RESUMO
Antigenic fractions of 27-28 kDa from Fasciola hepatica were purified by size-exclusion chromatography for use in the diagnosis of human fasciolosis. Excretion and secretion antigens were obtained from living adult flukes collected from sheep and cattle liver, and cultured in minimum essential medium. The reactivity of the purified antigen and efficacy were assessed by immunoblot test using four sera with human fascioliasis; four sera with other parasites, and two negative sera. We conclude that the purified antigenic fractions do not cross-react with other parasites by immunoblot. Therefore, purified proteins are considered as potential candidates to be used for the diagnosis of human fascioliasis.
Assuntos
Antígenos de Helmintos/isolamento & purificação , Fasciola hepatica/imunologia , Animais , Antígenos de Helmintos/metabolismo , Fasciola hepatica/metabolismo , Fasciolíase/diagnóstico , Humanos , Peso MolecularRESUMO
En el presente estudio, las fracciones antigénicas de 27-28 KDa de Fasciola hepatica fueron purificadas por cromatografía de exclusión molecular para su aplicación en el diagnóstico de la fascioliasis humana. Se obtuvieron antígenos de excreción y secreción a partir de fasciolas adultas vivas obtenida de hígado de ovino y bovino, y cultivados en medio mínimo esencial. La reactividad y eficacia del antígeno purificado fueron evaluadas por la prueba de inmunoblot empleando cuatro sueros con fascioliasis humana; cuatro sueros con otras parasitosis, y dos sueros negativos. Se concluye que las fracciones antigénicas purificadas no presentan reacción cruzada con otras parasitosis, por inmunoblot, por lo que se considera a las proteínas purificadas como potenciales candidatas a ser utilizadas para el diagnóstico de fascioliasis humana.
Antigenic fractions of 27-28 kDa from Fasciola hepatica were purified by size-exclusion chromatography for use in the diagnosis of human fasciolosis. Excretion and secretion antigens were obtained from living adult flukes collected from sheep and cattle liver, and cultured in minimum essential medium. The reactivity of the purified antigen and efficacy were assessed by immunoblot test using four sera with human fascioliasis; four sera with other parasites, and two negative sera. We conclude that the purified antigenic fractions do not cross-react with other parasites by immunoblot. Therefore, purified proteins are considered as potential candidates to be used for the diagnosis of human fascioliasis.
Assuntos
Humanos , Animais , Antígenos de Helmintos/isolamento & purificação , Fasciola hepatica/imunologia , Antígenos de Helmintos/metabolismo , Fasciola hepatica/metabolismo , Fasciolíase/diagnóstico , Peso MolecularRESUMO
Objetivo: Realizar un estudio epidemiológico de la zona norte y nororiental del Perú sobre la presencia de enfermedad de Chagas y sus vectores. Diseño: Estudio descriptivo, transversal. Institución: Instituto de Medicina Tropical Daniel A. Carrión, Facultad de Medicina, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. Material biológico: Triatominos positivos a Trypanosoma cruzi Chagas 1909, ratones machos Swiss-Webster de un mes de edad. Intervenciones: En septiembre de 2008, se visitó las localidades de Chilete, Paredones, en la Provincia de Contumazá, Cajamarca, y las localidades de Pampa Larca, La Puerta, Guitarras y Suyo en la provincia de Ayabaca, Piura, colectándose 10 especímenes de Panstrongylus chinai (Del Ponte, 1929) en Piura y 12 especímenes de Panstrongylus herreri (Wygodzinsky, 1948), en Chilete, Cajamarca. Se aisló las cepas de Trypanosoma en ratones blancos, machos, de un mes de edad, cepa Swiss webster, siendo estos mantenidos en el laboratorio por traspasos sucesivos. Se hizo la curva de parasitemia y el estudio morfométrico de los tripomastigotes sanguíneos. Los ratones infectados fueron sacrificados a los 30 días de inoculados, se separó las vísceras y en estas se hizo el estudio anatomopatológico. Se tomó 59 muestras de sangre a los habitantes de las zonas en estudio, de pulpa digital, en papel filtro, para búsqueda de anticuerpos IgG anti-T. cruzi por ELISA y reacción de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Principales medidas de resultados: Identificación de los triatominos y determinar su infección por Trypanosoma cruzi; presencia de anticuerpos IgG anti- T. cruzi en los pobladores. Resultados: De los especímenes de triatominos colectados, se encontró dos especímenes de P. chinai y uno de P. herreri positivos a Trypanosoma cruzi. El pico máximo de la curva de parasitemia, ocurrió a los 20 días y se halló nidos de amastigotes de T. cruzi en miocardio y músculo esquelético de los ratones. En los habitantes de las zonas, diez (16,9 por ciento) de las muestras de sangre fueron reactivas a anticuerpos IgG anti-T. cruzi, con resultados concordantes para ambas técnicas. Conclusiones: La presencia del parásito en los vectores y de sus anticuerpos en humanos confirma que en los lugares estudiados de la zona norte y nororiente del Perú existe la infección por T. cruzi en forma activa, con todos los eslabones de la cadena epidemiológica para contraer dicha infección.
Objectives: To perform an epidemiological study on presence of ChagaÆs disease and its vectors at northern and nor oriental Peru. Design: Descriptive, transversal study. Setting: Daniel A. Carrion Tropical Medicine Institute, Faculty of Medicine, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Peru. Biologic material: Triatomines positive to Trypanosoma cruzi Chagas 1909; one month-old Swiss-Webster male rats. Interventions: In September 2008 a visit was done to Chilete, Paredones, Contumaza province, Cajamarca, and to Pampa Larca, La Puerta, Guitarras and Suyo at Ayabaca province, Piura, collecting 10 Panstrongylus chinai (Del Ponte, 1929) specimens at Piura and 12 Panstrongylus herreri (Wygodzinsky, 1948) specimens at Chilete, Cajamarca. Trypanosoma strains were isolated in Swiss Webster white male one month-old rats, and maintained by successive transfers. Both parasitemia curve and morphometric study of blood tripomastigotes were done. Infected rats were sacrificed at 30 days from inoculation, viscera were separated and pathology study was performed. Fifty-nine blood samples were obtained from inhabitantsÆ finger pulp in paper filter to look for IgG anti-T. cruzi antibodies by ELISA and indirect immunofluorescence (IIF). Main outcome measures: Identification of triatomines and infection by Trypanosoma cruzi; presence of IgG anti- T. cruzi antibodies in inhabitants. Results: Two P. chinai and one P. herreri specimens were positive for Trypanosoma cruzi in the triatomines collected. Maximum peak of parasitemia curve occurred at 20 days. T. cruzi amastigotes nests were found in rat myocardium and skeletal muscle. Ten inhabitantÆs blood samples (16,9 per cent) were reactive to IgG anti-T. cruzi antibodies, with concordant results for both techniques. Conclusions: Presence of the parasite in vectors and of antibodies in humans confirmed that in Peruvian northern and nor oriental settings there exists active T. cruzi infection with all epidemiological chain links present to develop the disease.