. Our data broaden our understanding of the regulation of HU-mediated T6SS in these pathogenic bacteria. IMPORTANCE: T6SS is a nanomachine that functions as a weapon of bacterial destruction crucial for successful colonization in a specific niche. Enterobacter cloacae expresses two T6SSs required for bacterial competition, adherence, biofilm formation, and intestinal colonization. Expression of T6SS genes in pathogenic bacteria is controlled by multiple regulatory systems, including two-component systems, global regulators, and nucleoid proteins. Here, we reported that the HU nucleoid protein directly activates both T6SSs in E. cloacae, affecting the T6SS-related phenotypes. Our data describe HU as a new regulator involved in the transcriptional regulation of T6SS and its impact on E. cloacae pathogenesis.
Assuntos
Proteínas de Bactérias , Proteínas de Ligação a DNA , Enterobacter cloacae , Regulação Bacteriana da Expressão Gênica , Sistemas de Secreção Tipo VI , Enterobacter cloacae/genética , Enterobacter cloacae/metabolismo , Proteínas de Bactérias/genética , Proteínas de Bactérias/metabolismo , Sistemas de Secreção Tipo VI/genética , Sistemas de Secreção Tipo VI/metabolismo , Proteínas de Ligação a DNA/genética , Proteínas de Ligação a DNA/metabolismo , Regiões Promotoras Genéticas , Família MultigênicaRESUMO
Introducción: Mycoplasma fermentans presenta propiedades inmunorreguladoras y puede desencadenar infecciones crónicas con signos leves de la enfermedad. Por su parte, la materia partículada atmosférica es un componente diverso y complejo de la contaminación del aire y que se asocia a efectos adversos para la salud. Objetivo: Estudiar el daño producido por la inoculación de Mycoplasma fermentans y la exposición a ceniza volcánica. Materiales y métodos: Las muestras de ceniza se colectaron en zonas cercanas al volcán Popocatépetl. Diez hamsters se expusieron a la inhalación de ceniza volcánica, tros diez ejemplares fueron inoculados intratraquealmente con Mycoplasma fermentans y expuestos a inhalación de ceniza volcánica. Diez hamsters no fueron inoculados ni expuestos a la inhalación de ceniza, considerándose como grupo control. A partir del día 60 los ejemplares se sacrificaron, obteniéndose muestras de sangre para determinar el hematocrito, la cuenta diferencial y detección de anticuerpos. Se realizó estudio histopatológico al tejido pulmonar de los ejemplares. Resultados: El grupo de hamsters expuestos a la ceniza volcánica mostraron perdida en peso y decremento en el conteo de neutrófilos. No se detectaron anticuerpos contra Mycoplasma fermentans. El tejido pulmonar de los ejemplares expuestos a la ceniza mostró detritus celulares, reacción inflamatoria aguda e infiltrado linfocitario. Los hamsters previamente infectados y expuestos a la ceniza volcánica presentaronengrosamiento de la pared alveolar, infiltrado de células plasmáticas, neutrófilos y foco hemorrágico. Estos resultados indican que Mycoplasma fermentans puede interaccionar con estímulos ambientales, como es el caso de la ceniza volcánica, pontecializando efectos adversos en la salud.
Assuntos
Poluição Ambiental , Erupções Vulcânicas/efeitos adversos , Mycoplasma fermentansRESUMO
Introducción. El asma puede ser desencadenada por diferentes estímulos, entre ellos están los agentes infecciosos. Los virus la exacerban con mayor frecuencia y Mycoplasma pneumoniae ha sido implicado como posible agente. Objetivo. Buscar la presencia de micoplasma en exudado faríngeo de pacientes con asma y determinar el perfil de anticuerpos en suero. Material y métodos. Se buscaron micoplasmas en exudado faríngeo y en el suero de 208 pacientes en que se determinó IgM, IgG, IgA, aglutininas frías y anticuerpos antimicoplasmas. Resultados. Se identificaron 12 cepas de M. fermentans por polimerasa. Sólo se detectaron anticuerpos anti-M. fermentans y anti-M. pneumoniae en un paciente por inhibición metabólica. En los pacientes con M. fermentans hubo una disminución de IgM e IgG en la segunda determinación. Veinte pacientes tuvieron aglutininas frías y tres de ellos tenían M. fermentans. Discusión. No se aisló M. pneumoniae, M. fermentans se aisló en 5.5 por ciento, esto es difícil de interpretar debido a que se desconce su prevalencia en población sana. Probablemente no se aisló a M. pneumoniae porque no es un agente desencadenante, o por ser un microorganismo difícil de cultivar. Sin embargo el mecanismo de patogenicidad de los micoplasmas es muy parecido al de los virus que tienen la capacidad de exacerbar el asma. Conclusión. Con los resultados obtenidos no se puede concluir si los micoplasmas son agentes exacerbantes del asma, aunque tampoco se pueden descartar como tales